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Procedimiento
a) Preparación de la muestra.
Extracción de las proteínas de las muestras biológicas mediante disrupción
mecánica o química.
2- Indirecto
El anticuerpo primario sin marcar reacciona con el antígeno. Luego, un anticuerpo
secundario marcado se une al primario y reacciona con el sustrato. En el método
indirecto, se añade primero un anticuerpo primario sin marcar contra el antígeno de
la superficie de la membrana; posteriormente se añade un anticuerpo secundario
marcado contra el anticuerpo primario. Es decir que en este método se utilizan dos
anticuerpos; un anticuerpo primario y un anticuerpo secundario contra la especie del
primer anticuerpo.
Utilidad
Se usa principalmente para determinar la presencia o ausencia de una proteína
concreta en una muestra. También nos puede ser útil para determinar los niveles de
dicha proteína en esa muestra, o el tamaño de esta proteína, ya que en
determinadas enfermedades el problema no es la ausencia total de una molécula
sino su reducción o la expresión de una forma truncada de dicha proteína.
1. Enfermedades Inflamatorias
2. Enfermedades Infecto-Contagiosas
3. Perfil de Citoquinas en Modelos Experimentales
4. Factores de Crecimiento
5. Proteínas de Secreción
6. Enfermedades Infecto-Contagiosas
7. Enfermedades Inflamatorias
8. Perfil de Citoquinas en Modelos Experimentales
9. Factores de Crecimiento - Proteínas de Secreción
10. Se emplea como prueba definitiva de la encefalopatía espongiforme bovina,
comúnmente llamada "enfermedad de las vacas locas".
11. La enfermedad de Lyme
12. Prueba de VIH
Aunque el VIH suele detectarse mediante la técnica ELISA, el Western Blot se usa
como prueba confirmatoria cuando el ELISA da un resultado positivo en un grupo
que no es de riesgo o en una población donde la prevalencia del virus es muy baja.
etc.
Western Blot: solo pueden analizarse un número muy limitado de muestras por
experimento.
rendimiento.
de imagen.
6. COMPLEJIDAD DE LA TÉCNICA
proceso completo.
ELISA: técnica más sencilla que puede llevarse a cabo con éxito incluso por
7. COSTE
Western Blot: Requiere el uso de varios reactivos químicos, geles, etc., que hacen