Biotecnología de alimentos

PRACTICA N°2
CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO
1. OBJETIVOS
a. Determinar la curva de crecimiento microbiano para la levadura (
saccharomycescerevisae) y diferenciar cada una de las fases del crecimiento.

2. FUNDAMENTO TEORICO
El crecimiento bacteriano es la división de una bacteria en dos células hijas en un proceso
llamado fisión binaria. Suponiendo que no se produzca ningún caso de mutación las células
hijas resultantes serán genéticamente idénticas a la célula original. De este modo tiene lugar la
"duplicación local" de la población bacteriana. Las dos células hijas creadas tras la división no
sobreviven necesariamente. Sin embargo, si el número de supervivientes supera la unidad, en
promedio, la población bacteriana experimenta un crecimiento exponencial. La medición de
una curva del crecimiento exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido tradicionalmente
una parte de la formación de todos los microbiólogos. Los procesos fundamentales empleados
para ello son la enumeración bacteriana (conteo bacteriano) por métodos directos e individuales
(microscopía, citometría de flujo), por métodos directos y masivos (biomasa), por métodos
indirectos e individuales (conteo de colonias), o por métodos indirectos y en bloque (número
más probable, turbidez, absorción de nutrientes). Los modelos permiten conciliar la teoría con
las mediciones.( J. Bikandi.,2006).
Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del número de microorganismos a lo largo
del tiempo. Por tanto, no nos referimos al crecimiento de un único microorganismo (ciclo
celular), sino al demográfico. El crecimiento de una población es el aumento del número de
células como consecuencia de un crecimiento individual y posterior división
CICLO CELULAR
Las células aisladas cultivadas en un volumen finito de medio de cultivo apropiado van
utilizando los nutrientes que tienen disponibles, sintetizando sus propios componentes celulares
y dividiéndose en cuanto duplican su masa y su material genético. El tiempo que tarda una
célula en cumplir ese proceso se denomina tiempo de generación (τ) y puede variar desde unos
20 minutos en condiciones óptimas hasta varios meses en condiciones ambientales. Cada vez
que transcurre un tiempo de generación, el número de células se duplica, siguiendo, por tanto,
un incremento exponencial.

CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE UN CULTIVO DISCONTINUO.

PARÁMETROS.
En este apartado vamos a revisar el estudio de la cinética del crecimiento de microorganismos
que crecen aislados que no forman ningún tipo de estructura. Esta es la forma de crecimiento de
las levaduras (hongo unicelular) y bacterias.
Es importante conocer la cinética de crecimiento de los cultivos microbianos para predecir
cómo va a evolucionar un cultivo, cómo va a ir consumiéndose el substrato y cómo se van a ir
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acumulando los productos del cultivo. Conociendo estos factores es posible iniciar el cultivo a
mayores escalas.
Fuente: (K. Grijspeerdt y P. Vanrolleghem- 1999)
TRATAMIENTO DEL CRECIMIENTO EN FUNCIÓN DE LA TASA DE CRECIMIENTO μ

Otra forma de representar la cinética es considerando el incremento en el número de células

(dN) en un intervalo corto de tiempo (dt). En este caso, la ecuación que describe la cinética es
la siguiente:
dN/dt = μN
esto es: el incremento del número de células (dN) por unidad de tiempo (dt) es proporcional al
número de células presentes en el cultivo (N). A la constante de proporcionalidad (μ) se le
denomina tasa de crecimiento.
El campo de la microbiología es muy amplio, abarcando el estudio de microorganismos que
pueden tener un efecto tanto beneficioso como adverso en la salud humana, por ejemplo en la
calidad y seguridad de comidas procesadas o su acción en el campo de los agroecosistemas. La
principal herramienta de los microbiólogos es la posibilidad de identificar y cuantificar
microorganismos; sin embargo, la inexactitud inherente a los procesos de enumeración, y la
variación natural encontradas en las colonias, complican el trabajo.
Acumular suficientes datos acerca del comportamiento de los microorganismos requiere mucho
trabajo y es costoso. Además, aunque los datos pueden describir la respuesta de los
microorganismos, expresan muy poco acerca de la relación entre los procesos fisiológicos y el
crecimiento o la supervivencia. Una manera de reflejar estas relaciones es a través del uso de
modelos matemáticos y de simulaciones.
Los modelos y simulaciones han sido ampliamente usados en todas las disciplinas científicas.
Empezaron a usarse en microbiología de los alimentos a principios del siglo XX, buscando
describir la inactivación de patógenos durante el procesamiento de alimentos. Desde entonces,
con los avances realizados en informática, tanto hard como software, el uso de modelos y
simulaciones en microbiología creció al punto de ser reconocida como una disciplina de la
microbiología de alimentos, denominada “microbiología predictiva”, concepto introducido por
McMeekin et al (1993). Entre las ventajas más notorias del uso de modelos computacionales y
simulaciones se encuentra el potencial ahorro en lo referente al desarrollo de experiencias, la
posibilidad de obtener respuestas confiables en menor tiempo, y el beneficio de poder
almacenar datos que servirán de base a posteriores estudios.
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3. PROCEDIMIENTO

a. Preparación de precultivo: Preparar un precultivo de la levadura

(sacharomyces cereviseae) con un medio adecuado y dejar este a 27°C por
espacio de 48 horas.
b. Preparación de la curva de D.O. vs biomasa: se tomara una muestra de 50 ml
del precultivo luego de 48 horas de inoculación una vez sembrado. Se procederá
a centrifugar la muestra y se lavara dos veces con agua desionizada y destilada,
obteniéndose al final un precipitado a vienen a ser las células. Al precipitado
obtenido se le harán diferentes diluciones con agua destilada ( un promedio de
6) y cada dilución será medida en el espectrofotómetro a una longitud de onda
de 600nm, obteniéndose valores de D.O respectivas cuya lectura deberá
comprender el rango entre 0.1 y 0.9 (considerar como blanco para cada muestra
de agua destilada) . Tomar de cada dilución un volumen conocido de muestra y
colocarlo en placa petri previamente taradas, llevarlas a la estufa a 105 °C hasta
peso constante (aproximadamente de 6 a 8 hr), al termino de ellos se pesara cada
placa y se procederá a halar la cantidad de masa seca (gr) por volumen del
medio (L).

c. Preparacion de la curva D.O vs tiempo(Hr): Enumerar 10 erlenmeyer (de

100ml de capacidad) los cuales contienen 40 ml del medio de cultivo. A cada
erlenmeyer se inoculara un 5 % del precultivo y se le pondrá en el shaker bajo
condiciones asepticas a la temperatura de 30°C y con agitación constante. Cada
cierto tiempo se sacara un erlenmeyer y se tomara una muestra de volumen
conocido el cual será centrifugado y se leera el DO a la longitud de onda de
600nm.

4. RESULTADOS Y DISCUSION

-Densidad óptica Vs Biomasa

Cuadro n°1:CONCENTRACION
DILUCIÓ PESO DE PESO BIOMAS DO G G/L
N PLACA CONSTANTE A
0.01 45.48 45.5 0.02 1.224 7.7 2.58064516
5
0.021 41.28 41.31 0.03 1.828 7.7 3.88601036
2
0.025 44.48 44.53 0.05 1.958 7.9 6.28930818
5
Elaboración propia, 2018
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Grafica n°1: Densidad óptica versus Biomasa

D.O vs X
DO X (g/l)
2.5
1.224 2.58064516
y = 0.18x + 0.9045
1.828 3.88601036 2 R² = 0.7478
1.958 6.28930818
1.5

D.O 1

0.5

0
1.0000 2.0000 3.0000 4.0000 5.0000 6.0000 7.0000
X

En esta grafica podemos observar la relación entre biomasa y densidad óptica,

pero el error que hubo fue no tomar todos los datos completos

-Densidad óptica versus Tiempo

Cuadro n°2;CINETICA
TIEMPO DO VIAL VIAL VIAL 1 + VIAL 2 + BIOMASA
1 2 BIOMASA BIOMASA
0 0 13.87 12.69 14.24 14.24 0.04
1 0.175 13.61 13.54 13.6 13.6 0.1
2 0.255 13.86 13.75 13.74 13.74 0.04
3 0.985 13.62 13.63 13.65 13.65 0.1
5 1.139 12.65 13.93 13.98 13.98 0.09
7 1.188 13.65 12.79 12.84 12.84 0.09
9 1.218 13.68 13.69 13.71 13.71 0.06
12 1.089 13.59 13.66 13.72 13.72 0.2
24 0.422 13.56 13.68 13.74 13.74 0.27
Elaboración propia 2018
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Grafica n°2: Densidad óptica versus tiempo

D.O vs TIEMPO
TIEMPO DO 1.600
y = 0.1462x + 0.1447
0 0.000 1.400
R² = 0.795
1 0.175 1.200
2 0.255 1.000

D.O
3 0.985 0.800

5 1.139 0.600

7 1.188 0.400

9 1.218 0.200
0.000
0 2 4 6 8 10
TIEMPO

DISCUSION:
Respecto a la densidad óptica versus tiempo podemos observar que la tendencia en la
gráfica en ese lapso de tiempo tiene un crecimiento esperado. Sin embargo respecto a la
biomasa podemos observar que de esta se obtuvo muy pequeñas cantidades debido a las
disoluciones hechas después del lapso de tiempo, en primer lugar a la hora de sacarlas
de baño maría se descartó la mitad, una vez que se echa el sobrenadante del agua
destilada y des ionizada se volvió a hacer una dilución, procediéndose después a realizar
la medición en el espectrofotómetro lo que produjo que la biomasa obtenida fuera
mínima.

Biomasa versus Tiempo

X vs TIEMPO
TIEMPO X
1.00
0 0.65
0.95
1 0.69
0.90
2 0.71
0.85
3 0.88
0.80
X

5 0.92
0.75
7 0.93
0.70
9 0.94
0.65
0.60
0 2 4 6 8 10
Tiempo
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En esta última partese tiene como objetivo identificar la velocidad de crecimiento para lo
cual se tomaron 2 tiempos
TIEMPO X
0 0.65
1 0.69 Tiempo inicial de fase logaritmica
2 0.71
3 0.88 Tiempo final de fase logaritmica
5 0.92
7 0.93
9 0.94

𝑿
𝒍𝒏 𝑿𝟐
𝟏
𝝁𝒎 =
𝑻𝟐 − 𝑻𝟏

𝜇𝑚 = 0.125

5. CONCLUSION
Se logró determinar el crecimiento para la levadura SaccharomycesCerevisiae a partir de
muestras tomadas en diferentes tiempos para realizar sus respectivos análisis.

6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
a. J. Bikandi. Cinética de la fase exponencial de la curva de crecimiento
microbianoConsultado el 26/02/2014
"Marshall T. Savage - An Exponentialist View" (eninglés)

b. T. McMeekin, J. Olley, T. Ross, D. Ratkowsky. Predictive Microbiology:

Theory and
application. John Wiley & Sons, Chichester, UK. 1993.
c. K. Grijspeerdt y P. Vanrolleghem. Estimating the parameters of the Baranyi
model for bacterial growth. Food Microbiology, 16:593-605, 1999.
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7. ANEXOS

DOCUMENTO EXCEL- ADJUNTADO