MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y

LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
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Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017

INFORMACIÓN BÁSICA
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: PRÁCTICA No.:
Glucólisis anaeróbica y fermentación. 8
ASIGNATURA: Bioquímica
TEMA DE LA PRÁCTICA: Metabolismo de carbohidratos
LABORATORIO A UTILIZAR: Laboratorio de Química y Bioquímica
TIEMPO: 1 Sesión (2 Horas) TRABAJO GRUPAL: TRABAJO INDIVIDUAL:
CONTENIDO DE LA GUÍA
COMPETENCIAS DISCIPLINARES
Cuantifican la cantidad de CO2 producido a partir de la fermentación alcohólica para la comprobación del
proceso de glucolisis realizado en condiciones anaeróbicas y la efectividad de la enzima presente en la levadura
empleada, empleando el montaje de recolección de gases.
MARCO TEÓRICO
1. LA GLUCÓLISIS
La glucólisis es un camino por el que las células obtienen energía, este camino es común para casi todas las
células, ya sean procariotas o eucariotas. En las células eucariotas, la glucólisis tiene lugar en el citosol y se da
en una secuencia de diez reacciones catalizadas por enzimas en la que a partir de glucosa se obtienen piruvato,
aunque el fin último de esta ruta es la obtención de ATP. En la siguiente figura 1 se muestra la ruta metabólica
de la glucólisis.

Figura 1. Ruta metabólica de la glucólisis.

En términos de energía producida, la conversión de una molécula de glucosa en dos moléculas de piruvato se
acompaña de la conversión neta de dos moléculas de ADP en ATP y la producción de dos moléculas de NADH
(Horton. H, et al. 2008).

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ATP consumido por la glucosa: 2 ATP 2 (etapa de hexosa)
ATP producido por la glucosa: 4 ATP 4 (etapa de triosa)
Producción neta de ATP a partir de la glucosa 2

La reacción neta de la glucólisis se ve explicita en la figura 2.

Glucosa + 2ADP + 2NAD++ 2Pi 2Piruvato + 2ATP + 2 NADPH + 2H+ +2H2O

Figura 2. Reacción neta durante el proceso de la glucólisis

La formación de piruvato a partir del fosfoenol piruvato es el último paso de la glucólisis, en la que a partir de
la glucosa se sintetizan, en términos netos, dos moléculas de ATP. Sin embargo, esta ruta para convertir energía
no dura mucho, debido a que el balance redox no se mantiene. Esto se debe a que la actividad de la enzima
gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa, para generar un compuesto con alto potencial de transferencia de
fosfatos, lleva a la reducción de NAD+ a NADH. La cantidad de NAD+ en la célula es limitada, esta molécula es
derivada de la vitamina niacina, la cual es un requerimiento nutricional para los seres humanos. En
consecuencia, el NAD+ debe ser regenerado para que la glucólisis pueda seguir. Por lo anterior, el proceso final
en la ruta es la regeneración del NAD+ a través del metabolismo del piruvato. Aunque la secuencia de
reacciones de glucosa a piruvato es similar en muchos organismos y en muchos tipos de células, el destino del
piruvato suele ser variable. Hay tres reacciones del piruvato que son especialmente importantes: conversión
en dióxido de carbono, en ácido láctico y en etanol. Estas tres rutas son mostradas en la figura 1. (Lumber, D.
1981)

Figura 1. Reacciones del piruvato para regenerar el NAD+

2. FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA
La fermentación alcohólica es un proceso anaeróbico exotérmico (libera energía) y moléculas de ATP
necesarias para el funcionamiento metabólico de las levaduras (hongos unicelulares). Debido a las condiciones
de ausencia de oxígeno durante el bioproceso, la respiración celular de la cadena del ADP en ATP queda
completamente bloqueada, siendo la única fuente de energía para las levaduras la glucólisis de la glucosa con
la formación de moléculas de ATP mediante la fosforilación a nivel de sustrato. El balance a nivel molecular del
proceso genera 2 moléculas de ATP por cada molécula de glucosa. Si se compara este balance con el de la
respiración celular, se verá que se generan 38 moléculas de ATP. A pesar de ello parece ser suficiente energía
para los organismos anaeróbicos. (McMurry, 2004).
Muchas bacterias y algunos eucariotas son capaces de sobrevivir en ausencia de oxígeno. Convierten el
piruvato en una diversidad de ácidos orgánicos y alcoholes que son excretados. El etanol es uno de los

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productos. Las células de levadura convierten piruvato en etanol y CO2 y oxidan NADH a NAD+. Primero, se
descarboxila el piruvato y forma acetaldehído en una reacción catalizada por la piruvato descarboxilasa,
después la alcohol deshidrogenasa cataliza la reducción de acetaldehído a etanol. Esta reacción de oxidación-
reducción se acopla a la oxidación de NADH (figura 3).

Figura 3. Ecuación de la producción de etanol.

La mayor parte de la energía química de la glucosa permanece en el alcohol, que es el producto final de la
secuencia. La suma de las reacciones glicolíticas y la conversion de piruvato a etanol se encuentra resumida en
la figura 4.

Glucosa + 2Pi2- + ADP3- +2H+ 2Etanol + 2CO2 + 2ATP4- +2H2O

Figura 4. Reacción de conversion de piruvato a etanol

Durante el proceso de fermentación, el etanol va aumentando de concentración y es un compuesto tóxico

para la levadura. Cuando su concentración es aproximadamente del 12% de volumen, las levaduras tienden a
morir. Esta es una de las razones fundamentales por las que las bebidas alcohólicas (no destiladas) no alcanzan
valores superiores al 20% de concentración de etanol.

CONSULTA PREVIA
1. Teniendo en cuenta el siguiente video “Metabolismo y nutrición”: http://youtu.be/F1Pzcy_kAXY
Responda las siguientes preguntas.
A. ¿Indique que cantidad de ATP produce una persona media en un día?
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__________________________________________________________________________________________

¿Mencione cuáles son los dos tipos de proteínas que se encuentran en el músculo?
__________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________

B. ¿Cuál es el papel fundamental del oxígeno en los procesos corporales y que ocurre si no hay oxígeno?
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C. ¿Cuál es el efecto del exceso de ácido láctico?

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2. Mediante un gráfico represente la prueba de Fehling, señale cómo se realiza la prueba y el resultado que
debería esperarse en los tubos con glucosa y con la glucosa fermentada (una vez llevado a cabo el proceso
de glucólisis).

• Prueba de Fehling con glucosa fermentada.

• Prueba de Fehling con glucosa sin fermentar.

3. Consulte dos procedimientos en los que se realicen fermentaciones que puedan ser útiles para un
profesional de su tipo y mencione cuál es el beneficio que le aporta a su trabajo.
Procedimiento 1 ________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
Procedimiento 2 ________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
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4. Mencione las fuentes usadas para solucionar las preguntas planteadas en esta consulta. Citar en normas
APA.
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5. RIESGOS Y SEGURIDAD: FRASES H & P, PICTOGRAMAS Y COLECTORES DE DESECHO

Hidróxido de Sodio (En Sulfato de cobre II (En
reactivo de Fehling B) reactivo de Fehling A)
H314-H290 H302-H319-H315-H410
P280-P301+P330+P331 P273-P302+P352
P305+P351+P338 P305+P351+P338

Colector: ______________ Colector: ____________

Frases H
H290:____________________________________________________________________________________
H302:____________________________________________________________________________________
H314:____________________________________________________________________________________
H315:____________________________________________________________________________________
H319:____________________________________________________________________________________
H410:____________________________________________________________________________________
Frases P
P273:____________________________________________________________________________________
P280:____________________________________________________________________________________
P302+P352:_______________________________________________________________________________
P301+P330+P331:__________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
P305+P351+P338:__________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________

PALABRAS CLAVE *
Fermentación alcohólica, glucólisis, metabolismo de carbohidratos.

METODOLOGÍA
• Ingreso de los estudiantes a la práctica (Cada uno debe tener desde el inicio sus elementos de
bioseguridad: Guantes, Tapabocas* y bata).
• Entrega de consulta previa.
• Retroalimentación de consulta previa, la cual incluye claridad en las posibles dudas que tengan los
estudiantes.
• Explicación por parte del procedimiento por parte del docente
• Entrega de material.
• Ejecución de la práctica.
• Puesta en común de los resultados obtenidos, posibles causas de error y conclusiones.
• Entrega del material e informes.
Nota: Los docentes pueden realizar actividades anexas que permiten retroalimentar o evaluar el proceso de
la guía, las cuales van acorde a los criterios de evaluación presentadas en la rúbrica. Estas actividades se
realizarán en cualquier momento de la sesión práctica, según lo defina el docente.

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*El tapabocas deberá corresponder al solicitado dentro del listado de material estudiante, el cual
corresponde al riesgo de la sesión práctica.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR

Materiales y Equipos Reactivos Materiales Estudiante
3 Beaker de 400 o 600 mL (Todo el
8 mL Glucosa 20% Bata de laboratorio
grupo)
1 Pinza para tubo de ensayo 2 mL Fehling A Guantes de nitrilo
1 Tubo con desprendimiento lateral 2 mL Fehling B Gafas de seguridad
2 Tubos de ensayo y 1 gradilla 1 g Levadura Sharpie
1 Probeta 100 mL 15 mL de agua Paño absorbente
1 Manguera de Caucho Guía de laboratorio
2 Pipetas Pasteur de 2 mL 1 g de levadura en pasta
1 Termómetro (panadería)
1 Tapón de caucho para tubo
2 Pipeta graduada de 5 mL (Todo el
grupo).
2 Pipeteador
1 Vidrio de reloj
1 Balanza
1 Cubeta plástica
1 Plancha de calentamiento

PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO.

• Usar los elementos de protección (bata, guantes y mono gafas) durante toda la práctica.
• Recuerde siempre todas indicaciones de prevención y seguridad expuestas durante la sesión de
bioseguridad.
• Revise su área de trabajo al ingresar al laboratorio.
• Ingrese al laboratorio conociendo los procedimientos a realizar y nunca descuide montajes o equipos
durante su funcionamiento.
• Lavar cuidadosamente todo el material al iniciar y al finalizar la práctica.
• NUNCA corra o juegue en el laboratorio, puede ocasionar un accidente.
• No ingiera alimentos o bebidas en el laboratorio.
• Antes de manipular los reactivos tenga en cuenta las indicaciones de peligro y prudencia (Frases H y P)
consultadas.
• Cuando opere materiales y/o equipos cerciórese de conocer su funcionamiento. De lo contrario solicite
asistencia.
• Cuando utilice la plancha de calentamiento, mechero u otros materiales calientes tome las precauciones
necesarias: Cables, mangueras y otros elementos se pueden quemar accidentalmente.

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• Disponga todos los residuos en los colectores o canecas correspondientes. No los deseche calientes.
• En caso de presentarse algún incidente o accidente informar inmediatamente al docente.
• Dejar el lugar de trabajo limpio, seco y organizado.

PROCEDIMIENTO A UTILIZAR

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BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA
Koolman, (2005). Color Atlas of Biochemistry, 2nd edition, pág. 59, Thieme Medical Publishers.
Torrenegra, Ruben. (1990). Introducción al Análisis Químico Moderno. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de
Ciencias Básicas. Departamento de Química. Bogotá, Colombia.
Skoog, D. A. (2005). Fundamentos en Química Analítica. Editorial Paraninfo Thomson Learning. Madrid.
HORTON, H. ROBERT; MORAN, LAURENCE A.; SCRIMGEOUR, K. GRAY; PERRY, MARK D.; RAW, J. DAVID. (2008). Principios
de Bioquímica. Cuarta Edición: Editorial Pearson Educación, México,
LUMBER, D. (1981). Bioquímica Práctica. Bogotá: Editorial Mc Graw Hill.
McMURRY, John. (2004). Química Orgánica. Sexta edición. Ed. Thompson
Fundamentos de la fermentación alcohólica. (7 de octubre de 2014). Obtenido de
http://es.slideshare.net/JudyRosero/fermentacin-5290812.
M. Dolores Delgado. ( ). Bioquímica estructural y metabólica (tema 9 glucolisis). Universidad de Cantabria, España.
Mark´s basic medical biochemistry. (2008). A clinical approach. 3° ed. LWW. Caps 22, 27.

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Firma: Firma: Firma:

Nombre: Docentes de laboratorio Nombre: Lic. César Andrés Nombre: Ing. Claudia Patricia
de Química y Bioquímica Gutiérrez Zapata Fernández Arévalo
Fecha: Junio de 2017 Fecha: Junio de 2017 Fecha: Junio de 2017

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INFORME DE LABORATORIO
ASIGNATURA:
ESTUDIANTES:
▪
GRUPO:
▪
▪
NOTA:
▪

CARRERA: TRABAJO GRUPAL: TRABAJO INDIVIDUAL:

FORMULE TRES HABILIDADES QUE DESEE ADQUIRIR O DESARROLLAR A TRAVÉS DE LA PRÁCTICA DE
LABORATORIO
• _____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
• _____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
• _____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
Elabore un mapa conceptual del tema a tratar en la práctica de laboratorio.
Elabore un mapa conceptual, recuerde que el mapa conceptual se debe estructurar por medio de conectores, no se deben poner
definiciones y los conceptos se deben organizar jerárquicamente.

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RESULTADOS
Con los resultados obtenidos completar las siguientes tablas:
Cantidad de dióxido de carbono producida en el proceso de glucolisis.
Tabla 1. Volumen de CO2 producido.

Tiempo (min) Cantidad de CO2 (mL) Tiempo (min) Cantidad de CO2 (mL)
3 18
6 21
9 24
12 27
15 30
Cantidad total de CO2
producida

Datos experimentales obtenidos en las lecturas de pH

Tabla 2. Variación de pH
pH Inicial glucosa
pH Final glucosa fermentada

Datos experimentales obtenidos en el análisis de la glucosa metabolizada

Tabla 3. Resultados prueba de Fehling.

Sustancia Observaciones de la prueba con el reactivo de Fehling

Tubo A
Glucosa
fermentada

Tubo B
Glucosa sin
fermentar

CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el sustrato empleado en la fermentación realizada? ____________________________________
¿Qué otros sustratos se podrían emplear? ___________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
2. Observe los datos obtenidos con respecto al pH inicial y final, si encuentra diferencias en estos datos
explique porqué se producen.
______________________________________________________________________________________________
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______________________________________________________________________________________________
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3. En condiciones anaeróbicas la glucólisis presenta diferentes productos. Escriba los productos obtenidos
cuando el proceso ocurre en mamíferos y en levaduras. ¿Cuál es el balance energético para la fermentación
alcohólica?

CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS

Mencione que sucedería si la levadura se calienta a 50 °C o una temperatura superior.
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__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES
1. ______________________________________________________________________________________________
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______________________________________________________________________________________________
2. ______________________________________________________________________________________________
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______________________________________________________________________________________________
3. ______________________________________________________________________________________________
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APLICACIÓN PROFESIONAL DE LA PRÁCTICA REALIZADA

Expongan en este espacio la relación de las competencias y habilidades desarrolladas con el ejercicio de su futura profesión.
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BIBLIOGRAFIA UTILIZADA Utilicen las normas APA

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