DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES POR EL METODO DEL ACIDO DINITROSALICILICO

MODIFICADO (DNS)

Materiales

 Fiolas
 Papel metálico
 Tubos de ensayo

Equipos

 Espectrofotómetro

Reactivos

 Acido 3,5 – Dinitrosalicilico

 NaOH
 Fenol
 sulfito de sodio
 tartrato de sodio y potasio
 glucosa anhídrida

Metodología

a. Preparación de reactivos
 Preparación del reactivo DNS: pesar 1 g de acido 3,5 – Dinitrosalicilico; 1,1 g de
NaOH; 0,2 g de fenol y 0,05 g de sulfito de sodio, colocar en una fiola de 100 ml,
disolver y enrasar con agua destilada tibia.
 Preparación de sal de Rochelle 40% : Disolver 40 g de tartrato de sodio y potasio
en agua destilada y enrasar a 100 ml.
 Preparación de solución glucosa Stock: Pesar 1g de glucosa anhídrida y llevar a
volumen en una fiola de 100 ml con agua destilada.

b. Preparación de la curva standard

 Preparar la solución Stock de glucosa como se indicó en una fiola de 100 ml.
 Tomar alícuota de 2 ml, 4 ml, 6 ml, 10 ml, 14 ml, 18 ml y 20 ml; colocarlos en
fiolas de 100 ml, enumerarlas de 1 al 7 y enrasarlas con agua destilada.
 De cada fiola tomar 1 ml del Standard y colocarlo en tubos de ensayo,
enumerarlos del 1 al 7 y añadir 1ml de agua destilada a cada tubo.
 Preparar un tubo Nro. 6 y agregar 2 ml de agua destilada (Blanco).
 A cada tubo añadir 2 ml del reactivo DNS incluido al blanco y llevar a ebullición
durante 10 minutos, luego enfriar.
 Añadir 1 ml de sal de Rochelle al 40% a cada tubo, también al blanco.
 Mezclar completamente agitando los tubos varias veces.
 Leer la densidad óptica a 540 nm, previamente calibrar el espectrofotómetro a
0,0 de Absorbancia con el blanco.
 En el software la curva se construye automáticamente a medida que se van
dando las lecturas de absorbancia, en la pantalla se muestra el grafico mg de
glucosa/ ml en el eje de las absisas (x) y la absorbancia (A) en el eje de las
 ordenadas (Y) reportando la hoja 1 (Standard data) y la curva de trabajo
multipuntos (Multi-point Working curve).
 El software aplica a la curva standard ajustes de correlacion lineal y la
distribución ji – cuadrada (Chi-square), asi mismo interseca la curva con la
coordenada (0,0).

c. Preparación de la muestra
 Pesar la muestra que se va analizar y enrasar a 100 ml en una fiola con agua
destilada.
 Filtrar la solución utilizando papel filtro Whatman Nro. 4.
 Tomar 1 ml de la solución filtrada, colocarla en un tubo de ensayo, añadir 1 ml
de agua destilada.
 Preparar en otro tubo el blanco (2 ml de agua destilada + 2 ml de reactivo DNS)
 Llevar los tubos a baño maría en ebullición durante 10 minutos y enfriar.
 Añadir 1 ml de sal Rochelle 40%.
 Añadir 10 ml de agua destilada, mezclar completamente agitando el tubo
varias veces.
 Leer la absorbancia (A) a 540 nm. Previamente se calibra a 0,0 de absorbancia
con el blanco.
 Determinar la concentración de azucares reductores (mg de glucosa/ml) en la
curva standard.

Software PC -1201

Manipule
Aritmetic

[(L2x − 1) + L1]. 100/0,2 = ∅ mg glucosa/100 ml de zumo

Donde:

L1 = Absorbancia del tubo II calibrado a 0 de abs. Con el tubo I.

L2 = Absorbancia del tubo IV calibrado a 0 de abs. Con el tubo II.
D= Dilucion de la muestra (ml muestra/ ml de solución).