ENZIMAS…

Catalizadores biológicos
 Las enzimas están en el centro de cada proceso bioquímico.
Son el origen de la compleja sinfonía altamente regulada
que denominamos vida.
ENDOCELULARES EXOCELULARES

Citosol

REL Núcleo

Mitocondria

RER
Ribosomas
Membrana
Golgi

Lisosoma
 Concepto y características de las enzimas.
Las enzimas son catalizadores biológicos que aumentan la velocidad de
las reacciones, disminuyendo la energía de activación sin modificar la
constante de equilibrio, ni la variación de la energía libre de las mismas.

La mayoría de las enzimas son proteínas, excepto un pequeño grupo de

ARN catalítico (Ribozimas).

Las reacciones químicas sin catálisis no se darían en tiempos

compatibles con la vida.

El manejo de las enzimas es una herramienta practica para la

medicina, la industria y los alimentos.

Eficientes
Específicas
Actúan en bajas concentraciones, en relación al sustrato
No se consumen en las reacciones que catalizan
Son regulables
Cofactor
iones inorgánicos: Fe2+. Cu2+ (Citocromo oxidasa); K+ (Piruvato kinasa); Ni2+ (Ureasa),
Mg2+(Hexokinasa), Mn2+ (Hexokinasa, Piruvato kinasa)

Coenzima
complejo orgánico o complejo metalo-orgánico

Coenzima Tipo de reacción Grupo transferido

NAD+ óxido-reducciones H+, e-

FAD óxido-reducciones H+, e-

Coenzima Q óxido-reducciones H+, e-

Coenzima A activación y C=O
transferencia de acilos
Fosfato de Piridoxal transaminaciones - NH2

Si el cofactor o la coenzima están unidos covalentemente

a la enzima se denominan grupos prostéticos

Enzima + Coenzima
Haloenzima

La parte proteica de la Haloenzima se denomina Apoproteína

Isoenzimas
catalizan una misma reacción, sin embargo su

estructura molecular y origen son diferentes. Hexokinasa-
Glucokinasa.
 Clasificación de las enzimas

1. Oxidorreductasas: reacciones de óxido-reducción.

Deshidrogenasas, oxidasas.
2. Transferasas: transferencia de iones, radicales y grupos químicos.
Kinasas, aminotransferasas.
3. Hidrolasas: ruptura hidrolítica de enlaces.
Peptidasas, fosfatasas.
4. Liasas: ruptura de enlaces no hidrolítica.
Carboxilasas y decarboxilasas.
5. Isomerasas: reacciones de isomerización.
Mutasas, racemasas.
6. Ligasas: formación de un compuesto por condensación de dos.
Sintetasas, Sintasas.
 Mecánica enzimática
Hexokinasa
Sitio activo
Glucosa + ATP Glucosa 6-fosfato + ADP
Glucosa
Sustrato
CH2OH
(S) Glucosa
O
H H
Hidrofílica H
Puentes de H OH H
OH OH

H OH

Basado en estructura rayos X, Thomas Steitz Hidrofóbico

Interacciones hidrofóbicas
y de Van der Waals
ATP NH2
N
O N
O O
O P O P O P O CH2 O N N
O- O- O- H H
Enzima OH
(E) Hidrofílica
OH OH
Enlaces iónicos, Puentes de H
 La la velocidad de la reacción enzimática
depende del entorno

La velocidad de reacción es la cantidad de reactante que se consume o

cantidad de producto que se forma por unidad de tiempo. [S]o[P]/tiempo.

La velocidad de reacción está influida por:

• Tiempo
• [S]
• [E]
• Temperatura
• pH
• Cofactores, coenzimas
• Inhibidores
• Moduladores
 Las enzimas han evolucionado para disminuir selectivamente
‡
la energía de activación (∆G )
‡ Estado de
transición ‡ Reacción sin catalizar

∆G‡
‡ Estado de Reacción catalizada S
P
‡ ∆G‡
Energía libre (G)

transición
P
S

∆G‡ ∆G‡
S
P
S
P P
S

S
Estado basal
∆G’º
P
Estado basal

Sentido de la reacción
‡ Estado de transición: es una especie química muy inestable. Es el
máximo nivel energético en donde la probal¡bilidad de dar S o P es igual.
 E+S ES EP E+P

‡ Estado de
transición ‡ Reacción sin catalizar

∆G‡ ∆GF
Energía libre (G)

‡ Estado de
transición
‡ Reacción catalizada
S
P
∆G‡
S ES EP

P
Intermedios de reacción
Estado basal

Sentido de la reacción

La energía de fijación (∆GF), es la principal fuente de energía libre que

utilizan las enzimas para disminuir la energía de activación de las recciones.
 La descomposición del ES es el paso limitante de la
reacción enzimática.

k1 k2
E+S ES E+P
K-1 K-2

Si la [S] es muy superior a la [E], a tiempos cortos, la [S] permanece constante.

En éstas condiciones se habla de velocidades iniciales (V0)

Leonor Michaelis y Maud Menten (1913):

1. la combinación reversible del la [E] con el [S] ocurre en un paso muy rápido.
2. la descomposición del [ES] ocurre en un paso lento. la descompocisión del
[ES] es el paso limitante de la rección
3. a V0,, k-2 es despreciable.

4. k2 es la menor. Es limitante: V0 = k2 [ES] Km= k-1+ k2

k1
5. en el estado estacionario: Vf [ES] = Vd [ES]
 Cinética enzimática en el estado estacionario
Modelo de Michaelis -Menten CONSTANTE
Temperatura
E+S ES E+P [E]
Vo
(mM/min) Tiempo

Reacción de orden 1 Reacción de orden 0 pH

Vm Vo æ [S] Vo Constante 100 % Otros

[E]>>>[ES] [E]<<<[ES]
V0= Vm [S]
Vm Km +[S]
2

0
Km S (mM)

Vm: constante para cada sistema ES, cuando [E]cte. Vm= k2 [ET]

Km= es constante para cada sistema ES. Es una [S] al 50 % de la saturación.

 Gráfico de los dobles recíprocos
Modelo de Lineweaver-Burk
1 1
Vo (mM/min)

1 = 1 + Km 1
V0 Vm Vm [S]
Pendiente = Vm
Km
1
Vm

-1 0 1 (mM)-1
S
Km
Si una reacción transcurre en muchos pasos, Km es una función
muy compleja de muchas constantes de velocidades.
Vm y Km no proporcionan información acerca del número, velocidades o
naturaleza química de los pasos discretos en una ecuación.

¿Qué ocurre cuando el paso limitante de una reacción es la

liberación de P a partir del EP?
k1 k2 k3
E+S ES EP E+P
K-1 K-2 K-3

Número de recambio (kcat)
número de moléculas de S convertidas en P, por

unidad de tiempo, para una molécula de E, cuando el la enzima está sarurada.

V0= kcat [ET] [S]

Vm= k3 [EP] V0= kcat [ET] [S]
Km + [S] Km

Constante de especificidad (kcat/Km)
es la velocidad de conversión de E +S

en E + P, cuando [S]<<km
El modelo de Lineawever-Burk permite comparar diferentes
actividades enzimáticas y determinar el tipo de inhibición.

El inhibidor disminuye la actividad enzimática, sin ser transformado por la

enzima (no actúa como sustrato).

Tipos de inhibición:
1. Reversible: la actividad enzimática puede recuperarse.
- Competitiva
- No competitiva
- Acompetitiva
2. Irreversible: la actividad enzimática no se recupera.
Inhibición competitiva
El inhibidor compite con el sustrato por el sitio activo de la enzima, pero no
forma producto.

1/Vo 0,07 Producto

Sustrato CON INHIB IDOR

Enzima

0,035
SIN INHIB IDOR

Inhibidor

0
-2 -1 0 1 2
1/S

El inhibidor disminuye la velocidad de la reacción.

La Vm de la reacción con o sin inhibidor no varía.
La Km del sistema EI es mayor que el del sistema ES.
La inhibición se puede revertir aumentando la concentración del sustrato.
Inhibición no competitiva
El inhibidor se une a la enzima, en un sitio diferente al sitio activo.
NO compite con en sustrato

0,035 1/Vo
SIN INHIBIDOR
CON INHIBIDOR

Inhibición de la anhidrasa
carbónica con acetazolamida 0,0175

0
-1 -0,5 0 0,5
1/S

El inhibidor disminuye la velocidad de la reacción

La Vm del sistema ESI es menor que la del sistema ES.
La Km del la reacción con o sin inhibidor es igual.
La inhibición NO se revierte aumentando la concentración del sustrato.
 La concentración y la actividad de las enzimas
puede ser regulada

Concentración: relación entre la síntesis y la degradación.

[E] Regulada por factores genéticos.

Actividad: regulación de la actividad enzimática

Factores cinéticos: [S], temperatura, pH, concentración iónica,

cofactores, coenzimas, inhibidores.

Regulación específica:

Alostérica
unión reversible, no covalente con moduladores.

Covalente
unión covalente reversible con grupos reguladores.

Proteólisis limitada
irreversible.

 La actividad enzimática está imfluenciada por el tiempo
la temperatura y el pH del medio
0,4 0,4
[P] [P]

0,2 0,2

0 0
0 15 30 45 0 15 30 45 60 75
t (min) T (ºC)
 La regulación alostérica
F6P + ATP
F1,6BP + ADP

↓[ATP]
↑ actividad PFK-1
↑ glucólisis

Punto de regulación
principal de la glucólisis

↑[ATP]
↓ actividad PFK-1
↓glucólisis

• No cumplen la cinética michaeliana, sino que presentan una curva sigmoidea.

• Generalmente son proteínas oligoméricas.
• Su actividad enzimática está regulada por moduladores positivos y negativos.
• El modulador no se une al sitio catalítico, sino al Sitio Alostérico.
 La regulación alostérica
La unión covalente de grupos químicos o radicales altera la conformación de la
enzima transformándola en una forma más o menos activa.

↑ Glucogenogénesis GS a
Activa

2Pi GF b 2ATP
Menos activa Fosforilasa
Fosforilasa
kinasa
fosfatasa
Fosforilasa a Fosforilasa b
fosfatasa GS b kinasa
2H2O Menos activa 2ADP

GF a
Activa

↑ Glucogenólisis
 El control enzimático permite controlar el metabolismo

En una vía metabólica en la que participan varias enzimas en

forma secuencial, la velocidad de la enzima más lenta es la
limitante de la vía global. Esto es un punto de regulación.

Determinan la dirección de la vía

Sustrato A Producto P

B
Enzima clave D
Unidireccional C
Punto estratégico

Regulación
Alostérica
señales locales, necesidades celulares.
Covalente
mensaje hormonal, nesecidades orgánicas.