Cómo hacer TBE Buffer en 3 sencillos pasos

Este tampón se utiliza para la separación por electroforesis del ADN.

POR TERESA PHILLIPS Actualizado el 20 de agosto de 2018

TBE buffer es una solución tampón compuesta por Tris base, ácido bórico y EDTA (o Tris-
borate-EDTA en total). Este tampón se usa a menudo para la electroforesis en gel de agarosa
en el análisis de productos de ADN resultantes de amplificación por PCR , protocolos de
purificación de ADN o experimentos de clonación de ADN.

El tampón TBE es particularmente útil para la separación de fragmentos de ADN más pequeños
(MW <1000), como los productos pequeños de digeridos de enzimas de restricción . TBE tiene
una mayor capacidad de almacenamiento en búfer y dará una resolución más nítida que
el almacenamiento en búfer TAE . El tampón TAE es una solución formada por Tris base, ácido
acético y EDTA (Tris-acetato-EDTA).

La TBE es generalmente más costosa que la TAE e inhibe la ADN ligasa, lo que puede causar
problemas si se pretenden etapas posteriores de purificación y ligación del ADN. Con los tres
pasos simples que siguen, aprenda cómo hacer un buffer TBE. No debería llevar más de unos
30 minutos crear este búfer. Así es cómo:

Solución de stock de EDTA

Una solución de EDTA (ácido etilendiamino tetraacético) debe prepararse con anticipación. El
EDTA no se disolverá completamente hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8.0. Para
una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0.5 M, pesa 93.05 gramos de sal disódica de
EDTA (FW = 372.2). Luego disuélvalo en 400 mililitros de agua desionizada y ajuste el pH con
NaOH. Después de eso, recargue la solución hasta un volumen final de 500 mililitros.

Solución de Stock de TBE

Prepare una solución madre concentrada (5x) de TBE pesando 54 g de Tris base (FW =
121.14) y 27.5 g de ácido bórico (FW = 61.83) y disolviendo ambos en aproximadamente 900
mililitros de agua desionizada. Luego agregue 20 mililitros de EDTA 0.5 M (pH 8.0) y ajuste la
solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución puede almacenarse a temperatura
ambiente, pero se formará un precipitado en soluciones más antiguas. Almacene el tampón en
botellas de vidrio y deséchelo si se ha formado un precipitado.

Solución de trabajo de TBE

Para la electroforesis en gel de agarosa, se puede usar un tampón TBE a una concentración de
0.5x (dilución 1:10 del stock concentrado). Diluir la solución madre 10 veces en agua
desionizada. Las concentraciones finales de soluto son tris-borato 45 mM y EDTA 1 mM. El
tampón ahora está listo para su uso en la ejecución de un gel de agarosa .

Que necesitas
Para hacer un tampón TBE, solo necesitarás cuatro sustancias. Los elementos restantes en
esta lista son equipos. Las cuatro sustancias requeridas son EDTA sal disódica, Tris base,
ácido bórico y agua desionizada.

En cuanto al equipo, necesitará un medidor de pH y estándares de calibración, según

corresponda. Además de eso, necesitará vasos o matraces de 600 mililitros y 1500
mililitros. Para redondear las necesidades de su equipo están los cilindros graduados, las
barras de agitación y los platos de agitación.

Verifique el inventario en el laboratorio que usará para asegurarse de tener todo lo que necesita
antes de comenzar. No hay nada peor que tener que detenerse en el medio de preparar una
solución porque te has quedado sin los materiales adecuados. Si su laboratorio está en la
escuela o en su lugar de trabajo, verifique con el personal apropiado para ver si tienen todos los
artículos en el inventario. Hacerlo puede ahorrarle tiempo y energía al final.