Informe de Laboratorio de Bioquímica General

Pruebas generales para Carbohidratos

Wilmar Guzmán Zapata, Leidy Vanesa Salamanca Sandoval

*Laboratorio de Bioquímica General, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educación,

Universidad del Cauca, Popayán-Colombia.

RESUMEN: Los carbohidratos tienen como principal función la de contribuir en procesos de

almacenamiento y obtención de energía en los seres vivos, se encuentran formados por tres
elementos fundamentales que son: carbono, hidrogeno y oxígeno. En la práctica se tomaron en
cuenta carbohidratos como: glucosa, fructosa, lactosa, maltosa, ribosa, galactosa y sacarosa, los
cuales fueron sometidos a diferentes pruebas para comprobar sus propiedades donde reaccionaron
de manera positiva o negativa; la primera es la prueba de Molish a la cual se notó un cambio de
color a vino tinto en todos los tubos, la segunda es la prueba de Seliwanoff donde se notó un
cambio de color rojo en la sacarosa y fructosa, una tercera que es la prueba de Bial, dando positivo
para la fructosa (color amarillo) y la ribosa (color verde), una cuarta prueba denominada de
Benedict la cual nos dio positivo, la glucosa, fructosa, ribosa, galactosa y lactosa (color rojizo),
en la penúltima prueba de yodo para polisacáridos , se tiene como positivo el almidón y por último
la prueba de Barfoed la cual dio positiva para glucosa, galactosa, ribosa, y fructosa. Por lo tanto,
se logró identificar las características que presentan cada una de las diferentes soluciones de
carbohidratos debido a los cambios de color que tuvieron al reaccionar con los diferentes reactivos.

1. INTRODUCCIÓN
Los carbohidratos pueden tener una
influencia directa sobre las enfermedades
humanas así modificando los procesos
fisiológicos y metabólicos [1]. Así es como en
la actualidad se analizan estudios acerca de
enfermedades como la obesidad, diabetes o
enfermedades cardiovasculares, que afectan a
la población en general.
Sin embargo, los carbohidratos son de gran
importancia para todo ser vivo ya que de ellos
depende la energía requerida, estos son más
empleados con una estricta dieta por los
deportistas. La dieta habitual del deportista
tiene que ser rica en hidratos de carbono [2].
La característica química principal de los
hidratos de carbono es la presencia de un
grupo carbonilo (aldehído o
cetona) y de varios grupos hidroxilo. Los
carbohidratos o hidratos de carbono pueden
Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
clasificarse como monosacáridos, estructuras
sencillas, siendo las más abundantes las
hexosas y pentosas,
disacáridos, carbohidratos formados por 2
monosacáridos y polisacáridos, biomoléculas
de una gran cantidad de monosacáridos.
2. METODOLOGÍA
Se tienen en cuenta siete carbohidratos
(glucosa, fructosa, lactosa, maltosa, ribosa,
galactosa y sacarosa) que se les denomina
solución patrón de carbohidratos en cada
prueba (0,5 mL c/u). La prueba de Molish se
realiza con dos gotas del reactivo de Molish a
las soluciones patrones de carbohidratos ya
rotulados gota a gota, agregando por las
paredes se le añaden 0,5 mL de H2SO4 se
notándose un cambio de color en todos los
tubos, una coloración morada. En la prueba de
Seliwanoff se añaden 10 gotas de reactivo de
seliwanoff a las soluciones patrón, seguido a
1
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esto, se mezcló y llevó a un beaker con agua Tabla 1. Prueba de Molish y Seliwanoff
en ebullición a 85 °C durante 4 minutos, para solución de patrones de
donde se presenció un cambio de color en la carbohidratos.
sacarosa cambiando a color rojo (colocar las
otras que reaccionaron). Pruebas
Carbohidratos
Molish Seliwanoff
En la prueba de Bial se añaden 10 gotas del No
reactivo de Bial a las soluciones patrón de Almidón Reacciona
reacciona
carbohidratos; se calientan con un baño de Sacarosa Reacciona Reacciona
agua hirviendo, se deja enfriar y se le añade 5 No
mL de agua. Por último, se le añade 0.5 ml de Glucosa Reacciona
reacciona
alcohol butílico, se espera durante 3 minutos, No
notándose un cambio de color para la glucosa Galactosa Reacciona
reacciona
a amarillo y en la fructosa una coloración No
verdosa. En la prueba de Benedict se les Ribosa Reacciona
reacciona
añaden 15 gotas a las soluciones patrón de Fructosa Reacciona Reacciona
carbohidratos y seguido a esto se calientan en No
un baño de agua hirviendo durante 5 minutos, Lactosa Reacciona
reacciona
se nota un cambio de color en la glucosa,
fructosa de color amarillo y en la ribosa un Tabla 2. Prueba de Bial y Benedict para
color negro humo. En la prueba de yodo se solución de patrones de carbohidratos.
utilizan 2 gotas del reactivo de yodo para las
soluciones patrón de carbohidratos, se Pruebas
mezclan y se observan cambios, donde se Carbohidratos
Bial Benedict
apreció un color azul oscuro en el tubo que
No No
contenía almidón. Por último, para la prueba Almidón
reacciona reacciona
de Barfoed se le agregaron 10 gotas del
No No
reactivo a cada una de las soluciones patrón, Sacarosa
Reacciona reacciona
los tubos se disponen en un beaker con gua
No
hirviendo y tras 1 minuto se presentó un Glucosa Reacciona
reacciona
cambio de color a Vinotinto a la glucosa,
galactosa, fructosa y ribosa. No
Galactosa Reacciona
reacciona
3. DATOS, CALCULOS Y Ribosa Reacciona Reacciona
RESULTADOS Fructosa Reacciona Reacciona
No
Lactosa Reacciona
reacciona

Tabla 3. Prueba de polisacáridos y Barfoed

para soluciones patrón de carbohidratos.

Carbohidratos Pruebas

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Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
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Yodo Barfoed O CHO

+
No Pentosas C6H10O5 H
Almidón Reacciona
reacciona
No No Furfural
Sacarosa
reacciona Reacciona Reacción 2: Deshidratación de hexosas
No producción de 5-hidroximetilfurfural. [5]
Glucosa Reacciona
reacciona
No +
HOCH 2 O
Galactosa Reacciona Hexosas C6H12O 6 H
CHO
reacciona
No
Ribosa Reacciona 5-hidroximetilfurfural
reacciona
No En el ensayo de seliwanoff, es una prueba
Fructosa Reacciona
reacciona cualitativa se basa en la formación de
No No derivados furfuricos como en la prueba
Lactosa
reacciona reacciona anterior, en este caso el 5-
hidroximetilfurfural (deshidratación de
cetohexosa) reacciona con el resorcinol (1,3-
4. ANALISIS DE RESULTADOS dihidroxibenceno, componente de prueba de
El ensayo de Molish sirve para un seliwanoff) [6] dando positivo para los
reconocimiento en general de carbohidratos carbohidratos que contengan cetohexosas. En
[3] en el que los polisacáridos como en este la práctica la sacarosa y fructosa dieron
caso almidón, los disacáridos como la positivo para esta prueba ya que al ser la
sacarosa y lactosa y los monosacáridos como primera un disacárido de hexosa compuesto
la glucosa, galactosa, ribosa y fructosa dan por glucosa y fructosa y la fructosa al ser una
positivo en esta prueba. Todos presentan un cetohexosa, presentan cambios en los tubos
color rojo violeta en la interface esto debido a de ensayo, la sacarosa en menor proporción
que se hidrolizan (los carbohidratos) con el ya que al estar conformado también por
ion sulfuro, experimentan una serie de glucosa, y esta al no ser una cetohexosa
reacciones de deshidratación sucesivas, lo disminuye la reacción a parcialmente y así
cual explica los resultados obtenidos en el con el resorcinol se obtuvo una coloración
laboratorio, dando un resultado igual al de la rojiza que se observó en la práctica.
teoría. Se produce furfural, a partir de las
pentosas (ribosa) o 5-hidroximetilfurfural a
partir de las hexosas [4] (glucosa, sacarosa, Prueba de Bial, se usa para diferenciar a
galactosa, fructosa y lactosa). El reactivo de pentosas de hexosas, este contiene orcinol
Molish es una disolución al 15 % α-naftol en disuelto con HCl concentrado, para la
etanol, este reacciona con furfural o 5- práctica de laboratorio se tienen: para las
hidroximetilfurfural, a través de una reacción pentosas a la ribosa y las hexosas, glucosa
de condensación, para producir un compuesto galactosa y fructosa, las cuales se
de color purpura [4]. deshidratan, en medio acido dando furfural
(pentosas) o 5-hidroximetilfurfural (hexosas),
Reacción 1: Deshidratación de pentosas, ambas sustancias reaccionan con orcinol, y
producción de furfural. [5] FeCl3, dando productos de condensación [6].
Los resultados fueron positivos para la ribosa
(verde oliva), y la fructosa (amarillo fuerte).

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Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
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Figura 1. Estructura del Orcinol, compuesto
del reactivo de Bial. [7]
CH3
HO OH
Debido a que la sacarosa está compuesta por
glucosa y fructosa por enlace O-glucosídico,
esta sustancia para esta prueba fue negativa,
sin embargo, se observó un color amarillo
claro, lo que indica que se alcanzó a hidrolizar
el enlace glucosídico y probablemente la
fructosa como es la primera en deshidratarse
forma el hidroximetilfurfural que al
condensarse con orcinol forma el producto de
color amarillo-anaranjado. Para el caso de la
glucosa y la galactosa donde se reportó en una
consulta preliminar como positivo y debe ser
positivo por su estructura hexosa; la prueba
según el experimento es negativa debido al
color que presenta, este resultado pudo ser
debido a que no se realizó el calentamiento
suficiente para que se forme el
hidroximetilfurfural y reaccione con el
orcinol y forme el complejo de color
amarillo- oscuro, el cual se desea para esta
prueba.
Para la prueba de Benedict; se observó un
notable cambio de color excepto en la
sacarosa y almidón, son los únicos que no
reaccionan las demás toman una coloración
de tonalidad rojiza y para la ribosa, tornó de
una coloración mas oscura, no obstante, se
debe a que esta, al ser la única pentosa,
presento una reacción más rápida y una
variación de color, debido a un calentamiento
prolongado, hasta llegar a una
precarburización, pasando de azul oscuro al
tono rojizo oscuro observado.
Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
Para esta reacción, cabe resaltar que debido a
que todos los monosacáridos son azucares
reductores (MATHEWS), la lactosa; dio
positivo para esta reacción debido a que posee
un carbono anomérico libre y por tanto un
grupo aldehído libre, presentando la
oxidación característica de esta reacción. No
obstante, la galactosa no tiene esta
posibilidad. En la sacarosa y fructosa ninguno
de sus elementos presenta un grupo aldehído
libre, debido a que sus dos cetohexosas son
anoméricas, por tanto, no son reductores;
motivo por el cual no reacciono.
(MATHEWS).
La prueba de polisacáridos con Yodo, sirve
para identificar polisacáridos, formando
estructuras coloreadas con el yodo, lo cual se
debe a la absorción del yodo en sus cadenas
[8] En la práctica se presenta de manera
positiva para el almidón, ya que este es un
polisacárido; su coloración cambia a azul
oscuro, esto se debe a que polisacáridos como
la amilasa (componente del almidón) generan
complejos de un color azul intenso [8], este
color estructuralmente se debe a que el yodo
se introduce entre las espiras de la molécula;
cabe resaltar que no es una verdadera
reacción química, si no que forma un
compuesto de inclusión que modifica la
propiedades físicas de esta molécula, por eso
la coloración[9].
Dado que la prueba de Barfoed, al igual que
en la de Benedict. En este reactivo el ion
cúprico, se encuentra en una disolución,
débilmente acida y la velocidad de reacción
de la reducción en caliente da lugar a iones
cuprosos que precipitan en forma de óxido
cuproso, en las condiciones acidas los
disacáridos tardan más en reaccionar que los
monosacáridos, por lo que permiten
diferenciarlos. [7], los resultados de la
práctica fueron correctos con los de teoría.
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Informe de Laboratorio de Bioquímica General
Por tanto, encontramos que el almidón es un
polisacárido que presentara reacción en
pruebas como Molish y yodo, donde sufrió
una reacción de adición y no en las otras ya
que al ser un polisacárido pierde la capacidad
reductora de la glucosa que conforma sus
cadenas; así mismo, dos disacáridos, la
fructosa y sacarosa reaccionan en el ensayo
de seliwanoff, prueba para identificar
cetohexosas; no obstante, la fructosa, al igual
que el almidón, no presento reacción en el
ensayo de Benedict ya que presenta enlaces
glucosídicos anoméricos que le impide
funcionar como un carbohidrato reductor al
no tener grupos aldehídos potenciales; la
maltosa, otro disacárido, reductor, presento
reacciones similares a la sacarosa; ya que
ambos son carbohidratos disacáridos
reductores, destacando que en la reacción de
Seliwanoff, sufrieron una reacción lenta
debido a la glucosa, una aldosa; que al igual
que otros monosacáridos, reacciona como un
azúcar reductor; sufriendo las mismas
reacciones que la galactosa, las cuales
reaccionan más rápido que los disacáridos en
la prueba de Barfoed ya que esta prueba fue
diseñada para identificar monosacáridos pero,
también presenta reacción con los disacáridos
en un lapso de tiempo más largo y en
exposición al calor.
5. CONCLUSIONES
5.1. Se logro identificar el comportamiento
de los carbohidratos según sean cetosas o
aldosas, donde las cetosas sufrieron
cambios más notables según la
temperatura y medio en que
reaccionaran.
5.2. Se observo como el factor tiempo, en el
ensayo de Benedict, nos da positivo para
disacáridos, siempre en cuando se
encuentren en un medio acido, el cual
romperá los enlaces glucosídicos de
estos, liberando los monosacáridos que
Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
lo componen, los cuales son azucares
reductores.
5.3. Se identifico la facilidad que tienen las
cetosas para comportarse como aldosas
debido a el proceso de tautomerizacion
que sufren, siendo estos permanentes en
casos donde se ven implicados medios
ácidos o básicos que se encargan de
estabilizarlas
5.4. Se encontró que, en las pruebas de yodo,
no todos los resultados esperados se
deben a reacciones químicas, si no
también a procesos de adición como en el
caso del ion triyoduro.
5.5. Se concluye, de manera general que para
la correcta identificación de un
carbohidrato o, cadenas de estos, es
necesario someterlos a diferentes
pruebas donde nos permitan hallar
diferencias notables en su
comportamiento, sin dar lugar a la duda
por procesos de disociación o
reorganizamiento, ya que, en las
diferentes pruebas, los reactivos dieron
positivo dado a su comportamiento según
el medio o condiciones en que fueron
expuestos.
6. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
6.1. Reacciones presentes durante la práctica.
Reacción 1. Molish [8]
OH HO
H+
2
+
Carbohidrato R
OH
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HO

Oxidación
R
R

OH
OH
Cromogeno violeta
Reacción 3. Bial
Reacción 2. Seliwanoff
CH 2(OH) OH
O H
HCl
H H (HO)H 2C O + 3H2O
H OH Desidratación O

OH OH 5-hidroximetilfurfural
Cetohexosa
HO

H Reacción 4. Barfoed
(HO)H 2C O +3 OH
O
RCOH + 2Cu+2 + 2H2O → RCOOH +
5-hidroximetilfurfural Resorcinol Cu2O↓ + 4H+
calor Condensación
6.2. ¿Porque la fructosa da positiva en el
O ensayo de Benedict?
Dado el medio alcalino en el cual se llevó a
OH
cabo la reacción, aportado por el reactivo de
Benedict, al calentar los reactivos; causo la
(HO)H 2C
O tautomerizacion ceto-enol, de la fructosa a
OH glucosa y de esta manera, sufrió la oxidación
como sucedió con la glucosa en su respectivo
ensayo [10]. La fructosa, al ser una cetona,
OH
Compuesto coloreado (rojo) posee átomos de hidrogeno en sus carbonos
alfas, los cuales se Inter convierten de manera
rápida para formar un enol, que al presentarse
la canalización por una base, donde la base
elimina un hidrogeno ácido de la posición
alfa; produciendo un anión enolato que al ser
protonado en el átomo de oxígeno, produce el
Reacción 3. Benedict enol, regenerando el catalizador básico,

6
Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
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resultando en la formación de una aldosa que
en este caso, es la glucosa [12].
6.3. ¿Por qué se dice que la maltosa y la
lactosa tienen un grupo aldehído
potencial?
La principal razón, se da debido a que, en
ambos casos, los enlaces glucosídicos de, 1 de
α-glucosa y el carbono 4 de otra α-glucosa
para la maltosa y 1 β-galactosa con el carbono
4 de α-glucosa para la lactosa; el carbono 1 de
la glucosa queda libre (MATHEWS).
6.4. ¿Por qué el glucógeno y el almidón dan
negativo como azucares reductores?
Debido a que estos dos azucares, están
formados por enlaces glucosídicos de
monosacáridos que en general, son iguales, la
glucosa; poseen estructuras lineales y
ramificadas que en el caso del almidón está
dispuesta en forma helicoidal, alrededor de un
eje central donde cada vuelta se compone por
al menos 6 moléculas de glucosa, siendo así
hidrofóbico en su interior, de la misma
manera; el glucógeno, posee ramificaciones
separadas cada 10 unidades de glucosa ,
compactándose y de esta manera,
imposibilitándole retener agua. Por lo tanto,
no reaccionaran con el yodo, ya que este se
asociará y precipitara (MATHEWS)
6.5. ¿Porque en la prueba de Barfoed los
disacáridos reaccionan más lentamente
que los monosacáridos?
Esto se debe a que, a diferencia de los
monosacáridos, lo disacáridos tienen
comprometido uno de sus carbonos
anoméricos dado el enlace glucosídico,
disminuyendo su capacidad reductora; no
obstante, al estar presente un medio acido,
dicho enlace sufrirá una hidrolisis acida,
desencadenando la liberación de carbonos
anoméricos, incrementando dicha capacidad
y, por último, dando un resultado positivo
para Barfoed [5] [10].
Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
6.6. ¿Qué se deduce de la solubilidad del
ácido glucosacarido?
La solubilidad del ácido glucosacárido en
medio acuoso se deduce que es altamente
soluble en agua, ya que
posee en su estructura dos grupos carboxilos
y cuatro grupos hidroxilos el cual forman
enlaces de hidrógeno con
el agua.
7. BIBLIOGRAFÍA
[1] Food y Agriculture Organization of the
United Nations, Los carbohidratos en la
nutrición humana, Food & Agriculture Org,
1999. Pág. 21.
[2] Abad, M. J.; Latourrette, A.; Bermejo, P.
En Studies in Natural Products Chemistry;
Ed. Elsevier, Quinta edición, Amsterdam,
2005, p 703.
[4] Bolaños, N; Lutz, G.; Herrera, C. Química
de alimentos, Editorial Universidad de Costa
Rica, 2003. Pág. 10.
[5] Ocampo, R., Ríos, L. A., Betancur, L.A.,
& Ocampo, D. M. (2008). Curso practico de
quimica organica. Caldas: Editorial
Universidad de Caldas.
[6] EUNED, Manual de experimentos para
Bioquímica. Pág. 92.
[6] Universidad de Caldas, Curso practica de
química orgánica. Enfocado a biología y
alimentos. Universidad de Caldas, 2008.
Pág.100
[7] Doria, M. Experimentos de química en
microescala para nivel medio superior,
Universidad iberoamericana, 2009. Pág. 270.
[8] Manual de experimentos para bioquímica,
EUNED. Pág. 98
7
Informe de Laboratorio de Bioquímica General

[9]http://biqpacsvagg.blogspot.com/
10/05/2019

[10] Mackke, T., & Mckke, J. R (s.f).

BIOCHEMESTRY THE MOLECULAR
BASIS OF LIFE. www.oup.com/us/mckee

[11] Prada, W. A(Colombia). FENOMENOS

TAUTOMÉRICOS EN SISTEMAS
HETEROCÍCLICOS AROMATICOS.
Bogotá: Universidad Nacional de Colombia.

[12] C. K. Mathews, K. E.-C. (2013).

Bioquímica, 4.a edición. Madrid: PEARSON
EDUCACIÓN, S.A

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FIGURA 1. Prueba de Bial.

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FIGURA 2. Prueba de Molish.

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FIGURA 3. Prueba de Benedict

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FIGURA 4. Prueba de polisacáridos.

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Práctica 2 – Pruebas generales para carbohidratos
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FIGURA 4. Prueba de seliwanoff

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FIGURA 5. Prueba de Barfoed

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