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E IMPUNIDAD”
UNC - FILIAL CAJABAMBA
CICLO: V
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie
de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como
un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La Gelatina es otro agente solidificante, pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias
provocan su licuación. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de
Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio
y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El
suero y la sangre completase añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.
También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la
formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol
se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se
usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).
OBJETIVOS
Reconocer los microorganismos de cada medio de cultivo sus características y diferenciación.
composición de los diversos medios de cultivo con sus características y aplicaciones.
Desarrollo de cada agar y cultivo.
MEDIOS DE CULTIVO
Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo,
anaerobios y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos. Todas las
especies de la familia enterobacteriáceas se desarrollan.
B. FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano,
la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal de violeta son
los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. El agar es el
agente solidificante.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del
color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales
biliares.
C. CONSERVACIÓN
Conservado refrigerado entre 2º y 12º C es estable hasta la fecha de caducidad. El medio de cultivo
se debe almacenar sellado y con la cubierta de la placa (tapa) abajo.
D. MUESTRAS A CULTIVAR
Muestras de origen clínico o industrial que puedan contener enterobacterias tolerantes a las sales
biliares.
E. INOCULACIÓN
Antes de realizar la siembra, permitir que el medio de cultivo alcance la temperatura ambiente.
Sembrar las muestras bajo condiciones de esterilidad (uso de mechero o campana de bioseguridad).
F. INCUBACIÓN
Para muestras de agua y productos lácteos incubar por 24 a 48 horas entre 35º y 37ºC, atmósfera
aeróbica. La incubación de siembras en Agar MacConkey en atmósfera de CO2 puede reducir el
desarrollo y recuperación de algunas cepas bacterias Gram negativas.
Una vez completado el período de incubación, observar el desarrollo bacteriano y verificar las
siguientes respuestas culturales:
Enterobacterias fermentadoras de lactosa o lactosa (+): colonias color rosa de diversos tonos,
algunas pueden presentar halo de precipitación de sales biliares.
Bacterias no fermentadoras de lactosa o lactosa (-): colonias incoloras o ligeramente
coloreadas de beige.
Las características del desarrollo observado no son suficientes para establecer el diagnóstico de la
especie bacteriana. El usuario deberá aplicar pruebas de identificación para esta finalidad.
La evaluación de los resultados es válida solo para las condiciones de tiempo y temperatura de
incubación señaladas. Períodos de incubación prolongados o a mayores temperaturas pueden alterar
la respuesta del medio de cultivo para este aspecto.
H. RESULTADOS
I. RESULTADOS DE LABORATORIO
LECHE
microorganismos caracteristicas
LACTOSA POSITIVA Al utilizar la lactosa en el medio, las bacterias
producen acidez, lo cual baja el PH bajo 6,8 lo
que tiene como consecuencia la aparición de
colonias de color rosadas o rojas
LACTOSA NEGATIVA Bacterias que no fermenten la lactosa como
Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran
peptona en su lugar, formando ammonio, lo
cual incrementa el PH del agar, formando
colonias blancas o incoloras.
organismos observacion
Escherichia coli minuto, redondo
LACTOSA (+) klebsiella minuto, redondo
Salmonella opaco
LACTOSA (-) Proteus crecimiento fluorescente
Shigella
LACTOSA (+)
Escherichia coli
Por lo general, las bacterias Escherichia coli (E. coli) viven en los intestinos de las personas y de los
animales sanos. La mayoría de las variedades de Escherichia coli son inofensivas o causan diarrea
breve en términos relativos. Sin embargo, algunas cepas particularmente peligrosas, como la
Escherichia coli O157:H7, pueden causar cólicos abdominales intensos, diarrea con sangre y vómitos.
Puedes estar expuesto a la Escherichia coli proveniente del agua o de los alimentos contaminados,
sobre todo de los vegetales crudos y de la carne de res molida poco cocida. Los adultos sanos se
recuperan de la infección por la Escherichia coli O157:H7 en una semana, pero a comparación de los
niños pequeños y adultos mayores corren un riesgo más elevado de manifestar una forma de
insuficiencia renal que puede poner en riesgo la vida.
Síntomas
Causas
Solo unas pocas de las cepas de E. coli causan diarrea. Un grupo de E. coli, que incluye el serotipo
O157:H7, produce una poderosa toxina que daña el recubrimiento del intestino delgado, lo que
puede causar diarrea con sangre.
A diferencia de muchas otras bacterias que causan diarrea, la E. coli puede causar una infección
incluso si ingieres pequeñas cantidades. Es por eso que puedes enfermarte a causa de la E. coli por
ingerir una hamburguesa un poco cruda o por beber un trago de agua contaminada de un estanque.
Las fuentes potenciales de exposición son los alimentos o el agua contaminados y el contacto de
persona a persona.
Alimentos contaminados
La forma más común de contraer una infección por E. coli es ingerir alimentos contaminados, como:
Carne picada. Cuando se mata al ganado y se lo procesa, la bacteria E. coli que se encuentra
en los intestinos puede adherirse a la carne.
Leche no pasteurizada. La bacteria E. coli que se encuentra en la ubre de una vaca o en el
equipo de ordeño puede pasarse a la leche cruda.
Productos frescos. Los vertidos de la industria ganadera pueden contaminar los campos
donde se cultivan frutas y vegetales frescos. Algunos vegetales, como la espinaca o la
lechuga, son especialmente vulnerables a este tipo de contaminación.
Agua contaminada.
La materia fecal humana y animal puede contaminar el suelo y el agua de superficie, incluyendo los
ríos, los lagos y el agua utilizada para irrigar los cultivos. Aunque los sistemas de agua públicos utilizan
cloro, luz ultravioleta u ozono para matar la E. coli, algunos brotes se han relacionado con suministros
municipales de agua contaminados.
Los pozos privados generan una preocupación mayor porque no suelen tener ningún sistema de
desinfección. Es muy probable que los suministros rurales de agua estén contaminados. Además,
algunas personas se han infectado al nadar en estanques o lagos contaminados con materia fecal.
Factores de riesgo
Edad. Los niños pequeños y los adultos mayores corren un mayor riesgo de padecer una
enfermedad provocada por Escherichia coli, así como complicaciones más graves a causa de
la infección.
Sistemas inmunitarios debilitados. Las personas que tienen sistemas inmunitarios
debilitados —debido al sida, o a medicamentos para tratar el cáncer o para prevenir el
rechazo de los trasplantes de órganos— tienen más probabilidades de enfermarse por la
ingestión de Escherichia coli.
Comer ciertos tipos de alimentos. Los alimentos más riesgosos son las hamburguesas mal
cocinadas; la leche, el jugo de manzana o la sidra sin pasteurizar; y los quesos blandos
elaborados con leche cruda.
Época del año. Aunque la razón no está clara, la mayoría de las infecciones por Escherichia
coli en los Estados Unidos se producen de junio a septiembre.
Prevención
No existe una vacuna ni un medicamento que pueda protegerte contra la enfermedad causada por
E. coli, pero los investigadores están estudiando posibles vacunas. Para reducir las posibilidades de
estar expuesto a la E. coli, evita los alimentos riesgosos y ten cuidado con la contaminación cruzada.
Alimentos riesgosos
Bebe leche, jugos pasteurizados. Todos los jugos en caja o en botella que se conservan a temperatura
ambiente probablemente están pasteurizados, incluso si la etiqueta no lo dice.
Lava los alimentos crudos con cuidado. Lavar los alimentos no necesariamente eliminará la E. coli, en
especial, si se trata de verduras de hoja, las cuales proporcionan muchos lugares para que las
bacterias se adhieran. Un enjuague minucioso puede eliminar la suciedad y reducir la cantidad de
bacterias que puedan estar adheridas al alimento.
J. RESULTADOS DE LABORATORIO
MUESTRA 1 DE AGUAS RESIDUALES
ORGANISMO DESCRIPCION
LACTOSA (+) Color rosado
LACTOSA (-) Color amarillento
Crecimiento leve de los microorganismos, pero predomina la lactosa negativa en el medio de cultivo.
ORGANISMO DESCRIPCION
LACTOSA (+) Color rosa
LACTOSA (-) Color amarillento
Se observa que predomina el crecimiento de la lactosa negativa con poca presencia de lactosa
positiva.
MUESTRAS 3 DE AGUAS RESIDUALES
ORGANISMO DESCRIPCION
LACTOSA (+) Color rosa
LACTOSA (-) Color amarillento
MUESTRA DE LECHE
ORGANISMO DESCRIPCION
LACTOSA (+) Color rosa
LACTOSA (-) Color amarillento
B. FUNDAMENTO
Las sales biliares y el verde brillante inhiben el desarrollo de una amplia variedad de bacterias Gram
positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación
de sulfuro de hierro.
C. CONSERVACIÓN
Conservado refrigerado entre 2º y 12º C es estable hasta la fecha de caducidad. El medio de cultivo
se debe almacenar sellado y con la cubierta de la placa (tapa) abajo.
D. MUESTRAS A CULTIVAR
Muestras de la industria de alimentos, aguas y aguas residuales que puedan contener bacterias
tolerantes a las sales biliares.
enterobacterias
géneros Salmonella y Shigella.
E. INOCULACIÓN
Para muestras de origen médico sembrar mediante estría en superficie, a partir de muestras
primarias. El Agar Salmonella – Shigella puede ser sembrado intensivamente gracias a su poder
inhibidor.
Para lograr una mejor recuperación de Salmonellas y Shigella a partir de deposiciones, se recomienda
realizar un enriquecimiento selectivo previo, sembrando las muestras en Caldo Selenito – Cistina,
luego incubar no más de 18 a 20 horas. Las muestras de origen industrial deben pre enriquecerse y
sembrarse de acuerdo a las normativas adoptadas por el usuario.
F. INCUBACIÓN
Para muestras médicas incubar por 24 a 48 horas entre 35º y 37ºC, atmósfera aeróbica.
Las características del desarrollo observado no son suficientes para establecer el diagnóstico de la
especie bacteriana. El usuario deberá aplicar pruebas de identificación para esta finalidad.
H. RESULTADOS
organismos Observación
E. Coli Crecimiento ligero, color rosa o rojo
Enterobacter/klebsiella Crecimiento leve, color rosa
Proteus Incoloro, con centro blancos
Salmonella Incoloro, generalmente con centro de color
negro
Shigella incoloro
Pseudomonas Crecimiento leve e irregular
Bacterias Gram positivas Ausencia de crecimiento
I. RESULTADOS DE LABORATORIO
MUESTRA 1 DE AGUAS RESIDUALES
ORGANISMO COLOR
ORGANISMO DESCRIPCION
E. Coli Rosado
MUESTRA DE LECHE
ORGANISMO DESCRIPCION
Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y otras
especies de Vibrio a partir de heces, aguas y alimentos.
También conocido como “AGAR TIOSULFATO CITRATO BILIS SACAROSA” o como “AGAR SELECTIVO
PARA VIBRIOS”
B. FUNDAMENTO
Preparado según la formula desarrollada por Kobayashi, es el medio de cultivo nutritivo selectivo y
diferencial más adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio.
El extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteina aportan los nutrientes para el desarrollo
microbiano. La bilis de buey, el citrato de sodio y el pH alcalino inhiben el desarrollo de flora
acompañante, favoreciendo el crecimiento de Vibrio spp. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico y debido a su alta concentración también contribuye a la selectividad del medio.
La sacarosa es el hidrato de carbono fermentable y el azul de bromotimol y el azul de timol son los
indicadores de pH que en un ambiente alcalino le otorgan al medio de cultivo el color verde azulado
y viran al color amarillo en medio acido (por utilización de la sacarosa).el agar es el agente
solidificante.
C. CONSERVACION
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su envase
original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento.
Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad e incubarse durante los períodos de
incubación recomendados.
D. MUESTRAS A CULTIVAR
Las muestras de pacientes y las de alimentos pueden extenderse con torunda directamente o
después de una cuidadosa homogeneización (en especial cuando se analizan mariscos).
E. INOCULACIÓN
Según el tipo de muestra a procesar puede realizarse la inoculación directa en TCBS o puede ser
necesario el enriquecimiento previo en Agua Peptonada Alcalina.
Se recomienda que las muestras de materia fecal, aguas y alimentos en los que se quieran recuperar
especies de Vibrio, sean previamente enriquecidas en agua peptonada alcalina durante 5 a 8 horas a
35-37°C y luego subcultivadas en TCBS.
F. INCUBACION
ORGANISMO DESCRIPCION
Vibrio cholerae colonias amarillas
Vibrio parahaemolyticus colonia con centro verde
Vibrio alginolyticus colonias amarillas
Enterococcus faecalis colonias pequeñas amarillas o traslúcidas
Pseudomonas aeruginosa colonias azules
Proteus mirabilis Pequeñas colonias centro verde
I. RESULTADOS DE LABORATORIO
MUESTRA 1 DE LECHE
ORGANISMO DESCRIPCION
Emoliticus Verde fuerte con puntos negros
ORGANISMO DESCRIPCION
Vibrio Cólera Color amarillento.
Emolitios Verde fuerte y puntos negros.
4. AGAR NUTRITIVO
A. USO
B. FUNDAMENTO
C. CONSERVACION
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 °C.
Medio de cultivo preparado a 2-8 °C.
D. INOCULACION
En superficie: inocular directamente la muestra por estría.
En profundidad: inocular una alícuota de la muestra directa o de su dilución. Verter un
volumen del medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45°C. homogenizar mediante
movimientos de vaivén y rotación. Dejar solidificar.
E. INCUBACION
Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales en atmosfera con 5-10% de CO2 a 35-37°C
durante 24-48 horas.
ORGANISMO DESCRIPCION
E. Coli Colonias grandes, crema brillante y lisas.
Staphylococcus aureus Colonias grandes ligeramente amarillas, brillantes
y lisas.
Enterococcus faecalis Colonias pequeñas, crema opacas y lisas.
G. RESULTADOS DE LABORATORIO
MUESTRA 3 DE AGUAS RESIDUALES
ORGANISMO DESCRIPCION
E. Coli Un poco brillante.
Staphylococcus aureus Grandes colonias de color amarillo.
Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del
número más probable.
B. FUNDAMENTO
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.
C. CONSERVACION
D. INTERPRETACION DE RESULTADOS
POSITIVO: turbidez y presencia de gas. Puede existir viraje del color del medio de cultivo al
color amarronado o amarrillo.
NEGATIVO: ausencia de turbidez y gas.
E. RESULTADOS DE LABORATORIO
Al apreciarse en las imágenes observamos que hay burbujas eso quiere decir que hay coliformes.
CONCLUSIONES
Mediante el desarrollo de esta práctica definimos, estudiamos y aplicamos la diferenciación de cada
microorganismo sus características específicas de cada tipo de agar como también las diferentes
bacterias que crecen en cada una de ellas los medios de cultivo que te debe tener con cierta
temperatura para su crecimiento.
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