DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEINAS SOLUBLES POR EL

MÉTODO DE BIURET

*Estudiantes de Ingeniería agroecológica, Universidad de la Amazonia (Florencia-Caquetá)

Resumen

La práctica de laboratorio “Determinación cuantitativa de proteínas solubles por el método

de biuret” se realizó el día de octubre del año 2015 en el laboratorio 7101 de la universidad
de la amazonia sede porvenir, consistió en

Palabras claves:

Introducción:
Las proteínas son principios inmediatos orgánicos constituidos por largas cadenas de
aminoácidos, los cuales se unen entre sí mediante en laces peptídicos. La existencia del
enlace peptídico, de aminoácidos azufrados, puede ponerse de manifiesto en el laboratorio
mediante una serie de reacciones coloreadas específicas, que sirven para la identificación
de las proteínas. (Gonzales, 2003)

Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina

básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta, cuando se
quiere conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para el diagnóstico de
enfermedades, así como para muchos otros propósitos. Existen diferentes métodos para la
cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad
intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados
químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes (Segal, 2005).

La reacción de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida
(Alais, 2003).Es un reactivo muy bueno para demostrar la presencia de proteínas e incluso
cuantificarlas. La prueba da positiva en todos los componentes que tenga dos o más uniones
peptídicas, por lo cual es propia para proteínas y péptidos. La intensidad del color de la
reacción es proporcional a la cantidad de proteína en la muestra. (Vejar, E. 2005). Si su
color es (violeta) se debe a la formación de un complejo de Cu en un medio alcalino en
compuestos que poseen más de un enlace peptidico, como las proteinas (Cambell et al,
2006):
La curva de patrón es un método de química analítica empleado para medir la
concentración de una sustancia en una muestra por comparación con una serie de elementos
de concentración conocida. Se basa en la existencia de una relación en principio lineal entre
un carácter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometría) y la
variable a determinar (la concentración). Para ello, se efectúan diluciones de unas muestras
de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una
función matemática que relacione ambas; después, se lee el mismo carácter en la muestra
problema y, mediante la sustitución de la variable independiente de esa función, se obtiene
la concentración de esta. Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y,
empleando la curva patrón, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta
encontrar la concentración (Harris, 2003)
Materiales y Métodos:

Materiales: 8 tubos de ensayo, 1 gradilla para tubos, 1 pinza para tubos, 1 matraz aforado
de 100 mL , 1 matraz aforado de 25 mL, 1 Erlenmeyer de 100 mL, 1 Erlenmeyer de 250
mL, 3 vasos de precipitado de 100 mL, 1 embudo de vidrio,1 papel filtro y 1
Espectrofotómetro

Reactivos: Solución de albúmina de huevo, Reactivo Biuret y NaCl

Discusión

Cuestionario

1. Describa que es el espectrofotómetro y para qué sirve.

RTA: Sirve para calcular las concentraciones de las distintas sustancias en función de la
absorción del color. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz
monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por
dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:

1. Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.

2. Indicar indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en
la muestra.

2. Defina con sus propias palabras que es una curva patrón.

RTA: Son las medidas conocidas en orden ascendente que sirven de guía para ajustar una
solución problema.

3. Cuáles son las ventajas y las desventajas, de emplear los reactivos de biuret para
cuantificar proteínas explique.

RTA: Dentro de las ventajas del reactivo de Biuret es que es bastante específico para
proteínas, muestra pocas interferencias y es barato. Y la desventaja es que es poco sensible.

4. Mencione cual es la razón de que en el método de biuret la absorbancia de una proteína

se lea a una longitud de 540 nm.

RTA: El color violeta característico se presenta a esa longitud la cual se da por la

coordinación de un átomo de cobre con cuatro átomos de nitrógeno. El complejo se basa en
la desprotonación de los grupos amida para formar el enlace con el cobre (II) o por el
establecimiento de un enlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de
los átomos de oxígeno y de nitrógeno del péptido. (Freifelder, D. 2003)

5. Explique si una curva patrón puede ser empleada para cuantificar sustancias diferentes a
las proteínas y cuál sería la diferencia con estas.
6. ¿Cuál es la finalidad de utilizar un tubo como blanco? Mencione si siempre se utiliza
agua como blanco.

RTA: Tomar la medida de la cual parte la curva patrón, no siempre se utiliza agua como
blanco, sino una mezcla concentrada de la sustancia con la cual se está trabajando.
(Freifelder, D. 2003)
Bibliografía

Alais, C. 2003. Ciencias de la leche. Editorial Reverté S.A. Impreso en España. Pp 25.

Cambell,N; Smith, D & Peters, J. 2006. Bioquímica ilustrada: bioquímica y biología

molecular en la era posgenómica. Masson, España.

Freifelder, D. 2003. Tecnicas de bioquímica y biología. Editorial reverte.

Gonzales, P.2003.Prácticas de laboratorio y de aula. Editorial ilustrada, Impreso en España.

PP 168

Harris, C. 2003. Quantitative chemical analysis. San Francisco.

Segal, C. 2005. Manual de prácticas de biología molecular de la célula. Editorial

publidisia.

Vejar, E. 2005. Prácticas de bioquímica Descriptiva. Editorial USON. Impreso en Mexico.

PP 195