PRACTICA No.

SEPARACION DE LÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Uno de los procedimientos más empleados para separar e identificar lípidos en materiales
biológicos es la cromatografía en capa fina. Se utiliza como soporte una placa de aluminio
recubierta con una capa delgada de gel de sílice, que se activa mediante calefacción en una estufa.
Los lípidos, extraídos previamente del tejido mediante disolventes orgánicos, se “puntean” a unos
2 cm del borde inferior de la placa. Una vez evaporado el disolvente, se introducen las placas en
cubetas cerradas, donde la fase móvil de la cromatografía asciende por capilaridad a través del
adsorbente (gel se sílice). Cuando el frente de la fase móvil va llegando al borde superior de la
placa, se saca ésta de la cubeta y, una vez evaporado el disolvente, se determina la posición de los
distintos tipos de lípidos mediante algún tipo de reacción química (revelado) que en este caso se
realizara con yodo sublimado. (Amplíe el fundamento teórico de esta técnica de cromatografía)
¿Qué es un Rf? ¿Cómo se calcula? ¿Para qué sirve?

Extracción de lípidos del tejido

1. En un mortero deposite 1g del tejido (hígado o cualquier visera de pollo, aguacate, maní, atún o
cualquier tejido del que se conozca tiene un alto contenido de lípidos) y 10 mL de etanol al 95%.
Se macera durante 5 min.

2. Añadir 15 mL de éter de petróleo y macerar durante otros 5 minutos para disolver los lípidos.

3. Filtrar a través de una gasa y recoger el filtrado y transferiría un embudo de decantación.

4. Añadir 5 mL de agua destilada y agitar. Se observará la aparición de dos fases: la inferior,

compuesta de H2Oetanol, contiene las proteínas, mientras que la fase superior orgánica contiene
los lípidos.

5. Pasar la fase superior a una capsula de porcelana y evaporar a sequedad. Para este
procedimiento ayúdese de una pipeta con pipeteador.

6. Resuspender en 1 mL de cloroformo: metanol (2:1).

Aplicación y desarrollo de la muestra

1. Corte placas de silicagel de 10 cm por 7 cm y realice una marca suave con lápiz a un centímetro
del borde inferior de la placa, esta será la zona en donde se depositen las muestras.

2. Se toma la muestra obtenida en 6 y con la ayuda de un capilar se deposita sobre la zona de

muestras, la aplicación debe ser tipo punción. En el espacio que queda se aplican de la misma
manera soluciones de lípidos estándar (triglicéridos, colesterol, lecitina, ácido palmítico] disueltos
en cloroformo:metanol (2:1)
3. Las placas se introducen en una cubeta (un beaker de 100 ml) que contiene una mezcla de
disolventes (hexanoéter etílico-ácido acético 80:20:1), que constituye la fase móvil de la
cromatografía.

4. Después de dejar que el disolvente se desplace por la placa (aproximadamente 20 min), se saca
ésta de la cubeta, se deja evaporar y se procede al revelado.

Revelado

La placa se introduce en una cubeta que contiene yodo sólido que, al sublimarse, queda fijado a
los lípidos. Aparecerán unas manchas de color amarillento en las zonas que contengan lípidos. Si
se desea extraerlos, se raspa la zona correspondiente con una espátula y se recuperan mediante
disolventes orgánicos.
Consulte los lípidos que contiene la muestra biológica con la que va a desarrollar el laboratorio.