I.

INTRODUCCIÓN

La sangre está formada por un líquido amarillento

denominado plasma, en el que se encuentran en suspensión millones de células
que suponen cerca del 45% del volumen de sangre total. Tiene un olor
característico y una densidad relativa que oscila entre 1,056 y 1,066. En el adulto
sano el volumen de la sangre es una onceava parte del peso corporal, de 4,5 a
6 litros. Una gran parte del plasma es agua, medio que facilita la circulación de
muchos factores indispensables que forman la sangre. Un milímetro cúbico de
sangre humana contiene unos cinco millones de corpúsculos o glóbulos rojos,
llamados eritrocitos o hematíes; entre 5.000 y 10.000 corpúsculos o glóbulos
blancos que reciben el nombre de leucocitos, y entre 200.000 y
300.000 plaquetas, denominadas trombocitos. La sangre también transporta
muchas sales y sustancias orgánicas disueltas.

Al microscopio se verá un dominio predominante de hematíes

o glóbulos rojos. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los
bordes. Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la
presencia de núcleo. Si se observan muchos leucocitos es porque puede haber
una infección.

OBJETIVOS

 Aprender cómo se hacen preparaciones de frotis sanguíneos.

 Conocer y aplicar la técnica de tinción más utilizada en fisiología animal.

 Adquirir destreza para el manejo de los instrumentos a usarse en la presente

práctica.

 Reconocer cada una de las células sanguíneas que se encuentran en la

sangre de los diferentes animales domésticos y humanos.
 II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

La sangre es un tejido líquido cuya función es la de servir de

medio de transporte a nutrientes, sustancias de desecho, gases respiratorios,
hormonas y otras sustancias. Además, contiene una serie de proteínas, los
anticuerpos, y ciertos tipos celulares implicados en la defensa contra las
infecciones. Además, ciertas proteínas -fibrina- son responsables de la
coagulación sanguínea, que impide la pérdida excesiva de sangre cuando los
vasos se rompen, pero que, en ocasiones, pueden dar lugar a la formación de
coágulos o trombos responsables de ciertas patologías (infarto cardíaco,
embolia). Por último, la sangre también está implicada en la regulación de la
temperatura corporal.

2.1. ERITROCITOS O GLÓBULOS ROJOS

Los glóbulos rojos conocidos también como eritrocitos, son

células anucleadas, redondeadas y en su interior portan la hemoglobina,
elemento que provee el color rojo a la sangre. La función de estas células es
transportar oxígeno a todos los tejidos del cuerpo. Si su conteo es bajo se
diagnostica anemia, si su conteo es alto se diagnostica policitemia.

2.1.1. Características:

 Son las células más abundantes en la sangre.

 En mamíferos tienen forma discoidal y bicóncava, son de

tamaño pequeño (favorece la circulación y aumenta la relación
superficie/volumen), carece de núcleo y componentes
citoplasmáticos (metabolismo limitado).

 Químicamente compuesto por: el 65% de agua, 34%

hemoglobina, el resto son componentes de la membrana.

 Son responsables del transporte de oxigeno por la sangre,

contribuyen al equilibrio acido–base sanguíneo. Participan en el
trasporte de CO2.
  La velocidad de sedimentación mide la estabilidad de la
suspensión sanguínea y depende de la proporción de proteínas
plasmáticas concretas.

 La vida media en humanos es de 120 días, van perdiendo

progresivamente su actividad, y su membrana se hace frágil y
se acaba rompiendo, liberando su contenido.

 La resistencia de los eritrocitos suele medirse sometiendo la

suspensión a presiones osmótica decrecientes hasta hemolisis
parcial total.

2.2. LEUCOCITOS O GLÓBULOS BLANCOS

Los glóbulos blancos son células de mayor tamaño que los

glóbulos rojos, y normalmente son menores en número. Los glóbulos blancos
son parte importante del sistema inmune, por lo que si sucede algún tipo de
invasión patológica pueden aumentar el conteo de estas células.

2.2.1. Características:

 Los glóbulos blancos son nucleados, se agrupan en 5

categorías según su morfología. Su porción relativa se
denomina fórmula leucocitaria.

 Implicados en la defensa del organismo frente a la invasión de

materiales extraños y sus propios restos celulares.

 Están dotados de movimiento ameboide y se dirigen por

quimiotaxis. Los materiales son incorporados por fagocitosis
para ser destruidos y digeridos.

Como mencionamos se agrupan en cinco categorías según

su morfología:
 a) Neutrófilos: Se pueden encontrar en dos grupos: los
segmentados y abastonados. Son muy móviles y
presentan acusado quimiotaxismo y capacidad fagocítica.
Son los primeros en llegar (en un gran numero) a la
infección microbiana.

b) Eosinófilos: Presentan un color ladrillo o anaranjado. Son

menos móviles cuya función principal es: desintoxicar de
proteínas extrañas y otras sustancias. Implicados en la
eliminación celular de determinados parásitos y en la
modulación de reacciones inflamatorias alérgicas.

c) Basófilos: Son escasos en la sangre, poco móviles y no

contienen lisosomas. Es parecido tanto de forma
estructural y funcionalmente a los mastocitos.

d) Monocitos: Son los más grandes con núcleo redondeado

y excéntrico. Presenta citoplasma con granulaciones finas.
Tras abandonar la sangre la sangre se convierte en
macrófagos. Además de actividad fagocitaria, ejercen un
papel modulador en la homeostasis tisular y en respuestas
locales inflamatorias e inmunológicas.

e) Linfocitos: Carecen de granulaciones, no fagocitan,

presentan un núcleo central e implicado en respuestas
inmunitarias.

2.3. PLAQUETAS Y TROMBOCITOS

2.3.1. Características:

 Son fragmentos celulares pequeños sin núcleo originados en la

medula ósea a partir de megacariocitos. Su función primordial
está en relación con los procesos homeostáticos y el
mantenimiento de la integridad del epitelio.
 La superficie plaquetaria: glucocalix bien desarrollado
responsable de la adhesión a estructuras endoteliales o
agregación entre sí, suele presentar adheridas proteínas
plasmáticas como fibrinógeno, factor VIII y factor V.

 La membrana presenta receptores para fibrinógeno, trombina,

ADP, adrenalina 5-HT, colágeno y complejos antígeno-
anticuerpo y numerosas enzimas y fosfolípidos.

 En su citoplasma tiene un citoesqueleto bien desarrollado con

un sistema canalicular externo formado por invaginaciones
desde la membrana y conectada con el exterior formada por un
sistema canalicular interno correspondiente al retículo
endoplasmático liso (se sintetiza prostaglandinas y se
secuestra Ca). También hay mitocondrias, aparato de Golgi,
lisosomas, cuerpos densos a los electrones, gránulos cc y
gránulos de glucógeno.

 Su vida media es de 1 a 2 semanas si no intervienen en la

coagulación son destruidos por macrófagos en el hígado y en
el bazo.

 Plaquetas (trombocitos): su función principal es la coagulación

de la sangre. Las plaquetas tienen un tamaño mucho más
pequeño que el el resto de las células sanguíneas. Se aglutinan
en el orificio de un vaso sanguíneo formando un coagulo, o
trombo, que detiene la hemorragia.

 La producción de linfocitos se puede realizar en diversas partes,

pero la producción de neutrófilos, monocitos, eosinófilos y
basófilos se realiza exclusivamente en la medula ósea.
También podemos encontrar otro tipo de leucocitos como las
células plasmáticas y lo macrófagos en la medula ósea y en
otros sitios.
2.4. MATERIALES

 Cámara de Neubauer
 Pipeta de toma
 Solución de Gower
 Solución de Turk
 Cubreobjetos.
 Tubos de ensayo
 Micro pipeta
 Microscopio
 Sangre de animal.
 Solución May-Grumwald/Giemsa

2.5. MÉTODOS.

El método empleado por el docente fue netamente práctico.

2.5.1. Reconocimiento de células sanguíneas

Procedimiento:

 Se coloca una gota de sangre sobre un portaobjeto seco y se

extiende de la forma más delgada posible.
  Para identificar el extendido se inscriben con lápiz el numero o
nombre del animal sobre la película de sangre seca o sobre el
extremo del portaobjetos.

 La coloración del frotis se realiza por inmersión en el colorante o

por aposiscion (sobre barras paralelas).

 Para la coloración, el extendido se fija primeramente en una

solución alcohólica de eosina-azul de metileno; esta solución se
diluye a continuación en igual cantidad de agua destilada neutra
dejándola actuar otros 1 a 2 minutos.

 Luego se la vuelca y se cubre en el preparado con solución fresca

de Giemsa (10 gotas de solución madre Giemsa en 10 ml de agua
destilada neutra) durante 15 a 20 minutos, después de este tiempo
se lava minuciosamente con agua neutra y se saca al aire.

2.5.2. Recuento de glóbulos.

2.5.2.1. Dilución de la sangre y llenado de la cámara

 Procedimientos:

 Se inserta una boquilla con una manguera pequeña de jebe en el

extremo proximal de la pipeta para la dilución de glóbulos, luego se
toma la boquilla con la boca.

 La pipeta se pone en posición horizontal y se aproxima al borde de

la gota de sangre.

 Se deja que la sangre avance hasta la señal 0.5 de la pipeta,

realizando si es necesario una ligera aspiración por la boquilla. Si
la sangre pasara de la señal deseada, puede hacerse retroceder
tocando con el extremo de la pipeta un algodón o una gasa
húmeda.

 Luego se quita el exceso de sangre del extremo de la pipeta. El otro

extremo se cierra bien, sea tapando el tubo de goma o colocando
la punta de la lengua de la boquilla; de otra manera la sangre saldrá
de la pipeta.

 Se sumerge el extremo de la pipeta en el líquido de dilución para

glóbulo, manteniendo la pipeta en forma vertical.

 Luego se aspira el líquido de dilución exactamente hasta la señal

101 (para glóbulos rojos) o 11 (para glóbulos blancos). La dilución
se hace rápidamente y con precisión para que no se coagule la
sangre y para que los resultados sean más exactos.

 Seguidamente se coloca la cámara de recuento sobre la platina del

microscopio; se pone el cubreobjetos sobre la zona de recuento,
descansando sus bordes en la zona prevista.

2.5.2.2. Recuento de glóbulos rojos

Procedimientos:

 Colocar la cámara bajo el microscopio y localizar el campo con

pequeño aumento, pasando luego a un aumento mayor. Contar
las células en los cuatro campos de las esquinas y el centro de 16
cuadrados cada uno. Incluir en cada cuadrado las células que se
encuentran sobre las líneas superior izquierda de cada cuadrado.

 Luego calcule el numero promedio de las células por cada

cuadrado pequeño.

Cálculos:

 El espacio que queda entre el retículo de la cámara y el

cubreobjetos tiene 0.1mm de espesor. El retículo tiene 9mm 2de
superficie.

 El contaje de glóbulos rojos se hace en solo 1/5 del mm2 central,

o sea de los 25 cuadrados en que está dividido se toma en cuenta
el de las esquinas y el centro

 Suponiendo que en estos 5 cuadrados se hayan contado “N”

glóbulos rojos, 5N representará todo el mm2, pero como el
espesor de la cámara es de 0.1mm, tenemos que multiplicar por
10 para encontrar el número de glóbulos rojos por mm 3, y como
 la dilución es de 1 en 200, multiplicaremos a demás por 200,
entonces para calcular el número de eritrocitos realizaremos la
siguiente operación:

Numero de eritrocitos/mm3 = N x 5 x 10 x 200 es lo mismo

que: = N x 10,000

2.5.2.3. Recuento de glóbulos blancos

Procedimiento:

 La técnica de llenar la muestra es la misma que se utiliza para el

recuento de eritrocitos, la diferencia radica en que la pipeta que
se usa para este caso presenta un mayor diámetro y cuando se
llena con sangre hasta la marca 0.5 y se diluye con la solución de
Turk hasta la marca II, la dilución es de 1 en 20.

 El contaje se lleva a cabo con menor aumento y en los cuadrados

de las esquinas.

Cálculos:

 La dilución es de 1 en 20. La dimensión de la cámara es igual que

la de los glóbulos rojos. Los mm2 contados son de 5.
Luego:
Numero de glóbulos blancos/mm3 = N x 10 x 20 / 5
= N x 40
 III. RESULTADOS

Los resultados obtenidos en la práctica fueron exitosos ya que se logró

identificar los diferentes tipos de células existentes en la sangre, así
como también se pudo realizar el recuento de glóbulos rojos y blancos.

3.1. Identificación de células sanguíneas

3.2. Recuento globular

3.2.1. Glóbulos rojos

76 45

68

85 60

Numero de eritrocitos/mm3 = 333 x 5 x 10 x 200 es lo mismo que:

= 333 x 10,000

Entonces:

Numero de eritrocitos/mm3 = 3330,000

3.2.2. Glóbulos blancos

43 41

35 45

Numero de glóbulos blancos/mm3 = 164 x 10 x 20 / 5

= 164 x 40

Entonces:

Numero de eritrocitos/mm3 = 6,560

 IV. CONCLUSIÓN

La práctica se concluyó exitosamente ya que se logró

observar que Los eritrocitos o glóbulos rojos son células de color amarillento, con
la forma de un disco bicóncavo, sin núcleo y contienen un pigmento llamado
hemoglobina que les otorga su característico color.

Estos se forman constantemente en la medula ósea, en el

cráneo, las costillas, las vértebras y el esternón, en un proceso conocido como
eritropoyesis. Viven aproximadamente 120 días y al envejecer son destruidos
por las células retículo endoteliales del hígado, la medula ósea y el bazo.

La falta de núcleo le confiere la virtud de acarrear oxigeno sin

consumir nada de él.

V. BIBLIOGRAFÍA

 https://ieslilab.files.wordpress.com/2011/12/practica-sangre.pdf

 https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com/2014/11/23/prac
tica-no15-recuento-de-hematies/

 http://bvs.minsa.gob.pe/local/INS/845_MS-INS-NT40.pdf

 http://edurirom.blogspot.com/2012/03/practica-no-4-cuenta-de-
eritrocitos.html
ANEXO