DILUCIONES SERIADAS

J. Trujillo1, J. García2

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Estudiante de Ingeniería Agroindustrial, Universidad Surcolombiana, Facultad de
Ingeniería, Neiva-Colombia

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RESUMEN

En el presente artículo se hablará sobre las diluciones seriadas con tres medios de cultivo
tales como plate count agar, sabouraud agar y macconkey agar. Entre sus características se
pueden identificar la colonia, dentro del proceso se hará uso de medios de cultivo artificial
tipo agar y de diluciones seriadas, con tres tipos de agar para la obtención de un ambiente
óptimo de crecimiento y reproducción de microorganismos, donde en las muestras
extraídas por medio de la dilución seriada para sus análisis, se hicieron visible, colonias de
levaduras.

Palabras clave: Dilución seriada, Medio de cultivo, colonia, levaduras.

ABSTRACT

In this article we will talk about serial dilutions with culture media such as the agar agar plate,
sabouraud agar and macconkey agar. Among its characteristics can be identified the
colony, within the process can be used the use of artificial agar type media and serial
dilutions, with three types of agar to obtain an optimal environment for growth and
reproduction of microorganisms, where in the Samples extracted by means of serial
dilution for analysis, colony yeasts were made visible.

Key Word: Serial dilution, culture medium, colony, yeast.

 1. MARCO TEÓRICO:
Es un hecho que en la mayoría de los
ambientes, la densidad microbiana suele
ser demasiado elevada o baja para poder
realizar una siembra directa de la muestra
que de buenos resultados en la
enumeración de microorganismos. Esta
situación hace necesaria la dilución o la
concentración de la muestra previa a la
realización de cualquier estudio. Además,
las muestras sólidas requieren su dilución
para facilitar la manipulación y permitir
trabajar con ellas como si fueran muestras
líquidas (Arana, Orruño, & Barcina,
2012).
El sabouraud agar medio de cultivo
recomendado para el aislamiento y
desarrollo de hongos, particularmente los
asociados con infecciones cutáneas (piel,
pelo). En el medio de cultivo, la peptona, la
tripteína y la glucosa son los nutrientes
para el desarrollo de microorganismos. El
alto contenido de glucosa, la presencia de
cloranfenicol y el pH ácido, inhiben el
desarrollo bacteriano y favorecen el
crecimiento de hongos y levaduras. El agar
es el agente solidificante. Puede ser
suplementado con otros agentes selectivos
de crecimiento (Britania, 2019).
El mac Conky agar el medio de
cultivo, las peptonas, aportán los nutrientes
necesarios para el desarrollo bacteriano, la
Lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la mezcla de sales biliares y
el Cristal violeta son los agentes selectivos
que inhiben el desarrollo de gran parte de
la flora Gram positiva. El agar es el agente
solidificante, todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae desarrollan en
el mismo, por fermentación de la lactosa,
disminuye el pH alrededor de la colonia.
Esto produce un viraje del color del
indicador de pH (rojo neutro), la absorción
en las colonias, y la precipitación de las
sales biliares. Los microorganismos no
fermentadores de lactosa producen
colonias incoloras (Britania Laboratorios,
2019).
El plate count agar Plate Count Agar (Agar
de métodos estándar) se utiliza para la
enumeración de bacterias en el agua, aguas
residuales, alimentos y productos lácteos en
un entorno de laboratorio. Plate Count Agar
no está diseñado para su uso en el
diagnóstico de enfermedades u otras
afecciones en humanos. Esta fórmula
cumple con las normas ISO 4833-1 y 2:
2 0 1 3 , ISO 17410: 2 0 0 1 , Asociación
Americana de Salud Pública (APHA),
Asociación de Químicos Analíticos
Oficiales (AOAC) y Manual de Análisis
Bacteriológico de la FDA, Plate Count Agar
(Agar de métodos estándar) está libre de
suplementos selectivos y es relativamente
rico en nutrientes, lo que lo hace ideal para
la enumeración de organismos viables, ya
sea siguiendo un método de placa de vertido
o un método de placa de superficie.
(Neogen Seguridad Alimentaria, 2018)
 2. METODOLOGÍA
Se prepara tres medios de cultivos en
este caso Plate Count Agar, MacConkey
Agar y Saburou Agar, siguiendo las
indicaciones de la etiqueta se deben
agregar 22,5 g/L de Plate Count Agar, 50
g/L de MacConkey Agar y 65 g/L de
Saburou Agar, como se van a preparar 6
cajas de Petri por cada medio de cultivo, se
realiza los cálculos:
Plate Count Agar= 22,5 g/L
Ecuación 1
22,5 𝑔 → 1000 𝑚𝑙
= 2,7 g/120 ml.
𝑥→ 120 𝑚𝑙
Se usa la misma operación para los
otros 2 medios de cultivo y se obtiene para
el MacConkey Agar = 6 g/120 ml y para el
Saburou Agar = 7,8 g/120 ml.
Se pesan en una balanza y se mezclan
cada uno en un Erlenmeyer, a
continuación se tapan las bocas de los
Erlenmeyer con papel kraft, se agita y se
lleva cada uno a una placa de
calentamiento a 300°C hasta que hierva y
posteriormente junto con las cajas de Petri
envueltas en papel kraft se introducen en
un autoclave a 120°C y 7 lb de presión
durante 7 minutos.
Luego de que se esterilicen se sacan del
autoclave, se dejan enfriar y se sirve en las
cajas de Petri hasta que se solidifiquen, a
continuación en un Erlenmeyer se
adicionan 90 ml de agua peptonada y 10 g
de papas fritas e inmediatamente se agita,
posteriormente en otro Erlenmeyer se
repite el mismo proceso pero en este caso
se usa 10 ml de yogurt, en seguida se
prepara en 3 tubos de ensayo 10 ml de agua
peptonada y en el Erlenmeyer que contiene
la mezcla de agua peptonada y papas fritas
se hace diluciones seriadas 1:10 hacia los
tubos de ensayo, se repite el mismos
proceso para el yogurt, en seguida se
procede a cultivar, en el Plate Count Agar
se usa la técnica de siembra por estrías, en
el MacConkey Agar la técnica por
cuadrantes y en el Saburou Agar la técnica
por agotamiento, después se lleva a una
nevera a 36°C durante 24 horas, pasado el
tiempo se sacan de la nevera, se observa si
crecieron microorganismos y luego se
cuentan las colonias.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
Como se observa en la Figura 1, no hubo
desarrollo bacteriano ni fúngico en las
muestras de papas fritas y de yogur, esto se
debe a que posiblemente el agar estaba
vencido.
 Figura 1. Siembra de papas fritas y de Figura 2. Siembra de papas fritas y de
yogurt en Agar Plate Count. Técnica por yogurt en Agar MacConkey. Técnica por
estrías. Dilución 10-1, 10-2 y 10-3. cuadrantes. Dilución 10-1, 10-2 y 10-3.

En la figura 2, se observa que no hubo En la Figura 3 se puede observar una

desarrollo de enterobacterias, esto se debe colonia de hongos, por su morfología se
a que no había presencia de estas bacterias trata de levaduras y haciendo un conteo de
en las muestras de papas fritas y de yogurt. placa hay 1x103 UFC/ml.
 Figura 3. Observación de levaduras.
Siembra de papas fritas en Agar Saburou.
Técnica por agotamiento. Dilución 10-3.
Como se puede observar en la Figura 4,
hay 3 colonias de hongos, por su
morfología se trata de levaduras y
haciendo un conteo de placa hay 3x102
UFC/ml.
5. REFERENCIAS
1. Arana, I., Orruño, M., & Barcina, I.
Figura 4. Observación de levaduras.
Siembra de yogurt en Agar Saburou.
Técnica por agotamiento. Dilución 10-2.
4. CONCLUSIONES:
2. Britania. (20 de 06 de 2019).
De los medios de cultivo
utilizados para la proliferación de
microorganismos se denota
crecimiento en el sabouraud agar
dadas su composición química,
haciendo posible las condiciones
óptimas de reproducción de los
mismos.
En las muestras extraídas para sus
análisis se hicieron visible, colonias
de levaduras ya que en los otros dos
medios como lo es el macconkey
agar, que sirve como medio selectivo
de enterobacterias, no se encontró
reproducción de los mismos, en la
muestra de alimentos (papas,
yogurt), y en el plate count agar al ser
un medio enriquecido no hubo
proliferación por que de tanto tiempo
que tiene el agar en uso, se ha
vencido y pierde sus compuestos de
enriquecimiento.
(05 de 2012).
OpenCourseWare Universidad del
pais vasco. Obtenido de
OpenCourseWare Universidad del
país vasco:
https://ocw.ehu.eus/pluginfile.php/1
654/mod_resource/content/1/Tema
_1._Diluciones_y_concentraciones.
pdf.
Sabouraud Glucosado Agar.
Obtenido de Sabouraud
Glucosado Agar:
https://www.britanialab.com/back/p
ublic/upload/productos/upl_5a2971
216486 e.pdf
3. Britania Laboratorios. (20 de 07 de
2019). Mac Conkey Agar. Obtenido
de
https://www.britanialab.com/back/p
ublic/upload/productos/upl_5a2ed6
74cf661.pdf
4. Neogen Seguridad Alimentaria. (28
de 08 de 2018). Plate Count Agar
(Standard Methods). Obtenido de
https://foodsafety.neogen.com/pdf/
ncm/ncm0010_pi.pdf