Practica IV

Cromatografía de Capa Fina

Miranda Adán M., Miranda Cárdenas N. Y., Guerra García T., Parra Romero I., Martínez
Marín L., Quezada Santos S., García Labrada M., Flores García L., Urrutia Quiroz L. Y.

Instituto Tecnológico de Zacatepec. Ingeniería Bioquímica. Asignatura: Análisis Instrumental.

Catedrático Dra. Areli Marlen Salgado Delgado. Grupo WB. Calzada Tecnológico No. 27, C.P.
62780, Zacatepec de Hidalgo, Morelos. adanmonica1197@gmail.com , yaque231469@gmail.com,
taniaguerratanis@outlook.com, beatriz.cielo@hotmail.com, leochido83@gmail.com,
Sharol_quezada@hotmail.com, monseg-2710@hotmail.com , lidia199814@outlook.es,
yoali.urrutia@gmail.com
Introducción una mezcla, permitiendo identificar y determinar
La cromatografía se define como la separación de las cantidades de dichos componentes. Diferencias
una mezcla de dos o más compuestos por sutiles en el coeficiente de partición de los
distribución entre dos fases, una de las cuales es compuestos dan como resultado una retención
estacionaria y la otra una fase móvil. Varios tipos diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto,
de cromatografía son posibles, dependiendo de la una separación efectiva en función de los tiempos
naturaleza de las dos fases involucradas: sólido- de retención de cada componente de la mezcla.
liquido (capa fina, papel o columna), liquido- Clasificación:
líquido y gases-liquido (fase vapor). Las distintas técnicas cromatográficas se pueden
Todas las técnicas cromatográficas dependen de la dividir atendiendo a distintos criterios. Una
distribución de los componentes de la mezcla entre clasificación, según esté dispuesta la fase
dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada estacionaria, es:
también activa, que transporta las sustancias que se Cromatografía plana: La fase estacionaria se sita
separan y que progresa en relación con la otra, sobre una superficie plana. Las principales técnicas
denominada fase estacionaria. La fase móvil puede son:
ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser  cromatografía en papel
un sólido o un líquido.  cromatografía en capa fina
Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el Cromatografía en columna: La fase estacionaria se
poder de adsorber en mayor de o menor grado otras sitúa dentro de una columna. Según el fluido
sustancias sobre su superficie; y, similarmente' empleado como fase móvil pueden ser:
todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas  cromatografía de líquidos
con más facilidad que otras. Este fenómeno de  cromatografía de gases
adsorción selectiva es el principio fundamental de  cromatografía de fluidos supercríticos
la cromatografía. otros tipos de cromatografía son: intercambio
En la cromatografía en capa fina (CCF) la fase iónico, afinidad, exclusión y otros
estacionaria consiste en una capa delgada de un Concepto de Rf
adsorbente (como por ejemplo gel de sílice, Rf es el registro, es una relación de distancias, y se
alúmina o celulosa) depositada sobre un soporte define como:
plano como una placa de vidrio, o una lámina de p1 = (a) distancia que recorre la muestra desde el
aluminio o de plástico. punto de aplicación
(b) distancia que recorre el disolvente hasta el
Marco Teórico frente del eluyente.
La cromatografía es un método físico de Cromatografía en capa fina
separación para la caracterización de mezclas En la cromatografía en capa fina (ccf), el grado de
complejas, la cual tiene aplicación en todas las elución de las sustancias depende
ramas de la ciencia; es un conjunto de técnicas tanto de su propia polaridad como de la polaridad
basadas en el principio de retención selectiva, cuyo del eluyente utilizado'
objetivo es separar los distintos componentes de

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El adsorbente se coloca en forma de una capa
delgada adherida sobre un soporte rígido,
qué pueden ser placas de vidrio, aluminio o
poliéster. Los tamaños de la placa para ccf
convencional son: 20 x 20; 't0 x20 y 5x2 cm.
Objetivos
 Conocer la técnica de cromatografía
en capa fina, (ccf), sus características
y los factores que en ella intervienen.
 Aplicar la técnica de cromatografía en
capa fina como criterio de pureza e
identificación de sustancias.
Material
 Cámara cromatográfica
 2 Erlenmeyer de 25 mL
 Probeta de 10 mL
 Regla de 30 cm
 Placas de cromatografía
 Micropipeta
 Pipeta
Reactivos
 Alcohol Metílico
Procedimiento
1. Las placas cromatográficas se deben de
cortar a un tamaño adecuado, según el
número de muestras que se desee aplicar,
entre 3 y 5 cm de ancho, por 10 cm de alto.
Debe hacerse un corte por el lado del
soporte para no dañar el absorbente.
2. Después se deben marcar muy sutilmente
con un lápiz para no dañar el absorbente
una línea a 1 cm del borde inferior de la
placa y señalar ligeramente el punto o
puntos donde se van a aplicar las distintas
muestras, teniendo en cuenta que la
separación entre cada dos aplicaciones
debe ser del al menos medio centímetro y
que también hay que dejar un centímetro
de distancia desde las aplicaciones
laterales, hasta el borde de la placa.
3. Posteriormente, hay que elegir el eluyente
adecuado. Se toma una placa
cromatográfica y se hace a lápiz una línea
horizontal sobre la que se marcan varios
puntos de aplicación separados por al
menos 1 cm.
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4. Sobre cada punto se aplica con un capilar
de vidrio de diámetro interno menor de un
milímetro la muestra, con cuidado para
que el diámetro de la aplicación sea
inferior a 2 milímetros.
5. A continuación, se aplica sobre cada
punto de muestra un tipo de eluyente entre
los que se desea probar.
6. Después, aplicamos la muestra con un
capilar limpio, tocando ligeramente con
este el absorbente, para dejar un punto,
mancha circular en la posición
previamente marcada, el diámetro de la
aplicación no debe superar nunca los 2
milímetros.
7. A continuación, se prepara la cubeta de
cromatografía con un recipiente de
volumen y tamaño adecuado al de la
placa, se rellenará con la cantidad
necesaria de eluyente para empapar la
placa cromatográfica, pero sin cubrir la
línea de aplicación, se introduce un trozo
de papel filtro, rodeando parcialmente la
pared de la cubeta cromatográfica con el
fin de saturar la atmosfera de la cubeta con
el vapor del disolvente y prevenir la
evaporación del eluyente desde la capa
cromatográfica.
8. Una vez, echo todo lo anterior, se
introduce la placa en la cubeta de
cromatografía, se cierra la cubeta sin
moverla y se deja migrar el diluyente
hasta aproximadamente 1 cm del borde
superior, se saca la placa cromatográfica
de la cubeta y se marca con un lápiz la
línea de máxima altura alcanzada por el
frente del diluyente.
9. Se seca la placa al aire dejando que se
evapore todo el eluyente. Tras la
evaporación del eluyente si las sustancias
diluidas son coloreadas, la visualización
de sus manchas sobre la placa es directa,
en caso contrario, la placa cromatográfica
se verá blanca y habrá que usar una
lámpara ultra violeta o bien, revelar las
manchas correspondientes para hacerlas
visibles. Los agentes reveladores más
empelados son Vainillina, ácido
fosfomolibdico y permanganato potásico.
10. El procedimiento para seguir en estos
casos consiste en mojar el cromato folio
con una disolución del revelador y
 calentarlo en una estufa a 110°C durante
al menos 10 minutos. Si se ha escogido el
revelador adecuado se verán las manchas
correspondientes al producto que quiere
visualizarse.
11. Una vez detectadas las manchas, se
deberán encerrar con un lápiz para
tenerlas localizadas sobre la placa y así
poder determinar el factor de retención de
cada sustancia, además de la comparación
visual de la forma, color e intensidad de
las diferentes manchas, es importante
Resultados
Conclusión
La cromatografía en capa fina resulta un método
muy útil, si bien no tanto para separar sustancias
si es muy útil este principio de separación para
observar diferentes situaciones de una muestra
problema como lo es la pureza o la identificación
de compuestos presentes en esta muestra.
De igual manera esta técnica se aplica para saber
cuándo una reacción ya ha terminado o no, para
lograr observar un buen cromatograma, debemos
tomar en cuenta siempre la polaridad tanto del
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determinar el valor del factor de retención
de cada una de ellas.
12. El factor de retención se define como el
cociente entre la distancia recorrida por el
compuesto tomado desde el centro de la
mancha hasta la línea de aplicación y la
distancia recurrida por el diluyente desde
la misma línea de aplicación, hasta la
posición final del frente. El valor de este
factor, para cualquier compuesto no puede
ser mayor de uno ni menor de 0.
compuesto a analizar, así como del eluyente, así
podremos ver las diferencias de Rf y asegurar los
puntos anteriores por la distancia recorrida de
cada sustancia y cuando son distintas o cuando
son las mismas.
Fuentes Bibliografías
 http://organica1.org/1311/1311_6.pdf
 https://tv.upc.edu/contenidos/cromatograf
ia-en-capa-fina-es?set_language=es
 https://www.uam.es/docencia/jppid/docu
mentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf