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Jorge Contreras ', María Orfa Rojas ', Gladys Pinilla ' , Moisés Wasserman
Se ensayaron cuatro métodos para la recuperación de ADN separado por electro-
foresis en gel de agarosa. Se usaron diferentes cantidades y tamaños de ADN.
Se discuten las condiciones especiales, los cuidados de cada método y la
recuperación según el tamaño y las cantidades iniciales utilizadas.
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COMPARACION DE METODOS PARA LA RECUPERACION DE AON
TABLA 1. Separación de DNA de fago lambda cortado 5. Se hizo precipitación etanólica llevando la
con HlND 111.
concentración salina de la solución a 0,3 M
TAMANO ( ~ b ) CANTIDAD (ug) con NaAc y agregando dos volúmenes de
etanol absoluto. Se incubó 30 minutos a
-20°C. Se centrifugó20 minutos a 15.000 g.
El precipitado se resuspendió en buffer TE.
Se hizo cuantificación espectrofotométrica
y porelectroforesis en gel de agarosa (AGE)
del DNA.
(*) Este fragmento corresponde a las bandas de 2 y 2.3 kb
del ADN lambda Hlnd 1 1 . La electroelución (EE) se hizo de la siguiente
forma (4,5,6):
Se realizaron cuatro electroforesis en agarosa
Se introdujo el trozo de gel en una de
de bajo punto de fusión. El gel fue de un tamaño
diálisis que contiene 500 111de TE. Se colo-
de 6,5xlOxl cm. Las electroforesis se realizaron có la bolsa en una cámara de electroforesis
a 1 voltiolcm. En cada una se separaron tres ante un campo elétricode 1 voltiolcm duran-
muestras, así: 10. 2 y 0,5 iig de ADN de fago te 5 minutos. El ADN salió del ael v, se oeaó
-
Lambda cortado con la enzima de restricción a las paredes de la bolsa.
Hind III. Se hizo ourificación del ADN de las
bandas de 2.400. 2.000
~ ~ - -
~ v, 2.300
- - - -
(se
, - - tomaron
~- - - 2. Se cambió la oolaridad del camoo eléctrico
con...nrarrenre 1500 30.-as oanoas oe ADh se o ~ r a n r e 3 0 s c g ~ i i o opara
s oerar a ADN oe
v S-a zaron nieo aiire r nc on s-merq enco e qei a oolsa y oear o o s..e ro en e TE.
en una solución de bromuro de etidio 0,5 iigiml
3. Se saca el TE de la bolsa y se hace:
durante 10 minutos e iluminando con una Iámoa-
ra de luz ultravioleta de 302 nm. Se corlaron'las a. Extracción con fenol.
bandas de interés para purificar el ADN.
b. Extracción con fenol: cloroformo: alcohol
La purificación por extracciones orgánicas de isoamílico.
l a agarosa de bajo punto de fusión de hizo de la
siguiente forma (5.6,9): c. Extracción con cloroformo.
.( n m ~
La valoración del ADN recuperado por los L ~le
~
Onda
-- FENOL AUN
diferentes métodos se hizo por electroforesis,
espectrofotómetroy se hicieron dilucionesseriadas ~i",. 3
COMPARACION DE METODOS PARA LA RECUPERACION DE ADN
1. Girvitz OC, Bacchetti S, Rainbow AJ et al. A rapid 8. GENECLEANTM. Manual técnico. BIO 101 Inc. La
and efficientprocedureforthe purificaton of DNAfrorn Jolla: California.
agarose gels. Anal Biochem 1980: 106:492.