METODO DE RECUENTO MICROBIANO MEDIANTE EL EMPLEO DEL PATRON DE TURBIDEZ

MC FARLAND Y RECUENTO EN PLACA

ESTUDIO COMPARATIVO DE UN PATRON DE TURBIDEZ MC FARLAND CON UNA
SUPENSION BACTERIANA
De la cruz Boris, Márquez Ana, Pabón Milena, Sanchez Erika, Vega Liliana

Objetivos

 Determinar la concentración bacteriana mediante el patrón McFarland y el

recuento en placa.
Resultados y análisis de resultados
El recuento mediante el patrón McFarland, se fundamenta en la preparación de la
solución Sulfato de bario, el cual se realizó utilizando ácido sulfúrico (1%) y Cloruro de
Bario (1%).
Se elaboró 3 soluciones Mcfarland a diferente concentración (0,5 y 1,0 y 2,0) (Tabla 1 y 2),
dicha concentración se estableció midiendo la absorbancia, la cual relaciona el grado de
particularización del cloruro de Bario en ácido sulfúrico, formando partículas de pequeño
tamaño que causa la dispersión de la luz.
Se ajusto una suspensión bacteriana a diferente escala (E.coli, 0.5, 1.0 y 2.0) y (Salmonella
sp., 0.5 y 1.0) (Tabla 1 y 2). A partir de esta, se preparó diluciones seriadas (10-1 – 10-7),
para verificar la precisión del estándar de McFarland mediante recuento en placa de la
dilución, determinando el número de ufc/ml de solución (Tabla 3 y 4), la concentración del
recuento se expresó en unidades logarítmicas (Tabla 5).

Tabla 1. Absorbancia del Patron McFarland y suspensión de E.coli, a diferente escala.

Grupo Escala Absorbancia McFarland Absorbancia Inoculo

1 0,5 0,164 0,143
2 1,0 0,254 0,259
3 2,0 0,426 0,471

Tabla 2. Absorbancia del patrón McFarland y suspensión de Salmonella, a diferente escala.

Grupo Escala Absorbancia McFarland Absorbancia Inoculo

1 0,5 0,175 0,123
2 1,0 0,241 0,218
Tabla 3. Resultado a partir de recuento en placa de Escherichia coli.
Escherichia coli
Dilución Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3
Caja A Caja B Caja A Caja B Caja A Caja B
10−5 1004 1018 964 860 1340 1420
10−6 150 165 240 360 916 836
10−7 15 18 41 52 396 436

Tabla 4. Resultado a partir de recuento en placa de Escrherichia coli.

Salmonella spp
Dilución Grupo 1 Grupo 2
Caja A Caja B Caja A Caja B
10−5 385 174 1512 1540
10−6 234 320 274 272
10−7 88 36 20 25

Tabla5. Concentración del recuento de la suspensión de la bacteriana de E.coli y Salmonella sp.,

expresado en ufc/ml y unidades logarítmicas de cada escala.

Concentración teórica Escherichia coli Salmonella sp.

(McFarland)
Grupo Escala ufc/ml Log Recuento (ufc/ml) Log Recuento (ufc/ml) Log
8
1 0.5 1,5 x10 8,17 15x107 8,17 62x107 8,79
2 1.0 3,0 x108 8,47 35x107 8,54 22x107 8,34
8
3 2.0 6,0 x10 8,77 41x108 9,61
 Concentración de la suspension E.coli mediante Mc Farland
10 0.5
0.45
9.5
0.4
0.35
9
0.3
8.5 0.25
0.2
8
0.15
0.1
7.5
0.05
7 0
Grupo1 Grupo 2 Grupo 3

Log (Teorico) Log (exp) McFarland Teorico Mc Farland exp Inoculo

Grafica 1: Comportamiento obtenido de las absorbancias experimentales y de la suspensión con

respecto a la absorbancias teorica para los patrones Mcfarland 0,5, 1 y 2 Vs el recuento en placa
usado en el microorganismo modelo E. coli.

Concentración de la suspension Salmonella sp., mediante Mc Farland

8.9 0.3
8.8
8.7 0.25
8.6
0.2
8.5
8.4
0.15
8.3
8.2
0.1
8.1
8 0.05
7.9
7.8 0
Grupo1 Grupo 2

Log (Teorico) Log (exp) McFarland Teorico Mc Farland exp Inoculo

Grafica 2. Comportamiento obtenido de las absorbancias experimentales y de la suspensión con

respecto a la absorbancias teórica para los patrones Mcfarland 0,5 y 1 Vs el recuento en placa
usado en el microorganismo modelo Salmonella sp.

En la grafica 1 y 2 se observa una relación directamente proporcional entre las variables donde a
medida que aumenta una variable la otra igual aumenta siendo estas directamente
proporcionales. En la grafica 2 se observa una diferencia significativa entre los valores de
absorbancia experimentales de los patrones con respecto a los teóricos en el grupo 1 y 3 en
donde es ligera la diferencia en el grupo 1 correspondiente a la escala de patrón 0,5 y el grupo 3
correspondiente a la escala de patrón 2 donde la diferencia es significativa.