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ASIGNATURA : Bioquímica
CICLO : III.
GRUPO : “A”
2.RESUMEN:
En general, todas las enzimas, independientemente del tipo de reacción que catalizan,
presentan características comunes en cuanto a los factores que intervienen favoreciendo,
retardando o impidiendo su actividad. Estos factores se investigan teniendo en cuenta la
velocidad de la reacción enzimática sobre un sustrato adecuado y en determinadas
condiciones. Tomando una determinada enzima como patrón es posible tener una idea
más o menos clara de la influencia de los factores (Tiempo, temperatura, concentración
de enzima, concentración de sustrato, pH, iones, etc,) sobre la serie infinita de enzimas
que se conoce. Este patrón general, como se comprenderá, varia en forma característica
para cada enzima en particular. Para estudiar cada uno de estos factores es necesario que
los otros permanezcan constantes, de tal manera que la investigación del factor variable
no se vea afectada por la variación que pudieran sufrir los otros.
La finalidad de este experimento es observar el efecto de iones activadores, pH,
concentración de enzima, concentración de sustrato, tiempo y temperatura sobre la
velocidad de una reacción enzimática, tomando como ejemplo la hidrólisis enzimática del
almidón y evaluando las variaciones del sustrato transformado y de los productos de la
reacción enzimática.
3.INTRODUCCION
La temperatura, la concentración de sustrato, enzimas y la concentración de iones
hidrogeniones, son algunos de los factores que actúan directamente sobre la actividad
enzimática, produciendo consecuencias particulares según el efecto que tienen sobre la
enzima, ya sea favoreciendo, retardando o impidiendo su actividad.
El efecto que produce estos factores sobre las enzimas es diferente en cada una de ellas,
pues dependen en gran parte de las condiciones en las que se realiza dicha reacción.
Para estudiar cada uno de estos factores es necesario que los otros permanezcan
constantes, de tal manera que la investigación del factor variable no sea afectada por las
variaciones que pudieran sufrir los otros.
La finalidad de estos experimentos es observar el efecto de los iones activadores, PH,
concentración de enzima, concentración de sustrato, tiempo y temperatura sobre la
velocidad de una reacción enzimática, tomando como ejemplo la hidrolisis enzimática del
almidón y evaluando las variaciones del sustrato transformado y de los productos de la
reacción enzimática.
FUNDAMENTACION
4. OBJETIVOS
Objetivo general:
Armando el sistema amilasa salival-almidón, de acuerdo a las especificaciones, se
demostrara las modificaciones de las reacciones enzimáticas por acción de diversos
agentes físico-químicos a través de la determinación de sustrato residual (solución
yodada) y de los productos (solución cúprico-alcalina y solución fosfomolibdica), cuyos
cambios de color serán valorados en relación a un tubo patrón.
Objetivos específicos:
5.MATERIALES Y METODOS
Materiales
18 Tubos de ensayo.
Gradilla.
Pipetas.
Cocina eléctrica.
Reactivos:
Reactivo Concentración pH
Solución de almidón 1%
Buffer fosfato 0.1M 6.6
Buffer acetato 0.1M 3.6
Buffer fosfato 0.1M 10.0
Solución cloruro de sodio 2%
Amilasa salival dializada 0.25%
Ácido clorhídrico 0.05N
Solución yodada (yoduro de potasio).
Solución cúprico alcalina
Solución fosfomolíbdica
Agua destilada
Parte experimental:
Etapa A:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml.) I II III IV V VI VII VIII
Solución de almidón al 1 % 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Buffer acetato 0.1M pH 4.6 - - - 5.0 - - - -
Buffer fosfato 0.1M pH 6.6 5.0 5.0 5.0 - 5.0 - 5.0 5.0
Buffer acetato 0.1M pH 10 - - - - - 5.0 - -
Solución de ClNa al 2 % 1.4 - 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4
Agua destilada 2.6 3.0 1.6 1.6 1.6 1.6 0.6 1.6
Mezclar y colocar los tubos: del I al VII al baño maría a 37°C, por 30 minutos,
para el equilibrio de la temperatura.
El tubo VIII mantenerlo en agua helada entre 0°C y 4°C durante 30 minutos.
Pasado 5 minutos agregar el preparado enzimático (amilasa salival dializada al
0.25%) y el preparado enzimático hervido (amilasa salival dializada al 0.25%), a
los tubos: según se indica en el siguiente cuadro y tomar el tiempo:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml.) I II III IV V VI VII VIII
Preparado enzimático - 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 - 1.0
Preparado enzimático hervido - - - - - - 1.0 -
Cumplidos los 30 minutos de incubación sacar los tubos del baño maría y agua
helada y armar una serie paralela de tubos marcados del I al VIII, agregando
a cada tubo marcado, 1 ml. del incubado de su correspondiente tubo.
Etapa B:
TUBOS DE ENSAYO
Componentes (en ml.) I II III IV V VI VII VIII
Incubado correspondiente 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Ácido clorhídrico 0.05N 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
Solución yodada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Observar y anotar los resultados de las reacciones de cada uno de los tubos,
valorando los cambios de coloración.
RESULTADOS
TUBO I:
Contenía:
Explicación:
Debido a que no hubo enzima (amilasa salival) el sustrato (almidón) no se degradó. Por
ende al interactuar el almidón con el indicador (I2) la reacción se torna azul oscuro como
observamos en la imagen.
TUBO II:
Contenía:
Explicación:
Debido a que no hubo Cl (ión activador) la reacción fue lenta por eso se obtuvo escasos
productos. Como en la mezcla resultante había aun presencia de almidones no degradados
y escasos azucares reductores, el indicador (I2) tiño la mezcla de un color naranja como
se pudo observar.
TUBO III:
Contenido:
Explicación:
Debido a que la cantidad de sustrato estaba aumentada (era el doble comparando con los
demás tubos), la velocidad de la reacción fue aumentando hasta que alcanzó un valor
máximo y luego se mantuvo constante. A pesar de esto si se formaron productos por ello
el indicador al interactuar sobre aquellos tiño la reacción de color naranja
TUBO IV:
Contenido:
Explicación:
TUBO V:
Contenido:
Explicación:
En esta reacción no hubo ningún factor que altere la acción de la enzima sobre el sustrato
por ello la formación de productos (azucares reductores) se dio sin ningún inconveniente.
Este tipo de reacción es ideal. Al interactuar el indicador con los productos tiño la
reacción de color amarillo.
TUBO VI:
Contenido:
Explicación:
TUBO VII:
Contenido:
Explicación:
Debido a que la cantidad de enzima fue baja (a comparación de los demás tubos) esta se
saturo muy rápido. Por ello la cantidad de almidón no se degrado en su totalidad. Como
en la mezcla resultante había aun presencia de almidón no degradado y azucares
reductores, el indicador (I2) tiño la mezcla de un color azul oscuro.
TUBO VIII:
Contenido:
Explicación:
Debido a que la temperatura fue baja la enzima se desnaturalizo, en este caso el color de
la reacción fue azul oscuro
III V
RÁPIDA MODERADA
ENZIMA SATURADA ENZIMA NO SATURADA
MENOS PRODUCTOS MAS PRODUCTOS
COLOR AZUL OSCURO COLOR AZUL MUY OSCURO
TUBO III:
TUBO V:
En esta reacción no hubo ningún factor que altere la acción de la enzima sobre el sustrato
por ello la formación de productos (azucares reductores) se dio sin ningún inconveniente.
Este tipo de reacción es ideal. Al interactuar el indicador con los productos lo tiño de un
color azul más oscuro
DISCUSIONES
CUESTIONARIO
1. ¿Identifique en cada uno de los tubos el factor físico-químico que interviene
modificando la velocidad enzimática?
Los resultados obtenidos no fueron los previstos por que solo hubo una reacción
en los tubos III y V, y en los otros tubos bien es el caso de que la enzima se
desnaturalizo o se inhibió por que no ocurrió ninguna reacción.
6. ¿diga usted a que se llama amilasa salival dializada y cuál es su acción sobre
el almidón?
Se llama amilasa salival dializada a amilasa que a perdido o extraído toda la sal
y por lo tanto pierde el CHO3.
La enzima amilasa degrada el almidón para así formar azucares más simples
como la glucosa, es decir, de moléculas complejas pasa a moléculas simples. Las
moléculas de glucosa atraviesan la pared intestinal y posteriormente llegan a la
sangre.
BIBLIOGRAFIA
BIOQUIMICA
LEHNINGER Albert L.
Las Bases Moleculares de la Estructura y la Función Celular de la actividad
enzimatica
2da EDICION.
BIOQUIMICA DE HARPER
MURRAY GRANNER MAYES RODWELL.
Enzimas propiedades generales, cinética y regulación de la actividad.
15va. Edición
Pag. 87- 144.
http://www.monografias.com/trabajos-pdf900/actividad-enzimatica-
amilasa/actividad-enzimatica-amilasa.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Sustrato_(bioqu%C3%ADmica)
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz1.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Almid%C3%B3n