UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E HISTOPATOLOGICO

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA I

Ensayo de investigación basado en la práctica de laboratorio.

Tema:
TÉCNICAS DE OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS

Realizado por: Salgado Manrique Laura Paola cod: 23

Tercer semestre Paralelo: A

Docente: MgS. Felix Falconi

Período Académico: Abril – Agosto 2018

Fecha de la Práctica: 11 – Abril – 2018

Fecha de entrega: 18 – Abril – 2018

Riobamba – Ecuador

2018
Técnicas de observación de microrganismos Por: Salgado L.

RESUMEN
El objetivo de la práctica fue reconocer y aplicar las técnicas de preparación de muestras en
fresco y frotis para observación en el microscopio con tinción simple y en solución salina. Se
procedió mediante indicaciones del docente usando una muestra de cándida y preparándola en
fresco con placas porta objetos con solución salina, colorante violeta de genciana y colocando
el cubreobjetos y en frotis colocando la muestra con suero, fijándola con calor en el mechero,
aplicando colorante y enjuagando el mismo. El resultado fue preparar adecuadamente una
muestra en fresco y en frotis con tinción simple y en solución salina para su correcta
observación en el microscopio. Se concluye que de la preparación de la muestra depende en
gran medida el resultado del examen, una muestra bien preparada arroja resultados confiables,
en cambio, una muestra mal preparada genera errores en el reporte.

1. INTRODUCCIÓN
El microscopio es una herramienta de gran importancia para la observación e identificación de
los microorganismos. Debemos distinguir entre las técnicas para observación de
microorganismos vivos y las preparaciones para tinción. Las tinciones ofrecen una información
adicional a la simple observación de la morfología, ya que ponen de manifiesto características
de la pared celular o la existencia de estructuras especiales, como las esporas bacterianas (1).
Una de las características más importantes de los microorganismos es su tamaño minúsculo
que los hace imperceptibles a simple vista y, aunado a su transparencia, obliga a utilizar
(además del microscopio) técnicas especiales para observar y estudiar su morfología y algunas
de sus estructuras (2). No conocer las técnicas de preparación de muestra en fresco y frotis se
considera un problema ya que, de dichas técnicas, depende el resultado correcto o erróneo del
examen a realizar. Por lo tanto, es de vital importancia aplicar correctamente los métodos y
pasos a seguir, para así evitar contratiempos en el reporte del análisis. Por lo cual el propósito
de esta práctica reside en que los estudiantes tengan nociones básicas y puedan aplicar las
técnicas en fresco y frotis para visualizar correctamente en el microscopio.

2. DESARROLLO
2.1 Preparaciones en fresco
La forma más simple de preparar un espécimen para su examen microscópico es hacer una
preparación en fresco. Existen dos técnicas, una preparación en fresco simple ("entre porta y
cubre") consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos sobre un portaobjetos
y a continuación cubrirla con un cubreobjetos. Una preparación en gota pendiente se realiza

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Técnicas de observación de microrganismos Por: Salgado L.

colocando una gota del material en un cubreobjetos y cubriéndolo con un portaobjetos

(invertido) con una excavación central (portaobjetos excavado) Hay que sellar la preparación
con vaselina alrededor de la excavación. La ventaja de esta última técnica, es que la preparación
no se seca y puede ser observada durante un tiempo más largo. Las preparaciones en fresco se
utilizan para observar microorganismos vivos. Por ejemplo, para la búsqueda de Trichomonas
vaginalis en secreciones vaginales. Este protozoo de gran movilidad causa inflamación de la
vagina y la uretra. Si en la preparación se observan células en forma de huso que se mueven
mediante contracciones o sacudidas cruzando el campo, probablemente se tratará de T.
vaginalis, pudiéndose efectuar el diagnóstico. Sin embargo, el inconveniente de la observación
en fresco es que no permite aumentar el contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con un
microscopio óptico de campo claro, está bastante limitado. Normalmente, para observar
microorganismos vivos se utiliza alguno de los otros microscopios ópticos (3).
Durante la práctica se tomó un portaobjetos y se colocó una gota de solución salina sobre el
mismo, luego se recogió una muestra de Cándida albicans cuidadosamente con un palillo sin
introducirlo en el medio para no dañarlo, se procedió a disolverlo en la gota de solución salina
removiendo suavemente con el palillo, finalmente se colocó el cubreobjetos ubicando el borde
del mismo en ángulo de 45° y luego soltándolo con cuidado de no dañar la muestra. La gota de
solución salina no debe ser muy gruesa ya que al tapar con el cubreobjetos la muestra puede
regarse por los bordes y no sería posible su observación en el microscopio. Además, se efectuó
en otra placa portaobjetos una tinción simple realizando todo el proceso anterior, pero
añadiendo una gota de violeta de genciana. Las dos placas fueron llevadas al microscopio para
su observación a lente de 10x y 40x.

Imagen 1: Observación de muestra en fresco a 10x

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Técnicas de observación de microrganismos Por: Salgado L.

Imagen 2: Observación de muestra con tinción simple a 10x

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2.2 Preparación de muestras con frotis y tinción simple

La extensión del material sobre el portaobjetos se hará de diferentes formas, en función de la
procedencia del producto a examinar. Si el producto es líquido, se depositará una pequeña
cantidad de material en el centro del portaobjetos, extendiéndolo con el asa hasta conseguir una
capa fina y homogénea. Si la extensión debe hacerse a partir de un cultivo en medio sólido, la
colonia que se va a estudiar se mezclará con una gotita de agua destilada estéril colocada en el
centro del portaobjetos o con solución salina al 0,9% (4). Una vez realizado el frotis, debemos
dejar secar al aire la preparación, cuando está seca la superficie pasa de ser brillante a mate;
para acelerar el secado se puede calentar ligeramente la parte inferior del portaobjetos (sin
quemar). La fijación es el último paso antes de proceder a la tinción, y tiene como objetivo no
permitir que la muestra de estudio se pierda (o se barra) en el proceso de tinción. En frotis
hematológicos no se requiere de fijación debido a que existe una coagulación rápida de las
albúminas citoplasmáticas; o si el material a teñir posee abundante material celular, se
recomienda fijar con alcohol metílico después de secar la preparación. Los frotis de origen
microbiológicos se deben de fijar con calor suave, pasando el portaobjetos sobre una llama,
tras la fijación es muy importante esperar que se enfríe antes de proceder a realizar cualquier
procedimiento de tinción (5).
En el laboratorio se procedió colocando una gota de solución salina en el portaobjetos y se
disolvió una pequeña muestra de la colonia a estudiar, luego se realizó el secado y la fijación
pasando suave e intermitentemente el portaobjetos sobre la llama del mechero de bunsen, de
esta manera la muestra se estableció por completo en la placa. Luego se colocó una gota de
violeta de genciana sin remover con el palillo, se dejó reposar por 1 minuto para que se
coloreara la muestra y por ultimo se enjuagó en un chorro de agua suave para evitar que la
muestra se dañe, para ello se puede usar una piseta o simplemente agua de la llave a baja
presión, aunque se recomienda hacerlo con agua destilada. Después de enjuagar la muestra se
dejó secar al aire y fue llevada al microscopio para observación bajo el lente de 100x con aceite
de inmersión.

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Imagen 3: Observación de muestra en frotis con tinción simple

a 100x con aceite de inmersión
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3. CONCLUSIÓN
Con esta práctica se aprendió a realizar adecuadamente los tipos preparaciones que se utilizan
en microbiología, además de la correcta preparación de un frotis para poder realizar
posteriormente las tinciones más utilizadas para el laboratorio de microbiología que son
indispensables para el correcto estudio de los microorganismos; ya que éstas permiten el
análisis de las características estructurales y morfológicas de los mismos.

4. BIBLIOGRAFÍA

1. Aula virtual Universidad de Salamanca (s.f). Método de estudio de los microorganismos.

[Internet] Obtenido 04, 2018 de: goo.gl/UDR6Fq
2. Apoyo a acciones de innovación docente. Observación microscópica. [Internet] Obtenido
04, 2018 de: goo.gl/Sbv9SU
3. Rodríguez, F. (28 – 06 - 2017). Observación de bacterias en fresco. [Internet] Obtenido
04, 2018 de: goo.gl/9GDUVW
4. Universidad de Córdoba. (s.f). Técnicas para la observación, aislamiento y conservación
de microorganismos [Internet] Obtenido 04, 2018 de: goo.gl/nqv7J2
5. Totora, G; Funke, B; Case, C. Introducción a la microbiología. 9ª ed. Buenos Aires:
Editorial Médica Panamericana, 2007. [Internet] Obtenido 04, 2018 de: goo.gl/C2WtPo

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