INHIBICION ENZIMATICA

Definición.- Es un proceso caracterizado por

una disminución de la actividad enzimática
causado por un compuesto químico.
Importancia.- Permite explicar los procesos
de regulación metabólica, diseñar nuevos
medicamentos, descubrir nuevos
plaguicidas, explicar mecanismos de
interacción de ligandos, etc.
 ENZIMAS
INHIBICIÓN
ENZIMÁTICA

REVERSIBLE IRREVERSIBLE

COMPETITIVA NO ACOMPETITIVA UNIÓN POR ACTIVADO POR

COMPETITIVA AFINIDAD LA ENZIMA
 Inhibición enzimática
 La inhibición puede ser reversible e irreversible.
 La inhibición reversible es de 3 clases:
• a. Inhibición competitiva.
• b. Inhibición no competitiva.
• c. Inhibición acompetitiva.
 Experimentalmente pueden diferenciarse
mediante un gráfico en doble recíproca (1/v vs.
1/[S]), en función de [I].
 INHIBICION COMPETITIVA
 El inhibidor se liga al sitio activo de la enzima y
forma el complejo E-I.

 El inhibidor no se une al complejo E-S.

 En un gráfico en doble recíproca:

• a. No se modifica la velocidad máxima.

• b. El valor Km se incrementa.
 INHIBICION COMPETITIVA

El inhibidor se liga al sitio activo de la

enzima y forma el complejo E-I.
El inhibidor no se une al complejo E-S.
En un gráfico en doble recíproca:
a. No se modifica la velocidad máxima.
b. El valor Km se incrementa.
Inhibición competitiva
Inhibición competitiva
 INHIBICION NO COMPETITIVA
 El inhibidor puede ligarse a E, formando el
complejo E-I, o al complejo E-S formando E-S-I.
 El inhibidor se une a un lugar distinto al sitio
activo de la enzima.
 En un gráfico en doble recíproca:
a. El valor Km no se modifica.
b. La velocidad máxima disminuye.
Inhibición No competitiva
 INHIBICION ACOMPETITIVA
El inhibidor solamente se liga al complejo
E-S, formando el complejo E-S-I.
En un gráfico en doble recíproca:
– a. Disminuye la velocidad máxima.
– b. Disminuye el valor Km.
INHIBICION ACOMPETITIVA
 INHIBICIÓN IRREVERSIBLE
La inhibición irreversible podría ser de dos
clases:

1.- Unión por afinidad.

2.- Activado por la enzima (Sustrato suicida).

Inhibición irreversible:
Unión por afinidad
 ACTIVADO POR LA ENZIMA:
SUSTRATOS SUICIDAS
 El sustrato suicida tiene una estructura similar al
sustrato de la enzima.
 Se diferencia de un inhibidor competitivo, en que
éste interacciona con el sitio activo de la enzima
pero no se liga covalentemente a él, en tal sentido,
tiene una Ki que corresponde a la disociación del
complejo E-I.
 Esta interacción difiere considerablemente de la
que ocurre en la inhibición irreversible.
 ACTIVADO POR LA ENZIMA:
SUSTRATOS SUICIDAS
 Antidepresivos:
Tranil cipromina, fenalzina Inhibidores MAO
 Antiparkinsonianos:
L-deprenil, selegilina Inhibidores MAO
 Inhibidores de β-lactamasa
Acido clavulánico β-lactamasa
 Antiprotozoos
Eflornitina Ornitina descarboxilasa
 ACTIVADO POR LA ENZIMA:
SUSTRATOS SUICIDAS
 Antitumoral:
5-F-2’-desoxiuridilato Timidilo sintetasa
 Antiviral:
Trifluridina Trimidilo sintetasa
 Anticonvulsivo:
Vigabatrina GABA aminotransferasa
 Antiuricémico:
Allopurinol Xantina oxidasa
 Antitiroidea:
Metimazol, metiltiouracilo Tiroidea peroxidasa
 EFECTO DE LA CONCENTRACÓN DE
ENZIMA
Cuando la concentración de sustrato es
saturante ( 10 veces Km), la velocidad de la
reacción es directamente proporcional a la
concentración de enzima. Es decir:

V = k2 [Et]
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE
ENZIMA
 ACTIVACIÓN ENZIMÁTICA
 Es un proceso caracterizado por un incremento de la
actividad catalítica de una enzima, causado por acción de
un compuesto químico.
 La activación enzimática puede ser de 2 clases:
1. Activación esencial: aquella en que la presencia del
activador es imprescindible para que la enzima catalice la
reacción.
2. Activación no esencial: es aquella en que la enzima no
requiere de la presencia del activador para mostrar
actividad catalítica.
Efecto de la Temperatura
 Efecto de la Temperatura
 La velocidad de las reacciones enzimáticas se
incrementa, a medida que aumenta la
temperatura.
 Existe una temperatura crítica asociada a una
caída de la velocidad (50o a 60oC).
 La temperatura afecta la estabilidad de la enzima
y los diversos parámetros cinéticos: Km, Vmax,
Ki, etc.
 Efecto de la Temperatura
 Si la enzima absorbe mucha energía se rompe
la estructura terciaria y la enzima se
desnaturaliza.

 La temperatura óptima es aquella en que la

enzima muestra una actividad constante en un
periodo de tiempo igual al del ensayo.
 EFECTO DE LA TEMPERATURA
Estabilidad térmica

 En la leche la lipasa y la fosfatasa alcalina

son termolábiles.

 La determinación de actividad de la fosfatasa

alcalina permite diferenciar leches crudas de
pasteurizadas.
 EFECTO DE LOS METALES
 Existen metales que prácticamente no afectan la
actividad de las enzimas (Na, K, etc.)

 Metales como el Pb, Ag, Hg, etc. inhiben

completamente a un gran número de enzimas.

 Algunos metales (Fe, Cu, Ca, etc.) ejercen un

efecto inhibitorio parcial sobre las enzimas.
 EFECTO DE LOS METALES
 Ciertos metales incrementan la actividad
enzimática o son necesarios para su actividad.
 Los iones metálicos esencialmente:
A.- Mantienen la estructura tridimensional de la
enzima.
B.- Participan en el mecanismo de catálisis.
 Para realizar esta función pueden:
1. Ligarse directamente a la enzima.
2. Unirse al sustrato.
 Fosfatasa Ácida
Efecto de los iones divalentes
Metal Concentración (µM) Actividad (%)

Ninguno ----- 100

Co2+ 1.0 98
Ba2+ 1.0 98
Ca2+ 1.0 93
Mg2+ 1.0 93
Zn2+ 1.0 55
Cu2+ 0.025 45
Hg2+ 0.001 00
 EFECTO DE LOS METALES
 El magnesio se liga al ATP, constituyéndose en
sustrato de la hexoquinasa.
 El Zn2+ es requerido por la alcohol deshidrogenasa
de hígado de caballo.
 El fierro y el molibdeno son requeridos por la
xantina oxidasa de la leche.
 El cobre se encuentra en el sitio activo de la
polifenol oxidasa.
 EFECTO DE LOS METALES
 Las enzimas que requieren fierro pueden
dividirse en:
A.- Enzimas que tienen grupo hemo.
B.- Enzimas que no tienen grupo hemo.

 En este último grupo están: lipooxigenasas y

xantino oxidasa (XO).
 Efecto del pH
 El estado de ionización de una enzima depende del
número, clase y localización de sus grupos
ionizables.
 Existen sustratos no ionizables y otros susceptibles
de ionizarse.
 Un cambio del pH puede alterar la velocidad de
las reacciones catalizadas por enzimas.
 Cuando se grafica la actividad enzimática en
función del pH se obtiene una curva con forma de
campana.
Efecto del pH
 Efecto del pH
 El pH en que la enzima muestra su máxima eficiencia
catalítica se denomina pH óptimo.
 Una variación en el pH del medio de reacción afecta a los
grupos ionizables responsables de:
a. Mantener la estructura tridimensional.
b. Interactuar con el sustrato.
c. Ser responsables de la catálisis.
 Una modificación del pH puede afectar el estado de
ionización de ciertos sustratos.
Efecto del pH
 Enzimas Alostéricas
 Muchas enzimas están constituidas por varias cadenas
polipeptídicas y tienen varios sitios para fijar ligandos.
 La curva de fijación del sustrato es de tipo sigmoideo y
es característica de la fijación cooperativa.
 Normalmente estas enzimas participan en la
regulación de vías metabólicas.
 El efector alostérico [activador (+) o inhibidor (-)] se
fija en lugares distintos del sitio activo.
Enzimas Alostéricas
 Enzimas Alostéricas
 Modelo Concertado: (Monod)
Las enzimas alostéricas existen en 2 estados que
están en equilibrio: TT ⇔ RR .
El estado TT tiene poca afinidad por el sustrato,
mientras que RR muestra una mayor afinidad.

+S +S
TT ⇔ RR ⇔ RR-S ⇔ S-RR-S
Jacques Monod
 Hipótesis de Monod

T T S S

T T S S
 Enzimas Alostéricas
 Modelo Secuencial: (Koshland)
Las enzimas alostéricas existen en una sola forma
(TT), que tiene poca afinidad por el sustrato, la
proximidad de éste, produce un cambio de
conformación (TR) de mayor afinidad.
+S +S
TT ⇔ TR-S ⇔ S-RR-S
Koshland Jr.
 Hipótesis de Koshland

T T T R R R
 MODULADORES ALOSTÉRICOS
 Los moduladores alostéricos se ligan a la enzima en un
lugar distinto al que se liga el sustrato.
 Existe un lugar definido para los moduladores positivos
(activadores) y otro lugar para los moduladores negativos
(inhibidores).
 Los moduladores positivos estabilizan la forma RR, que
tiene mayor afinidad por el sustrato.
 Los moduladores negativos estabilizan la forma TT, que
tiene poca afinidad por el sustrato.
 Los moduladores no compiten con el sustrato por el sitio
activo.
Retroinhibición
Modulación alostérica
 ENZIMAS
 La transformación de sustrato en producto requiere un
mínimo de energía.
 Teoría del Estado de Transición: las moléculas
previamente deben activarse, lo que requiere:
a. Elevar la temperatura hasta que parte del
sustrato alcance el estado de transición.
b. Disminuir la energía de activación.
 Las células no pueden elevar la temperatura.
 Las enzimas disminuyen selectivamente la energía de
activación de las reacciones que catalizan.
Mecanismo de Acción
Energía de Activación
 Mecanismo de Acción Enzimática
 Los principios que rigen la catálisis enzimática son los
mismos que se utilizan para describir la catálisis química.
Catálisis covalente
Catálisis ácido base.
 Existen 2 hipótesis para explicar el mecanismo de acción
de las enzimas:
 Hipótesis de la “llave y cerradura”
 Hipótesis del “encaje inducido”
 Regulación de las Enzimas
 El metabolismo celular opera de una manera
perfectamente regulada.
 Requiere que sus componentes se encuentren en
concentraciones apropiadas
 El proceso de regulación de las enzimas se realiza
fundamentalmente de 2 formas:
1. Regulación de la concentración de enzima.
2. Regulación de la eficiencia catalítica.
 Regulación de las Enzimas
 Regulación de la concentración de enzima.-

1. Inducción de la síntesis de enzima.

2. Represión de la síntesis de enzima.
 Regulación de las Enzimas
Regulación de la eficiencia catalítica.-
 Concentración de sustrato.
 Concentración de activadores.
 Concentración de inhibidores.
 Concentración de iones metálicos.
 Concentración de coenzimas.
 Modificación de la temperatura.
 Variación del pH.
 Modificación covalente de la enzima.
 Modificación estructural de la enzima.
ENZIMAS

FIN