Módulo 3: Diagnóstico y

tramiento
3.2 Diagnóstico
Pruebas bioquímicas
para identificación de V. cholerae
Lineamientos para la
Vigilancia por
Laboratorio de
Enfermedad Diarreica
Aguda Bacteriana.
DGE-InDRE/RNLSP
(2013)
 Diagrama de flujo para la búsqueda de Vibrio spp

Diagrama de flujo Hisopo rectal

(Cary-Blair)
ara búsqueda de 6-8 h 36+1°C

Vibrio spp Agua Peptonada

Alcalina (APA)

6-8 h 36+1°C

Vibrio cholerae Agar TCBS Vibrio parahaemolyticus

18-24 h 36+1°C

Colonias sacarosa positivo Colonias sacarosa negativo

(amarillas): (verdes):
Pruebas bioquímicas: Pruebas bioquímicas con 1% de
CP, CArg, MIO, TSI, LIA. NaCl:
Tubo de BAB CP, CArg, MIO, TSI, LIA.
Caldo nutritivo con 1, 3, 6, 8 y
10 % de NaCl. Tubo de BAB

18-24 h 36+1°C 18-24 h 36+1°C

Prueba de oxidasa e Prueba de oxidasa e

Interpretación de resultados Interpretación de resultados
Clasificación de V. cholerae

NO USO DE
PRUEBAS RÁPIDAS

Lineamientos para la Vigilancia por Laboratorio de Enfermedad Diarreica Aguda Bacteriana

DGE-InDRE–RNLSP 2013
Toma, manejo y envío de
muestrasdel
Etapas para coprocultivo
proceso de análisis
ETAPA ETAPA
ETAPA POST-
PRE-ANALÍTICA ANALÍTICA ANALÍTICA

Solicitud del Método de análisis Almacenamiento

de las muestras.
examen
Disposición
Preparación del Aseguramiento de segura de las
la calidad muestras
paciente
analizadas.
Toma de muestra Informe de
resultados
Transporte Revisión
sistemática
Formato uniforme

Commission on Laboratory Accreditation

College of American Pathologists (CAP), 2005.
Toma de muestra
Cuando hacer la Cuando el paciente está en un proceso diarreico.
toma de muestra: Tan pronto como sea posible después de iniciar la enfermedad
(preferentemente dentro de los primeros cuatro días).
Antes de empezar tratamiento antimicrobiano.

Qué cantidad de Hisopo rectal

muestra Hisopo fecal (a partir de la deposición fresca en medio de
transporte)

Medio de Medio de transporte Cary Blair.

transporte
Almacenamiento de El almacenamiento de elección es en refrigeración.
la muestra después Se pueden transportar y manejar las muestras a temperatura
de la toma. ambiente por tiempos prolongados.

Transporte Sellar los tubos para prevenir pérdidas de humedad.

Colocarlos en contenedores impermeables.
Solicitud del examen

Formato de solicitud

Datos generales del paciente

Dirección del paciente
Datos del médico solicitante
Tipo de muestra
Examen que solicita
Preparación del
paciente
Explicar en forma clara el procedimiento para la toma
de la muestra.

La toma de la muestra debe ser antes de iniciar el

tratamiento con antibióticos.
Toma de muestra
Hisopo rectal
Humedezca el hisopo en el medio de transporte.
Inserte el hisopo en el esfínter rectal (2 a 3 cm) y rote
suavemente.
Saque y examine el hisopo para asegurar que hay algo de
materia fecal en la superficie.
Coloque el hisopo en el medio de transporte y tape.
La cantidad de hisopos que se tomen depende de la cantidad de
placas que se requieran sembrar.
Toma de muestra
Hisopo fecal
Colecte la deposición de los pacientes en contenedores limpios sin
residuos de desinfectantes o detergentes y con tapón de rosca.

No debe colectar las deposiciones de cómodos debido a que ellos

pueden contener residuos de desinfectantes o ser fuente de
contaminación.

Las deposiciones deben refrigerarse y procesarse dentro de las dos

primeras horas después de la colección.

Las deposiciones que no se puedan procesar dentro del tiempo

establecido se deben colocar en medio de transporte.
Medio de transporte
•Cary-Blair (1ª elección)
•Amies
•Stuart
•Salina con glicerol (excepto para Vibrio
cholerae)

•APA (sólo para Vibrio cholerae y únicamente si

no hay otra alternativa)
Medio de transporte
Cary Blair
Se usa para transportar muchos patógenos entéricos: Shigella,
Vibrio cholerae, Salmonella, Escherichia coli

Es un medio de consistencia semisólida fácil de transportar.

El medio de cultivo puede almacenarse a temperatura

ambiente y por más de un año después de su preparación.

Debido a su valor de pH elevado es el medio de elección para

el transporte y preservación de Vibrio cholerae.
Criterios de aceptación
y rechazo

Sólo se aceptan las muestras colectadas en

contenedores apropiados y sin contaminación.

No se procesarán muestras sin etiqueta,

ilegibles o etiquetadas en forma inapropiada.

No se procesarán las muestras con solicitudes

mal llenadas o ilegibles.

Se hará notificación de las muestras o

solicitudes rechazadas.
Fuentes de variación con
respecto a la muestra
•Conservación de la muestra
•Exposición a la luz
•Temperatura de embalaje
•Transporte
Transporte de la
muestra
Intrahospitalario o Intrainstitucional

a) Sección de toma de muestra al laboratorio

(ambulatorio)
b) Sala de hospitalización al laboratorio.

Desde otro laboratorio o institución

Desde el domicilio del paciente

Transporte de la muestra

•El remitente debe hacer seguimiento del

transporte de las muestras al laboratorio

•Tiempo
•Temperatura
•Seguridad
Capacidad diagnóstica instalada (RNLSP)

 Boletín Caminando a la
Excelencia: Concordancia
de resultados y
cumplimiento con el envío
de cepas para Referencia

 Programa de Evaluación
Externa del Desempeño:
Evaluación de la
competencia técnica
mediante el envío de dos
paneles de eficiencia al
año
Capacidad instalada
(RNLSP)

• Laboratorios de la RNLSP
 Los 31 LESP tienen la capacidad de identificar Vibrio cholerae
hasta serotipo
 El porcentaje de concordancia de los 31 LESP obtenido en el
último panel de evaluación del desempeño en 2013 fue de
100%
 Diez LESP están en fase de implementación para la
determinación de toxigenicidad por PCR
Capacidad instalada
(InDRE)
 Confirmación de serotipo de los
aislamientos de Vibrio cholerae
que realiza la RNLSP
 Determinación de toxigenicidad
por métodos moleculares en
cepas de V. cholerae 01
identificadas por la RNLSP
 Determinación de perfiles de
sensibilidad y resistencia a los
antibióticos
 Realización de perfiles
electroforéticos por campos
pulsados para determinación
de similitud clonal
•En 2012 se realizó la
capacitación a nivel nacional
para la determinación de
toxigenicidad por PCR en cepas
de Vibrio cholerae 01
•Actualmente InDRE acompaña y
asesora técnicamente para la
implementación de la técnica
molecular para toxigenicidad a la
RNLSP