Procesos bioquímicos en la simbiosis de bacterias y

leguminosas fijadoras de nitrógeno.

Fijación Biológica de Nitrógeno en Leguminosas
Introducción
La fijación Biológica de Nitrógeno (FBN) es el proceso por el cual algunos
microorganismos utilizan el nitrógeno contenido en el aire, reduciéndolo a amoníaco a
través de una enzima llamada nitrogenasa para la producción de proteínas. Los
microorganismo fijadores de nitrógeno son bacterias y cianobacterias, de vida libre en el
suelo, eventualmente asociados a una planta, o viviendo en simbiosis con una planta. Se
ha reconocido que las subfamilias Papilionáceas, Mimosáceas y Cesalpináceas poseen
la propiedad de aprovechar el nitrógeno mediante la fijación biológica. Las
Papilionáceas son las que presentan mayor número de especies formadoras de nódulos
entre un 80 – 90%, las Mimosáceas un 25% y las Cesalpináceas sólo unas pocas. Entre
las tres subfamilias agrupan 12000 especies con capacidad fijadora de nitrógeno.
En la atmósfera, el nitrógeno se encuentra en forma molecular (N2) con una
disponibilidad del 80%. Como se ha comentado anteriormente, las plantas solamente
pueden asimilar las el nitrógeno mayormente en forma de nitratos (NO3-) y en forma de
amonio (NH4+). Para poder convertir el nitrógeno de su forma no asimilable (N2) por
las plantas a una que sí lo sea, las bacterias realizan la FBN.
La energía requerida por las bacterias para desarrollar este proceso proviene de:
Los carbohidratos del suelo cuando los microorganismos son de vida libre.
Los exudados radiculares para aquellos asociados en la rizósfera de una planta
Directamente de los productos de la fotosíntesis de la planta huésped cuando
existe una simbiosis.
Como hemos descripto anteriormente, la FBN representa un papel de suma importancia
para las plantas, en especial para los cultivos agrícolas, lo cual se analizará diversos
ítems más adelante.
Existen varios organismos fijadores de nitrógenos para el caso de las leguminosas.
Algunos casos de bacterias fijadoras son nombrados en los cuadros a continuación
(Stewart, 1977):
Estructura y diferenciación del simbiosoma
De forma paralela al desarrollo del nódulo, el rizobio se distribuye por el mismo a
través de canales de infección. El nódulo va sufriendo una serie de modificaciones que
culmina en la formación del simbiosoma, el cual presenta una serie de características
que son indispensables para realizar la actividad fijadora de nitrógeno.
En un simbiosoma se pueden distinguir los siguientes componentes:
1. Membrana peribacteoides (mpb)
2. Fluido perobacteroideo (fpb)
3. Bacteroide
Membrana peribacteroidea

Es un envoltorio absolutamente necesario para la actividad del simbiosoma, ya que sirve

de intermediario de señales y nutrientes entre la bacteria y la planta. Aunque tiene su
origen en la porción de la membrana plasmática vegetal que rodea al rizobio durante la
invasión, la naturaleza de la mpb madura se asemeja más a la de la membrana del
tonoplasto. La razón de éste cambio en la composición radica en la fusión de vesículas
procedentes tanto del aparato de Golgi como del retículo endoplasmático que conduce al
crecimiento de la membrana peribacteroidea. Por otro lado, esas vesículas transportan
determinados componentes proteicos, como una H+-ATPasa, que pasan a incorporarse a
esta cubierta.
La actividad de esta proteína genera una acumulación de H+ en el espacio
peribacteoideo, y por tanto un descenso de pH que el bacteroide va a combatir
excretando el nitrógeno fijado en forma de amoniaco que en ese ambiente se encontrará
ionizando como NH4
+. Los iones de amonio pasan a través de un transportador
específico de la mpb al citoplasma de la célula vegetal en donde el sistema GS-GOGAT
los incorpora en forma de aminoácidos. Además de un gradiente de pH, se genera un
gradiente electroquímico aprovechando por determinados transportadores, como por
ejemplo el de malato, con el fin de proporcionar sustratos carbonados al bacteroide.
En el simbiosoma se acumula calcio, el cual participa en la regulación de
proteinquinasas
de membrana que controlan el transporte de malato y amonio a través de la
mpb.

Fluido peribacteoideo
El fluido peribacteroideo (fpb), definido como material soluble existente entre la mpb y
el bacteroide, mantiene en contacto la superficie de ambos, estableciendo una zona que
permite la interacción. Como se ha mencionado anteriormente, es donde se va a
acumular una alta concentración de H+ debido a la actividad ATPasa de la mpb. Desde
el aparato de Golgi se secretan proteínas al fbpcaracterñisticas de lisosomas como
proteasas, trehalasas ácidas o manosidasas, que hacen del simbiosoma un orgánulo con
propiedades líticas. El equilibrio en el intercambio de metabolitos entre la planta y el
microorganismo resulta vital para la simbiosis, de tal forma que, una alteración del
mismo producida por alguno de los dos miembros de la asociación, llevaría a una
acidificación en el interior del simbiosoma que conduciría a la activación de las
hidrolasas y por tanto a la muerte del simbiosoma y a la senescencia del nódulo.
La fusión de vesículas del aparato de Golgi da como resultado material glucoproteico,
de la familia de las lectinas, al cual se lo denominó PsNLEC-1. La presencia de estas
lectinas está relacionada con lamaduración de la bacteria hacia bacteroide.

Fijación biológica de nitrógeno por el bacteroide

La fijación biológica de nitrógeno en la bacteria Bradyrhizobium japonicum se lleva a

cabo en los bacteroides que se encuentran en el citoplasma de las células del nódulo. La
enzima nitrogenasa cataliza la reacción:

N2 + 8 H+ + 8 e- + 16 Mg-ATP 2 NH3 + H2 + 16 Mg-ADP + 16 Pi

La nitrogenasa es un proteína de gran tamaño que consiste de dos componentes, la
proteína homodimérica que contiene Fe y es codificada por los genes nifH, y la proteína
tetramérica que contiene Fe y molibdeno (Mo), codificada por los genes nifD y nifK. La
nitrogenasa de los nódulos radicales posee una característica similar a la enzima de las
bacterias fijadoras de nitrógeno de vida libre, incluyendo al O2 y la capacidad de reducir
acetileno y N2. La formación de H2 es parte del mecanismo de la nitrogenasa, pero
representa una pérdida significativa de energía.
Los bacteroides dependen totalmente de la planta para obtener la energía necesaria para
la fijación biológica de nitrógeno.
Los principales compuestos orgánicos transportados al interior de los bacteroides a
través de la membrana peribacteroidal son los intermediarios del ciclo del ácido cítrico,
en particular los ácidos de cuatro carbonos como succinato, malato y fumarato. Éstos
ácidos son utilizados como donadores de electrones para la producción de ATP. El
primer producto estable que se obtiene de la fijación de N2 es el amonio, y varias
pruebas indican que la asimilación del amonio para formar compuestos de nitrógeno
orgánico en los nódulos radicales lo lleva principalmente la planta. El amonio también
se puede asimilar en los bacteroides y pueden ser transferidos a la planta en forma de
alanina.
Durante el proceso de simbiosis, la planta también expresa la leghemoglobina. Esta
sustancia tiene la función de aportar O2 a los bacteroides y controlar los niveles de
oxígeno. La leghemoglobina se localiza en el citosol de las células de la planta infectada
y es la que da el típico color rosado de los nódulos funcionales, que en su interior son
rojizos debido a la presencia de la misma.
posición en la raíz. Los cambios están relacionados con el pasaje de la planta de estado
vegetativo a reproductivo y las condiciones ambientales. En el caso de los nódulos
formados por Bradyrhizobium japonicum en la soja (nódulos determinados), la
senescencia comienza en la zona central de la corteza y se extiende hacia la periferia,
hasta causar el deterioro total del nódulo. En el caso de los nódulos indeterminados (por
ejemplo en la alfalfa), la senescencia se inicia en la región proximal o base del nódulo y
presenta varios periodos de senescencia y recuperación durante la vida de la planta.