UEA:

Laboratorio de Microbiología Aplicada

Fecha de entrega:
Martes 16 de julio, 2019

Práctica 22.
“INVESTIGACIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y
FECALES EN DESECHOS SÓLIDOS Y COMPOSTA ”

Profesora:
M. en C. María del Rocío Cruz Colín

Alumnas:
Bernal Sánchez Irene 2162002568
Reyes Cobos Melissa Viridiana 2162000091
Robles Álvarez Beatriz Paulina 2162004526

Equipo 1
 Práctica núm. 22
INVESTIGACIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN DESECHOS
SÓLIDOS Y COMPOSTA
I. Objetivo
Determinar la presencia de coliformes totales y fecales en un desecho sólido por el
método del número más probable (NMP) utilizando la técnica de tubos de
fermentación múltiple.
II. Introducción
En la ciudad de México se producen 12,998 toneladas por día de basura en forma
de residuos sólidos. Se han identificado seis fuentes generadoras, entre ellas la
domiciliaria, que contribuye con un 47.98% de residuos generados, y los
comercios con un 25.60%; el 26.42% restante corresponde a servicios,
controlados, diversos y a la Central de Abasto (Inventario de residuos sólidos 2007).

El compostaje es un proceso de transformación natural de los residuos

orgánicos (restos de comida que tiramos a la basura) para obtener composta,
un abono natural que sirve para aportar nutrientes a la tierra, el compostaje es un
proceso es una solución para contrarrestar este problema por diferentes razones.

Es de suma importancia la realización de análisis microbiológicos de los desechos

sólidos para determinar la naturaleza de los microorganismos presentes, en la
composta se lleva a cabo por medio de una muestra representativa la cual se
analiza en el laboratorio llevando el debido proceso de recolección, cuarteo y
molienda correspondiente. Los microorganismos que participan en el compostaje
requieren carbono y nitrógeno para su actividad ya que con ellos se reproducen
rápidamente y consecuentemente, la descomposición de los residuos orgánicos
también se acelera, durante el compostaje se podría producir amoníaco gaseoso,
lo cual no solamente daña al medio ambiente sino también afecta la calidad de la
composta.

Los hongos filamentosos constituyen un grupo muy importante durante el proceso

de compostaje, participando en la degradación aeróbica de la materia orgánica
debido a su alta capacidad lignocelulolítica como es el caso de:

• Aspergillus fumigatus: Termófilo, encontrado en composta.

Una alternativa para mejorar el proceso de compostaje es la búsqueda de

microorganismos con capacidad de síntesis de enzimas hidrolíticas bajo diferentes
condiciones de pH y temperatura que permitan acelerar el proceso. Se asume que
el proceso se acelera incrementando el número de microorganismos mediante
adición artificial de los mismos, aumentando o sustituyendo la población nativa
microbiana, proceso que se conoce como bio aumentación (Zeng et. al., 2009).
III. Resultados

• PRUEBA PRESUNTIVA
Se homogeneizo una muestra de desechos orgánicos en tierra (composta casera)
revolviendo la tierra y partiendo en 4 partes iguales para poder agarrar tierra de los
4 lados. Se pesaron 50g de muestra y se pasaron al vaso del homogeneizador tipo
Waring Blendor agregándole 450mL de agua peptonada estéril al 0.1% para
obtener una dilación 10-1, se licuaron por 3 minutos a una velocidad máxima.
Pasado el tiempo de homogeneización se paso la muestra aun matraz y se
realizaron tres diluciones (10-2, 10-3, 10-4). A partir de la dilución 10-1 se tomó una
alícuota de 1mL y se pasó a un tubo que contenía 9mL de agua de dilución estéril
obteniendo la dilución 10-2, el tubo se homogeneizo y se tomó una alícuota de 1mL
y se vertió a otro tubo con 9mL de agua de dilución estéril obteniendo la dilución
10-3, se siguió el mismo procedimiento para realizar la dilución 10 -4. Se inocularon
4 series de cinco tubos que contenían caldo lactosado y una campana Durham al
fondo sin presencia de burbujas previas, las series de tubos se inocularon de
acuerdo a cada dilución realizada (10-1, 10-2, 10-3, 10-4). Las series de tubos se
incubaron por 24 horas a 35°C.
Pasadas las 24 horas de incubación se hizo la primera lectura observando la
turbidez en el caldo lactosado y la presencia de gas en la campana Durham.

A B

Figura 1. A) Tubos de caldo lactosado inoculados con diluciones hechas de una

muestra de desechos orgánicos en tierra (composta casera). B) Series de tubos
inoculados después de la incubación con presencia de turbidez en el caldo y
presencia de gas en la campana Durham, los tubos positivos de la prueba
presuntiva fueron 20.
 • PRUEBA CONFIRMATIVA PARA COLIFORMES TOTALES
Nota: para poder calcular el NMP de coliformes totales y fecales se usan tripletes
por lo que no se hizo prueba confirmativa de la serie de tubos de dilución 10 -1 ya
que es la de mayor concentración.
Por cada tubo positivo (15 tubos) de la prueba presuntiva, se inocularon
asépticamente con 3 asadas un tubo de fermentación que contenía caldo LBVB y
campana Durham. Los tubos se incubaron por 48 horas a 35°C. Pasadas las 48
horas de incubación se observo s i los tubos tenían presencia de turbidez o
producción de gas en la campana Durham.

A B

Figura 2. A) Tubos de caldo LBVB inoculados a partir de los 15 tubos positivos de

la prueba presuntiva. B) Tubos después de la incubación por 48 horas a 35°C. 15
tubos positivos, demostrado en turbidez del caldo y producción de gas en la
campana Durham.
• PRUEBA CONFIRMATIVA PARA COLIFORMES FECALES
Por cada tubo positivo (15 tubos) de la prueba presuntiva, se inocularon
asépticamente con 3 asadas un tubo de fermentación que contenía caldo EC y
campana Durham. Los tubos se incubaron por 48 horas a 44.5°C. Pasadas las 48
horas de incubación se observó si los tubos tenían presencia de turbidez o
producción de gas en la campana Durham.
 A B

Figura 2. A) Tubos de caldo EC inoculados a partir de los 15 tubos positivos de la

prueba presuntiva. B) Tubos después de la incubación por 48 horas a 44.5°C, 15
tubos positivos, demostrado en turbidez del caldo y producción de gas en la
campana Durham.
• CALCULO DEL NMP
Para obtener el NMP se realizaron los siguientes cálculos:

Tabla 1. Resultado obtenido en la determinación en composta, de coliformes

totales y fecales, el análisis es efectuando diluciones.

Dilución Volumen Denominación Tubos positivos en la Tubos positivos en Tubos positivos en

de muestra de la serie de prueba presuntiva la prueba la prueba
inoculada 5 tubos para coliformes confirmativa para confirmativa para
(mL) totales y fecales coliformes totales coliformes fecales
10-2 0.01 2-CT.CF 5 5 5
10-3 0.001 3-CT.CF 5 5 5
10-4 0.0001 4-CT.CF 5 5 5
≥ 2400 ≥ 2400

Para Coliformes Totales se establece el código: 5, 5, 5 y consultando la Tabla

17.1 del NMP se observa un valor de ≥ 2400 , por lo tanto, se tiene:

2400
= 2400 × 1000 = 2,400,000
0.001

NMP DE COLIFORES TOTALES: 2,400,000/100mL

 Para Coliformes Fecales se establece el código: 5, 5, 5 y consultando la Tabla
17.1 del NMP se observa un valor de ≥ 2400 , por lo tanto, se tiene:

2400
= 2400 × 1000 = 2,400,000
0.001

NMP DE COLIFORES FECALES: 2,400,000/100mL

IV. Análisis y discusión de resultados

Bernal Sanchez Irene
Los análisis microbiológicos constituyen un elemento importante para determinar
la calidad sanitaria del composteo. La densidad de coliformes fecales es utilizada
como un indicador de la presencia de bacterias patógenas, la NADF-020-AMBT-
2011 que establece los requerimientos mínimos para la producción de composta a
partir de la fracción orgánica de los residuos sólidos urbanos, agrícolas, pecuarios
y forestales, así como las especificaciones mínimas de calidad de la composta
producida y/o distribuida en el distrito federal, pone como valor máximo permisible
para especificaciones microbiológicas en coliformes fecales de <1000 NMP/g en
una composta terminada, lo que quiere decir que las muestras que contengan
menos de 1000 coliformes fecales por gramo de peso seco de composta indica
que los microorganismos patógenos han sido destruidos.
De acuerdo al análisis realizado de la muestra de comporta casera que se utilizó
para la realización de la practica el valor del NMP resultado para coliformes
fecales es de 2,400,000/100mL, el cual no cumple la norma establecida para la
ciudad de México, esto debido a que la composta casera eran solo desechos
orgánicos en proceso y no una composta terminada, puesto que una composta
terminada debe cumplir ciertas características que la NADF-020-AMBT-2011 nos
menciona, como humedad, pH, conductividad eléctrica, materia orgánica,
granulometría, entre otras, que varían en medida de acuerdo al tipo de composta
que se desea obtener, la composta utilizada para este análisis no cumplía con
ningún parámetro mencionado.
El composteo de los residuos sólidos urbanos representa un beneficio económico
y ambiental. La composta resultante puede ser utilizada como mejorador de
suelos, nutriente o sustrato para cultivo de hortalizas y frutales, para áreas verdes
públicas o privadas y viveros en general; además, su uso propicia la disminución
de la aplicación de fertilizantes químicos y reduce la generación de gases de
efecto invernadero.
Reyes Cobos Melissa Viridiana

En el análisis a realizar se contaba con una muestra de desechos orgánicos

tratada como composta casera de la cual se utilizaron 50g los cuales se
homogenizaron en el vaso homogeneizador "Waring Blendor" vertiéndole 450mL
de agua peptonada estéril al 0.1% , con un tiempo de 3 minutos, se realizaron 4
diluciones (10-1,10-2, 10-3, 10-4), incubaron 4 series con 5 tubos cada una a una
temperatura de 35°C durante 24hrs, cada tubo contenía medio de caldo lactosado
(figura 1) asi como su respectiva campana Durham, se realizo la primera lectura
donde se observo la presencia de gas en la campana y turbidez en los tubos.
Posterior a las observaciones se realizo un conteo de tubos positivos teniendo 20
positivos en la prueba presuntiva, seguidamente se realizo a prueba confirmativa
para coliformes totales y fecales con caldo LBVB por 48hrs a 35°C, teniendo como
resultado la tabla 1 donde se muestran los valores obtenidos en ambas pruebas
de coliformes totales y fecales en relación a su dilución, obteniendo un resultado
de NMP en coliformes totales: 2,400,000/100ml y NMP en coliformes fecales:
2,400,000/100ml, teniendo como valor máximo permisible 1000 NMP/g en base a
la NORMA AMBIENTAL PARA EL DISTRITO FEDERAL NADF-020-AMBT-2011,
QUE ESTABLECE LOS REQUERIMIENTOS MÍNIMOS PARA LA PRODUCCIÓN
DE COMPOSTA A PARTIR DE LA FRACCIÓN ORGÁNICA DE LOS RESIDUOS
SÓLIDOS URBANOS, AGRÍCOLAS, PECUARIOS Y FORESTALES, ASÍ COMO
LAS ESPECIFICACIONES MÍNIMAS DE CALIDAD DE LA COMPOSTA
PRODUCIDA Y/O DISTRIBUIDA EN EL DISTRITO FEDERAL, con un parámetro
mucho mayor en la muestra analizada, tiendo en cuenta que se estaba analizando
una muestra de desechos orgánicos casera en donde los desechos aun estaban
en el proceso de descomposición.

Robles Alvarez Beatriz Paulina

En una muestra de composta casera se realizó la técnica de tubos de

fermentación y se determinó el Número Más Probable de coliformes totales y
fecales presentes, obteniéndose para ambos casos un valor de 2400000/100mL,
de acuerdo a lo especificado en la norma NOM-112-SSA-1994.

La composta es un abono orgánico que se forma por la degradación microbiana

de materiales acomodados en capas y sometidos a un proceso de
descomposición; los microorganismos que llevan a cabo la mineralización de los
materiales se encuentran de manera natural en el ambiente; lleva un proceso de
elaboración bastante sencillo; todo gira en torno a la descomposición microbiana
que se llevará a cabo en el contenedor de la composta, por lo que si implica un
proceso de espera algo extenso, aunque eso depende de los materiales que se
usen y las cantidades de los mismos.

Una vez llegada a la etapa de maduración de la composta, el abono obtenido debe

someterse a pruebas microbianas para garantizar al usuario final la inocuidad de
este, ya que al contener excretas de animales es probable la presencia de
bacterias del grupo coliformes, estas son un grupo heterogéneo compuesto por
 varios tipos de microorganismos y sin utilizados como indicador sanitario en la
evaluación microbiológica de un producto.

De ahí que la composta de analice de acuerdo a la NADF-020-AMBT-2011 en

dónde se fijan los niveles máximos permisibles de diferentes contaminantes, entre
ellos los coliformes. De acuerdo a esta norma, el valor máximo permisible de
coliformes fecales en la composta debe ser menor a 1000 NMP/g., para que
puede ser vendida dentro del Distrito Federal, este valor es mucho menor que el
obtenido en la muestra, sin embargo por el momento esta composta no será
comercializada, solo será para uso doméstico por lo que si se desea disminuir la
cantidad de coliformes en esta se puede esperar a que las propias condiciones
ambientales del lugar propicien que se descomponga completamente la materia
orgánica o bien añadir cal para matar a las bacterias (FDA, 1998).

V. Conclusiones
Bernal Sanchez Irene
Gracias a la realización de la práctica pudimos analizar la presencia de coliformes
totales y fecales en una muestra de composta casera utilizando la técnica de tubos
de fermentación múltiple obteniendo un total de 2, 400,000/100mL gracias al
método del número más probable (NMP). Gracias a las pruebas realizadas
sabemos que la composta utilizada como muestra no cumple con los criterios para
ser una composta terminada, por tanto, no cumple con la NADF-020-AMBT-
2011,que pone como valor máximo permisible para especificaciones
microbiológicas en coliformes fecales de <1000 NMP/g en una composta
terminada.
Reyes Cobos Melissa Viridiana

Con base al objetivo planteado se logro determinar la presencia de coliformes

totales y fecales en una muestra de desechos orgánicos de tierra la cual era
composta casera, en relación al método del numero más probable (NMP) se
utilizo la técnica de tubos de fermentación múltiple en donde se realizo la prueba
presuntiva y la confirmativa obteniendo los resultados de la tabla 1 donde se
estableció el código 5, 5, 5 y con base a la tabla 17.1 del NMP (Manual de
Microbiología), arrojando un valor final NMP de coliformes totales asi como para
coliformes fecales: 2,4000,000/100mL, podemos concluir que tal cual la muestra
no era una composta si no tierra con desechos orgánicos caseros, la cual estaba
en el proceso de descomposición ya que se podía observar un hueso de mango y
estableciendo la calidad de la muestra analizada no cumple con los parámetros
establecidos en "NORMA AMBIENTAL PARA EL DISTRITO FEDERAL NADF-
020-AMBT-2011".
 Robles Alvarez Beatriz Paulina

Se determinó la presencia de coliformes totales y fecales en composta por el

método del número más probable (NMP) utilizando la técnica de tubos de
fermentación múltiple, obteniéndose un NMP de coliformes totales y fecales de
2400000/100mL.

VI. Cuestionario
1. ¿Qué importancia tiene el análisis microbiológico de los desechos sólidos?
El análisis microbiológico de este tipo de residuos ofrece un panorama sobre su
origen, sus niveles de contaminación, sus posibles usos y remediaciones, entre
otras. Por ejemplo, para utilizarlos en la producción de compostaje es necesaria,
aunque un tanto compleja, la revisión de los microorganismos que se encuentren
en esos residuos, pues en algunos casos, para aumentar la velocidad a la que se
descomponen los residuos orgánicos se recurre a la bioaumentación (Camacho et
al, 2014).
2. ¿Qué tipo de microorganismos se identifican en los desechos sólidos?
Una amplia diversidad de microorganismos conforma las poblaciones mixtas del
proceso de compostaje. Las más importantes son bacterias mesófilas y termófilas,
Actinomicetos y hongos filamentosos mesófilos y termófilos (Laich, 2011).
3. ¿Qué papel desempeñan los microorganismos en el proceso de obtención de
composta?
Las bacterias son las más numerosas en el proceso de compostaje, y constituyen
entre el 80% y el 90% de los microorganismos existente en el compost. Se trata de
un grupo de gran diversidad metabólica, que utilizan un amplio rango de enzimas
que degradan químicamente una gran variedad de compuestos orgánicos.
La participación de los Actinomicetos durante el proceso de modificación de la
materia orgánica del compost es relevante, debido a la capacidad enzimática para
degradar compuestos orgánicos complejos (celulosa, lignina, etc.). Asimismo,
muchas de las especies que participan en este proceso son tolerantes a las
temperaturas que alcanza el compost durante el proceso de degradación aeróbica.
Los hongos filamentosos constituyen un grupo muy amplio. Estos pueden estar
implicados durante el proceso de compostaje, participando en la degradación
aeróbica de la materia orgánica debido a su alta capacidad lignocelulolítica.
Asimismo, se encuentran en el suelo como parte del microbiota normal, implicados
en procesos de degradación y solubilización de compuestos orgánicos complejos
y compuestos inorgánicos (Laich. 2011).
4. ¿Cuántos tipos de composta existen?

Dependiendo de las materias primas empleadas, del fin último de la composta y

del método de compostaje empleado, existen diferentes tipos de composta a nivel
agrícola:

Tipo de Descripción
composta
Básica Se trata de la composta de elaboración elemental.

Caliente Este tipo de composta está hecha a base de estiércol, tierra

y agua, además de la reacción con el oxígeno proveniente
del aire, lo que juega un papel fundamental en el proceso de
degradación.

Se trata de una composta de uso común en las zonas

rurales. Debe prepararse al aire libre, en una zona a media
sombra, ventilada y sobre tierra.
De café Para la elaboración de este tipo de composta se utilizan los
residuos de la siembra de café, los cuales se caracterizan
por tener una rápida descomposición.
De También conocido como lombricomposta, este proceso
lombrices consiste en sacar el máximo beneficio de las lombrices de
tierra rojas (Lumbricus rubellus), y de su actividad
saprófaga, ya que se alimentan de componentes orgánicos.
Avi- Mediante este proceso se incorpora la interacción de aves a
compostaje la composta para agilizar el proceso de degradación del
material. Las aves más empleadas para ello son las
gallinas.

(Torres, 2019).

5. Mencionar aplicaciones de la composta.

Se usa como abono en agricultura, jardinería, horticultura, forestales, parques,

viveros.

✓ Restauración de terrenos desnudos, suelos de vertederos de

construcción, puntos negros…
✓ Lucha contra la erosión: fijación del suelo, estabilización de terrazas.
✓ Como sustrato para la reforestación en selvicultura.
✓ Recuperación de terrenos empobrecidos.
✓ Estabilización y regeneración de taludes.
 ✓ Formación de pantallas y barreras vegetales.
✓ Preparación de terrenos para nuevas plantaciones.
✓ Como sustrato y soporte orgánico en grandes superficies.
✓ Aplicación de filtros de tierras para la retención de malos olores.
✓ Plantaciones extensivas de arboledas.
✓ Abonado de praderas (Compostaje Doméstico, 2013).

VII. Referencias
Camacho, A., Martínez, L., Ramirez, H., Valenzuela, R., y Valdes, M. (2014).
Potencial de algunos microorganismos en el compostaje de residuos sólidos. Terra
Latinoamericana. Vol, 32, no. 4.
Compostaje Doméstico. (2013). Tipos y usos del compost. Valladolid, España.
Recuperado el 05/07/2019 de https://compostajedomestico.wordpress.com/breve-
guia-del-compostaje-domestico/tipos-y-usos-del-compost/
FDA. (1998). Guía para reducir al mínimo el riesgo microbiano en los alimentos,
para frutas y hortalizas frescas. Directivas para la industria. U. S. Department of
Health and Humans Services. Centrer for Food and Applied Nutrition. Estados
Unidos de América. P. p.: 24
Laich, F. (2011). El papel de los microorganismos en el proceso de compostaje.
Jornada Técnica: Fertilidad y Calidad del Suelo. Experiencias de fertilización
orgánica en platanera. Instituto Canario de Investigaciones Agrarias. ICIA.21 de
Octubre de 2011.
NADF-020-AMBT-2011, que establece los requerimientos mínimos para la
producción de composta a partir de la fracción orgánica de los residuos sólidos
urbanos, agrícolas, pecuarios y forestales, así como las especificaciones mínimas
de calidad de la composta producida y/o distribuida en el distrito federal. GACETA
OFICIAL DEL DISTRITO FEDERAL, 30 de noviembre del 2012.
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS.
DETERMINACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES. TÉCNICA DEL NÚMERO
MÁS PROBABLE. Diario Oficial de la Federación. México, Distrito Federal. 10 de
mayo de 1995.
Torres, J. (2019). Composta: Qué es y Tipos Principales. Cultura General.
Lifeder.com. Recuperado el 05/07/2019 de https://www.lifeder.com/composta/
Zeng, G. M., H. L. Huang, D. H. Huang, X. Z. Yuan, R. Q. Jiang, M. Yu, H. Y. Yu,
J. C. Zhang, R. Y. Wang, and X. L. Liu. (2009). Efecto de la inoculación de hongos
de la podredumbre durante diferentes fases en la madurez del compost de los
desechos agrícolas. Proc Biochem. Pp. 396-400.