PREGUNTAS DE EXPOSICION- III UNIDAD INGENIERIA DE ENZIMAS

1. ¿Por qué la medición de una enzima se realiza en tiempos cortos de

reacción?
Porque la actividad de la enzima disminuye con el transcurso del tiempo,
además en tiempos cortos la velocidad es igual a la actividad enzimática.
Además porque la actividad de la enzima se ve afectada por distintos
factores:

 Desnaturalización de la enzima (por la temperatura), es decir, se

sabe que la enzima al ser una proteína y al ser sometida a altas
temperaturas, puede perder su estructuras de orden superior,
entonces conviene utilizar tiempo cortos para evitar ello
 Reversibilidad de la reacción enzimática
 Inhibición por producto o inhibidor externo, conforme pasa el
tiempo se van generando productos gracias a la reacción enzimática
sin embargo al obtener altas concentraciones de producto este
puede generar inhibición de la enzima, por tanto se recomienda
medir a tiempo cortos cuando el producto no sea demasiado.
 -desaturacion de la enzima (por baja concentración de sustrato)

2. ¿Por qué en la determinación experimental del rango de linealidad de

la inulinasa soluble, se tuvo que ensayar a diferentes diluciones del
extracto enzimático de inulinasa?

La determinación experimental del rango de linealidad me permite

determinar la actividad enzimática de la enzima. Una de las variables mas
importantes de cinética enzimática es la concentración de enzima (además
del tiempo de hidrolisis, concentración de sustrato y temperatura), al
reducir la concentración de la enzima, se disminuye la actividad de esta.

Después de realizar los ensayos y graficar decido: trabajar con la dilución

donde obtenga mayor linealidad a través del tiempo y donde pueda obtener
mayor producto.

3. ¿Para que te ha sido útil obtener el perfil X vs ket/K para el reactor

con inulinasa inmovilizada?

Obtener el perfil de ket/K vs X es importante para determinar la conversión

de sustrato en productos en función de la velocidad máxima de reacción, el
tiempo y la constante de saturación; la gráfica X vs (ket/K) presenta un
comportamiento casi ideal en comparación a los curvas características de
un reactor enzimático por lote.
 Esto nos permite elaborar un esquema que prefiere el comportamiento real
de un reactor agitado a diferentes concentraciones de sustrato inicial..

4. ¿Por qué es importante e indispensable en el experimento determinar

los valores de los parámetros cinéticos de una enzima soluble y/o
inmovilizada? ¿Cuáles son los parámetros cinéticos?

Son importantes para predecir el comportamiento del sistema enzimático. .

Los parámetros cinéticos son Vmax y Km

La importancia del estudio de la cinética enzimática reside en dos principios

básicos. En primer lugar, permite explicar cómo funciona una enzima, y en
segundo lugar, permite predecir cómo se comportará esa enzima in vivo. Las
constantes cinéticas definidas anteriormente, Km y Vmax, son los pilares
fundamentales a la hora de intentar comprender el funcionamiento de las
enzimas en el control del metabolismo.

La velocidad V indica el número de reacciones por segundo que son

catalizadas por una enzima

Las enzimas pueden ser caracterizadas por la concentración de sustrato a la

cual la velocidad de reacción es la mitad de la velocidad máxima. Esta
concentración de sustrato se conoce como constante de Michaelis-Menten
(KM). Es la constante de disociación (la afinidad del complejo enzima-
sustrato (ES) por el sustrato). Valores bajos indican que el complejo ES está
unido muy fuertemente y raramente se disocia sin que el sustrato reaccione
para dar producto.

5. En tu experiencia de Biocatálisis, en el caso que se hubiera

determinado los parámetros cinéticos de la inulinasa inmovilizada
¿Podrías intuir que sus valores fueron equivalentes o semejantes a los
obtenidos con inulinasa soluble? ¿Por qué?

No. Debido a que siempre existe una disminución del poder catalítico de la
enzima cuando se realiza la inmovilización, esto puede ser debido a
diversos factores como: restricciones difusionales.

No son semejantes: porque los parámetros cinéticos de la enzima soluble

son mayores que en la enzima inmovilizada, la inmovilizada puede limitar el
acceso del sustrato al centro activo de la enzima, volviendo la actividad
menor.
Efecto partición, cuando la concentracion del sustrato es diferente en la
superficie del soporte.