PRODUCCIÓN DE PENICILINA G

Rodríguez T. Angela P., Rubiano A. Alejandra, Sánchez B. Oscar F., Santana P. Edison A.

RESUMEN

El siguiente escrito se realizó con el fin de comparar ciertas características y parámetros

determinantes del proceso de producción de la penicilina G, haciendo un barrido bibliográfico de
diferentes artículos, como referencia y apoyo de información a la hora de tomar la decisión en
cuanto a cual sustrato y biomasa se va a trabajar para la síntesis de este antibiótico, teniendo en
cuenta que la idea es obtener un mayor rendimiento frente a los demás microorganismos con los
que también se sintetiza y reducir costos de producción.

INTRODUCCIÓN y no requerir de equipos extras para brindarle

Las sustancias químicas producidas por un ser
vivo o algún derivado sintético, se le
denomina antibiótico, actualmente muchos
antibióticos son indispensables para tratar
diferentes tipos de enfermedades en el
mundo, como es el caso de la penicilina tipo
G, el cual según la OMS presenta un
desabastecimiento en reservas de más de 18
países a lo largo del mundo, dentro de estos
E.E.U.U, Canadá, Portugal, Francia y Brasil. La
penicilina es necesaria para tratamiento de
enfermedades como enfermedad reumática
del corazón y sífilis. En 2012 se reportó la
muerte de más de 53 mil bebes en el mundo
por no poder acceder al medicamento para
sus tratamientos. Es por eso que es necesario
desarrollar y optimizar los diferentes
procesos en la fabricación de penicilina tipo G.
La producción de penicilina G se realiza a
partir del desarrollo de un hongo del tipo
penicillium en el que se encuentran más de
150 especies, pero no todas sintetizan este
antibiótico, así que se van a analizar algunas
especies que hasta el momento hayan
manifestado un alto rendimiento en su
producción, para ser comparadas y así elegir
aquella que tenga una desarrollo óptimo a las
condiciones ambientes para minimizar costos
condiciones diferentes.
Alexander Fleming, bacteriólogo precursor de
la penicilina, hizo su descubrimiento por
casualidad, tras haber olvidado limpiar una
cámara de Petri que contenía ciertos
microorganismos con los que pretendía
obtener un crecimiento, pero esto no se dio,
debido a la presencia de la Penicillium
Notatum, como se denomina el hongo que
impidió la multiplicación de dichas bacterias y
que el bacteriólogo descubrió. Después de
haber investigado este microorganismo, se
dio cuenta que a partir de este se podía
sintetizar la penicilina G, exponiendo
públicamente un artículo sobre el antibiótico,
siendo este el fin de su aporte.
Fue uno de los más grandes hallazgos en la
historia de la medicina, que llego a competir
con las sulfamidas que hasta esa época habían
sido la revolución más grande, hasta su
progreso hoy en día.
Antiguamente era casi imposible aumentar
los rendimientos, incluso Ingenieros químicos
fueron capaces de identificar la molécula,
pero presentaron dificultad para producirla
en masa, hasta que Margaret Hutchinson
Rousseau cultivo el hongo penicillium en
grandes tanques aireados y agitados
constantemente, desarrollando el cultivo, a medicina humana, el 12% en veterinaria y el
partir de una cepa que fue obtenida de 43% restante se usa como material de partida
melones mohosos, en el cual el para penicilinas semisintéticas.
microorganismo detectado fue la Penicillium
CARACTERÍSTICAS DE LA PENICILINA [1]
Chrysogenum NRRL1951, donde el elemento
central fue el éxito de la producción en masa
de la penicilina, ahí comenzó a ser un fármaco
practico y rentable hasta la actualidad. Luego
de esto, varios científicos modificaron la cepa
genéticamente por medio de rayos x y luz
ultravioleta para crear cepas mutantes que
produjeran rendimientos más elevados, la
que se conoció posteriormente a la
Penicillium Chrysogenum NRRL1951 fue la
cepa WisQ176, alcanzando en 1943 casi 21
Nombre PENICILINA G
billones de unidades y en 1945 alrededor de
7025 billones de unidades.
IDENTIFICADORES
Cabe resaltar que la decisión que se pretende
tomar está basada en un barrido bibliográfico Número CAS 61-33-6
de diferentes artículos, como fuente de
Código ATC J01CE01
información para cada uno de los sustratos y
biomasas con las que se puede generar la PubChem 5904
penicilina G.
DrugBank DB01053
¿QUÉ ES LA PENICILINA G?
ChEBI 18208
La penicilina G, es un tipo de penicilina
natural, derivada de los antibióticos DATOS QUÍMICOS
betaláctamicos, que se caracteriza por poseer Fórmula C16H18N2O4S
en su estructura un anillo b-lactamico el cual
posee tres átomos de carbono y uno de 334,4 - 356,34
hidrogeno; son inhibidores específicos de la Peso Molecular g/mol
síntesis de peptidoglicano, que es el
DATOS FÍSICOS
componente principal de la pared celular
bacteriana. La producción de este se da por Densidad 1,41 g/cm3
una fermentación en la que no se adicionan
P. de Ebullición 97 °C (207 °F)
precursores, excepto la procaína y la
benzatina. Para este proceso es importante Solubilidad en 0,285 mg/mL
controlar los productos de la fermentación Agua (20°C)
que se lleva a cabo, ya que dependiendo de la
combinación de los precursores de diferentes FARMACOCINÉTICA
cadenas que se agregan, se van a obtener 60 - 70 %
diversas penicilinas, donde la mayoría de ellas Biodisponibilidad (humanos),
son sintéticas. Actualmente, el 38% de la 30% animales
penicilina natural producida tiene un uso en la
 50 - 80 % 12 µm) y aproximadament
Unión proteica albícina fiálides en e 42 a 48 [g/ml]
forma de
Metabolismo Hepático botella (de 7-12
µm), donde
Vida media 30 min a 56 h nacen conidios
lisos,
Excreción Renal
elipsoidales (de
2,5-4 µm)
azules o verde-
INOCULOS A PARTIR DE LOS CUALES SE azulados en
SINTETIZA LA PENICILINA cadenas, sin
ramificar, con
TIPO DE CARACTERISTICA
PRODUCTIVIDAD un penacho o
INOCULO S
pincel
Colonias de Se determinó, característico
crecimiento según Heatley y [15]
rápido, Florey que la
vellosas, productividad Tabla 1: Características generales de los
aterciopeladas, era de 4 unidades microorganismos
verdosas con por mililitro,
PROCESO DE PRODUCCIÓN DE LA PENICILINA
una corona aproximadament
radial ancha y e 2,4 [g/ml]. Enfocándonos a la producción en masa, se
blanca, a 25 °C usan cultivos sumergidos en tanques, los
(no crecen o cuales tienen un dimensionamiento que
Penicilium
crecen
Notatum oscila entre los 40 y los 200 metros cúbicos.
pobremente a
Este último no se puede superar ya que el
37 °C). Reverso
habitualmente microrganismo utilizado, que es la penicillium
amarillento o chrysogenum requiere de oxígeno para vivir,
cremoso. y al tener un tanque de una capacidad mayor,
Esporulación va a ser difícil la transferencia de oxigeno
abundante. adecuado para la bacteria, además debe
Olor aromático, permanecer en un pH de 6,5. La velocidad de
especiado o aireación depende del volumen del
afrutado. biorreactor y la cepa, pero debe estar entre
los 0.5 y 1.5 vvm (volúmenes de aire por
Posterior al volumen de lecho por minuto). Para asegurar
Hongo
penicillium una mezcla óptima la agitación debe estar
filamentoso
notatum, este entre los 120 y 150 rpm. La temperatura del
que presenta
Penicilium conidióforos tipo de hongo microorganismo se encuentra entre los 25 y
Chrysogenu por medio de los 27 °C, lo cual nos indica que es
tabicados de
m proceso aproximadamente la temperatura ambiente,
pared lisa (200-
sumergido,
300 µm), y de aquí podemos inferir que no es necesario
produjo de 70 a
ramificado al el uso de equipos extra, para brindarle unas
80 unidades por
final, con condiciones diferentes a las del medio, esto
mililitro,
métulas (de 8-
implica una reducción de costos en el
Compuesto alcohólico con tres
mantenimiento de la cepa.
grupos hidroxilos, se encuentra
Para inocular el microorganismo, se utilizan Glicerol en todos los tipos de aceites,
esporas liofilizadas, las cuales tienen varias así como en las grasas animales
etapas de crecimiento que llegan a la cantidad o vegetales
y concentración deseada para iniciar el cultivo
de producción. Pero hay que tener en cuenta
Está formado por dos
que la penicilina es un metabolito secundario,
polímeros de glucosa: amilasa y
lo que nos indica que solo se produce durante
Almidón de amilopectina. Estas moléculas
la fase estacionaria, así que su modo de
Maíz se organizan en anillos
operación más adecuado es el “fed - batch”.
concéntricos para originar la
Su fase de producción toma un tiempo que va
estructura granular.
desde 120 hasta 200 horas
(aproximadamente entre 5 y 9 días).

Ahora lo más importante, el medio de cultivo

Es un carbohidrato con la
en el que se da ese crecimiento, y el cual varía
misma fórmula que los
según la cepa utilizada. Vamos a nombrar
almidones. Se produce por la
algunas fuentes de esta:
hidrólisis del almidón vía
Dextrinas
Fuentes de carbono como posibles sustratos: temperatura y ácidos. Su
naturaleza y comportamiento
SUSTRATO CARACTERISTICAS químico dependen del tipo de
almidón del que provienen.
Monosacárido con fórmula
Glucosa molecular C6H12O6, es el
azúcar más simple de todos. Tabla2: Características de los posibles
sustratos

Carbohidrato disacárido
Lactosa formado por dos azucares Fuente principal de nitrógeno:
simples, glucosa y galactosa.
Liquido de la maceración de maíz. Este
Es un disacárido que se aumenta el rendimiento de la producción de
Sacarosa encuentra formado penicilina G al suministrar aminoácidos y
por glucosa y una fructosa factores de crecimiento.

Otras alternativas adicionales que también se

han usado pero no son de implementación
Mezcla compleja que contiene
contaste debido a los costos, son las semillas
Melaza de sacarosa, azúcar invertido,
de algodón, los extractos y las peptonas y la
caña de sales y otros compuestos
harina de soja, entre otros.
azúcar solubles en álcali que están
presenten en el jugo de caña.
DIAGRAMA DE FLUJO DE LA PRODUCCIÓN DE
PENICILINA G
Figura 2: Esquema del metabolismo de la
producción de penicilina G. Tomado de: Planta
industrial para la producción de penicilina G
(tesis de pregrado). Universidad de Cádiz. Pág.
27

MODOS DE OPERACIÓN Y DISEÑO

La penicilina fue producida en botellas de

leche, debido a que ya existía la tecnología
para manejar y rellenar un gran número de
estos contenedores. Sin embargo, más
adelante se desarrolló la tecnología necesaria
Figura 1: Monografía Microbiología que permitió el uso de grandes tanques
Industrial. Universidad Ben Gurion. Prof. José fermentadores, lo que llevo a un gran salto en
Merchuk. Beer Sheeva, Israel. 1968. la eficiencia y productividad del proceso. La
ANÁTOMIA DEL DIAGRAMA DE FLUJO DE LA fabricación con éxito y el desarrollo de la
PRODUCCIÓN DE PENICILINA G penicilina G demostró que los
microorganismos podían producir
compuestos médicamente útiles y también
iniciar la búsqueda de nuevos antibióticos que
ha continuado hasta el presente día. La mayor
parte a partir de Streptomyces. Cada año se
producen cientos de toneladas de los
productos más populares, aproximándose el
valor total mundial de los mismos a 750
millones de libras, con penicilinas y
cefalosporinas comprendiendo más del 70%
Figura 2: Identificación de las etapas del del mercado. Estos son descubiertos o en su
bioproceso. forma natural o como derivados
semisintéticos. Los últimos desarrollos fueron
RUTA METABÓLICA hechos posibles por el aislamiento del núcleo
de la penicilina y su subsecuente modificación
química. La búsqueda de nuevos antibióticos
que existan naturalmente va acompañada
actualmente por un esfuerzo químico
equivalente para producir derivados
semisintéticas.

Los fabricantes de antibióticos están

naturalmente celosos de la tecnología que
utilizan para producir sus productos, el
objetivo es dar una visión de los
procedimientos que son bien conocidos y
comúnmente utilizados en la industria. Cada
fabricante utiliza un proceso diferente. La
tecnología utilizada derivada de la 2. Método de cultivo sumergido:
investigación y del desarrollo interno de los
El método de fermentación sumergida es el
métodos publicados, y de los acuerdos sobre
crecimiento de microorganismos en sistemas
permisos de licencias con otros fabricantes y
totalmente líquidos (Tavorsky 1992)
compañías de consulta. Tradicionalmente
incrementa la superficie donde el hongo
cada fabricante ha desarrollado sus propias
necesita crecer, aumentando así la
cepas. Sin embargo, desde 1971, se hizo
productividad de este, con el cual logro
posible comprar los derechos de uso de cepas
identificarse el penicillium chrysogenum
desarrolladas por organizaciones diferentes,
como el mayor productor de niveles altos de
específicamente establecidas para producir
penicilina según investigaciones dadas por
cepas que son competitivas con las cepas
Margaret Roseau.
comerciales existentes.
Con el descubrimiento de una nueva especie,
El corolario de utilizar cepas diferentes es la
P. chrysogenum, se pudieron incrementar los
necesidad de operar en condiciones y con
rendimientos del producto empleando
medios diferentes a fin de obtener la
lactosa como fuente de carbono y energía,
productividad óptima. El principal
agua de macerado de maíz (corn-steep liquor)
componente del medio utilizado será
como fuente de nitrógeno, hizo más rentable
probablemente muy similar, pero sus
el proceso (Demain & Elander, 1999).
proporciones relativas variarán y diferentes
Permitiendo disminuir los requerimientos de
fabricantes utilizarán una variedad de
espacio y consecuentemente los costos de
componentes menores. Casi todos los
producción. Es así como La penicilina G es
antibióticos son producidos en recipientes
producida utilizando cultivos sumergidos en
agitados mecánicamente y aireados, cuyo
tanques de fermentación.
diseño es de importancia crucial para el
proceso. El aspecto más importante de todos Proceso de producción.
los procesos comerciales es la economía de la
operación. A menos que pueda conseguirse Un biorreactor es por definición un recipiente
un beneficio, ningún fabricante estaría en el o sistemas que mantienen un ambiente
negocio durante mucho tiempo, biológicamente activo. En algunos casos, un
particularmente en un negocio competitivo biorreactor es un recipiente en el que se lleva
como la industria de antibióticos. El énfasis en a cabo un proceso químico que involucra
limitar los costes del proceso estará presente organismos o sustancias bioquímicamente
en muchos de los aspectos discutidos en este activas derivadas de dichos organismos. Este
contexto y debería subrayar la importancia proceso puede ser aerobio (requerimiento de
creciente de este aspecto en cualquier oxígeno para sobrevivir) o anaerobio (no hay
proceso biotecnológico. requerimiento de oxigeno).

Esquema de proceso de producción

El primer sistema de producción de penicilina

fue conocido como:

1. método de superficie:

El hongo crece en la superficie de una capa de

medio de cultivo en bandejas.

Figura. Fernando Acevedo, Juan Carlos CETINA, Andres
Llanes, fundamentos de Ingenieria Bioquimica, segunda
Edicion. Chile. Ediciones universitarias de Valparaiso.
2004.
Generalmente, un biorreactor está diseñado
para mantener las condiciones ambientales
óptimas para el crecimiento del cultivo
microbiano y la producción del componente
deseado. La complejidad del diseño de este
tipo de proceso radica en el hecho de que la
cinética no depende exclusivamente de las
velocidades de reacción y las variables que la
determinan, así mismo de las cualidades del
microorganismo o cultivo, como la velocidad
de crecimiento celular. Los aspectos básicos
en el diseño de un biorreactor son el tamaño
del tanque, tiempo del proceso,
concentraciones iniciales de reactivos, aire,
potencia y la necesidad de retirar o ingresar
calor, de igual manera la determinación de
operación del biorreactor ya sea modo batch,
feed batch o continuo.
Reactor Batch
Tanque agitado cerrado en el tiempo cero, el
medio de cultivo se inocula con la población,
manteniéndose unas condiciones de PH y
temperatura óptimas, se deja que se
desarrolle la fermentación, la única
agregación es de aire estéril durante todo el
proceso. (Navas López, 2016)
Fed-batch
El sustrato se añade de forma controlada a
medida que avanza la fermentación. Hay un
volumen inicial y un volumen final de cultivo
y las concentraciones de biomasa, sustrato y
producto varían con el tiempo. Este método
se utiliza cuando se quiere ejercer el control
externo del crecimiento celular. (Navas López,
2016)
La penicilina es un metabolito secundario, ya
que solo es producida en la fase estacionaria,
teniendo en cuenta esto, (jorgensen et al.
1995). Propone fed-batch como el modo de
operación más fiable.
La fermentación continua en la síntesis de
penicilina G se ha probado sin mucho éxito
debido a la poca estabilidad de las cepas de
producción. Sin embargo, se ha
implementado con éxito un sistema de
producción en semicontinuo por cargas, en el
cual se descarga entre un 20 y 40% del
contenido del fermentador para ser
remplazada con una solución fresca de los
sustratos sin verse afectado el rendimiento en
las 10 primeras repeticiones, por otro lado,
investigaciones con células inmovilizadas
comprobó que existen ventajas usando este
sistema, aunque dicha técnica no ha sido
implementada a nivel comercial.
CONDICIONES DE OPERACIÓN
La penicilina G es producida utilizando
fermentadores cuyos tamaños oscilan entre
40 y 200 m3. El uso de tanques de mayor no
es posible debido a la deficiente transferencia
de oxígeno, ya que el penicicillium requiere
niveles de oxígeno óptimos para sobrevivir se
utilizan de 0.5 a 1.5 vvm dependiendo el
tamaño del biorreactor y la cepa, la agitación
se lleva a cabo con impulsores de tipo turbina
que giran a una velocidad entre 120 y 150
RPM para asegurar una mezcla optima, la
temperatura adecuada de producción se
encuentra entre 25 y 27 °C para el proceso de
inoculación, se utilizan en primer lugar
esporas liofilizadas que tras varias etapas de
crecimiento llegan a la cantidad y
concentración de biomasa necesarias para
iniciar el cultivo de producción.
La concentración de oxígeno en el medio es
una de las más significativas debido a una baja
solubilidad en el agua y por tanto en el medio
de cultivo, la saturación de oxígeno en
condiciones normales debe estar
aproximadamente 10 mg/l, el cual se
considera insuficiente para mantener un
sistema aerobio. El oxígeno a de suministrarse
cuantitativamente al cultivo, transfiriéndose
de la fase gas a la fase liquida para así ser
utilizado por el microorganismo.
La agitación es otro de los factores clave para
obtener una inapreciable transferencia de
materia en el biorreactor determinando el
funcionamiento óptimo del proceso. Está
relacionado con la potencia consumida por el
sistema y las variables de operación, la
potencia absorbida durante la agitación, la
densidad del medio, velocidad de agitación y
el diámetro del impulsor al igual que la
geometría del medio y el régimen de
circulación.
Etapas del proceso de producción de la
penicilina G
El proceso fermentativo se divide en dos
fases: fermentación y
separación/recuperación del producto, que a
su vez se dividen en varias fases.
1. Fermentación
Conocido como método de superficie, donde
el hongo crecía en la superficie de una capa de
medio de cultivo en bandejas. Después en
1945 con el descubrimiento de una nueva
especie, P. chrysogenum, se pudieron
incrementar los rendimientos del producto y
trabajar en cultivo sumergido, empleando
lactosa como fuente de carbono y energía y
agua de macerado de maíz (corn-steep liquor)
como fuente de nitrógeno, lo cual hizo más
rentable el proceso 1(Demain & Elander,
1999). Permitiendo disminuir los
requerimientos de espacio y,
consecuentemente, los costos de producción.
Los fermentadores para la producción de
penicilina alcanzan los 20.000 a 115.000 litros
de capacidad. El inóculo constituye casi el 10%
del cultivo total y se prepara a partir de un
cultivo (starter) del hongo preparado de
esporas liofilizadas.
En la línea de fermentación se incluyen
biorreactores de producción trabajando en
semi - paralelo organizados en líneas, cada
línea alimentada por un biorreactor inoculo.
En la fermentación es necesaria la
preparación de medios de cultivos
requeridos, el medio de etapa inicial de
crecimiento y medio de etapa de producción
de penicilina, para ello se debe disponer de
tanques de mezcla y tanques de preparación
inicial de medio, asegurando una frecuencia
de suficiente para satisfacer la demanda del
proceso. El medio inicial es constituido por
una dilución acuosa de glucosa, el medio
pharma se define como un 75% de líquido
macerado de maíz y 25% de extracto de
levadura.
El segundo tanque donde se preparan medios
de producción se realiza el mezclado de
medio cubriendo la demanda de la planta
(reactores trabajando a la vez), el medio de
producción glucosa en una concentración
determinada (se determina el grado de
optimo por medio de estudio de modelos
matemáticos) (Bajpai y Reuss 1981; Birol et al
2002), fuentes de nitrógeno, ácido fenil
acético como precursor para desplazar la
reacción hacia la síntesis de penicilina G y
aceite vegetal como antiespumante.
Ambas corrientes deben pasar por
esterilización antes de entrar al biorreactor de
producción, esta esterilización en su mayoría
mes llevada a cabo por precalentador y una
sección isoterma la temperatura se debe
adecuar después de dicho proceso. El medio
de producción pasa directamente al proceso
mientras que el medio inicial es almacenado
en un tanque hasta que este es necesario en
el proceso.
En la etapa de filtración de aire al ser un
proceso aerobio, se requiere una etapa previa
de filtración de aire para asegurar su
esterilidad al igual que los tanques con una
etapa de limpieza.
La etapa de preparación de inoculo para el
ingreso en el biorreactor al inicio del proceso
de fermentación, el caldo de cultivo es
tratado a condiciones de 30 °C y 1 atmosfera
de presión.
La fermentación está dividida en dos fases: la
fase de crecimiento en modo batch a la cual
se introduce el medio inicial con una
composición detallada, el inoculo, al terminar
la operación el organismo ha crecido hasta
que el sustrato se encuentre agotado, se inicia
la alimentación de medio de producción con
un caudal constante de medio de producción.
En la siguiente etapa de feed batch se
introduce al biorreactor hasta una
concentración final de biomasa determinada,
mientras que la concentración de producto
cambia a una específica, la concentración de
oxigeno se mantiene constante durante todo
el proceso, gracias a la velocidad de aireación
y agitación, la temperatura y el PH constante.
(E Lander, 2003)
El incremento de presión debido a la
acumulación de aire no disuelto en el medio o
por la generación de gas de dióxido de
carbono como resultado del metabolismo
celular, debe ser aliviado por medio de
válvulas de venteo que se incluyen en la
construcción del biorreactor.
2. Separación y recuperación de
penicilina G
la separación y recuperación son etapas que
se trabajan en continuo, abasteciéndose de lo
producido en el reactor, en la primera fase se
realiza una separación del caldo de cultivo y
del micelio usando una filtración por flujo
cruzado, el cual difiere en la dirección del
flujo con respecto al medio de filtrado en
paralelo y el hecho que este medio es una
membrana, tiene como ventajas su coste de
operación más bajo que el tradicional filtro
rotatorio a vacío y la eliminación de
impurezas es más eficaz ya que dichas
membranas separan partículas por debajo de
0,1 micrómetro . De esta forma se eliminan
etapas antes aplicadas como tratamientos
con carbón activo, se hace uso de un
recirculado para asegurar, la máxima
recuperación de producto. Para mantener un
buen rendimiento del proceso es necesario
que la concentración de la biomasa en el
tanque de alimentación se mantenga
constante.
Los caldos de filtrado se refrigeran pasando
de 25 °C a 5°C asegurando que se conservan
las propiedades y actividad de la penicilina
para posteriormente llevarse a una extracción
liquido – líquido en medio acido ya que la
penicilina G se degrada fácilmente en este
medio, seguidamente se realiza la extracción
en disolvente orgánico que consiste en ,la
acidificación de la corriente de extracción con
valores de PH de 6.2 a 2.5, una vez
acondicionada la corriente tras su
enfriamiento y acidificación se realiza la
extracción liq-liq con un modo de extracción
continuo a contracorriente lo que
proporcionara mejor extracción,
posteriormente será pasada por un medio
acuoso y se procede a una precipitación en
forma de cristales y así separar por filtrado a
vació el líquido matriz de los cristales, La
esterilización de hace por filtración y luego el
producto se cristaliza y se envasa en
polietileno o frascos de vidrio.
Equipos de planta
Los equipos como biorreactores en fase”
batch” como en “fed-batch” respectivamente
deben satisfacer condiciones del proceso
como
 Tiempo
 Concentración inicial de sustrato
 Concentración inicial de biomasa
 Caudal de alimentación
 Composición de alimentación
 PH
 Temperatura
 Velocidad de aireación
 Velocidad de agitación
 Volumen inicial
 Volumen final
 Volumen de CO2 máximo generado
 Calor máximo generado
RESULTADOS
Los resultados obtenidos tras el estudio
realizado se centran en las condiciones de
operación del proceso fermentativo y las
características dimensionales y mecánicas del
biorreactor basados en el artículo que
describe con precisión un proceso a escala
industrial en el cual propone un marco
cinético describiendo el crecimiento celular y
la formación del producto en una
fermentación fed-batch de penicillium
chrysogenum [J. Yuan et al 2010].
El proceso fermentativo se divide en dos
fases: crecimiento del hongo en modo batch
con condiciones iniciales de operación de
biomasa, glucosa, medio pharma al alcanzar
la concentración deseada en el caldo, se inicia
una segunda etapa en fed batch a condiciones
óptimas de temperatura según la bibliografía
[Yuan et al 2010]. Determinando el primer
parámetro físico, tamaño.
Considerando un reactor cilíndrico perfecto
se calcula diámetro y altura de este, siguiendo
la literatura las proporciones típicas que
suelen tener los tanques de fermentación, ya
que se han demostrado las configuraciones
más adecuadas para favorecer la mezcla y
aireación del sistema, guardando una relación
por heurística de altura de líquido- diámetro
igual a 2, la variable infiere en la potencia de
agitación necesaria.
Se sugiere hacer simulación con respecto a los
modelos matemáticos obtenidos para
determinar la concentración de oxígeno en el
sistema durante todo el proceso al igual que
la velocidad de agitación según [Yuan
2010],los tanques constan de aperturas ´para
corrientes de entrada y salida , con corrientes
de entrada del inoculo, medio inicial, medio
de producción y descarga del caldo se
determinan diámetro usando normatividad
ANSI B-36-10/19, los parámetros mecánicos
del tanque están regidos por la ASME VIII
división 1, teniendo en cuenta las condiciones
de operación, adecuadas al menor tamaño
del tanque.
En el siguiente esquema se representan de
forma clara y resumida los aspectos
comentados anteriormente.
Figura. Esquema de variables a controlar en el proceso
de producción en modo “fed-batch”de penicilina G.S
Goldrik et a. The development o fan industrial-scale fed-
batch fermentation simulation journal of Biotechnology
193(2015) 70-82.
Fermentation simulation journal
Biotechnology 193(2015) 70-82.
PROBLEMAS Y POSIBLES SOLUCIONES AL
PROCESO DE LA PENICLINA
Respecto al proceso de producción de la
penicilina tipo G, este actualmente se
encuentra en crisis según la OMS[1], ya que
tres de los cuatro productores a nivel mundial
se encuentran en china, y muchos
laboratorios han optado por empezar a
comprar a estos productores, algunos
laboratorios europeos han dejado de
producirla ya que alguna de las materias
primas tienen que importarlas, aparte de esto
la demanda de la penicilina como lo declaran
algunos medios es por parte de la gente
“pobre”[1] y esto no es atractivo para las
productores ya que, no se tiene una patente y
no genera muchos ingresos, a pesar que esta
es de gran importancia para tratar casos como
la enfermedad reumática del corazón (Imagen
1) y tratamientos contra la sífilis.
Haciendo una comparación en cuanto al
precio de la penicilina y su variación en el
tiempo, en los años 50-60 el mayor productor
era estados unidos, con un 80% de la
producción mundial y el otro 20% lo producía
Europa y china, en la actualidad se han
invertido los papeles, china tiene actualmente
el 80% de penicilina y el 20% se distribuye
entre estados unidos y Europa. Actualmente
los costos por kilogramo de penicilina son de
10 USD contra los 300 USD en los años 50-60
[5]. Esto radica en los bajos costos que implica
producirlos en el país asiático.
Ante esta problemática una posible solución
sería un compromiso por parte de los
gobiernos para financiar estos procesos de
producción para ayudar a cubrir la demanda
of de la penicilina, aunque inevitablemente esto
representaría un aumento en el costo final del
producto podría representar una leve
solución a este problema.
Si mencionamos otra problemática es la
resistencia bacteriana a la penicilina. Como
todo organismo vivo, las bacterias no son la
excepción ya que estas también están regidas
por las reglas biológicas evolutivas [2], esto
desencadena en que estás por alguna u otra
razón ha desarrollado resistencia a los
antibióticos sin ser la penicilina una
excepción. Ya sea por dosis inadecuadas,
tratamientos mal sobrellevados o alguna otra
causa, se han encontrado presencia de
mutaciones en las bacterias. Esto ha llevado a
estar en una constante optimización en el
proceso de obtención de penicilina,
recurriendo a varios métodos que se
mencionan posteriormente.
CONDICIONES ÓPTIMAS PARA EL PROCESO
DE PRODUCCIÓN DE PENICILINA.
Desde su descubrimiento la penicilina se ha
visto envuelta en diferentes procesos que han
intervenido en su constante mejoramiento y
optimización del proceso, enfocándose
principalmente en mejoramientos genéticos
de las cepas, así como permitir un mejor
control a las condiciones del medio para su
desarrollo, a lo largo de la historia se han
venido haciendo mejoras en el proceso, como
técnicas de recombinación que tienen cierta
ventaja sobre las de mutación. Técnicas
genéticas para el mejoramiento del proceso.
Otra de las continuas mejoras dentro de los
grandes productores de penicilina radica en
las tres etapas claves del proceso. Elección de
la cepa, fermentación y separación del
producto final. [3,4]
Dentro de los factores que afectan el proceso
se destacan el potencial de hidrogeno, la
temperatura, aireación y concentración de
galactosa, así mismo existen ciertos valores
que se han determinados como óptimos para
la producción de penicilina, estos están
centrados en la velocidad específica de
producción.
 pH, el pH puede variar entre 5 – 8,
pero su rendimiento óptimo se
encuentra en los valores de ~6,5.
 Temperatura: el valor óptimo para el
crecimiento es alrededor de 30ºC.
Para la producción: oscilar entre 20 -
25 °C. En proceso batch: 25 – 27ºC. En
Batch: 23 – 28ºC.
 Aireación: Los niveles de oxígeno son
claves, a la hora de desarrollar un
medio de cultivo idóneo, ya que se
está tratando de un proceso aerobio,
sin embargo hay que tener en cuenta
que la cantidad de oxígeno va a
depender de la producción y la forma
de operación del proceso.
CONDICIONES OPERACIONALES PARA EL
PROCESO.
CONDICIONES MÍNIMAS Y MÁXIMAS.
De acuerdo con el tipo de penicilina que se
desea obtener es importante mantener
ciertas condiciones mínimas y Máximas para
la velocidad de producción de penicilina son:
Temperatura: 20 – 30 °C
pH: 5 – 8
Si bien estas propiedades no se deben
mantener constantes a lo largo del proceso,
ya que este cuenta con diferentes etapas, sin
embargo dentro de las etapas claves para la
producción de penicilina y la cepa usada,
diversos estudios hacen énfasis en estas
condiciones.
MEDIOS DE MANTENIMIENTO E INÓCULOS.
Antes de iniciar el proceso de cultivo es
necesario realizar una exhaustiva evaluación
que asegure el mantenimiento de las
características de la cepa, lo cual implica
determinar el grado de esporulación, la
productividad y características morfológicas,
lo que incluye ensayos en agitadores y en
fermentadores de laboratorio.[8]
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES
El P. chrysogenum no sólo usa glucosa y
lactosa como fuentes de carbono y energía,
también puede usar sacarosa, almidón,
dextrinas, melaza, aceites vegetales y
animales, etanol y glicerol, sin embargo es
necesario destacar que la alimentación de
estos componentes independientemente la
fuente sean de manera continua para evitar la
toxicidad de los mismos sobre la cepa y la
hidroxilación por acción del organismo. [8]
LA CEPA
Penicillium chrysogenum es la especie de
hongo que se utiliza más frecuentemente en
la producción de penicilina. La especie está
dentro del género Penicillium de la familia
Aspergilliaceae de los Ascomycota[7].
P. chrysogenum es una especie saprófita. Es capaz de
descomponer materia orgánica para producir
compuestos de carbono simples que utiliza en su
alimentación.
La especie es ubicua (se puede encontrar en
cualquier parte) y es común encontrarla en
espacios cerrados, el suelo o asociada a
plantas. También crece sobre el pan y sus
esporas son comunes en el polvo.
Las esporas de P. chrysogenum pueden
generar alergias respiratorias y reacciones
cutáneas. Además puede producir diversos
tipos de toxinas que afectan a los seres
humanos.
Esta es cosmopolita. La especie se ha
encontrado creciendo en aguas marinas, así
como en el suelo de bosques naturales en
zonas templadas o tropicales. Es una especie
mesófila que puede crecer entre los 5 – 37°C,
con su óptimo a los 23°C. [6] Además, es
xerófila, por lo que puede desarrollarse en
ambientes secos. Por otra parte, es tolerante
a la salinidad.
Medio de cultivo: Las colonias en los medios
de cultivo crecen muy rápidamente. Son de
aspecto aterciopelado hasta algodonoso, con
los micelios blancos en los márgenes. Las
colonias son de color verde azulado y
producen un exudado abundante de color
amarillo brillante. [6]
Para abordar el planteamiento de un modelo
de la cinética del proceso, se analizaron los
artículos de: (Sathyanarayana et al
2008),(Navas et al 2016) , los estos se
consideran los más relevantes; de los cuales
se concluye lo siguiente.
El procedimiento para la producción de
penicilina se sintetiza en 5 factores
importantes, según el balance pseudo
estequimetrico; La Producción de biomasa, el
consumo de sustrato, la demanda de oxígeno,
la generación de producto y la generación
volumétrica.
Se analizan los factores de manera
independiente en los distintos artículos, y
todos coinciden en un modelo similar en base
a los postulados de Malthus y su ley de
crecimiento poblacional.

La cinética de la biomasa: El microorganismo

Penicilium notatum se reproduce por el
mecanismo de crecimiento apical,
entendiendo este mecanismo se despeja el
problema de calcular la producción de
biomasa, aproximando a un modelo
matemático exponencial de la población, se
encuentra que el crecimiento poblacional del
microrganismo penicillium notatum coincide
La velocidad específica cambia a medida que
con el modelo de Malthus.
transcurre el proceso, pero alcanza su
máximo en la fase exponencial, este valor es
susceptible al pH del medio y la temperatura
del reactor, está según (Sathyanarayana et al
2008), se puede aproximar al
Donde la velocidad de crecimiento comportamiento descrito por el modelo de
poblacional es directamente proporcional a la Arrhenius:
población. Este modelo concuerda con la
etapa de creciento exponencial del ciclo de
vida del microorganismo.

Un modelo más refinado para el

comportamiento de la población es la
progresión logística (PearlandReed Growth
Es importante mantener el proceso en una
equation with inhibition factor leading to
temperatura optima cuidadosamente
logistic equatio) la cual plantea que para
cercana a la de la muerte celular para
procesos en lotes la población llega a un
mejorarla cinética del proceso.
punto máximo en el cual se estanca esto
concuerda con o determinado de forma
experimental en la bibliografía.
El sustrato: se plantea una relación entre el
cambio másico de la biomasa y del sustrato,
esta es llamada el rendimiento de biomasa a
partir del sustrato, la bibliografía simplifica el
modelo según:
Gráficamente el comportamiento que exhibe
la cantidad de biomasa es:
 En base a este rendimiento se asevera que el ocasionan un cambio en la presión del
consumo de sustrato es directamente sistema y ello puede perjudicar al
proporcional a la población. microorganismo:

El Producto: El producto, se genera La demanda de oxígeno está relacionada con

principalmente durante la fase estacionaria la cantidad de biomasa presente, luego el
del proceso, por ello se desprecia la cantidad consumo de oxigeno es directamente
que se pueda generar durante la fase proporcional a la producción de biomasa, esto
exponencial, en base a ello el modelo principalmente durante la fase exponencial,
matemático es: ya que la ausencia de oxígeno puede
modificar la ruta metabólica del
microrganismo.

El cambio volumétrico es directamente

La velocidad de generación de producto
durante la fase estacionaria es directamente
proporcional a la cantidad de biomasa.
También aplica la definición de rendimiento
con respecto al sustrato.
proporcional a la producción de CO2, el
modelo se plantea en (Navas et al 2016), En el
cual las constantes dependen del
microorganismo, estas se determinan
experimentalmente.

El comportamiento se puede sintetizar en una

gráfica que englobe estas características
El volumen de control: como el modelo principales;
trabaja principalmente en un rector Bach, se
debe de tener en cuenta la generación
volumétrica de gases y líquidos, Las fuentes
bibliográficas indican que el cambio
volumétrico es directamente proporcional al
volumen generado a partir de las reacciones
esto hace necesario hacer énfasis en la
importancia de la generación volumétrica de
líquido y la generación volumétrica de gas.
Durante la reacción se produce agua pero
esta llega a ser despreciable en la mayoría de
los casos, para los gases existe una relación
entre el consumo de oxígeno y la producción
de CO2, estas 2 son importantes porque
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