FACULTAD DE CIENCIAS DE

INGENIERÍA
E.P. ING. AMBIENTAL Y SANITARIA

PREPARACION DE
MEDIOS DE CULTIVO

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 PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO
I. INTRODUCCION

Los medios de cultivo son fuentes nutritivas naturales o sintéticas que se asemejan al
nicho ecológico de los microorganismos en el cual se desarrollan estas necesidades
nutricionales se han determinado mediante extensas investigaciones.

De acuerdo a su función o aplicación se tiene los siguientes medios:

 Medios de aislamiento no selectivo se utiliza para aislar bacterias donde se pueden

desarrollar la mayoría de ellas, ya que no presentan inhibidores. Tenemos agar
nutritivo
 Medios de aislamiento selectivo estos medios además de llevar el medio base
presentan un sustrato, más indicadores y en algunos casos que pueden ser
colorantes, sales, antibacterianas como antibióticos. Se clasifican en poco,
médianos y altamente selectivos.
 Medios de aislamiento especifico: son generalmente altamente enriquecidos.
Ademas en estos medios los inhibidores tienen relativa importancia, pues su
especificidad esta en función en su requiza.
 Medios referenciales son medios que llevan un medio corriente, a que se le a
agregado un sustrato conocido y un indicador de pH. En ellos se estudian la acción
de enzimas bacterianas, etc.

Todos los medios deberán ser preparados de acuerdo a las especificaciones dadas por los
fabricantes, así existen medios que requieren esterilización, otros se preparan por
ebullición y otros por filtración.

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II. OBJETIVOS:
 Conocer los procedimientos de preparación de un medio simple o común
y un medio selectivo.
 Conocer las formas de esterilización usadas mas frecuentemente en
microbiología.
 Aprender a preparar los medios de cultivo mas comunes que se utilizan
para el cultivode los microorganismos
 Diferenciar los diversos tipos de medios y su aplicación adecuada de
acuerdo al tipode microorgaanismo a cultivar
III. MARCO TEORICO

MEDIOS DE CULTIVO:

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite

el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para
realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las
muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias. (López T. & Torres C.,2006)

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir
encondiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando
una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más
importantes para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido
de carbono ehidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte
extra de factores decrecimiento específicos en forma de suero, sangre y
extracto de levadura entre otros. (Ramón P. & Juárez A., 2002)

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El desarrollo de un microorganismo en un medio de cultivo depende
de diversosfactores, entre los cuales los más importantes son:

 Disponibilidad de los elementos nutritivos necesarios.

 Existencia del oxígeno requerido.
 Grado de humedad apropiado.
 Valores de pH adecuados: Usualmente neutro o ligeramente alcalino
(7.2-7.4), salvo excepciones.
 Temperatura de incubación precisa: 35-37°C para las bacterias
patógenas.
 Condiciones de esterilidad del medio y protección de posibles
contaminaciones. (García M., Fernández T. & Paredes S., 2005)

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

SEGÚN SU ORIGEN:

 Naturales: Son los preparados a partir de sustancias naturales de

origenanimal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y
cuyacomposición química no se conoce exactamente.
 Sintéticos: Son los medios que contienen una composición
químicadefinida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultadosreproducibles.
 Semisintéticos: Son los sintéticos a los que se les añaden factores
decrecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo,
comopor ejemplo extracto de levadura. (López T. & Torres C., 2006)

SEGÚN SU CONSISTENCIA:

 Líquidos: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en

soluciónacuosa. Favorecen mucho el desarrollo y la multiplicación de
lasbacterias porque al difundirse estas por todo el medio encuentran
confacilidad las sustancias que necesitan para nutrirse.
 Sólidos: Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo).
Elagar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que

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 seextrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las
bacteriasno constituye ningún elemento nutritivo, en ellos las bacterias
crecencon mayor dificultad, pues los nutrientes se agotan con rapidez
en elpunto donde se desarrollan.
 Semisólidos: Se utilizan para determinar la motilidad de las especies
enestudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con
elagregado de agar. (García M., Fernández T. & Paredes S., 2005).

SEGÚN SU COMPOSICIÓN:

 Comunes o universales: Su finalidad es el crecimiento de la mayor

partede los microorganismos poco existentes. Es el medio
másfrecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas.
Porejemplo: agar común o caldo común.
 Selectivos: Son sólidos en los que la selectividad se consigue
alterandolas condiciones físicas del medio o añadiendo
o suprimiendocomponentes químicos específicos con el fin de inhibir
el crecimiento deespecies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este
tipo de medio sólopermite el crecimiento de un grupo de
microorganismos e inhibiendo elde otros. Se utiliza para seleccionar y
aislar microorganismos a partir depoblaciones mixtas. Por ejemplo
Agar salado-manitol o Chapman. (permite el crecimiento de ciertos
estafilococos). (López T. & Torres C., 2006).

SEGÚN SU APLICACIÓN:

 Generales: También llamados comunes, son apropiados para

el cultivode la mayoría de los microorganismos por la facilidad con
que sedesarrollen en ellos.
 Especiales: Conocidos también como específicos, van dirigidos al
cultivode determinadas especies bacterianas o son utilizadas con fines
dediferenciación.
 Enriquecidos: Van añadidos de nutrientes muy ricos que permiten
elcrecimiento de ciertas bacterias difíciles de cultivar.

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 COMPONENTES USUSALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

 Extractos: Para su preparación, ciertos órganos o tejidos animales o vegetales

(por ejemplo, carne, hígado, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor,
yposteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o
polvo. Estospreparados deshidratados son frecuentemente empleados en la
confección demedios de cultivo. Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de
malta, etc. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta, provee
sustanciasnitrogenadas, minerales y vitaminas, mientras que el extracto
delevaduras provee vitaminas del grupo B, nitrógeno y carbono.
 Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados
ysales minerales que carecen de identidad química definida; se obtienen
pordigestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja,
carne, gelatina, caseína, etc.). Las peptonas son muy ricas en péptidos
y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales.
 Fluidos Corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o
suerosanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para
elcultivo de algunos patógenos. La sangre no puede ser esterilizada y debe,
portanto, ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal
sano.Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores
de crecimiento,sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del
crecimiento dealgunas bacterias.
 Sistemas amortiguadores: Algunos componentes son incorporados al medio
decultivo para mantener el pH dentro del rango óptimo del
crecimientobacteriano. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el
pH óptimopara su crecimiento está próximo a la neutralidad), y sales como
fosfatosbisódicos o bipotásicos, o sustancias como las peptonas, previenen
unadesviación del pH.
 Indicadores de pH: Indicadores ácido- base se añaden a menudo a los
mediosde cultivo con objeto de detectar variaciones del pH.

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  Agentes reductores: Cisteína, tioglicolato y otros son agentes reductores
quese añaden a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan
eldesarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios.
 Agentes selectivos: La adición de determinadas sustancias al medio de
cultivopuede convertirlo en selectivo (ver más adelante, clasificación de los
medios decultivo). Por ejemplo, cristal violeta, sales biliares, ácida sódica,
teluritopotásico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada, actúan como
agentesselectivos frente a determinados microorganismos. (Rodríguez C.,
Gamboa C. & Hernández Ch., 2005)

MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS EN LABORATORIO:

AGAR NUTRITIVO:

Es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo

debacteria. Es muy útil porque permanece solido incluso a relativas
altastemperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en
lasuperficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo
denutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una
sustanciaespesa, con colonias difícilmente observables.(Uberoa F, 1981)

IV. MATERIAL Y METODOS:

4.1.MATERIAL.
 Agar nutritivo
 Agar SS
 Balanza analítica
 Espátula
 Matraces
 Probeta
 Cocina
 Placas de Petri

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  pH-meter
 Agua destilada
 Lapiz marcador
 Autoclave
 Hasa de siembra
 Algudon
4.2.METODO
 Pesar las sustancias indicadas en las fórmulas respectivas calculando las
cantidades en relación con los volúmenes requeridos.
 Para aplicar la formula de aspa simple, para dar el uso de la forma exacta de
agar nutritivo nos pide para 100ml de agua destilada en una probeta de 250ml
y luego trasladar ha una matraz de emeleyer

111.02 g de Agar es 1000 ml de agua destilada y como nos pide en 100 ml de

agua destilada es 11.102g de Agar podemos utilizar para preparar nuesto
cultivo.
 Luego se lleva a pesar el Agar, y separar con un espatula un aproximado
11.102g de Agar en la balanza analitica en papel de aluminio
 Despues del pesaje de la muestra aproximado de 11.102 y agua destilada de
100ml se disolve juntamente en una matraz de 500ml tapando con una joronta
de algudon
 Luego calentar la matraz en una estufa durante 9 minutos deluendo hasta
observar las burbugas o ebullicion y retirar de la estufa a un lugar segura y
poner sobre una franela o papel toalla ya que no habra u contacto muy violento.

 Filtrar si es necesario, enfriar modernamente de 5 a 7 minutosy ajustar el pH

6, 8 y 7, 4 u otro que fuera indicado.

 Despues de enfriamento se amarra con pabilo y pape kraft a la muestra

 Llevar la muestra a esterilizar en autoclave por 15 minutos a 120°C.
 Sacar la muestra de autoclave de los tres grupos de la mesa

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  Luego limpiar la mesa con alcohol y algudon para que el ambiente se esteril
de la contaminacion.
 Prender la llama para calentar el parte superior de la mustra de Agar de
microorganismo y servir en 7 placas de petri en proporcion casi iguales a
13.3ml. Tubos de ensayo o placa petri completamente estériles y siempre
frente a una llama (mechero).
 Despues enfriar de 7 a 10 minutos, y luego si hace una esterilizacion al
material haza de siembra, luego se introduce a leche de suero para formar
siembra por estria en cada cuadrante, y en primer cuadrante mayor estria en
segundo lamitad de estria y en tercero la tercera parte en cuarto cuadrante uno
o dos puntos de estria, y aplicar a las 7 placas de petri, para almacenamiento
de los microorganismos.
 Luego se remplaza a la encobadora microbiana, para los medios de siembra a
37ºc hasta que haya habido crecimiento bacteriano durante 24 a 48 horas.
V. RESULTADOS:
 Se obtuvo un medio de cultivo en buenas condiciones.
VI. DISCUSIÓN O COMENTARIOS:
 Para poder identificar los microorganismos es necesario observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales.
 (Pinto & Martín, 2012)

VII. CONCLUSIONES:

 Se aprendió a preparar los medios de cultivo como el caldo nutritivo.

 Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite
eldesarrollo de microorganismos.
 Nuestro cuerpo también es un excelente portador de microorganismos
 Se diferenció los tipos de medios de cultivo y su aplicación adecuada
 Los medios de cultivo están conformados por nutrientes favorablespara la
proliferación de microorganismos.

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 Tenemos que esterilizar los materiales a utilizar para el cultivo
demicroorganismos para evitar la contaminación.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

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