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INTRODUCCIÓN:
Para determinar la cantidad de enzima presente en una muestra, para este caso se trata de
una muestra de extracto crudo de hígado, se midió la velocidad de reacción. La velocidad
inicial de una reacción catalizada por una enzima depende de la cantidad de sustrato y de
enzima presente (Devlin. T. 2004).
Para mostrar que existe relación directa de la concentración de enzima con la velocidad de
reacción, se muestra la siguiente gráfica que relaciona en sus ejes el tiempo y la formación
de producto. Todas las muestras tienen las mismas concentraciones de sustrato, variando las
cantidades de enzima (Devlin. T. 2004).
Para la determinación de proteínas por el método de Biuret (en medio alcalino regulado), los
enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con los iones cúpricos del reactivo, dando un
complejo de color azul- violáceo cuya intensidad se mide fotometricamente a 540 nm en un
espectrofotómetro (GT Laboratorio S.R.L. 2014). Se utilizó albúmina suero de bovino (ASB)
como estándar (Johnson M. 2012 y Carrillo Soto J. 2013) para la formación de la curva
principal de absorbancia y miligramos de muestra.
2. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO:
2.1. MATERIALES:
● Espectrofotómetro
● Vortex
● Baño María
● Tubos de ensayo
● Gradilla
● Micropipetas
2.2. REACTIVOS:
● Agua destilada
● Solución madre de albúmina
● Extracto crudo de hígado
● Reactivo de Biuret
2.3. PROCEDIMIENTO:
● Rotular 8 tubos con la denominación: B, E1, E2, E3, E4, E5, M1, RM
● Agregar agua, en ml, en las siguientes cantidades en el mismo orden de rotulación:
0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0, 0.4, 0.4.
● Agregar la solución estándar de albúmina, en ml, en el orden de rotulación como sigue:
0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0, 0.
● Adicionar 0.1 ml de extracto crudo de hígado a los tubos M y RM.
● Agregar 2.5 ml del reactivo de Biuret a todos los tubos.
● Llevar a baño María a 37 °C por un periodo de 10 minutos
● Leer en el espectrofotómetro a 540 nm, calibrando a 0 con el tubo B (blanco).
REACTIVO BIURET 2.5 ml 2.5 ml (todos los tubos) 2.5 ml (todos los tubos)
3. RESULTADOS:
La siguiente tabla muestra los resultados obtenidos a nivel de laboratorio, los cuales muestran
las absorbancias obtenidas a 540 nm y calibrando a cero de absorbancia con el tubo blanco.
M1 M2 M3 M4 M5 M6
4. CÁLCULOS:
a) Hallar el promedio de las absorbancias de los tubos con albúmina
Los valores en los cuadros plomos no son considerados ya que pueden conducir a
error al hallar la regresión.
El cuadro color amarillo indica que el resultado de la mesa 5 no concuerda con el resto
de mesas.
● Mesa N°2
27.148 mg --------- 100 ml
0.815 mg --------- 3 ml (tubo de ensayo)
● Mesa N°1
50.111 mg --------- 100 ml
1.503 mg --------- 3 ml (tubo de ensayo)
● Mesa N°6
78.630mg --------- 100 ml
2.359 mg --------- 3 ml (tubo de ensayo)
2.359 mg --------- 0.15 ml (sobrenadante)
15.726 mg --------- 1 ml
● Mesa N°3
105.667 mg --------- 100 ml
3.170 mg --------- 3 ml (tubo de ensayo)
● Mesa N°4
162.704 mg --------- 100 ml
4.881 mg --------- 3 ml (tubo de ensayo)
Los resultados de la mesa 1 y 5 no son considerados debido a que pueden conducir a error
del resultado.
5. DISCUSIONES:
Los rangos normales de proteínas totales en plasma en humanos son 6.0 a 8.3 g/dl estos
valores pueden variar ligeramente entre pruebas realizadas en diferentes laboratorios,y los
rangos de bovinos vacunos de 2 a 15 años oscilan un aproximado de 8.12 a 8.93 g/dl, levando
a las unidades correspondientes nuestro promedio de resultados tenemos: 1.605
g/dl.(Pereira, 1988)
La falta de relación de nuestros resultados al rango, se puede deber a los errores mínimos
que se dan en la prueba pero que tiene elevada significancia al realizar los cálculos
respectivos.
6. CONCLUSIONES:
❏ Realizar los procedimientos detenidamente con el fin de disminuir los errores técnicos.
● Dolores de Arriaga M., Soler J., Busto F. y Cadenas E. Cinética enzimática: Manejo
de datos. Universidad de Oviedo. Departmento de Bioquímica. Facultad de Biología y
Veterinaria. León. 1978.