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A=εcl [1]
donde A es la absorbancia, que es una medida de la cantidad de luz que puede
absorber el analito; ε es el llamado coeficiente de absorción molar, que
depende de la longitud de onda a la que se mide la absorbancia; c es
la concentración de la especie absorbente cuando está en disolución y l es
la longitud del camino óptico que recorre la radiación dentro de la muestra,
que normalmente es 1 cm ya que esta es la anchura estándar de las cubetas que
se utilizan.
HA + H2O ⇌ A– + H3O+
Los dos puntos en que las absorbancias del espectro global coinciden a todos los
pH (puntos que se han destacado dentro de círculos azules) se
llaman isosbésticos y su aparición denota la existencia de un equilibrio
químico entre especies. Estos puntos, como se observa, tienen la propiedad de
que en ellos la absorbancia es independiente del pH. (Por ello, son muy útiles
en análisis cuantitativo.) En esta otra imagen, que contiene espectros de naranja
de metilo a nueve valores de pH, se observan aún mejor:
(La razón de la existencia de los puntos isosbésticos la explicamos
aquí: triplenlace.com/2013/11/29/que-es-un-punto-isosbestico-en-
espectroscopia-y-que-revela/)
2) Por otro lado, con ayuda de los tampones adecuados, se preparan varias
disoluciones del indicador a pHs intermedios (determinados exactamente
con un pHmetro) y se miden las absorbancias Ai en los i espectros
realizados, siempre a la misma longitud de onda elegida en el paso anterior.
Con los valores de pH y los de AHA, AA– y Ai vamos a poder calcular el pKa del
indicador, como se explica a continuación.
***
Ai = (AHA,i) + (AA–,i)
cHA = c
cA– = c
Sustituyendo estos valores de cHA y cA– en las expresiones [5] quedan estas otras:
AHA = c (εHA) l
AA– = c (εA-) l
(εHA) l = AHA / c
(εA-) l = AA– / c
Ai = (cHA,i)(AHA/c) + (c A–,i)(AA-/c)
Basta dividir todos los miembros de la igualdad anterior por (cHA,i) y reordenar
para llegar sin dificultades a:
***
En este enlace se explica cómo realizar una práctica de laboratorio basad en este
teoría:
triplenlace.com/2013/12/20/determinacion-espectrofotometrica-del-pka-de-
un-indicador-acido-base
***
Especrofotometría UV-visible
(I): El color de los objetos
Los compuestos químicos que no tienen color a la luz “blanca” (como el alcohol
etílico) deben esta circunstancia a que no absorben radiación visible (o
absorben muy poca); al contrario, la reflejan o transmiten en su totalidad. Pero
eso no implica que no puedan absorber radiación no visible. De hecho, muchos
compuestos químicos absorben radiación ultravioleta (UV).
Ley de Beer
Como cada molécula (o átomo, en su caso) es capaz de absorber un conjunto de
fotones UV-visible característico, la técnica se presta al análisis cualitativo. Sin
embargo, por razones que más abajo se explican, no es esta su principal
aplicación, sino el análisis cuantitativo, basado en el hecho de que el número de
fotones absorbidos es proporcional al número de moléculas absorbentes, de
acuerdo con la ley de Beer:
A=εcl
Una molécula que se halle en algún estado de energía electrónico (ya sea el
fundamental o alguno de los excitados) se puede encontrar en cualquiera de
una serie de estados vibracionales asociados a cada estado electrónico y en
cualquiera de una serie de estados rotacionales asociados a cada estado
vibracional. La figura siguiente esquematiza estos tres tipos de estados
energéticos de una molécula y su magnitud relativa. De la figura se deduce que
las transiciones entre estados electrónicos implican cambios de energía mucho
mayores que los que se dan en transiciones vibracionales, y a su vez estas son
mucho más energéticas que las rotacionales.
Dado un gran conjunto de moléculas, la mayoría de ellas se encontrará en
el estado vibracional fundamental del estado electrónico fundamental, E0. Si el
conjunto se irradia con un haz de fotones policromáticos de energía suficiente,
las moléculas podrán pasar al primer estado electrónico excitado (E*),
pero cada una de ellas puede alcanzar un estado de vibración diferentedentro
de ese estado electrónico E*, e incluso niveles de rotación diferentes dentro de
un nivel de vibración dado. Todo depende de la cantidad de energía que hayan
absorbido. Es decir, pueden darse múltiples transiciones, como estas:
Esto explica las grandes diferencias que se suelen observar entre los espectros
de gases y los de especies en estado líquido o en disolución. Esta figura lo
ilustra:
En ella se compara el espectro UV-visible del vapor de benceno con el del
benceno disuelto en hexano. En el espectro del vapor, los picos corresponden a
transiciones como las esquematizadas más arriba e incluso a transiciones hasta
distintos estados rotacionales dentro de un estado vibracional dado. (La
intensidad de cada pico es proporcional a la probabilidad cuántica de la
transición correspondiente.) Sin embargo, en los líquidos puros y disoluciones,
esta estructura finase pierde debido a diversos factores, sobre todo las
interacciones entre las moléculas. Los picos de rotación están tan próximos
entre sí que suelen coalescer (fundirse), mostrando como resultado una única
curva envolvente o banda bajo la que quedan dichos picos indiferenciados. A
veces coalescen también los picos debidos a transiciones vibracionales. En ese
caso, la consecuencia será que solo se observe una ancha banda de absorción
por cada transición electrónica. El efecto de ensanchamiento es mayor cuanto
más polar es el disolvente.
Cromóforos y auxócromos
Cada especie química molecular tiene su propio espectro UV-visible,
constituido, en general, por pocas y anchas bandas. Pero se ha comprobado que
lo que a menudo define los rasgos principales del espectro UV-visible de una
especie molecular no es la naturaleza de la molécula completa en sí, sino uno o
varios grupos de átomos de esa molécula que se llaman cromóforos y que son
los responsables de la principal o principales absorciones observadas. Es decir,
se puede considerar que la transición electrónica que da lugar a una banda
determinada está localizada en orbitales moleculares formados básicamente
por el grupo de átomos que constituyen el cromóforo. Por ejemplo la agrupación
de átomos –COOH (grupo funcional característico de los llamados ácidos
carboxílicos) es un cromóforo que absorbe radiación UV en torno a 210 nm
debido a una transición n®p* esencialmente localizada en ese grupo de átomos.
De este modo, cualquier molécula que posea un grupo –COOH experimentará
una absorción a aproximadamente esa longitud de onda. Son también
cromóforos el grupo carbonilo (C=O), el anillo bencénico o los dobles enlaces
C=C, N=N, N=O y C=S.
Otros compuestos que pueden ser estudiados por esta técnica son
los complejos de transferencia de carga. Se trata de moléculas que se pueden
considerar divididas en dos partes, una de las cuales puede ceder electrones a la
otra mediante absorción de radiación UV-visible. Sucede, por ejemplo, en el
hexacianoferrato (II) de hierro (III) (comúnmente conocido como ferrocianuro
férrico), de intenso color azul de Prusia.
Especrofotometría UV-visible
(II): El espectrómetro
By Triplenlace on 4 - diciembre - 20122 comentarios
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Espectrometría UV-Vis (I): El color de los objetos
Espectrometría UV-Vis (II): El espectrómetro
Espectrometría UV-Vis (III): Aplicaciones en Química
La técnica de la espectrofotometría UV-vis se aplica fundamentalmente a
líquidos y disoluciones, aunque también a gases. Como el disolvente influye en
la longitud de onda de las bandas, es muy importante elegir el más adecuado en
cada caso; lo ideal es que este no absorba en la región de interés. Algunos
hidrocarburos saturados (como el hexano), así como el metanol, el éter dietílico
o el agua, solo absorben a muy bajas longitudes de onda, en el UV lejano. El
tetracloruro de carbono, que es un buen disolvente de compuestos orgánicos, no
es recomendable en esta técnica porque presenta una banda de absorción a 257
nm que puede interferir.
Fuentes y detectores
Como fuentes se suelen emplear lámparas de deuterio o de hidrógeno, que
emiten por excitación eléctrica radiación UV continua desde 160 a 400 nm, o,
para la zona del visible, una lámpara incandescente de filamento de
wolframio al que se mezcla una pequeña cantidad de yodo, lo que mejora sus
propiedades. Puede usarse el mismo instrumento para las dos regiones con solo
cambiar de fuente. También se suelen emplear lámparas de arco de xenón, que
producen un espectro de radiación continua que cubre la región UV entre 200 y
380 y toda la visible.
La principal diferencia entre unos y otros es que los fotómetros solo permiten
seleccionar algunaslongitudes de onda, mientras que con los
espectrofotómetros puede hacerse un barrido de longitudes de onda dentro de
un cierto intervalo (por ejemplo todo el visible y el UV próximo). Además, un
filtro suele dejar pasar fotones de longitudes de onda dentro de un intervalo –30
o 40 nm– mucho mayor que un monocromador (comúnmente del orden de 1
nm, aunque pueden alcanzar dos órdenes de magnitud menos). También se
puede optar por un filtro de interferencias, que deja pasar radiación dentro de
un ancho de banda de unos 10 nm. Por otro lado, el sistema de detección de los
espectrofotómetros es más sensible.