Actualizacion Manual de Tecnicas PDF

MANUAL
DE TÉCNICAS LABORATORIO
DE ANALISIS CLINICOS
Índice
BIOQUÍMICA CLÍNICA:
Glucosa…………………………………………………………………......
Urea…………………………………………………………………………
Creatinina…………………………………………………………………..
Acido úrico…………………………………………………………………
Colesterol total……………………………………………………………..
Triglicéridos…………………………………………………………….......
Colesterol HDL……………………………………………………………..
Colesterol LDL……………………………………………………………..
Lípidos totales……………………………………………………………...
Fosfolípidos………………………………………………………………...
Hemoglobina glucosilada…………………………………………………
Tolerancia a la glucosa……………………………………………………
GLUCOSA
(BIOSYSTEMS)
FUNDAMENTO: La glucosa se determina después de una oxidación enzimática

en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrogeno formado reacciona
catalizado por la peroxidasa, con fenol y aminofenazona para formar un indicador
de quinonaimina rojo-violeta.
PROCEDIMIENTO:
1 Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.
2 Pipetear el tubo de ensayo:
Blanco Estándar Muestra

Estándar 5 µL
Muestra 5 µL
Reactivo 500 µL 500 µL 500 µL
3 Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16
– 25 °C) o durante 5 minutos a 37°C.
4 Leer absorbancia del patrón y de la muestra a 500 nm frente al blanco. El color
es estable durante 2 horas.
VALORES DE REFERENCIA:
Suero y plasma: Neonato, prematuro: 25 – 80 mg/dL

Neonato a termino: 30 – 9 0 mg/dL
Niños y adultos: 70 – 105 mg/dL
LINEALIDAD: 500 mg/dL. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la

muestra ¼ con agua destilada y repetir la medición.
GLUCOSA
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL MÉTODO: la glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de la
glucosa a acido gluconico. El peróxido de hidrogeno (H2O2), producido se
detecta mediante un aceptor cromogénico de oxigeno, fenol-ampirona en
presencia de de la peroxidasa (POD):
GOD
Β-D-Glucosa + O2 + H2O acido gluconico + H2O2
POD
H2O2 + fenol + ampirona QUINONA + H2O
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa

presente en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLINICO: La glucosa es la mayor fuente de energía para las

células del organismo; la insulina facilita la entrada de la glucosa en las células.
La diabetes mellitus en una enfermedad que cursa con una hiperglucemia,
causada por un déficit de insulina.
PROCEDIMIENTO:
2 Pipetear el tubo de ensayo:

Estándar 5 µL
Muestra 5 µL
3 Mezclar e incubar los tubos durante 10 minutos a 37°C ó 15-20 minutos a

temperatura ambiente (16 – 25 °C).
4 Leer absorbancia del patrón y de la muestra, frente al blanco de reactivo. El
color es estable como mínimo 30 minutos.
VALOR DE REFERENCIA:
Suero o plasma: 60-110 mg/dL
LCR: 60-80% del valor en sangre.
RANGO DE MEDIDA: desde el limite de detección de 0.04 mg/dL hasta el limite

de linealidad de 500 mg/dL.
Si la concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra ½ con
ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
GLUCOSA
(POINTE)
PRINCIPIO DEL MÉTODO: la glucosa es oxidada por la glucosa oxidasa a

gluconato y peróxido de hidrógeno. Fenol + 4-AAP + peróxido de hidrógeno, en
presencia de peroxidasa, produce una quinoneimina que se mide a 500 nm.
Glucosa Oxidasa
D-Glucosa + O2 + H2O H2O2 + D-Gluconato
POD
H2O2 + 4-AAP + Fenol Quinonaimina + H2O
La absorbancia a 500 nm es proporcional a la concentración de glucosa en la

muestra.
SIGNIFICADO CLINICO: para la determinación cuantitativa de glucosa en

suero. La determinación de glucosa en suero es más comúnmente realizada para
el diagnóstico y tratamiento de diabetes mellitus.
PROCEDIMIENTO:
1.- Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.
2.- Pipetear Al tubo de ensayo:
Incubar el reactivo a 37 °C durante 5 minutos antes de agregar el suero.

Estándar 5 µL
Muestra 5 µL
4.- Agregar el suero e incubar los tubos durante 10 minutos a 37°C ó 15-20
minutos a temperatura ambiente (16 – 25 °C).
5.- Leer absorbancia del patrón y de la muestra, frente al blanco de reactivo. El

color es estable como mínimo 30 minutos.
VALORES ESPERADOS.
70 – 105 mg/dL.
RANGO DE MEDIDA: limite de detección de 0.00 mg/dL hasta el límite de

linealidad de 500 mg/dL.
Si la concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra ½ con
UREA/BUN
(BIOSYSTEMS)
FUNDAMENTO: La urea presente en la muestra origina según la reacción el

salicilato y el hipoclorito del reactivo reacciona con los iones amonio para formar
un complejo verde (2,2-bicarboxilindofenol) que es directamente proporcional a
la concentración de urea en la muestra y que se cuantifica
espectrofotométricamente.
PROCEDIMIENTO:

2 pipetear en tubos de ensayo:

Estándar 5 µL
Muestra 5 µL
Reactivo (A) 500 µL 500 µL 500 µL
3 Agitar bien e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (16 – 25 °C)

o durante 5 minutos a 37°C.
4 Pipetear:
Reactivo (B) 500 µL 500 µL 500 µL
5 Agitar bien e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (16 – 25 °C)

o durante 5 minutos a 37°C.
6 Leer la absorbancia del patrón y de la muestra a 600 nm frente al blanco. El
color es estable durante 2 horas.
Suero o plasma: 15 – 39 mg/dL BUN: 7 – 18 mg/dL
Orina: 26 – 43 g/24 Horas BUN: 12 – 20 g/24 Horas
LINEALIDAD: 300 mg/dL

UREA/BUN
(LICON)
FUNDAMENTO: la urea es el principal producto de desecho del catabolismo de

proteínas. Es sintetizada en el hígado a partir del amonio, el cual es producido
como resultado de la desaminación de aminoácidos. Normalmente, el nitrógeno
de urea en la sangre comprende solo el 45 % del nitrógeno no proteico. La
importancia de la determinación del nitrógeno de urea es su valor como buen
indicador del funcionamiento hepático y renal. La disminución de los niveles del
nitrógeno de urea (BUN) se ha visto en la nefritis, destrucción hepática aguda,
amiloidosis y embarazo. Valores elevados de BUN sean visto en casos de nefritis
aguda y crónica, obstrucción urinaria e intestinal, uremia, envenenamiento por
metales, neumonía, enfermedad de Addison, peritonitis, shock en cirugía y fallas
cardiacas.
El procedimiento BUN de StanBio es una modificación del método descrito por
Sampson. La urea se convierte catalíticamente a carbonato de amonio por
acción de la ureasa. La velocidad de reacción depende de la concentración de
deshidrogenasa glutámica. La velocidad de reacción de esta segunda reacción
es dependiente de la primera y puede medirse por la velocidad de conversión de
NADH a NAD por el cambio de absorbancia a 340 nm.
PROCEDIMIENTO
1. Prepara el reactivo de trabajo de BUN de acuerdo al instructivo.
2. Calibre a 0 el espectrofotómetro a 340 nm con agua destilada.
3. Por cada muestra y control, agregar 1.0 mL de reactivo de trabajo a la cubeta

o tubo de prueba y llevar a 37 °C por 3 minutos.
4. Adicionar 10 µL (0.010 mL) de suero a cada tubo respectivamente y agitar

levemente.
5. Leer y anotar la absorbancia (A1) exactamente después de 30 segundos.
6. Exactamente a los 60 segundos después de leer (A1), lea y registre la

absorbancia (A2).
7. Calcule el cambio de absorbancia por minuto (ΔA) mediante la resta de (A1) -

(A2).
8. Procese las muestras de pacientes y controles siguiendo los pasos del 4 al 7
Rango normal: BUN: 8 – 23 mg/dL

UREA: 17 – 49 mg/dL
UREA
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: la ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente

en la muestra, en amoniaco (NH3) y anhídrido carbonico (CO2).
El amoniaco formado se incorpora al α-cetoglutarato por acción de la glutamato
desidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a NAD +:
Ureasa
+
Urea + H2O + 2H 2NH3 +CO2
GLDH
2NH3 + αcetoglutarato + NADH H2O + NAD+ + L-Glutanmato
La disminución de la concentración de NAD + en el medio es proporcional a la

concentración de urea de la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLINICO: la urea es el resultado final del metabolismo de las
proteínas; se forman en el hígado a partir de su destrucción.
Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de
proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardiaca, hemorragias gástricas,
hipovolemia y obstrucciones renales.
PROCEDIMIENTO:
2 pipetear en tubos de ensayo:

Estándar 5 µL
Muestra 5 µL
Reactivo de trab. 500 µL 500 µL 500 µL
3 Agitar bien y leer inmediatamente.
Suero o plasma: 15 – 45 mg/dL

Orina: 20 – 35 gr/24 Horas BUN: 12 – 20 g/24 Horas
LINEALIDAD: 500 mg/dL.

Si la concentración es superior al limite de linealidad, diluir la muestra ½ con
CREATININA
(BIOSYSTEMS)
FUNDAMENTO: la creatinina en solución alcalina reacciona con ácido pícrico
para formar un complejo coloreado. La cantidad del complejo formado es
directamente proporcional a la concentración de creatinina. Las determinaciones
de creatinina se usan en el diagnostico y tratamiento de enfermedades renales,
monitoreo de la diálisis renal como base de calculo para la determinación de
otros analitos en la orina.
PROCEDIMIENTO:
Preparar reactivo de trabajo, mezclando volúmenes iguales de las soluciones A

y B para la cantidad de pruebas a realizar.
1 Pipetee en tubos de ensaye:
Estándar Muestra
Estándar 50 µL
Muestra 50 µL
Reactivo de trabajo 500 µL 500 µL
2 Agitar bien y leer la absorbancia A1 del estándar y de la muestra al cabo de 30

segundos. Exactamente 2 minutos después leer la absorbancia A2 del estándar
y del problema.
CÁLCULOS:
A2 – A1 = ΔA Muestra o ΔA Patrón
ΔA Muestra X Concentración del estándar = mg/dL

ΔA Patrón
Las muestras de orina deberán procesarse de igual forma, diluyendo 1:10 con
solución fisiológica al 0.9% multiplicando el resultado por dicha dilución.
Hombres (Suero): 0.6 – 1.1 mg/dL

(Orina): 800 – 2000 mg/24horas
Mujeres: (Suero): 0.5 – 0.9 mg/dL

(Orina): 60 – 1800 mg/24 horas
CREATININA
(DiaSys)
FUNDAMENTO: La creatinina es un producto de desecho excretado por los
riñones principalmente por la filtración glomerular. Valores elevados de
creatinina en plasma siempre indican una excreción disminuida, por ejemplo
función del riñón dañada. El clearalce de creatinina permite una estimación
bastante buena de la tasa de filtración glomerular (GFR) que permite una mejor
detección de enfermedades del riñón y la vigilancia de la función renal. Para este
propósito la creatinina es medida simultáneamente en el suero y orina
recolectada en un lapso de tiempo definido.
La creatinina forma un complejo coloreado rojo-anaranjado en una solución de

picrato alcalino. La diferencia en la absorbancia a tiempos fijos durante la
conversión son proporcionales a la concentración de creatinina en la muestra.
PROCEDIMIENTO:
1. Coloque en cubetas los siguientes volúmenes:
BLANCO MUESTRA/ESTÁNDAR
MUESTRA/ESTÁNDAR ---- 50 µL
AGUA DESTILADA 50 µL ----
MONOREACTIVO 1000 µL 1000 µL
2. Mezclar y leer la absorbancia A1 después de 60 segundos, leer la absorbancia

A2 después de otros 120 segundos.
Suero-plasma:
- Mujeres: 0.6 – 1.1 mg/dL

- Hombres: 0.9 – 1.3 mg/dL
Orina:
- Mujeres: 11 – 20 mg/kg/24 h
- Hombres: 14 – 26 mg/kg/24 h
CREATININA
(LICON)
FUNDAMENTO: La creatinina reacciona con el ácido pícrico en un medio
alcalino para formar un complejo de color el cual absorbe a 510 nm. La velocidad
de formación del color es proporcional a la concentración de creatinina en la
muestra.
PROCEDIMIENTO:
1 Coloque las celdillas del espectrofotómetro a 37°C.

2 Lleve a cero el espectrofotómetro con un blanco de agua a 510 nm.
3 Pipetee 1 mL de reactivo en cada tubo de ensaye y preincube por 3 min a 37°C.
4 Transfiera 0.05 mL (50µL) del estándar en el tubo de ensaye, mezcle
inmediatamente y pase a una celdilla de lectura.
5 Transcurridos exactamente 20 segundos, lea y registre la absorbancia (A1).
6 Exactamente 60 segundos después de la lectura inicial lea y registre la
absorbancia final (A2).
7 Calcule el cambio de absorbancias ΔA restando (A2 – A1).
8 Corra los controles y las muestras de los pacientes como se indica en los pasos
del 1 al 7.
Hombres (Suero): 0.9 – 1.5 mg/dL

(Orina): 1000 – 2000 mg/24horas
Mujeres: (Suero): 0.7 – 1.4 mg/dL

(Orina): 600 – 1500 mg/24 horas
LINEALIDAD: hasta 20 mg/dL. Muestras que excedan de estos valores deberán

diluirse al doble con solución salina, repetir el ensayo y multiplicar el resultado
por 2
CREATININA
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: el ensayo de la creatinina con el picrato de sodio

descrito por Jaffé.
La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El
intervalo de tiempo escogido por las lecturas permite eliminar gran parte de las
interferencias conocidas del método.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina
en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLINICO: la creatinina es el resultado de la degradación de la

creatinina, componente de los músculos y puede ser transformada en ATP,
fuente de energía para la célula.
La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular.
Varía poco y los niveles suelen ser muy estables.
Se elimina a través del riñón en una insuficiencia renal progresiva hay una
retención en sangre de urea, creatinina y acido úrico.
Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal.
PROCEDIMIENTO:
1 Pipetee en tubos de ensaye:

Estándar 50 µL
Muestra 50 µL
Reactivo de trabajo 500 µL 500 µL 500 µL
2 Agitar bien y leer inmediatamente el estándar y después la muestra o

problema.
Suero-plasma:
Orina:
- Mujeres: 8 – 18 mg/kg/24 h
- Hombres: 10 – 20 mg/kg/24 h
DEPURACION DE CREATININA
La prueba de la depuración de la creatinina en orina de 24 horas constituye una

cuantificación específica de la función renal, principalmente de la filtración
glomerular. Mide la viscosidad con lo que el riñón depura creatinina en la sangre
• Volumen de orina de 24 horas.
• Muestra de sangre, para medir creatinina en suero.
PROCEDIMIENTO:
1. Medir la orina de 24 horas en ml.
2. Centrifugar un tubo de 13 x 100 de orina.
3. Realizar una dilución 1:20 con H2O destilada. Realizar la medición de
creatinina como si fuera una muestra de suero.
4. Realizar la medición de creatinina en suero.
• Volumen de orina de 24 horas.

• Creatinina sérica
CALCULOS.
Depuración de Vol. De orina en mL Creatinina en orina

creatinina de = -------------------------- X ------------------------
orina de 24 hrs 1440 min (24 horas) Creatinina sérica
Reporte de creatinina urinaria:
Creatinina urinaria (mg/dL) X 10 = Creatinina urinaria (mg/L)
Creatinina urinaria (mg/L) X 24 hrs/1000=Creatinina urinaria (mg/L/24 hrs)
Creatinina urinaria (mg/L) X (1440 min)/ 1000=Creatinina urinaria (mg/L/24 hrs)
Creatinina urinaria (mg/L/24 hrs) / 1000 = Creatinina urinaria (g/24 hrs)
CÁLCULOS:
Datos:
Volumen: 1078 ml de orina en 24 horas.
24 horas= 1440 minutos
Creatinina en orina: 2.2 mg/dL X 20 (Factor de dilución)
= 44 mg/dL
Creatinina en suero= 4.9 mg/dL
Depuración de Vol. De orina en mL Creatinina en orina

creatinina de orina
= -------------------------- X ------------------------
de 24 hrs
1440 min (24 horas) Creatinina sérica
Depuración de 1078 mL 44 mg/dL

creatinina de orina
= -------------------------- X ------------------------
de 24 hrs
1440 min 4.9 mg/dL
Depuración de 44 mg/dL
creatinina de orina
= 0.748 mL/min X ------------------------
de 24 hrs
4.9 mg/dL
Depuración de
creatinina de orina
= 0.748 mL/min X 8.97 mg/dL
de 24 hrs
Depuración de
creatinina de orina = 6.70 mL/min.
de 24 hrs
Reporte de la creatinina urinaria:

Creatinina urinaria (mg/dL) X 10 = Creatinina urinaria (mg/L)
44 mg/dL X 10 = 440 mg/L
Creatinina urinaria (mg/L) X 24 hrs/1000 = Creatinina urinaria (mg/L/24 hrs)
440 mg/L X (1440 min/1000)

440 mg/L X 1.44 = 633.6 mg/L/24 hrs
Creatinina urinaria (mg/L/24 hrs) / 1000 = Creatinina urinaria (g/24 hrs)
(633.6 mg/L/24 hrs) / (1000) = 0.633 g /24 hrs
ÁCIDO ÚRICO
(LICON)
FUNDAMENTO: La uricasa actúa sobre el ácido úrico para formar peróxido de
hidrógeno y alantoína. El H2O2 es leído cuantitativamente por su reacción con
el ácido 3,5-dicloro-2-hdroxibenzosulfunico (DCHB) en presencia de peroxidasa
y 4aminofenazona, para formar un complejo quinoneimina de color rojo violeta.
PROCEDIMIENTO:
1. Pipetear en cubetas los siguientes volúmenes (en mL) y mezcle bien:
REACTIVO ESTÁNDAR MUESTRA

BLANCO (RB) (E) (M)
REACTIVO 1.0 1.0 1.0
ESTÁNDAR ----- 0.02 ----
MUESTRA ----- ---- 0.02
Nota: el volumen puede ser incrementado si el instrumento requiere volúmenes

mayores de 1 mL Usa 2 mL del reactivo y añada 0.05 mL del estándar o de la
muestra.
2. Incube todas las cubetas a 37 °C por 5 minutos y deje enfriar o incube a

temperatura ambiente por 15 minutos.
3. Lea E y M contra RB a 520 nm antes de 15 minutos.
Rango normal:

Orina: 0.5 – 1.0 g/día (dependiendo del contenido de purinas en la dieta).
ÁCIDO ÚRICO
(POINTE)
FUNDAMENTO: La uricasa actúa sobre el ácido úrico para formar peróxido de
hidrógeno y alantoína. El H2O2 es leído cuantitativamente por su reacción con
el ácido 3,5-dicloro-2-hdroxibenzosulfunico (DCHB) en presencia de peroxidasa
y 4aminofenazona, para formar un complejo cromogénico rojo.
Ácido úrico + O2 + H2O Uricaza Alatonina + Co2 + H2O2
POD
H2O2 + 4-AAP + DCHB Cromógeno + 4H2O
PROCEDIMIENTO:
1. Pipetear en cubetas los siguientes volúmenes y mezcle bien:

BLANCO (RB) (E) (M)
REACTIVO 500 µL 500 µL 500 µL
ESTÁNDAR ----- 12.5 µL ----
MUESTRA ----- ---- 12.5 µL
2. Incube todas las cubetas a 37 °C por 10 minutos.
3. Lea E y M contra RB a 520 nm.
Rango normal:
2.5 – 7.7 mg/dL
COLESTEROL TOTAL
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: El colesterol presente en la muestra
origina un compuesto coloreado.la intensidad del color formado es
proporcional a la concentración del colesterol presente en la muestra
ensayada.
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del
organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que
necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas
hormonas. La determinación del colesteroles una de las herramientas
mas importantes para el diagnostico y clasificación de las lipemias.
El aumento del nivel del colesterol es uno de los principales factores
de riesgo cardiovascular.
PROCEDIMIENTO
1. Coloque en cubetas los siguientes volúmenes (µL) y mezcle bien.

BLANCO (RB) (E) (M)
REACTIVO 500 500 500
ESTÁNDAR ----- 5 ----
MUESTRA ----- ---- 5
2. Incube todas las cubetas a 37 °C por 5 minutos o incube a temperatura

ambiente por 10 minutos.
Linealidad: 600 mg/dL (si la concentración es superior al límite de linealidad,

diluir la muestra1/2 con ClNa 9 g/l y multiplicar el resultado final por 2.
Valores de referencia:
Evaluación del riesgo.

Menos de 200 mg/dL...………………..Normal
200-239 mg/dL………………….……..Moderado
240 o mas………………………….…....Alto
COLESTEROL TOTAL
(LICON)
PRINCIPIO DEL METODO: el método enzimático para el colesterol fue
introducido en 1973 por Flegg y Richmond utilizando colesterol oxidasa de origen
bacteriano, seguida de saponificación química de los esteres del colesterol.
Roeschlau modifico esta técnica y Allain y col. Publicaron los primeros ensayos
enzimáticos completos, combinando colesterol oxidasa y colesterol esterasa.
Este método se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinación con
el reactivo peroxidasa/fenol-4-antipirina, de trinder.
La colesterol esterasa (CE) hidroliza los esteres para originar colesterol libre y
ácidos grasos. El colesterol libre así producido mas el colesterol preformado se
oxidan en presencia del colesterol oxidasa (Cox) para dar colest-4- en-3-ona y
peróxido de hidrogeno. Un cromógeno quinoinamina, con absorción máxima de
500nm, se produce cuando el fenol se acopla oxidativamente con
4aminofenazona, en presencia de peroxidasa (POD) con peróxido de hidrogeno.
La intensidad del color final es proporcional a la concentración total del colesterol.
PROCEDIMIENTO

BLANCO (RB) (S) (U)
ESTÁNDAR ----- 5 ----
MUESTRA ----- ---- 5

3. Lea S y U contra RB a 500 nm antes de 60 minutos.
Linealidad: 750 mg/dL (si la concentración es superior al limite de linealidad, se

diluyen tres veces (1+2) con ClNa 8.5 g/l y multiplicar el resultado final por 3.
Colesterol total mg/dL HDL colesterol
Cordón 45-100 Edad Hombre Mujer
0-14 30-65 30-65
Recién nacido 53-135
15-19 3-65 30-70
Infante 70-175 20-29 3-70 30-75
Niños 120-200 30-39 30-70 30-80
Adolescentes 120-210 ›40 30-70 30-85
Adultos 140-310 Media 45 55
Raza negra: aprox. 10 mg/dL mas altos
Ideal para adultos 140-200
COLESTEROL HDL
(SPINRECT)
PRINCIPIO DEL METODO: Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y

baja densidad (LDL) de suero o plasma, se precipitan con fosfotungstato en
presencia de iones magnesio. Tras su centrifugación, el sobrenadante claro
conteniendo las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se emplea para determinar
el colesterol HDL.
SIGNIFICADO CLINICO: El colesterol transportado por las lipoproteínas de alta
densidad (HDL) a menudo se denomina colesterol bueno ya que niveles
elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular. Un nivel bajo
de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo
cardiovascular.
PROCEDIMIENTO:
Precipitación
1.- Dosificar en tubos de centrifuga:
Reactivo HDL (µL) 100 50

Muestra (µL) 1000 500
2.- mezclar y dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente.
3.- centrifugar 20 minutos a 4000 rpm o a 2 minutos a12000 rpm (15 minutos a
3000 rpm).
4.- recoger el sobrenadante y determinar el HDL colesterol.
PROCEDIMIENTO DEL COLESTEROL TOTAL

BLANCO (RB) (E) (M)
ESTÁNDAR ----- 5 ----
MUESTRA
----- ---- 5
(SOBRENADANTE)

❖ Leer en el canal correspondiente al colesterol HDL “HDLCOLFA”.
HDL colesterol Hombres Mujeres

Riesgo menor >55 mg/dL >65 mg/dL
Riesgo normal 35-55 mg/dL 45-65 mg/dL
Riesgo elevado <35 mg/dL <45 mg/dL
Limite de linealidad: 275 mg/dL (si la concentración es superior al limite de

linealidad, diluir la muestra 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por
2.
TRIGLICÉRIDOS
(LICON)
FUNDAMENTO: la determinación de los niveles de triglicéridos, cuando se lleva

a cabo en conjunto con otros ensayos de lípidos, proporciona una ayuda en el
diagnostico de hiperpoliproteinemia primaria y secundaria. También es útil para
dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y varias
anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos.
1. El glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la

acción de la lipasa sobre los triglicéridos.
2. El glicerol se fosforila por el adenosin-5’-trifosfato (ATP) para producir
glicerol 3 fosfato (G-3-P) y adenosin-5’-difosfato (ADP) en una reacción
catalizada por la glicerol-cinasa (GK).
3. La G-3-P es oxidada por la glicerol fosfato oxidasa (GPO) produciendo
dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrógeno.
4. Los peróxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la
influencia catalítica de la peroxidasa (POD) para formar una quinoneinina
de color rojo.
PROCEDIMIENTO:
1. Coloque en cubetas los siguientes volúmenes (mL) y mezcle bien.

BLANCO (RB) (E) (M)
REACTIVO 1.0 1.0 1.0
ESTÁNDAR ----- 0.01 ----
MUESTRA ----- ---- 0.01
Nota: Los volúmenes se puede incrementar si el instrumento requiere volúmenes

mayores de 1 mL

30 – 150 mg/dL
TRIGLICÉRIDOS
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa

(LPL) liberan glicerol y acidos grasos libres. El glicerol es fosforiladopor
glicerolfosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP en presencia de glicerol quinasa
(GK) para producir glicerol 3-fosfato (#P) y adenosin 5-fdifosfato (ADP). El G3P
es entonces convertido a dihidroxiaacetona fosfato (DAP) y peróxido de
hidrogeno (H2O2) por GOP.
Al final el peróxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4-aminofenazona (4-AF)
y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa (POD) y dando una
coloración roja:
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de triglicérido
presentes en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLINICO: los triglicéridos son grasas que suministran energía a
la célula.
Al igual que el colesterol, son transportados a las células del organismo por las
lipoproteínas en sangre.
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los niveles de
triglicéridos.
Su aumento es relativamente inespecífico. Diversas dolencias, como ciertas
disfunciones hepáticas o diabetes mellitus, pueden estar asociadas con su
elevación.
PROCEDIMIENTO:
1. atemperar los reactivos.
2. Coloque en cubetas los siguientes volúmenes (mL) y mezcle bien.

BLANCO (RB) (E) (M)
ESTÁNDAR ----- 5 ----
MUESTRA ----- ---- 5
Nota: Los volúmenes se puede incrementar si el instrumento requiere volúmenes

mayores de 1 mL

Hombres: 40 – 160 mg/dL
Mujeres: 35 -- 135 mg/dL
Limite de linealidad: 1000 mg/dL. Si la concentración es superior al límite de

linealidad, diluir la muestra ½ con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
FORMULAS
(LDL, VLDL, LIPIDOS TOTALES Y FOSFOLIPIDOS)
CALCULO DE LDL-COLESTEROL:
Se calcula mediante la formula de Friedewald.
LDL- COLESTEROL = Colesterol total – (triglicéridos/5 + HDL colesterol)

LDL-colesterol:
Valores sospechosos a partir de: 150 mg/dL
Valores elevados a partir de 190 mg/dL
VLDL= Triglicéridos/5
❖ excepto cuando los triglicéridos > 400 mg/dl.
LIPIDOS TOTALES = Colesterol total + Triglicéridos x 1.5151
FOSFOLIPIDOS = lípidos totales - (colesterol total + triglicéridos)
HEMOGLOBINA GLICOSILADA
(LICON)
FUNDAMENTO: En el método presentado, se mezcla un hemolizado de sangre

total con una resina de intercambio cationico. La hemoglobina no Glicosilada
(HbA0) se une a la resina, dejando la (HbA1) libre para que se pueda remover
mediante un separador de resina en el sobrenadante. El porcentaje de HbA1, se
determina midiendo los valores de absorbancia a 415 nm de la fracción HbA1 y
de la fracción de Hb total, calculando la proporción de absorbancia (R) y
comparando esta proporción con un estándar de glicohemoglobina al que se le
practico el mismo procedimiento.
Los resultados son expresados como HbA1 también se puede convertir o
reportar HbA1c usando un factor de conversión o cuando se use un valor de
HbA1c para el estándar.
PROCEDIMIENTO:
Preparación del hemolizado:
1. Pipetee 0.5 mL (500µL) del reactivo de lisis en tubos previamente

marcados como estándar (S), Muestra (M) y control (C).
2. Pipetee 0.1 mL (100µL) de la muestra de sangre mezclada en los tubos
apropiados y mezcle.
3. Déjelo reposar por 5 minutos a temperatura ambiente (15 – 25 °C) para
completar la hemolisis.
Ensayo y preparación de la glicohemoglobina:
1. Marcar los tubos de resina Pre-Fil como, estándar (S), Muestra (M) y
control (C).
2. Pipetee 0.1 mL (100µL) del preparado hemolizado dentro de los tubos de
resina marcados apropiadamente.
3. Coloque el separador de resina en el tubo de manera que el manguito de
plástico quede aproximadamente 1-2 cm por arriba del nivel de líquido.
4. Mezcle los tubos en un agitador hematológico por 5 minutos.
Alternativamente se pueden mezclar los tubos manualmente si se toman
por la parte superior de la resina.
5. Al final de los 5 minutos de mezcla. Empuje el separador de resina dentro
del tubo hasta que la resina este firmemente colocada en un botón en el
tubo de 13 mm.
6. Vaciar cada sobrenadante dentro de cubetas separadas para leer las
absorbancias.
7. Leer las absorbancias (Agly) del estándar (S), Muestra (M) y controles (C)
contra agua, a 415 nm antes de 60 minutos.
Ensayo para hemoglobina total:
1. Pipetee 5 mL de agua des ionizada a tubos marcados como estándar (S),

Muestra (M) y control (C).
2. Añada 0.02 mL (20 µL) del hemolizado a los tubos apropiados. Mezcle
bien y transfiera a las cubetas para leer la absorbancia.
3. Leer la absorbancia (Atot) del estándar (S), Muestra (M) y control (C) contra
agua a 415 nm dentro de 60 minutos.
RESULTADOS:
Para cada Estándar y Muestra calcule el rango (R) de absorbancia de la

glicohemoglobina y de la absorbancia de la hemoglobina total como sigue:
Agly
R =_______
Atot
R (Muestra)
Glicohemoglobina (%) _______________ x concentración del estándar
R (Estándar) de la glicohemoglobina (%)
Glicohemoglobina A1:
Rango normal: 6.0 – 8.0 %
Diabético:
- Buen control: 7.5 – 8.9 %
- Control medio: 9.0 – 10.0 %
- Control pobre. Arriba de 10 %
Glicohemoglobina A1c:
Rango normal: 4.2 – 6.2 %
Diabético:
- Buen control: 5.5 – 6.8 %
- Control medio: 6.8 – 7.6 %
- Control pobre: Arriba de 7.6 %
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
La Curva de Tolerancia Glucosada nos indicará como están respondiendo

nuestras células a la glucosa así como nuestro riesgo de desarrollar Diabetes
tipo 2. En la mayoría de los casos, esta prueba se hace a mujeres embarazadas,
para asegurarse que no tengan Diabetes Gestacional. Los diferentes
diagnósticos se harán dependiendo de los siguientes resultados.
Tolerancia Normal a la Glucosa: Se considera que una persona tiene una
respuesta normal de su glucosa a la insulina cuando todos los valores de
glicemia (glucosa en sangre) fueron menores a 200 mg/dl durante las 2 primeras
horas y el nivel de glicemia a las 2 horas después de la ingesta de la solución
glucosada fue menor a 140 mg/dl.
Tolerancia Anormal a la Glucosa: Se considera que una persona tiene una
respuesta anormal de su glucosa a la insulina, es decir, que es intolerante a la
glucosa, cuando el nivel de glicemia en ayunas fue mayor de 100 mgs/dl y menor
a 125 mgs.dl pero el nivel de glicemia 2 horas después de la ingesta de la
solución glucosada, estuvo entre 140 mg/dL a 199 mg/dL. En este caso la
persona puede tener Resistencia a la Insulina ó Prediabetes y en cualquiera de
los dos casos, el diagnóstico de Diabetes aún podría ser prevenido.
Diabetes: Se considera que una persona tiene Diabetes cuando su nivel de
glicemia en ayunas es mayor a 126 mgs/dl y el nivel de glicemia 2 horas después
de la ingesta de la solución glucosada es mayor a 200 mgs/dl.
Diabetes Gestacional: Una mujer tiene Diabetes Gestacional cuando los
niveles de glicemia, 1 hora después de la ingesta de solución glucosada es de
180 mg/dl ó más, 155mg/dl ó más 2 horas después y 140 mg/dl ó más 3 horas
después de tomada dicha solución.
1.- La primera toma de muestra es para valorar si al paciente podemos darle la

carga glucosada: si el paciente tiene una glucosa mayor de 120 no se realiza la
curva de tolerancia a la glucosa.
2.- el paciente debe tomar la solución glucosada inmediatamente poner en
marcha el cronometro, se le tomara la muestra a los 30 min, 60 min, 120 min y
180 min.
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPATICO
INDICE
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPATICO:
Bilirrubinas…………………………………………………………………
Transaminasa oxaloacética (TGO)………………………………………
Transaminasa pirúvica (TGP)…………………………………………….
Fosfatasa alcalina………………………………………………………….
Proteínas totales…………………………………………………………...
Albumina……………………………………………………………………
Globulina……………………………………………………………………
Relación albumina/globulina……………………………………………...
Gamma G transferasa (GGT)…………………………………………….
BILIRRUBINAS TOTALES y BILLIRRUBINA DIRECTA

(BYOSISTEMS)
Fundamento del método: la bilirrubina directa presente en la muestra reacciona

con el acido Sulfanílico diazoado, originando un complejo coloreado que puede
determinarse espectrofotométricamente. La cetrimida solubiliza la bilirrubina
indirecta permitiendo sui reacción junto con la fracción directa. Los términos
“directa” y “total” se refieren a las características de reacción en presencia o
ausencia de solubilizantes (aceleradores). La bilirrubina directa e indirecta
equivale solo de forma aproximada a las fracciones conjugada y no conjugada.
PROCEDIMIENTO MODIFICADO:
BILIRRUBINA TOTAL Blanco de muestra Muestra

Reactivo BT -- 100 µl
Reactivo AT 500 µl 400 µl
Muestra 50 µl 50 µl
Leer a los 2 minutos.
BILIRRUBINA Blanco de muestra Muestra

DIRECTA
Reactivo BD -- 100 µl
Reactivo AD 500 µl 400 µl
Muestra 50 µl 50 µl
Leer a los 5 minutos.
NOTA: reportar el aspecto del suero.
ADULTOS:
Total: hasta 1.0 mg/dL
Directa. 0.2 mg/dL
ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST/TGO)

(SPINREACT)
Principio del método: la aspartato aminotrasferasa (AST) inicialmente llamada

transaminasa glutamato oxaloacética (GOT) cataliza la transferencia reversible
de un grupo amino del aspartato al α-cetoglutarato con formación de glutamato
y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia de
malato deshidrogenasa (MDH) y NADH.
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio,
determinada fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de
AST en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO La AST es una enzima intracelular, se encuentra en

niveles altos en el músculo del corazón, las células del hígado, las células del
músculo esquelético y en menores cantidades en otros tejidos. Aunque un nivel
elevado de AST en suero no es específico de enfermedad hepática se emplea
principalmente para su diagnóstico y seguimiento, junto con otras enzimas como
la ALT y ALP. También se emplea en el control post-infarto, en pacientes con
desórdenes del músculo esquelético, y en otras afecciones.
PROCEDIMIENTO
RT (µL) 1000 500

• Mezclar, incubar 1 minuto.

• Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
• Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
CÁLCULOS ΔA/min x 1750 = U/L de AST
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte
1 μmol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se
expresa en unidades por litro (U/L).
VALORES DE REFERENCIA
25ºC 30ºC 37ºC
Hombres Hasta 19 U/L 26 U/L 38 U/L
Mujeres Hasta 16 U/L 22 U/L 31 U/L
Linealidad: 260 U/L. Si la concentración de la muestra es superior al límite de

linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.
ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST/TGO)

(STANBIO)
PRINCIPIO: La aspartato amino transferasa es una de las varias enzimas que

catalizan el intercambio de grupos amino y oxo entre alfa-aminoácidos y ala-
oxoacidos. Esta ampliamente distribuida en los tejidos corporales con una
cantidad significativa en corazón e hígado. En pequeñas cantidades se
encuentran en musculo esquelético, riñones páncreas, bazo pulmones y cerebro.
El daño a los tejidos da por resultados una liberación de enzimas AST a la
circulación general. En el infarto al miocardio la AST sérica puede empezar a
incrementarse dentro de las 6-48 horas después del ataque, con un pico a los
dos días y vuelve a la normalidad para el cuarto o quinto día después del infarto
en enfermedades como hepatitis, necrosis hepática, cirrosis y metástasis en
hígado, se ha encontrado también un aumento en las concentraciones séricas
de AST.
La AST cataliza la transferencia del grupo amino aspartato a 2-oxogluitarato para
producir oxalacetato y glutamato. El oxalacetato formado en la primera reacción
va a reaccionar con el NADH en presencia de malato deshidrogenasa (MDH)
para formar NAD. La actividad de AST se determina midiendo el valor total de
oxidación de NADH a 340 nm. La lactato deshidrogenasa se incluye en el
reactivo para convertir el piruvato endógeno dela muestra a lactato durante la
fase lag anterior a la medición.
PROCEDIMIENTO MANUAL:
1. Prepare el reactivo de trabajo de acuerdo alas instrucciones.
2. Calibre a cero el espectrofotómetro a 340 nm con agua destilada.
3. Para cada muestra y control, agregar 1.0 mL de reactivo de trabajo a la cubeta
o tubo de ensayo y llevar a 37°C por 3 minutos.
4. Adicionar 100 µL (0.10 mL) de suero a cada tubo respectivamente y agitar
levemente.
5. Leer y anotar la absorbancia al minuto 1. Continúe incubando a 37°c y anotar
el cambio de absorbancia a los 2 y 3 minutos. El cambio debe ser constante.
6. Determine el cambio de absorbancia por minuto (DA/min) y multiplicar por el
factor 1746 para obtener los resultados en U/L.
NOTA: si la cubeta no esta a temperatura controlada, incube las muestras a 37°c

entre lectura y lectura.
VALORES ESPERADOS:
Rango normal: 8 - 33 U/L (37°C)
LINEALIDAD: es lineal hasta 600 U/L a 37°C de acuerdo a la guía NCCLS, EP6.
ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT/TGP)

(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL MÉTODO: La alanina aminotrasferasa (ALT) inicialmente

llamada transaminasa glutámico pirúvica (GPT) cataliza la transferencia
reversible de un grupo amino de la alanina al α-cetoglutarato con formación de
glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido a lactato en presencia de
lactato deshidrogenasa (LDH) y NADH:
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio,
determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de
ALT en la muestra ensayada1
Significado clínico: la ALT es una enzima intracelular, se encuentra
principalmente en las células del hígado y el riñón. Su mejor aplicación es en el
diagnostico de las enfermedades del hígado. Se observan niveles elevados en
enfermedades hepáticas como la hepatitis, enfermedades de los músculos y
traumatismos.
Cuando se emplean en conjunción con la AST ayuda en el diagnostico de infartos
al miocardio, ya que el valor de la ALT se mantiene dentro limites normales y
aumenta en los niveles de AST.
PROCEDIMIENTO:
RT (µL) 1000 500

• Mezclar, incubar 1 minuto.

• Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
• Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
CÁLCULOS ΔA/min x 1750 = U/L de ALT

Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte
1 μmol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se
expresa en unidades por litro (U/L).
Linealidad: linealidad 260 U/L. Si la concentración de la muestra es superior al
límite de linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por
10.
25ºC 30ºC 37ºC

Hombres Hasta 22 U/L 29 U/L 40 U/L
Mujeres Hasta 18 U/L 22 U/L 32 U/L
En recién nacidos normales se han descrito valores de referencia hasta el doble
del de los adultos, debido a su inmadurez hepática, estos valores se normalizan
aproximadamente a los tres meses.
ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT/TGP)

(LICON)
FUNDAMENTO: la alanina aminotransferasa (ALT), cataliza la transferencia del

grupo amino de la alanina al 2-oxoglutarato para producir piruvato y glutarato. El
piruvato formado es reducido a lactato en presencia de la LDH, con la oxidación
simultanea de nicotinamida adenina dinucleotido (NADH) reducido. El radio de
decremento en la absorbancia a 340 nm es directamente proporcional a la
actividad de ALT.
PROCEDIMIENTO:
1 Prepare el reactivo de trapajo de ALT de acuerdo a las instrucciones.

2 Lleve a 0 el espectrofotómetro a 340 nm con agua destilada.
3 Por cada muestra y control, agregar 1.0 mL de reactivo de trabajo a la cubeta
o tubo de prueba y llevar a 37°C por 3 minutos.
4 Adicionar 100 µL (0.1 mL) de suero a cada tubo respectivamente y agitar
levemente.
5 Leer y anotar la absorbancia al minuto 1. Continúe incubando a 37°C y anotar
el cambio de absorbancia a los 2 y 3 minutos. El cambio debe ser constante.
6 Determine el cambio de absorbancia por minuto (ΔA/min), y multiplicar por el
factor 1746 para obtener los resultado en U/L.
Nota: si la cubeta no esta a temperatura controlada, encube las muestras a 37°C
entre lectura y lectura.
Sustrato Enzima Sol. De trabajo

500 µL + 100 µL = 600 µL-100 µL
Sol. de trabajo Muestra

500 µL + 50 µL Leer inmediatamente
3 – 35 U/L
LINEALIDAD:
600 U/L
FOSFATASA ALCALINA
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: la fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrólisis del

p-nitrofenilfosfato (pNPP) a pH 10.4 liberando p-nitrofenol y fosfato, según la
siguiente reacción:
p-nitrofenilfosfato + H2O FAL p-nitrofenol + Fosfato
La velocidad de la formación de p-nitrofenol, determinado fotométricamente, es

proporcional a la concentración catalítica de fosfatasa alcalina en la muestra
ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO: las fosfatasas alcalinas son enzimas que se
encuentran presente en casi todos los tejidos del organismo, siendo
particularmente alta en huesos, hígado, placenta, intestinos y riñón. Tanto el
aumento como la disminución de los niveles en plasma, tienen significado
clínico. Causas más probables de aumento del nivel de FAL: enfermedad ósea
de Paget, obstrucciones hepáticas, hepatitis, hepatotoxicidad por medicamentos
y osteomalacia. Causas más probables de disminución del nivel de FAL:
cretinismo y déficit de vitamina C.
PREPARACIÓN DE REACTIVO:
Reactivo de trabajo (RT):
Ref.: 1001130
Disolver (→) una tableta de R2 substrato en un vial de R1 tampón.
Ref.: 1001131
Disolver (→) una tableta de R2 substrato en 15 mL de R1 tampón.
Ref.: 1001132
Disolver (→) el contenido de un vial de R2 substrato en 50 mL de R1.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 21 días a 2-8°C o 5 días a temperatura ambiente.
PROCEDIMIENTO:
Reactivo de trabajo (µL) 1200 600

Muestra (µL) 20 10
Mezclar y leer inmediatamente.
37°C
Niños (1-14 años) <645 U/L
Adultos 98- 279 U/L
CARACTERISTICAS DEL MÉTODO:

Rango de medida: desde el limite de detección 4.26 U/L hasta el limite de
linealidad 825 U/L.
Si la concentración de la muestra es superior al limite de linealidad, diluir ½ con
ClNa 9/ g/L y multiplicar el resultado final por 2.
FOSFATASA ALCALINA
(LICON)
RESUMEN Y PRINCIPIO: los niveles de fosfatasa alcalina sérica son de interés

en el diagnostico de desordenes hepatobiliares y óseos asociados con
incremento en la actividad osteoblastica. Las elevaciones moderadas de
fosfatasa alcalina se pueden observar en varias condiciones que no involucren
al hígado o al hueso. Entre estos están la enfermedad de Hoodking, falla
congestiva cardiaca, colitis ulcerativa, enteritis regional e infecciones bacterianas
intra-abdominales. Las elevaciones también se observan durante el primer
trimestre del embarazo. El procedimiento esta basado en el trabajo de Bowers
y Burnett el cual trata los efectos de los errores de la longitud de onda y el ancho
de la banda del espectro.
4-nitrofenilfosfato + H2O FAL 4-nitrofenol + Fosfato
La fosfatasa alcalina hidroliza el 4-nitrofenilfosfato para formar 4-nitrofenol y

fosfatos. El 4-nitrofenol es amarillo a un pH de 10.4 con una absorbancia máxima
a 405 nm. El rango en el cual se forma el p-nitrofenol es directamente
proporcional a la actividad de la fosfatasa alcalina.
PREPARACION DE REACTIVO: el buffer y el sustrato son reactivos líquidos
listos para usarse. Prepare el reactivo de trabajo a razón de 5 partes de
buffer(R1) y 1 parte del substrato(R2) (ejemplo 50 mL buffer y 10 mL de
substrato).
PROCEDIMIENTO:
Sustrato Enzima Sol. De trabajo

500 µL + 100 µL = 600 µL-100 µL
Sol. de trabajo Muestra

500 µL + 50 µL Leer inmediatamente
Adultos: 34 – 114 U/L a 37°C
LINEALIDAD:
Hasta 800 U/L a 37°C
PROTEINAS TOTALES
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: en medio alcalino, las proteínas dan un intenso color
violeta azulado en presencia de sales de cobre; contiene yoduro antioxidante. La
intensidad de color formado es proporcional a la concentración de proteína total
en la muestra ensayada.
Significado clínico: las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares,
ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales
y de transporte. Se dividen en dos fracciones, albumina y globulinas.
Su determinación es útil en la detección de:
-hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento
en la concentración de proteínas especificas.
-hopoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica,
perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.
PROCEDIMIENTO:
Blanco Patrón Muestra
Reactivo (µL) 1000 1000 1000
Patrón (µL) -- 25 --
Muestra (µL) -- -- 25
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o 10 minutos a temperatura ambiente.
VALORES DE REFERENCIA
Adultos: 6.6 – 8.3 g/dL
Recién nacidos: 5.2 – 9.1 g/dL
CARACTERISTICAS DEL METODO:

Limite de linealidad: 15 g/dL
ALBUMINA
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: la albumina se combina con el verde de bromocresol

a PH ligeramente acido, produciéndose un cambio de color del indicador, de
amarillo verdoso a verde azulado proporcional a la concentración de albumina
presente en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLINICO: la albumina es una de las mas importantes proteínas

plasmáticas producidas en el hígado.
Entre sus múltiples funciones se incluye nutrición, mantenimiento de la presión
oncótica y transporte de sustancia y transporte de sustancias como Ca++,
bilirrubina y ácidos grasos, drogas y esteroides.
Alteraciones en los valores de albumina indican enfermedades del hígado,
desnutrición, lesiones de la piel como dermatitis, quemaduras severas o
deshidratación.
PROCEDIMIENTO:
Blanco Patrón Muestra

Reactivo (µL) 1000 1000 1000
Patrón (µL) -- 5 --
Muestra (µL) -- -- 5
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (15-25°C).
3.5 A 5.0 g/dL
CARACTERISTICAS DEL METODO: rango de medida: desde el limite de

detección de 0.04 g/dL hasta el limite de linealidad de 6 g/dL
FORMULAS:
GLOBULINAS = PROTEINAS TOTALES – ALBUMINA
RELACION ALBUMINA/GLOBULINA = ALBUMINA/GLOBULINA
DROGAS DE ABUSO
MULTI-DRUG TEST HYCEL (ANTI-DOPING)
(Detección de AMP, COC Y THC en orina)
FINALIDAD: prueba inmunológica cualitativa para la detección de las siguientes

drogas y/o metabolitos en orina humana en los niveles limites señalados
Droga Nivel limite (ng/ml)
Anfetaminas (AMP) 1000
Cocaína (COC) 300
Marihuana (THC) 50
SIGNIFICADO CLÍNICO: los ensayos para drogas de abuso con base urinaria
se han convertido en uno de los métodos mas aceptados para estudios
eliminatorios. Estos ensayos permiten que los laboratorios grandes grupos de
muestras negativas y se enfoquen en los grupos minoritarios que resulten
positivos desde el inicio. La prueba rápida multi-drogas permite la detección
simultanea de diferentes drogas y/o metabolitos en un solo ensayo de la muestra.
Las anfetaminas son drogas estimulantes del sistema nervioso central. Pueden
inducir un estado de alerta, vigilia, incremento de energía, reducción del hambre
y sensación de bienestar general. La sobredosis y uso prolongado de
anfetaminas puede llevar al abuso dela sustancia, que puede causar daño
severo y/o permanente al sistema nervioso humano. Las anfetaminas aparecen
en a orina en las tres horas siguientes a su consumo (cualquier tipo), y están
presentes por 24-48 horas después de la ultima dosis.
La cocaína es un estimulante del sistema nervioso que puede será adictivo. La
cocaína puede aparecer en la orina solo durante unas horas después de su uso,
mientras que la benzoilecgonina, un producto de la degradación hidrolítica de la
cocaína, puede ser detectable en orina durante dos días después de consumir
cocaína. Por lo tanto la detección de la benzoilecgonina en orina humana se
usa ampliamente para evaluar el uso de cocaína.
Los tetrahidrocannabinoles (THC, Δ-9-THC, Δ-1-THC) son constituyentes más
activos del principio, así como los metabolitos mayores, de los cannabinoides
como la marihuana y hashish. Los cannabinoides han sido usados como
depresores del sistema nervioso central. La sobredosis y uso prolongado de los
cannabinoides pueden llevar al abuso de las drogas, que pueden causar daños
severos y/o permanentes en el sistema nervioso humano. La detección de THC
en orina es ampliamente usada para evaluar el abuso de cannabinoides.
Metodología y principios químicos: la prueba rápida es un inmunoensayo

cromatográfico de flujo lateral de un paso. La tira de prueba en el panel incluye
1) una almohadilla que contiene el conjugado de color borgoña/oro coloidal y los
anticuerpos monoclonales anti-drogas y 2) una membrana de nitrocelulosa que
contiene una región de prueba (línea T) y una región control (línea C).la línea T
esta cubierta con un antígeno para drogas y la línea Cesta cubierta con un
anticuerpo IgG de cabra anti-ratón.
En esta prueba es un inmunoensayo de enlace competitivo. La droga o su
metabolito en la orina compite con el antígeno cubierto sobre la membrana de
nitrocelulosa por los limitados sitios de unión de los anticuerpos en la almohadilla
del conjugado.
Cuando se coloca un volumen adecuado de la muestra a la almohadilla del
panel, la orina migra por capilaridad a través de la tira de prueba. Si el nivel de
droga en la muestra es menor que el límite de detección, el conjugado borgoña
se enlaza a los antígenos sobre la membrana de nitrocelulosa (línea T). Como
resultado, la línea T se vuelve visible como una línea borgoña, lo que indica un
resultado negativo.
Si la droga esta presente en la orina al limite de detección o mayor, se enlazara
con los anticuerpos en la almohadilla del conjugado y no se formara una banda
en la región T, indicando un resultado positivo.
Se ha agregado una banda control a la tira de la membrana en la región C para
indicar que la prueba se ha trabajado satisfactoriamente. El conjugado coloreado
oro-anticuerpo debe enlazarse a la línea C y formar una banda borgoña
independientemente de la presencia de la droga o de sus metabolitos.
PROCEDIMIENTO:
1.- saque el panel de la y colóquelo en una superficie plana. Rotule con el
nombre del paciente.
2.- Saque la pipeta de la bolsa. Presione el bulbo para llenar la pipeta con la
muestra. Manteniendo la pipeta vertical, agregue de 10 a 12 gotas (aprox. 660
µl) de la orina al pozo de muestra.
nota: si no se observa la migración del fluido en 30 segundos en la ventana de
resultado, añada 2 gotas más de orina.
3.- lea el resultado entre 4 y 7 minutos después de agregar muestra.
IMPORTANTE: no lea los resultados después de 7 minutos
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
POSITIVO: La ausencia de banda borgoña en la línea de prueba (T) indica un
resultado positivo para esa droga en particular.
Las muestras con resultados positivos deberán confirmarse con un método mas
especifico antes de hacer una conclusión positiva.
NEGATIVO: si las líneas C y T aparecen, la prueba indica que el nivel de droga
correspondiente o sus metabolitos es menor al límite de detección.
Nota: una línea muy débil en la región de prueba debe considerarse negativa.
INVÁLIDO: si no se desarrolla la línea C en 5 minutos en cualquiera de las tiras
de prueba, la prueba es inválida y el ensayo deberá repetirse con un panel nuevo
INMUNOLOGIA
INDICE
INMUNOLOGIA
Reacciones febriles………………………………………………………..
Antiestreptolisinas…………………………………………………………
Factor reumatoide…………………………………………………………
Proteína “C” reactiva………………………………………………………
V.D.R.L……………………………………………………………………...
V.I.H…………………………………………………………………………
Eosinófilos en moco nasal………………………………………………..
Ac. Anti-Helicobacter pilory……………………………………………….
DENGUE IgG/IgM LAFON………………………………………………..
Hepatitis A………………………………………………………………….
Hepatitis B………………………………………………………………….
Hepatitis C………………………………………………………………….
PIE de sangre………………………………………………………………
REACCIONES FEBRILES
(LICON)
FUNDAMENTO: la prueba se basa en la reacción inmunológica entre los

anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de
aglutinación macroscópica.
Método de prueba rápida en placa:
Lleve los reactivo a temperatura ambiente antes de realizar la prueba. Marcar en
una placa de vidrio, indicando el antígeno que se este usando.
1.- depositar en sitios diferente de la placa las siguientes cantidades del suero a
probar: 0.08 ml, 0.04ml, 0.02 ml, 0.01ml y 0.005ml.
2.- agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.
3.-añadir 30 µl de la suspensión del antígeno a cada una de las diferentes
cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero
incluido proporciona una gota de 30-40 µl).
4.- mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada uno
de las cantidades de suero.
5.- girar la placa manualmente/utilizando un agitador mecánico (120 rpm)
durante 2 minutos.
6.- realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la
aglutinación macroscópica
7.- se recomienda incluir controles positivo y negativo.
Interpretación de resultado de los resultados en placa:

El grado de aglutinación se registra como sigue:
4+ Aglutinación del 100% de los organismos
- Aglutinación del 0% de los organismos
El titulo del suero será a la inversa de la dilución más alta en donde se observa
una aglutinación del 50% de organismos (2+). Las diluciones del suero en la
prueba en la placa son aproximadamente equivalente a las diluciones para
prueba en tubo como se muestra a continuación:
VOLUMEN DEL SUERO TITULO
0.08 ml 1:20
0.04 ml 1:40
0.02 ml 1:80
0.01 ml 1:160
0.005 ml 1:320
METODO DE TITULACION EN TUBO:

Mezcle bien la suspensión de antígeno mediante agitación suave; prepare una
dilución 1:20 del antígeno a utilizar en solución salina.
1.- colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para cada antígeno a probar,
marcándolos del 1 al 6 y el tubo 7 como control.
2.- añadir al tubo 1; 0.9 ml de solución salina y 0.5 ml a los 6 tubos restantes.
3.- añadir 0.1 ml del suero a probar al tubo numero 1, mezcle bien y transfiera
0.5 ml al tubo numero 2.
4.- continúe esta operación hasta el tubo numero 6, eliminar 0.5 ml de esta
dilución. El tubo 7(CONTROL NEGATIVO) tendrá únicamente solución salina.
5.- añadir 0.5 ml de antígeno diluido 1:20 a cada uno de los 7 tubos.
6.- agitar bien la gradilla para mezclar el antígeno y el suero e incubar en baño
de agua. El tiempo y la temperatura recomendada es la siguiente.
ANTIGENO TEMPERATURA TIERMPO DE INCUBACION

Tífico “O” 48-50°C 18-24 horas
Tífico “H” 37°C 2 horas
S. paratyphi
“A” y “B” 48-50°C 2 horas
Brucella abortus 37°C 48 horas
Proteus ox-19 37°C 18-24 horas
7.- después de la incubación, saque la gradilla que contiene los tubos del baño
y observe la aglutinación. La utilización de una fuente de luz directa contra un
fondo negro dará mejores condiciones para la lectura.
8.- registrar los resultados como sigue:
4+ Todos los organismos 100% aparecen sedimentados en el
fondo del tubo y el sobrenadante es totalmente claro.
3+ Aproximadamente el 75% de los organismos se encuentran
sedimentados y el sobrenadante es ligeramente turbio.
sedimentados y el sobrenadante es moderadamente turbio.
sedimentados y el sobrenadante es turbio.
Negativo No se observa aglutinación y la suspensión es turbia.
9.- registrar el titulo del suero en el cual la ultima dilución de una aglutinación
2+.
Limitaciones del procedimiento:

1.- algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20ª 1:40 y hasta 1:80 pero
esto puede ser debido a vacunaciones o alguna vacunación anterior. No siempre
se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas.
2.- se puede producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a
vacunaciones por ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir
aglutininas contra antígenos Proteus.
3.- en la reacción de Huddleson títulos de 1:80 pueden considerase ya de
significado clínico.
REACCIONES FEBRILES
(SPINREACT)
DETERMINACION CUALITATIVA DE ANTICUERPOS FEBRILES
PRINCIPIO DEL METODO: los antígenos bacterianos son una técnica de

aglutinación en porta y tubo para la detección y semicuantificación de
anticuerpos anti- salmonella, Brucella y Proteus en suero humano.
Significado clínico:
El diagnostico de enfermedades febriles pueden establecerse bien sea por el
aislamiento del microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostración
del titulo de anticuerpos específicos, somáticos (O) y flagelares (H) en el suero
del paciente. La determinación de estos anticuerpos forman las bases para el
ensayo de widal que establece que altos niveles de anticuerpos O y H
superiores a 1/100 en suero, es indicativo de infección por estos
microorganismos
PROCEDIMIENTO
a. Método de aglutinación en porta (cualitativo)
1- Dejar atemperar los reactivos y las muestras a temperaturas ambiente.
La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2- Depositar 50 µl de la muestra a ensayar (NOTA 1 Y 2) y una gota (50 µl)
de cada control en círculos separados de un porta.
3- Homogenizar el reactivo suavemente antes del ensayo. Añadir una gota
(50 µl) de antígeno próxima a la muestra a ensayar.
4- Mezcla con ayuda de un palillo, procurando extender la mezcla por toda
la superficie interior del círculo.
5- Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m. durante un
minuto.
b. Método de aglutinación en porta (titulación)
1- Utilizando una micro pipeta, dispensar 80, 40, 20, 10 y 5 µl de la muestra
no diluida en círculos separados de un porta.
2- Depositar una gota (50 µl) de antígeno en cada círculo próximo a la
muestra a ensayar.
3- Mezclar con ayuda de un palillo, procurando exterder la mezcla por toda
la superficie interior del círculo.
4- Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m. durante un
minuto.
c. Método de aglutinación en tubo (semicuantificación)
1.- preparar una serie de tubos tal como sigue:
Diluciones 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 …
Muestra µl 100 -- -- -- -- -- …
ClNa 9 g/L (ml) 1.9 1 1 1 1 1 …
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml desechar
2.- preparar dos tubos mas para el control positivo y negativo: 0.1 ml control+
0.9ml ClNa 9 g/L.
3.- añadir una gota 50 µl de antígeno a cada tubo.
4.- agitar e incubar los tubos a 37°C durante 24 horas.
LECTURA E INTERPRETACION
Interpretación de resultado por método de aglutinación en porta:
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación
inmediatamente después de retirar el porta del agitador y comparar los
resultados con los obtenidos en los controles.
Los resultados obtenidos en el método de titulación en porta, son
aproximadamente equivalentes a los que se obtendrían en el método de
aglutinación en tubo con diluciones del suero de 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320
respectivamente. Cualquier resultado positivo es aconsejable a confirmar el titulo
mediante en método de aglutinación en tubo.
Interpretación de resultado por método de aglutinación en tubo:
Examinar macroscópicamente el modelo de aglutinación y comparar los
resultados con los resultados obtenidos en el tubo control. El control positivo
debe mostrar aglutinación parcial o completa. El control negativo no debe
mostrar ningún tipo de aglutinación.
Se considera como resultado positivo cualquier grado de aglutinación parcial o
completa, con diversos grados de clarificación del sobrenadante. El titulo de la
muestra se define como la dilución mayor que muestra resultado positivo.
VALOR DE REFERENCIA:
Son indicativos de infección reciente:
Salmonellas:títulos 1/80(anticuerpos somáticos) y 1/160(anticuerpos flagelares)
Brucellas: títulos 1/80
Proteus: títulos de OX-19 1/80, OX2 1/20 y OXK 1/80
ANTI-ESTREPTOLISINA O (ASO)
(SPINREACT)
FUNDAMENTO: El ASO-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la

detección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O (ASO) en suero
humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O (SLO) son
aglutinadas con anticuerpos ASO presentes en la muestra del paciente.
PROCEDIMIENTO:
Método cualitativo:
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La

sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los
controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Homogenizar suavemente el reactivo de ASO-Látex antes de usar. Depositar
una gota (50 µL) junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la
superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante 2 min.
El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.
Método semicuantitativo:
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.

2. Proceder para cada dilución como en la prueba cualitativa.
Cálculos:
La concentración aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene

aplicando la siguiente formula:
200 x titulo de ASO = UI/mL
Hasta 200 UI/ml (adultos) y 100 UI/mL (niños menores de 5 años).

ANTI-ESTREPTOLISINA O (ASO)
(BIOSYSTEMS)
FUNDAMENTO: la antiestreptolisina o (ASO) sérica con 200 UI/mL o valores

mayores provoca una aglutinación de látex recubiertas con est1rptilina O.
PROCEDIMIENTO:

controles positivo y negativo, en círculos separados de la tarjeta visualizadora.
3. Homogenizar el reactivo con suavidad antes del ensayo mantener el vial del
reactivo (A) en posición vertical y añadir a cada círculo una gota del reactivo(A)
próxima a la muestra a analizar.
4. Mezclar con la ayuda de un palillo desechable, procurando extender la mezcla
por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada
muestra.
5. Agitar la tarjeta 100 rpm durante 2 min.
Lectura:
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación dentro
del minuto siguiente a la parada del agitador.
Resultados positivos: la presencia de la aglutinación indica una concentración de
ASO en el suero igual o superior a los 200 UI/mL. Los sueros positivos pueden
titularse, realizar las diluciones
l
Cálculos:
La concentración aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene

200 x titulo de ASO = UI/mL
Hasta 200 UI/ml (adultos) y 100 UI/mL (niños menores de 5 años).
FACTOR REUMATOIDE
(SPINREACT)
FUNDAMENTO: El factor reumatoide (FR)-Látex es una técnica de aglutinación

en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de factores reumatoides
(FR) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con gamma-globulina
humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra del
paciente.
PROCEDIMIENTO:

3. Homogenizar suavemente el reactivo de FR-Látex antes de usar. Depositar

Cálculos:
La concentración aproximada de FR en la muestra del paciente se obtiene

8 x titulo de FR = UI/mL
Hasta 8 UI/ml.
PROTEÍNA C REACTIVA (ASO)
(SPINREACT)
FUNDAMENTO: La PCR-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la

detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partículas
de látex recubiertos con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por
moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.
PROCEDIMIENTO:

3. Homogenizar suavemente el reactivo de PCR-Látex antes de usar. Depositar

Cálculos:
La concentración aproximada de PCR en la muestra del paciente se obtiene

6 x titulo de PCR = mg/L
Hasta 6 mg/L
V.D.R.L. “Prueba Rápida de Reagina”
(LICON)
Prueba Rápida de Reagina (Sífilis): Prueba en placa de floculación con carbón

activado para la determinación cualitativa y cuantitativa de anticuerpos
reagínicos en suero o plasma
RESUMEN Y PRINCIPIO: La prueba de RPR es una prueba de floculación no
treponémica macroscópica que es utilizada para detectar y cuantificar reaginas,
un anticuerpo anti-lipídico encontrado en el suero o plasma de personas con
sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crónicas en otras
condiciones aparte de la sífilis.
El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del antígeno VDRL que
contiene micro partículas de carbón para realzar la diferencia entre un resultado
positivo y negativo.
Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculación con las partículas de
carbón contenidas en la suspensión del antígeno, la cual aparece como un
cúmulo negro. Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO
La suspensión del antígeno debe agitarse por 5 a 10 segundos antes de abrirse,
para re suspender las partículas de carbón. Los controles están listos para su
uso.
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Las muestras pueden ser sueros activados o inactivados o plasmas recolectados
con EDTA como anticoagulante. Evite la hemólisis. La lipemia no interfiere con
la suspensión del antígeno, sin embargo, si la muestra esta severamente
lipémica de manera que se obscurece el estado de las partículas de antígeno, la
muestra no debe ser utilizada.
PROCEDIMIENTO
Procedimiento cualitativo
1. Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno de RPR, los
controles y las muestras.
2. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Al tiempo que oprime y mantiene
presionado dicho extremo, coloque la pipeta dentro de la muestra. Suelte para
permitir que la pipeta aspire un poco de muestra.
3. Sostenga en posición vertical la pipeta/agitador directamente sobre un círculo
de la tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta área.
4. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador, extienda la muestra para
cubrir el total de la superficie del círculo. Deseche la pipeta/agitador. Repita el
mismo procedimiento para cada muestra.
5. Agite el frasco de la suspensión del antígeno antes de utilizarlo. Sosténgalo
en posición vertical y dispense varias gotas en la tapa del frasco para asegurarse
de que el paso por la aguja es correcto. No limpie la aguja. Coloque una gota de
la suspensión del antígeno sobre cada muestra. NO EXTIENDA!
6. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico.
7. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y
suavemente.
8. Lea macroscópicamente bajo una lámpara de luz intensa.
RESULTADOS CUALITATIVOS
Reactivo: Presencia de flóculos grandes o pequeños en el centro o la periferia
del círculo de prueba.
Débil reactivo: Presencia de flóculos pequeños pero definidos.
No reactivo: Apariencia lisa, uniforme pero sin flóculos visibles.
Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las
muestras utilizando procedimientos cuantitativos. Se recomiendan pruebas
serológicas confirmativas como el ensayo de micro hemaglutinación para
anticuerpos treponémicos (MHA-TP). El diagnóstico final debe estar en base a
la correlación de los resultados de prueba junto con otros hallazgos clínicos.
Procedimiento cuantitativo
1. Seleccione los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
2. Colocar en una gradilla cuatro tubos 12 x 75 mm y numerarlos.
3. Agregar a cada uno de ellos 0.5 mL de solución salina.
4. Depositar 0.5 mL de suero problema en el tubo No. 1 y mezclar.
5. Pasar 0.5 mL del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezclar.
6. Continuar esta operación hasta el tubo No. 4.
7. Depositar 0.05 mL de cada una de las diluciones sobre anillos diferentes de la
placa de reacción. Extienda sobre el total de la superficie de cada círculo donde
se colocaron las diluciones.
8. Añadir una gota de la suspensión del antígeno previamente re suspendido,
exactamente sobre cada una de las gotas de las diluciones anteriores utilizando
el frasco gotero al cual se le ha insertado la aguja No. 18 sin bisel.
9. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico.
10. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y
suavemente.
11. Leer el resultado macroscópicamente.
RESULTADOS CUANTITATIVOS
La última dilución que contenga agregados macroscópicos indica el título de la
muestra.
Ejemplo: Tubo No. Dilución del suero Resultado
El título del suero problema será: 1:8.

LIMITACIONES
El diagnóstico de la sífilis no debe ser hecho basado en un resultado positivo
único de una prueba no treponémica, sin el soporte de una historia positiva o
evidencia clínica. Las muestras de suero que son reactivas en pruebas
cualitativas deben ser cuantificadas para establecer un tratamiento en el cual los
cambios de título puedan ser determinados como un indicador de la respuesta al
mismo.
Las muestras de plasma no deben ser utilizadas para pruebas cuantitativas. Las
muestras que son no-reactivas pero dudosas, se deben de repetir y cuantificar
ya que se pueden detectar reacciones poco frecuentes de prozona.
V.D.R.L. “Determinación cualitativa de reaginas plasmática”

(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: RPR-carbón es una técnica no treponemica de

aglutinación en porta parta la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas
plasmáticas en suero humano. Las partículas de carbón sensibilizadas con una
mezcla de lípidos, son aglutinadas en presencia de reaginas presentes en la
muestra del paciente afectado por sífilis.
SIGNIFICADO CLINICO: las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos
contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que sufren
infección por Treponema pallidum, agente causal de la sífilis. Este
microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón, liberando al torrente
circulatorio pequeños fragmentos de estos órganos no reconocidos por el propio
individuo. El sistema inmunológico del paciente reacciona dando lugar a la
formación de reaginas, -anticuerpos frente a estos fragmentos-.el ensayo es útil
para seguir la respuesta a la terapia antibiótica.
PREPARACION
RPR-carbón: homogenizar el reactivo con suavidad ante del uso. Abrir el vial de
RPR-carbón y acoplar la micropipeta al vial dispensador de plástico y aspirar por
succión la cantidad de reactivo necesaria. Una vez terminado el ensayo,
devolver la cantidad sobrenadante a su envase original y lavar la micropipeta y
vial con agua destilada.
PROCEDIMIENTO
1.- atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La
2.- depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los
3.- homogenizar suavemente el reactivo de RPR-carbón antes de usar. Invertir
el vial dispensador y presionar ligeramente para eliminar las burbujas de aire.
4.- situar la micropipeta en posición vertical y perpendicular al porta, y dispensar
una gota (20 µL) de este reactivo junto a cada una de la gotas anteriores.
5.- mezclar las gotas con un palillo procurando extender la muestra por toda la
6.- situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m. durante 8 minutos
(nota 1). El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.
1.- realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L.
2.- proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.
LECTURA E INTERPRETACION.
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación
inmediatamente después de retirar el porta del agitador. Agitar el porta
manualmente un par de veces antes de realizar la lectura.
Interpretación
Tipo de aglutinación Lectura Resultado
Agregados grandes o medianos R Reactivo
Agregados pequeños W Reactivo débil
Ningún agregado o ligera rugosidad N No reactivo
En el titulo semicuantitativo, se define el titulo como la dilución mayor que da el

resultado positivo.
Notas
1.- temperaturas elevadas del medio ambiente pueden provocar la desecación
de la mezcla de reacción sobre el porta, dando lugar a un aspecto de aglutinación
que puede confundirse con un falso positivo. Se recomienda realizar la prueba
en una cámara humeda.
Uni-Golden HIV
(Licon)
La prueba para HIV Uni-Golden de Trinity Biotech es un ensayo individual para

la detección de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1
y 2 en suero, plasma o sangre total. La prueba de Uni-Golden HIV de Trinity es
un inmunoensayo rápido basado en el principio del sándwich
inmunocromatográfico.
Principios del procedimiento: las proteínas recombinantes representando las
regiones de las proteínas de la cubierta del HIV-1 y HIV-2, la glicoproteína gp41,
gp120 (HIV-1) y la glicoproteína gp36 (HIV-2) respetivamente son inmovilizadas
en la región de prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se
unen al oro coloidal y se impregnan por debajo de la región de prueba del
cartucho. Una banda delgada de la membrana de nitrocelulosa también se
sensibiliza como una región control.
Procedimiento de prueba:
1.- si cualquier muestra/reactivo se a almacenado en refrigeración, permita que
se atempere 20 minutos a temperatura ambiente.
2.- tome el número necesario de cartuchos de prueba Uni-Golden HIV de Trinity
Biotech.
3.- marque cada prueba con la información apropiada del paciente.
4.- utilizando una de las pipetas proporcionadas tome la muestra
(suero/plasma/sangre total).
5.- colocando la pipeta sobre el área de muestra adicione dos gota de muestra
(aproximadamente 60 µL) cuidadosamente.
6.- adicione dos gota de muestra (aproximadamente 60 µL) del reactivo de
lavado al área de muestra.
7.- permita que transcurran exactamente 10 minutos para que la reacción ocurra.
El resultado se debe leer exactamente al final de los 10 minutos de tiempo de
incubación. Los resultados son estables aproximadamente durante 5 a 10
minutos.
NOTA: lo más recomendable es realizar la lectura inmediatamente después del
tiempo de incubación.
Interpretación de los resultados de la prueba
NEGATIVO: una línea en el área de control únicamente indica un resultado
negativo.
POSITIVO: una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segunda
línea en el área de control indica un resultado positivo.
INVALIDO: ausencia de una línea en el área control, la prueba se debe repetir
con un cartucho nuevo independientemente de que aparezca una línea en el
área de prueba.
HIV 1 / 2 STAT-PARK ASSAY

(Bio-Rad)
El ensayo HIV 1 /2 STAT-PAK DE Chembio es una prueba inmunocromatográfico de
un solo uso, par la detección de anticuerpos para el virus de inmunodeficiencia humano,
tipo 1(HIV-1) y tipo 2 (HIV-2) en sangre por puncion digital, sangre total venosa,
muestras de suero o plasma. El ensayo HIV 1 /2 STAT-PAK de Chembio tiene un uso
previsto como prueba de punto de cuidado para ayudar al diagnostico de la infección de
HIV-1 y HIV-2. La prueba es adecuada para utilizarse en los algoritmos múltiples
pruebas diseñadas para la validación estadísticas de los resultados de la prueba rápida
de VIH.
RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA:
El virus que produce inmunodeficiencia en el humano, descubierto en 1983, es un
retrovirus y ha sido identificado como el agente etiológico para el síndrome de
inmunodefieciencia Adquirida (SIDA), y el complejo relacionado al SIDA. El SIDA se
caracteriza por cambios en la población de linfocitos de4 las células T, que juegan un
papel clave en el sistema de defensa inmune. En las personas infectadas, el virus
produce una depleción de una sub-población de linfocitos T, las llamadas células T
ayudadoras, lo cual deja a esos pacientes sensibles a las infecciones producidas por
microorganismos oportunistas y ciertas enfermedades malignas. Las principales vías de
transmisión son el contacto sexual, la exposición a sangre contaminada o a productos
sanguíneos (incluyendo el compartir jeringas y agujas contaminadas) y transmisión de
madre a recién nacido.
El virus de VIH consiste de una molécula RNA genómica protegida por una cápside y
una cubierta. La cubierta VIH es el principal objetivo de la respuesta del anticuerpo
humoral. La presencia del virus en los pacientes ocasiona que el sistema inmune inicie
la producción de anticuerpos. La detección de esos anticuerpos se puede utilizar como
herramienta de diagnostico.
Los Inmunoensayos de Enzimas (EIAs), Western Blot (WB), Prueba de Amplificacion
Nucleica (NAT) y varios otros sistemas de prueba están actualmente disponibles para
la detección de la infección por HIV-1 y HIV-2. El ensayo HIV 1 /2 STAT-PAK DE
Chembio utiliza antígenos inmovilizados para la detección de anticuerpos para el HIV-
1 y HIV-2y es una prueba para el diagnostico de la infección por HIV-1 y HIV-2.
PRINCIPIOS BIOLOGICOS DE LA PRUEBA: El ensayo HIV 1 /2 STAT-PAK DE

Chembio utiliza la combinación única de una proteína de unión ESPECIFICA a
anticuerpo conjugada con partículas de colorante dorado coloidal y antígenos VIH-1/2,
las cuales están unidas a una membrana de fase solida. La sangre total venosa o capilar
(punción digital), suero o plasma se aplica a la celdilla de la muestra del dispositivo de
prueba seguida por la adicción de una solución amortiguadora de corrida. La solución
amortiguadora facilita el flujo lateral de la muestra y los reactivos de prueba y promueve
la unión de los anticuerpos al antígeno. La mezcla muestra/solución buffer migra a lo
largo de la tira de prueba por medio de acción capilar, reconstituyendo el conjugado. Si
se encuentran presentes, los anticuerpos se unen al anticuerpo conjugado de oro
coloidal unido a la proteína. En una muestra reactiva, el complejo colorante conjugado-
complejo inmune migra en la membrana de nitrocelulosa y es capturada por los
antígenos inmovilizados en el área de PRUEBA (T) produciendo una línea rosa/purpura.
En ausencia de de los anticuerpos HIV-1 y HIV-2 no existe una línea rosa/purpura en
el área de prueba (T). la muestra continua migrando a lo largo de la membrana y produce
una línea de color rosa /purpura en el área de control (c), conteniendo los antígenos G
de la inmunoglobulina. Este control del procedimiento sirve para demostrar que la
muestra y los reactivos han sido aplicados apropiadamente y han migrado a través del
dispositivo.
PROCEDIMIENTO DE LAS PRUEBA: preparación de componente del equipo.

Todos los componentes de la prueba del ensayo HIV 1 /2 STAT-PAK DE Chembio están
listos para utilizarse como se proporcionan. Seguir las instrucciones como se indica. Si
la muestra a ser evaluada esta refrigerada, retirarla del refrigerador y permitir que
adquiera una temperatu8ra ambiente de+18°C a 30°C antes de realizar la prueba.
1.- retirar el dispositivo de la prueba HIV 1 /2 STAT-PAK DE Chembio de su bolsa y
colocarlo en una superficie plana (no s necesario retirar el desecante dela bolsa). Nota:
si falta el paquete del desecante, NO LO UTILICE, desechar el dispositivo de prueba y
deberá utilizar un nuevo dispositivo de prueba.
2.- etiquetar el dispositivo de prueba con el nombre del paciente o el número de
identificación.
3.- tocar el asa de la muestra de 5 µL proporcionada para la muestra, permitiendo la
apertura del asa para llenar con el líquido.
4.- deteniendo el asa verticalmente, tocarla con el cojín de la muestra en el centro de la
celdilla de la MUESTRA (S) del dispositivo para distribuir 5 µL de la muestra (suero,
plasma o sangre total) en el cojín de la muestra.
5.- invertir el frasco con solución amortiguadora de corrida y detenerlo verticalmente (no
en ángulo) sobre la celdilla de la muestra. Adicionar 3 gotas (105 µL) de solución buffer
lentamente, gota a gota, en el orificio de la muestra.
6.- leer el resultado de la prueba entre los 15 y 20 minutos, después de la adicción de
la solución buffer de corrida.se pueden observar los resultados de la prueba reactiva y
leerse antes de los 15 minutos.
Para verificar los resultados de la prueba no reactiva, esperar los 15 minutos completos
después de iniciar la prueba. No leer resultados después de 20 minutos.
Nota: desechar el asa de la muestra utilizada, el dispositivo de prueba y cualquier otro
material de prueba en un contenedor para desechos biológicos peligrosos.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE PRUEBA
NO REACTIVO: una línea de color rosa /morado en el área de control (C), sin una línea
en el área de prueba (T) indica un resultado de prueba NO REACTIVO. UN
RESULTADO DE PRUEBA no reactivo significa que los anticuerpos HIV-1 y HIV-2 no
fueron detectados en la muestra. El resultado de la prueba es interpretado como
NEGATIVO para los anticuerpos HIV-1 y HIV-2. Sin embargo esto no excluye una
posible infección por HIV. Seguir los lineamientos de CDC para informar al sujeto de
prueba de los resultados de prueba y su interpretación.
REACTIVO: dos líneas de color rosa/morado, uno en el área de prueba (T) y uno en el
área de control, indican un resultado de prueba reactivo. La línea en el área de prueba
(T) puede verse diferente de la línea del área de control (C). Las intensidades de las
líneas de prueba y control pueden variar. El resultado de prueba con líneas visibles en
ambas áreas de prueba y control, independiente de la intensidad, se considera reactiva.
Un resultado de prueba reactiva significa que los anticuerpos HIV-1 y HIV-2 han sido
detectados en la muestra. El resultado de la prueba es interpretado como POSITIVO
preliminarmente para los anticuerpos HIV-1 y HIV-2.
INVALIDO: en el área de control(C), siempre debe aparecer una línea de color
rosa/morado, ya sea que aparezca o no una línea en el área de prueba (T). Si no existe
una línea de color rosa/morado en el área de control entonces la prueba es inválida.
Cualquier línea que aparezca fuera del área de control (C) o el área de prueba es una
prueba inválida. Se recomienda que la prueba inválida se repita en un nuevo dispositivo.
HELICOBACTER PYLORI (Bio-Pylori)

(Grupo MexLab)
USO. La prueba Bio-Pylori en presentación tira diseñada para la detección rápida

de flujo lateral, cromatográfica de inmunoensayo, cualitativa de anticuerpos IgG
en suero humano. Esta prueba esta diseñada como un auxiliar en el diagnostico
de la infección causada por H. pylori.
Nota. No utilice plasma o muestras conteniendo anticoagulantes que puedan
interferir en la sensibilidad y especificidad de la prueba.
RESUMEN Y EXPLICACION. La helicobacteria pylori esta asociada con una
variedad de enfermedades gastrointestinales tales como la ulcera estomacal,
gastritis activa crónica y adenocarcinomas gástricos y duodenales (1,2,3,4,5,).
La organización mundial de la salud (Who) ha declarado recientemente a la H.
pylori como carcinógeno clase I, declarado como factor altamente riesgos en el
desarrollo de cáncer de estomago. Se a reportado en un 50% de la población
mundial esta infectada de H. Pylori desarrollan anticuerpos específicos y la
detección de ellos es el principio utilizado en el diagnostico de la infección.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA: esta prueba es de inmunoensayo cromatográfico
de fluido lateral con doble antígeno. La prueba de H. pylori contiene una
membrana microporosa cubierta con antígenos de H. pylori y oro coloidal
conjugado unido molecularmente con antígenos de H. pylori. Existen dos
regiones en la prueba, una región de prueba (Test) y una de control (C). Una
línea de color rosado-rojizo aparecerá en el área de Test cuando los anticuerpos
especifico IgG de H. pylori estén presentes en la muestra. Si los anticuerpos no
están presentes o están presentes en niveles muy bajos, No será visible la línea
del Test. Sin embargo una línea de color rosado-rojizo aparecerá siempre como
resultado de un control de calidad interno en el desarrollo de la prueba.
PROCEDIMIENTO:
1.- Las muestras refrigeradas y las pruebas deberán estar a temperatura
ambiente antes de ser utilizadas.
2.- abra el sobre metalizado hasta el momento de realizar la prueba. Identifique
la prueba con el nombre del paciente.
Agregue 50 µL (una gota) de muestra de suero en la zona de muestra.
3.- resultados altamente positivos aparecerán dentro de los primeros 5-10
minutos. Resultados débilmente positivos tardara de 5-10 minutos. No
intérprete los resultados después de transcurridos 10 minutos.
INTERPRETACION DE RESULTADOS.
1.-POSITIVO: las líneas de control C y de Test T están presentes en la ventana
de resultados indicando la presencia de H. pylori en la muestra evaluada. En
caso de aparecer en el área de Test Tuna línea demasiado tenue, es indicativo
que el resultado positivo se encuentra en niveles muy bajos por lo que se
recomienda reevaluar la muestra bajo otro método confirmatorio.
2.-NEGATIVO: la línea de control c estará presente en la ventana de resultados,
indicando la no presencia de H. pylori como indicativo de un resultado negativo.
3.- INVALIDO: cuando no aparezca ningún tipo de líneas en el área de
resultados C ni T después de transcurridos los 10 minutos. Se recomienda utilizar
otra prueba. Otra opción para el resultado inválido será la aparición de la línea
de test T sin que aparezca la línea de control C.
DENGUE IgG/IgM LAFON
Prueba rápida en cassette
Prueba rápida inmunocromatográfica de un solo paso para la

determinación cualitativa de anticuerpos del virus de dengue
(Dengue IgG/IgM) en suero y plasma humano.
EXPLICACION DE LA PRUEBA:
El virus del dengue es trasmitido por el mosquito Aedes aegypti y
aedes albopictus mosquitoes, que están ampliamente distribuidos en
las áreas tropicales y subtropicales del mundo. Hay cuatro distintos
serotipos conocidos (virus del Dengue 1, 2, 3 y 4). En niños lqa
infección es frecuentemente sub-clínica o causa una enfermedad
febril. Sin embargo si el paciente es infectado una segunda vez con
un serotipo diferente una más severa enfermedad, síndrome de
shock del Dengue o fiebre hemorrágica de dengue, puede ocurrir.
El Dengue es considerado la más importante enfermedad viral
artrópodo-huésped debido a la morbilidad y mortalidad causada.
PRINCIPIO
La prueba esta diseñada para que simultáneamente detecte y
diferencie anticuerpos IgG e IgM para el virus de Dengue en suero o
plasma humano. Esta prueba también puede detectar todos los 4
serotipos de Dengue usando una mezcla de proteínas
recombinantes de Dengue. El dispositivo de prueba Dengue IgG/IgM
LAFON tiene tres líneas preunidas, “G” (línea de prueba IgG), “M”
(línea de prueba IgM), y “C” (línea de control) sobre la superficie de
la membrana. Todas las tres líneas en la ventana de resultados no
son visibles antes de aplicar la muestra. La línea control es usada
para procedimiento control. La línea control deberá siempre aparecer
si el procedimiento es realizado apropiadamente y los reactivos de
las pruebas rápidas y confiables para las infecciones primarias y
secundarias de Dengue son esenciales para el manejo del paciente.
La infección primaria del Dengue eta asociada con una alta fiebre,
dolor de cabeza, dolor muscular. La respuesta inmune incluye la
producción de anticuerpos IgM por el 3 ó 4 día de los síntomas y
persiste por 30-60 días. La IgG aparece el 14 día y persiste de por
vida. La infección secundaria frecuentemente resulta en altas fiebres
y en muchos casos con hemorragias y fallos circulatorios. Infecciones
secundarias muestran que el aumento de la IgG dentro de 1-2 días
después de los síntomas e induce una respuesta IgM después de 20
días de la infección.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA.
1- Usando una micropipeta añada 5 µL de suero o plasma dentro
del pozo de muestra marcado “S”
O usando la pipeta capilar añada 5 µL de suero o plasma dentro
del pozo de muestra marcado “S”.
2- Coloque 3 ó 4 gotas del diluyente de muestra dentro del pozo
de diluyente.
3- Interpretar los resultados en 15-20 minutos.
INTERPRETACION
NEGATIVO: (No infección por Dengue)
Una línea rosa “C” en la ventana de resultados.
POSITIVO:
1. IgM Positivo (infección primaria de Dengue)
Dos líneas rosas “C” y “M” en la ventana de resultados.
Esto es un resultado positivo, incluso si la línea “M” es débil.
2. IgG Positivo (infección pasada o secundaria del Dengue)
Dos líneas rosas en “C” y “G” en la ventana de resultados
Esto es un resultado positivo, incluso si la línea “G” es débil.
3. IgG e IgM Positivo (infección primaria tardía o secundaria
temprana de Dengue)
Tres líneas rosas “C”, “M” y “G” en ventana de resultados.
INVALIDO: NO APARECE LA LINEA “C” EN LA VENTANA DE
RESULTADOS. SE RECOMIENDA REEVALUAR LA PRUEBA.
Dengue Ag
El test OnSite Dengue Ag Rapid Test es un inmunoensayo
comatografico de flujo. Para la detección cualitativa del antígeno del
virus Dengue en suero o plasma humano. Destinado a utilizarse
como prueba de Screening como ayudaen el diagnostico de la
infección del virus Dengue.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA:
HEPATITIS A
OnSite HAV IgM Rapid Test-Cassette (Serum / Plasma)
El OnSite HAV IgM es una Prueba rápida de inmunoensayo

cromatográfico de flujo lateral para la detección cualitativa de
anticuerpos IgM a virus de hepatitis A (HAV) en suero o plasma
humano.
RESUMEN Y EXPLICACION DEL TEST
Cualquier muestra con el reactivo de prueba rápida OnSite VHA IgM
debe ser confirmada con un método alternativo comprobando los
resultados clínicos.
HAV es un virus de RNA positivo, miembro único de la familia
picornavirdae. Su transmisión depende principalmente en la
transmisión serial de persona a persona por vía fecal-oral. Aunque
la hepatitis A no es generalmente una enfermedad de transmisión
sexual, la tasa de infección es alta entre los homosexuales
masculinos, como resultado de contacto oral-anal.
La presencia de anticuerpos específicos anti-VHA IgM en muestras
de sangre sugiere VHA aguda o infección reciente. El anticuerpo
IgM aumenta rápidamente en el título durante un periodo de 4-6
semanas posterior a la
infección, luego disminuye a niveles no detectables dentro de 3 a 6
meses en la mayoría de los pacientes.
PRINCIPIO DEL TEST
El OnSite VHA IgM es una prueba rápida de inmunoensayo
cromatográfico de flujo lateral. la prueba de cassette consta de: 1)
una almohadilla de conjugado de color borgoña que contiene
anticuerpo conjugado de ratón anti-IgM humana con oro coloidal
(conjugados IgM) y, 2) una tira de membrana de nitrocelulosa
que contiene una banda de prueba (T banda) y una banda de
control (banda C). La banda T es pre-revestido con recombinante
antígeno del VHA, y la banda C es pre-recubiertas con anticuerpos
de cabra anti-IgM de ratón.
Cuando un volumen adecuado de muestra de prueba se dispensa
en el pocillo de muestra del casete, La muestra migra por acción
capilar a través de la cassette. Anti-HAV IgM si está presente en la
espécimen se unen a los conjugados de IgM. El inmunocomplejo se
captura entonces en la por el antígeno de membrana pre-revestida
VHA, formando una banda borgoña T de color, indicando un VHA
IgM resultado positivo. La ausencia de la banda T sugiere un
resultado negativo.
La prueba contiene un control interno (banda C) que debe exhibir
una banda de color borgoña de el inmunocomplejo de cabra anti-
ratón de anticuerpos IgM / conjugado IgM-oro, independientemente
de la desarrollo del color en la banda T. De lo contrario, el resultado
de la prueba no es válido y es necesario que la muestra sea
analizada de nuevo con otro dispositivo.
PROCEDIMIENTO:
Paso 1: Lleve los componentes de ensayos y muestras a
temperatura ambiente si están refrigerados o congelados. Mezcle
bien la muestra antes del ensayo una vez descongelado.
Paso 2: Cuando esté listo para hacer el ensayo, abra la bolsa por la
muesca y retire el dispositivo. Coloque la prueba ó dispositivo en
una superficie limpia y plana.
Paso 3: Asegúrese de etiquetar el dispositivo con el número de
identificación del espécimen.
Paso 4: Llene la pipeta cuentagotas con la muestra.
Sosteniendo el gotero verticalmente, dispensar 1 gota
(aproximadamente 30-45 µL) de muestra en la muestra así
asegurarse de que no hay burbujas de aire.
A continuación, añadir 1 gota (aproximadamente 35-50 l) de
diluyente de la muestra inmediatamente.
Paso 5: Activar cronometro.
Paso 6: Los resultados se pueden leer en 15 minutos. Los
resultados positivos pueden ser visibles en un tiempo corto como de
1 minuto.
No lea el resultado después de 15 minutos. Para evitar confusiones,
desechar el dispositivo de prueba después de interpretar el
resultado.
PRUEBA DE EMBARAZO “tiras de hCG”
(SPINREACT)
Significado clínico: la gonadotropina coriónica humana (hCG) es una hormona

producida por la placenta de las mujeres embarazadas. Es detectable, tanto en
la orina como en el suero, de 7 a 10 días después de la concepción, por lo que
lo hace un indicador ideal del embarazo.
Principio del método: STICK hCG es un inmunoensayo por cromatografía de
flujo lateral. El método emplea una combinación única de conjugado de
anticuerpo monoclonal colorante y anticuerpos policlonales en fase solida para
identificar selectivamente hCG presente en las muestras, con un elevado grado
de sensibilidad. En menos de cinco minutos, pueden detectarse niveles de hCG
tan bajos como 10 mlU/ml. Cuando se aplica una cantidad suficiente de muestra
en la porción absorbente, esta migra por capilaridad a través de la tira. El
conjugado anticuerpo-colorante se una a la hCG formando un complejo
anticuerpo-antígeno. Este complejo se une al anticuerpo ant-hCG de la zona de
reacción positiva produciendo una banda coloreada rosa cuando la
concentración de hCG es mayor de 10 mlU/ml. En ausencia de hCG, no se
observa banda alguna en la zona de reacción positiva. La mezcla de reacción la
migración a través de la tira hasta la zona de control. El conjugado libre aun, se
une a los reactivos de la zona de control formando una banda coloreada rosa,
demostrando el correcto funcionamiento del test.
Procedimiento:
1.- atemperar la muestra y los otros materiales necesarios para el test, antes de
realizar el ensayo.
2.- identificar cada tira con los datos de la muestra.
3.- dispensar 0.5 ml en un pequeño tubo o vial.
4.- introduzca verticalmente la tira de hCG en la muestra durante 10-15
segundos. No sobrepasar la marca MAX. Si el nivel del tubo es menor de 1.5 cm
se puede dejar la tira dentro del tubo hasta finalizar el tiempo de reacción. En
caso contrario, coloque la tira en otro tubo en una superficie plana, limpia y
seca.5.- leer en ambos casos el resultado a los tres minutos para las muestras
de orina o 5 minutos para las muestras de suero. NO INTERPRETAR
RESULTADOS TRANSCURRIDOS 10 MINUTOS.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
NEGATIVO
POSITIVO
Negativo: si solo aparece una banda coloreada transversal en la zona blanca

superior (banda control).
Positivo: además de la banda transversal roja (control) aparece una segunda
banda transversal roja (test) en la zona blanca central dela tira.
Cualquier resultado positivo debe ser confirmado por un método mas especifico
antes de dar una determinación positiva.
No valido: si no aparece bien visible la línea control. Puede deberse a una
cantidad insuficiente de muestra o bien a que se aplique incorrectamente la
técnica. Se recomienda repetir el test con una nueva placa u obtener una nueva
muestra y testarla 48 horas después.
HEPATITIS B (HBsAg Test)
(CORTEZ DIAGNOSTICS, INC)
INTRODUCCIÓN
La Prueba Insta Test de HbsAg es un ensayo inmunocromatográfico diseñado
para la determinación cualitativa de hepatitis B (HbsAg) en suero o plasma
humano.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA: El antígeno de Australia (HbsAg)
es un complejo específico asociado con la infección de Hepatitis B. Al realizar
esta prueba a donadores de sangre nos proporciona un medio eficaz para
identificar la presencia del antígeno lo que reduce la incidencia de infecciones a
través de transfusiones de sangre.
PRINCIPIOS DE LA PRUEBA: El dispositivo inmunocromatográfico contiene un
único set de conjugado y anticuerpos policlonales y monoclonales que son
usados para producir un tramo visual distintivo que nos indica la presencia de
HbsAg en el dispositivo de la prueba en aproximadamente 10 minutos.
TOMA DE LA MUESTRA: El suero o plasma se obtiene a partir de sangre dentro

de un contenedor sin anticoagulante. Permitir que la sangre se coagule y separar
el suero del coagulo. Usar el suero para la prueba. Si la muestra no puede ser
utilizada en el día que se tomo, almacenarla en refrigerador o congelador, las
muestras pueden ser almacenadas de 2 a 8°C por un periodo de 2 a 5 días.
Acondicionar la muestra a temperatura ambiente antes de realizar la prueba. No
congelar y descongelar la muestra en repetidas ocasiones.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
1. Permita que las tarjetas y muestras lleguen a temperatura ambiente (20 a
30°C). Cuando este listo para empezar la prueba, abra el sello de plástico en el
cual se encuentra el dispositivo de prueba
2. Depositar 5 gotas aproximadamente (0.2 ml) de muestra con la pipeta y
dispensar esta dentro del pozo de la muestra del cassette.
3. Dependiendo de la concentración de HBsAg un resultado positivo puede
aparecer en menos de 60 segundos. Esperar 20 minutos y leer los resultados,
para confirmar un resultado negativo, el tiempo de reacción completa es de 30
minutos.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Negativo: Solo aparece una banda de color rosa en la región de control.
Positivo: Una banda de color rosa aparece en la región de control ( C ) ,

además de otra banda de color rosa en la región (T).
Invalido: La ausencia total de color en ambas regiones es indicativo de que

hubo algún error durante el procedimiento y/o que el reactivo se ha deteriorado.
PRUEBAS DE COAGULACION
INDICE
PRUEBAS DE COAGULACION:
Tiempo de sangrado………………………………………………………
Tiempo de coagulación……………………………………………………
Tiempo de protrombina……………………………………………………
Tiempo de tromboplastina parcial………………………..……………..
Tiempo de trombina……………………………………………………….
TIEMPO DE SANGRADO
FUNDAMENTO: Prueba sencilla que refleja la función plaquetaria de agragación

y de vasoconstrucción. La función plaquetaria que se mide es independiente del
mecanismo de coagulación de la sangre. El tiempo medido refleja el intervalo
que se requiere para que cese la hemorragia en una herida superficial pequeña
(que se estandariza en una herida de 1 mm de profundidad en la piel).
PROCEDIMIENTO:
1. Dar un pequeño masaje en el lóbulo de la oreja o en el pulpejo del dedo.
2. Limpie con una torunda con alcohol el lóbulo de la oreja o la cara lateral
de la yema del dedo anular y espere que evapore el exceso de alcohol.
3. Puncione con una lanceta desechable y ponga en marcha el cronómetro.
4. Seque la sangre con papel filtro (sin tocar la piel) cada 15 segundos hasta
que cese la hemorragia, en ese momento pare el cronómetro.
1 a 3 minutos.
TIEMPO DE COAGULACIÓN
FUNDAMENTO: el diagnóstico y estudio de un defecto de coagulación
cualquiera, representa interacciones complejas entre sistemas enzimáticos y
varias proteínas enzimáticas hábiles, se encuentran tiempos de coagulación
prolongados en la hemofilia clásica y en deficiencia de factor IX de la
coagulación, la prueba carece de valor para deficiencias ligeras de distintos
factores, porque basta una pequeña cantidad de trombina para producir coágulo
de fibrina.
PROCEDIMIENTO:
1. Obtener sangre por punción venosa en dos tubos de ensaye (1 mL por

cada tubo), poner en marcha el cronómetro.
2. Colocar los tubos de ensaye en baño María a 37 °C.
3. Al cabo de 3 min se inclina el tubo cada 15 seg con la finalidad de observar

si fluye sangre.
4. Registrar como el tiempo de coagulación, el intervalo del tiempo

transcurrido desde que la sangre entra en contacto con el cristal hasta
que al intervenir el segundo tubo la sangre ya no fluya, sacando el
promedio de los tubos, se detiene el tiempo de coagulación.
5 – 10 min.
TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

FUNDAMENTO: La prueba de protrombina indica la rapidez de la formación del
coágulo sanguíneo y es una buena prueba de la vía extrínseca de producción de
trombina. No mide la cantidad de protrombina que se genera sino la actividad. El
tiempo de protrombina extrínseco es tan corto que cualquier contribución a la
coagulación a partir de la vía intrínseca suele ser de poca importancia.
Generalmente es utilizada como exploración prequirúrgica para detectar posibles
problemas hemorrágicos.
PROCEDIMIENTO:
1. Obtener muestra anticoagulada con citrato de sodio al 3.2%.

2. En un tubo de 13 X 100 mm depositar 0.2 mL (200µL) de reactivo de TP
e incubar a baño María por 3 min. A 37 °C.
3. Se incuba también el tubo que contiene el plasma a 37 °C por 3 min.
4. Agregar al tubo de reactivo 0.1 mL (100µL) de plasma e iniciar el
cronometraje agitando suavemente el tubo de baño María.
5. A los 10 segundos exactos sacar el tubo del baño María y observar la
formación de fibrina, deteniendo el cronómetro al inicio de dicha
formación.
6. El resultado se reporta en segundos con porcentaje de actividad de
acuerdo a la curva de calibración.
El TP obtenido puede convertirse en índice de tiempo de protrombina o índice

normalizado internacional (INR).
10 – 13 segundos.
Índice Normalizado Internacional
INR = Valor obtenido (TP) x 1.82

13
TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

(I.D.)
FUNDAMENTO: La prueba de TP indica la rapidez de la formación el coagulo

sanguíneo y es una buena prueba de la vía intrínseca de producción de trombina.
No mide la cantidad de protrombina que se genera sino la actividad. El TP
extrínseco es tan corto que cualquier contribución a la coagulación a partir de la
vía extrínseca suele ser de poca importancia. Generalmente es utilizado como
exploración pre quirúrgica para detectar posibles problemas hemorrágicos.
PROCEDIMIENTO.
1 mezclar 9 partes de sangre venosa con 1 parte de citrato de sodio al 3.8% o

con oxalato de sodio 0.1 M.
2 Centrifugar durante 5 minutos a 3000 rpm y separar el plasma en otro tubo y
mantenerlo refrigerado hasta ser analizado.
3 Colocar en un tubo la cantidad de cloruro de calcio 0.02M. suficiente para el
numero de pruebas que se van a correr y colocar en baño de agua a temperatura
de 37°C.
5 colocar 0.1 mL de tromboplastina líquida activada en el fondo de un tubo de
ensayo de 13 x 100 mm y dejar en el baño de agua unos segundos hasta
alcanzar la temperatura de 37°C.
6 Adicione al mismo tubo 0.1 mL de plasma y deje que la muestra alcance la
temperatura de 37 °C.
7 A la mezcla anterior soplar fuertemente 0.1 mL de la solución de cloruro de
calcio 0.02M previamente calentado, al mismo tiempo poner en marcha el
cronometro.
8 El tubo se agita para homogeneizar la muestra y se mantiene en el baño de
agua hasta 2 o 3 segundos antes de la formación del coagulo. Se recomienda
correr todas las pruebas por triplicado. Así el tiempo de la primera será
aproximado, los de la segunda y tercera prueba deberán confirmar el primero.
9 Fuera del baño inclinar el tubo suavemente y cerca de una fuente de luz
observar la aparición de los primeros filamentos de fibrina. Esto indica el punto
final de la prueba, detener el cronometro en este momento.
Plasma citratado: 11.5 – 13.5 segundos

Plasma oxalatado: 1 2.5 – 14.5 segundos
TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL (TTP)
FUNDAMENTO: La prueba de TTP es utilizada como una prueba general para

detectar deficiencias de los factores de coagulación en los sistemas intrínseco y
común de la generación de trombina. El nombre de tromboplastina “parcial”
proviene del uso de una tromboplastina que carece de la capacidad para
compensar totalmente el defecto plasmático de la hemofilia, por lo que es una
tromboplastina parcial.
PROCEDIMIENTO:
1. Obtener muestra anticoagulada con citrato de sodio al 3.2%.

2. En un tubo de 13 X 100 mm depositar 0.1 mL (100µL) de reactivo de TTP
y 0.1 mL (100 µL) de suero e incubar a baño María por 5 min. A 37°C.
3. Una vez terminada la incubación agregue 0.1 mL (100 µL) de cloruro de
Calcio previamente incubado a 37 °C.
4. Al momento de agregar el cloruro de Calcio iniciar el cronometraje
agitando suavemente el tubo de baño María.
5. A los 20 segundos exactos observar el tubo para apreciar la formación de
fibrina, deteniendo el cronómetro al inicio de dicha formación.
6. El resultado se reporta en segundos.
VALORES NORMALES:
35-45 segundos
(I.D.)
FUNDAMENTO: La prueba de TTP utilizada como prueba general para detectar

deficiencias de los factores de coagulación en los sistemas intrínseco y común
de la generación de trombina. El nombre de tromboplastina “parcial” proviene del
uso de uno tromboplastina que carece de la capacidad para compensar
totalmente el defecto plasmático de la hemofilia, por lo que es una tromboplastina
parcial.
PROCEDIMIENTO.
1. Colocar 0.1 mL de tromboplastina parcial líquida activada en tubo de ensayo

de 13 x 100 mm en un baño de agua a 37°C. incubar por 2 minutos.
2. Agregar 0.1 mL de plasma problema o control, mezclar bien y dejar incubar
por 2 minutos.
Nota: El tiempo mínimo de activación es de 2 minutos, los tiempos de incubación
mayores de 5 minutos pueden causar pérdida de los factores V y VII
3. Después de 2 minutos adicionar 0.1 mL de cloruro de calcio 0.02M,
previamente colocado en el baño de agua a 37°C simultáneamente accionar el
cronometro.
4. Colocar de nuevo el tubo en el baño de agua durante 30 segundos, retirarlo y
observar los primeros hilos de fibrina, parar el cronometro.
Nota: Cuando los tiempos sean mas prolongados, mantener la temperatura
constante metiendo y sacando el tubo del baño de agua mientras se forma el
coagulo.
Plasma citratado: < 40 segundos

Plasma oxalatado: < 45 segundos
(SPINREACT)
PRINCIPIO DEL METODO: los factores intrínsecos de la coagulación se activan

en presencia de un complejo fosfolipídico y un activador soluble en plasma
citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro cálcico
(CaCl2) hasta la formación del coagulo de fibrina.
SIGNIFICADO CLINICO: la medida del tiempo de APTT, es la determinación
mas común junto con la PT, sirve para determinar trastornos de la coagulación
y es particularmente sensible a los defectos de la coagulación intrínseca
(factores VIII, IX, XI, XII).
Se usa normalmente para la monitorización de las terapias anticoagulantes con
heparina.
PROCEDIMIENTO:
El reactivo puede emplearse en técnica manual, mecánica, foto-óptica o
cualquier instrumento apto para detectar la formación del coagulo.
Técnica manual:
1. Calentar a 37°C los reactivos y la muestra.
2. 2. Mezclar bien los reactivos sin agitarlos.
3. 3. Pipetear en un tubo de ensayo limpio y seco:
4. Mezclar bien e incubar 5 min. A 37°C (tiempo de activación).
5. Pipetear:
6. Mezclar.
7. Poner en marcha el cronometro o el controlador de tiempo del
coagulometro y medir el tiempo de formación del coagulo, a partir de la
adición del R2 iniciador.
24 - 36 segundos.
HEMATOLOGÍA
VSG
TINCIÓN DE WRIHT
El frotis sanguíneo se fijara con metanol y se dejara secar, posteriormente se le
colocara Wright por 5 minutos, hasta estar bien lleno, luego se le colocara el
buffer fosfato ( ) por ocho minutos (se soplara con una perilla para homogenizar
el colorante con el buffer), posteriormente se lavara con agua corriente y dejara
secar.
RETICULOCITOS
En un tubo de ensaye se colocaran 100 µl de muestra (sangre total con EDTA)
y 100 µl de colorante (azul de cresil brillante o azul de metileno) dejar reposar de
15 a 30 minutos, tirar el sobrenadante y del precipitado hacer un frotis dejar
secar y leer a inmersión.
Se cuentan de 500 eritrocitos, cuantos reticulocitos hay y se multiplica esta

cantidad por 0.2.
Valores normales: 0.5-2%
TINCIONES ESPECIALES
TINCIÓN DE GRAM
CRISTAL VIOLETA: Cristal violeta 2g, alcohol etílico al 95% 20 ml, oxalato de
NH4 0.8 g, agua destilada 100 ml.
LUGOL DE GRAM: yoduro de potasio 2g, cristales de yodo1 g, agua destilada
100 ml.
DECOLORANTE: acetona 50 ml, alcohol etílico al 95% 50ml.
CONTRATINCION: safranina 2.5 g, alcohol etílico al 95% 100ml. Agregar 10 ml
a agua destilada 100 ml.
Esta es una tinción diferencial usada parta demostrar las propiedades tintoriales
de las bacterias.
Las bacterias Gram positivas retienen el colorante de cristal violeta después de
la decoloración y se ven de color azul oscuro.
Las bacterias Gram negativas no son capaces de retener el cristal violeta
después de la decoloración y se contratiñen de color rojo con el colorante de
safranina.
1.- Se hace un frotis delgado del material a estudiar y se deja secar al aire.
2.- Se fija el material en el portaobjeto pasándolo 3 o 4 veces a través de la
llama de un mechero Bunsen de modo que el material no sea lavado durante el
procedimiento de tinción.
3.- se coloca el frotis en un soporte para tinción y se cubre la superficie con el
colorante de cristal violeta por un minuto.
4.- se lava totalmente con agua.
5.- se cubre el frotis con solución de yodo de Gram durante un minuto. Se lava
nuevamente con agua.
6.- se sostiene con una pinza el frotis y se cubre la superficie con unas gotas de
decolorante de alcohol-acetona hasta que no se desprenda más color violeta der
10 a 30 segundos.
7.- Se lava con agua corriente y se coloca otra vez el frotis sobre un soporte para
tinción. Se cubre la superficie con contratinción de safranina durante un minuto.
Se lava nuevamente con agua.
8.-se coloca el frotis en una posición vertical dejando que dren el exceso de
agua y el frotis se seque.
9.- se examina el frotis con aceite de inmersión con el objetivo a 100 x del
microscopio. Las bacterias grampositivas se tiñen de color azul oscuro y las
bacterias gramnegativas se ven de color rojo-rosado.
TINCION DE ZIEHL-NEELSEN PARA BACILOS ACIDORESISTENTES.

Carbolfucsina: cristales de fenol 2.5ml, alcohol al 95% 5 ml, fucsina básica 0.5g,
agua destilada 100 ml.
Alcohol-acido al 3%: HCL concentrado 3ml, alcohol al 70% 100 ml.
Azul de metileno: azul de metileno 0.5 g, acético glacial 0.5 ml, agua destilada
100 ml.
Los bacilos acidorresistentes se denominan así porque están rodeados por una
envoltura cérea que es resistente a la tinción. Es necesario calor o un detergente
para que la tinción penetre en la capsula. Una vez teñidas, las bacterias
acidorresistentes resisten la decoloración, mientras que otras bacterias se
destiñen con el alcohol acido.
BACTERIOLOGIA
DESCRIBIR CADA MEDIO DE CULTIVO
El agar de MacConkey
Propósito e ingredientes diferenciales: es un medio diferencial para la
selección y recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos
relacionados.
Las sales biliares y cristal violeta inhiben el crecimiento de bacterias gram
positivas y algunas bacterias gram negativas.
La lactosa es el único hidrato de carbón. Las bacterias fermentadoras de lactosa
producen colonias con tonos variables de rojo debido a la conversión del
indicador rojo neutro (rojo con un pH menor de 6.8) por la producción de ácidos
mixtos. Las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa se ven incoloras
o transparente.
Reacciones e interpretación: los fermentadores intensos de lactosas típicos,
como especies de Escherichia coli, Klebsiella y Enterobacter, producen colonias
rojas rodeadas por una zona de bilis precipitada.
Los fermentadores lentos o débiles de la lactosa, como Citrobacter, Providencia,
serratia y Hafnia, pueden aparecer incoloros después de 24 horas levemente
rosados en 24-48 horas.
Las especies de Proteus, Edwardsiella, salmonella y Shigella, con raras
excepciones, producen colonias incoloras o transparentes.
TINCIÓN DE GRAM
BIOQUIMICAS
PARASITOLOGÍA
Técnica de Ritchie (método formalina –éter)
Muestra: heces en un frasco estéril del tamaño de una nuez.
Procedimiento:
Se observara la consistencia de la muestra, así como el color, presencia o
ausencia de moco y sangre, de haber este ultimo se preferiría esta parte para
hacer el prueba en fresco.
Se le adicionara solución salina al frasco de muestra y se agitará para después
depositar el liquido ¾ partes del tubo de ensaye (13x100)
MOCO FECAL
COPROPARASITOSCOPICO
PFH
LECTURA E INTERPRETACION DE PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA

IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIAS AISLADAS DE MUESTRAS
BIOQUIMICAS.
1.- ROJO DE METILO (RM) Medio liquido

Color original del medio: amarillo paja de aspecto transparente.
Agregar dos a tres gotas del reactivo rojo de metilo.
Prueba positiva (+): presenta color rojo
Prueba negativa (-): presenta color pardo amarillento o café.
2.- MOVILIDAD INDOL Y ORNITINA (MIO) medio semisólido

Color original del medio: morado transparente
PRUEBA DE MOVILIDAD
Positiva (+): medio turbio o dispersión del crecimiento bacteriano a través de la
picadura.
Negativa (-): medio transparente con crecimiento bacteriano únicamente en la
picadura.
PRUEBA DE LA DESCARBOXILACIÓN DE LA ORNITINA
Positiva (+): sin modificación de color morado en el fondo del tubo
Negativa (-): presencia de color amarillo en el fondo del tubo.
PRUEBA DEL INDOL
Agregar dos a tres gotas del reactivo de kovacs y agitar muy levemente
Positiva (+): formación de un anillo rojo en la superficie del medio de cultivo.
Negativa (-): formación de un anillo amarillo (del reactivo) en la superficie del
medio.
3.- AGAR HIERRO Y LISINA (LIA): medio solido en pico de flauta

Color original del medio: morado tenue.
PRUEBA DE LA DESCARBOXILACION DE LA LISINA
Positiva (+): sin cambio del color morado original en el fondo del tubo.
Negativa (-): presencia de color amarillo en el fondo del tubo.
PRUEBA DE LA DESAMINACION DE LISINA
Positiva (+): presencia de color rojo en el pico de flauta o en todo el tubo.
Negativa (-): sin cambio de color.
4.- AGAR HIERRO KLIGLER (KIA). Medio solido en pico de flauta

Color original del medio: naranja
PRUEBA DE PRODUCION DE GAS DE LA GLUCOSA
Positiva (+): presencia de gas en el fondo del tubo o de burbujas a lo largo de la
picadura.
Negativa (-): ausencia de gas en el fondo o de burbujas en la picadura.
PRUEBA DE LA LACTOSA
Positiva (+): presencia de color amarillo en el pico de flauta (acido)
Negativa (-): ausencia de color amarillo, permanece el color naranja (alcalino)
PRUEBA DE LA PRODUCION DE ACIDO SULFIDRICO (H2S)
Positiva (+): presencia de precipitado negro a lo largo de la picadura y/o en el
fondo del tubo.
Negativa (-): ausencia completa de precipitado negro.
5.- PRUEBA DEL CITRATO DE SIMMONS. Medio solido en pico de flauta

Color original del medio: verde de aspecto transparente.
Positiva (+): presencia de color azul o crecimiento bacteriano en el pico de flauta.
Negativa (-): sin cambio de color y sin presencia de crecimiento bacteriano.
6.- PRUEBA DE LA UREA DE CHRISTENSEN. Medio líquido o solido en pico

de flauta. Color original del medio: rosa bajito (tenue) de aspecto transparente.
Positiva (+): presencia de color rosa más subido (fuerte) que el original.
Negativa (-): sin cambio de color original en el medio.
7.- PRUEBA DE LA FERMENTACION DE LA SACAROSA. Medio liquido

Color original del medio: rojo de aspecto transparente
Positiva (+): presencia de color amarillo (acido)
Negativa (-): sin cambio de color (alcalino)
8.- PRUEBA DE LA FERMENTACION DE LA MANITOL. Medio liquido

Color original del medio: rojo de aspecto transparente
Positiva (+): presencia de color amarillo (acido)
Negativa (-): sin cambio de color (alcalino)
9.- PRUEBA DE LA HIDRÓLISIS DE LA GELATINA. Medio solido en pico de

flauta. Color original del medio: amarillo paja de aspecto transparente.
Positiva (+): se observa licuefacción de la gelatina al inclinar el medio.
Negativa (-): no se observa ningún cambio en la consistencia al inclinar el medio.
INMUNOLOGIA

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MANUAL

FUNDAMENTO: La glucosa se determina después de una oxidación enzimática

Blanco Estándar Muestra

Suero y plasma: Neonato, prematuro: 25 – 80 mg/dL

LINEALIDAD: 500 mg/dL. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa

SIGNIFICADO CLINICO: La glucosa es la mayor fuente de energía para las

Blanco Estándar Muestra

3 Mezclar e incubar los tubos durante 10 minutos a 37°C ó 15-20 minutos a

RANGO DE MEDIDA: desde el limite de detección de 0.04 mg/dL hasta el limite

PRINCIPIO DEL MÉTODO: la glucosa es oxidada por la glucosa oxidasa a

La absorbancia a 500 nm es proporcional a la concentración de glucosa en la

SIGNIFICADO CLINICO: para la determinación cuantitativa de glucosa en

Incubar el reactivo a 37 °C durante 5 minutos antes de agregar el suero.

5.- Leer absorbancia del patrón y de la muestra, frente al blanco de reactivo. El

RANGO DE MEDIDA: limite de detección de 0.00 mg/dL hasta el límite de

FUNDAMENTO: La urea presente en la muestra origina según la reacción el

1 Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.

Blanco Estándar Muestra

3 Agitar bien e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (16 – 25 °C)

Reactivo (B) 500 µL 500 µL 500 µL

5 Agitar bien e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (16 – 25 °C)

Suero o plasma: 15 – 39 mg/dL BUN: 7 – 18 mg/dL

Orina: 26 – 43 g/24 Horas BUN: 12 – 20 g/24 Horas

LINEALIDAD: 300 mg/dL

FUNDAMENTO: la urea es el principal producto de desecho del catabolismo de

1. Prepara el reactivo de trabajo de BUN de acuerdo al instructivo.

2. Calibre a 0 el espectrofotómetro a 340 nm con agua destilada.

3. Por cada muestra y control, agregar 1.0 mL de reactivo de trabajo a la cubeta

4. Adicionar 10 µL (0.010 mL) de suero a cada tubo respectivamente y agitar

5. Leer y anotar la absorbancia (A1) exactamente después de 30 segundos.

6. Exactamente a los 60 segundos después de leer (A1), lea y registre la

7. Calcule el cambio de absorbancia por minuto (ΔA) mediante la resta de (A1) -

8. Procese las muestras de pacientes y controles siguiendo los pasos del 4 al 7

Rango normal: BUN: 8 – 23 mg/dL

LINEALIDAD: 140 mg/dL

PRINCIPIO DEL METODO: la ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente

La disminución de la concentración de NAD + en el medio es proporcional a la

Blanco Estándar Muestra

3 Agitar bien y leer inmediatamente.

Suero o plasma: 15 – 45 mg/dL

LINEALIDAD: 500 mg/dL.

Preparar reactivo de trabajo, mezclando volúmenes iguales de las soluciones A

1 Pipetee en tubos de ensaye:

2 Agitar bien y leer la absorbancia A1 del estándar y de la muestra al cabo de 30

ΔA Muestra X Concentración del estándar = mg/dL

Hombres (Suero): 0.6 – 1.1 mg/dL

Mujeres: (Suero): 0.5 – 0.9 mg/dL

La creatinina forma un complejo coloreado rojo-anaranjado en una solución de

1. Coloque en cubetas los siguientes volúmenes:

2. Mezclar y leer la absorbancia A1 después de 60 segundos, leer la absorbancia

- Mujeres: 0.6 – 1.1 mg/dL

1 Coloque las celdillas del espectrofotómetro a 37°C.

Hombres (Suero): 0.9 – 1.5 mg/dL

Mujeres: (Suero): 0.7 – 1.4 mg/dL

LINEALIDAD: hasta 20 mg/dL. Muestras que excedan de estos valores deberán

PRINCIPIO DEL METODO: el ensayo de la creatinina con el picrato de sodio

SIGNIFICADO CLINICO: la creatinina es el resultado de la degradación de la

Blanco Estándar Muestra

2 Agitar bien y leer inmediatamente el estándar y después la muestra o

La prueba de la depuración de la creatinina en orina de 24 horas constituye una

• Volumen de orina de 24 horas.

Depuración de Vol. De orina en mL Creatinina en orina