Cromatografía de pigmentos fotosintéticos

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, Decana de América)

DEPARTAMENTO DE QUIMICA ORGANICA-2019
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
Cromatografía en papel y capa fina

PROFESOR: Juan Woolcott Hurtado
ALUMNOS:
Camargo Poma,
Ruth Mayli
Sinche Solis
Aymet Lidia
Fecha de realización de la prática: 24/ 04 / 2019 Zegarra Maria
Mercedes
Fecha de entrega de informe: 8 / 05/ 2019
LIMA-PERÚ
2019
1. RESUMEN
Se separó los componentes de la muestra (hojas verdes y flores rosadas en solución BAW
(butanol, ácido acético y H2O) mediante la técnica de cromatografía en capa fina y en
papel filtro.
En primer lugar, se dejó secar las hojas verdes y flores rosadas en la estufa a la
temperatura de 60ºC aprox., seguido se pasó a triturar hasta obtener el polvo, siendo estas
agregadas a un vaso precipitado (2 g). A ambas muestras hojas verdes y flores rosadas
en polvo se les adicionó etanol y se pasó a guardar en la oscuridad durante unos 10
minutos. Pasado el tiempo, se obtuvo un líquido, de tal manera que se sembró en el papel
de capa fina y en el papel milimetrado con la ayuda de un tubo capilar. Se sembró en dos
puntos diferentes y 3 veces en el mismo lugar (línea base), luego se colocó dentro de otro
vaso precipitado con solución de BAW. De esta manera el solvente sube a través del papel
de capa fina hasta una altura de mientras que la muestra se va separando del solvente
quedando el color verde a una altura de la línea base.
2. INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una de las técnicas más empleadas en las muestras complejas como
las sustancias biológicas, por separar con una gran eficiencia mezclas de aminoácidos,
analgésicos y muchas moléculas orgánicas. Esta es una técnica de separación de una
mezcla de solutos en solución, basándose en las diferencias relativas de las velocidades,
con que se mueven cada uno de los componentes de la mezcla, a través de un medio sólido
poroso insoluble, y arrastrados por un disolvente en movimiento.
La cromatografía sobre papel es una de las técnicas cromatográficas más simples y

antiguas, la separación se realiza sobre tiras u hojas de papel de filtro, especialmente
elaborado. La fase estacionaria consiste en moléculas de agua absorbidas en las fibras de
papel y la fase móvil es el solvente, por lo tanto, esta cromatografía es una técnica de
partición líquido-líquido. La fase móvil, que se mueve y arrastra a los distintos
componentes, permite que en el sistema formado operan dos tipos de fuerzas: fuerzas
propulsoras y retardantes.
Uno de los aspectos más importantes de la cromatografía, es que un sistema

cromatográfico dado, el movimiento relativo de un compuesto, con respecto al frente de
solvente, es una propiedad característica y reproducible. Se expresa como un valor Rf,
coeficiente de reparto, que es la relación entre la distancia recorrida por la sustancia y la
distancia recorrida por el solvente.
La cromatografía en capa fina es una técnica de adsorción sólido-líquido, en donde la fase

estacionaria es sólida y la fase móvil es líquida. Se lleva a cabo sobre una capa delgada
uniforme de adsorbente adecuado, extendido sobre una lámina de vidrio, y activada por
calentamiento. Influyen dos factores, las fuerzas de atracción entre los solutos y los
adsorbentes y las fuerzas que tienden a separar todos los solutos.
3. OBJETIVOS:
⮚ Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlpos mediante la técnica de

cromatografoa de papel y capa fina.
⮚ Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias,
sus características y los factores que en ella intervienen.
4. PRINCIPIOS TEÓRICOS
4.1.¿En qué Consiste?
La cromatografía es un método físico de separación de los distintos componentes de una

mezcla, este método sirve identificar y determinar las cantidades de los componentes de
la mezcla.
El procedimiento consiste en hacer pasar una fase móvil fluida (gas, líquido o fluido
supercrítico), que se mueve respecto a la fase estacionaria (estacionaria constituida por
un sólido finamente dividido o un líquido fijado en un sólido) manteniendo un contacto
íntimo con ella y arrastrando a la muestra, cuyos componentes se distribuyen entre ambas
fases, cumpliendo la ley de reparto.
4.2. Fundamento teórico:
En este proceso los componentes de la mezcla invierten un tiempo diferente en interactuar

con cada una de las fases, con lo que se produce la separación y/o identificación. Si un
componente esta la mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueve
rápidamente, mientras que, si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el
producto queda retenido y su salida es mucho más lenta. Esto se debe a que los
componentes fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el
flujo de la fase móvil, mientras que los componentes con baja afinidad por la fase
estacionaria se desplazan con más rapidez al ser arrastrados por la fase móvil.
4.3. Tipos de Cromatografía
4.3.1. Cromatografía de papel:
El soporte de la fase estacionaria es una tira de papel de

celulosa, que tiene los líquidos entre sus fibras.
Dependiendo del grado de retención y la solubilidad de
las distintas sustancias, el eluyente (fase móvil que
arrastra los solutos a través de una fase estacionaria a
4.3.2. Cromatografía de capa fina:
través del movimiento de esta) los arrastrará a distinta
velocidad.
La cromatografía en capa fina es un tipo de cromatografía de adsorción, se basa
fundamentalmente en las distintas afinidades de adsorción de los componentes de la
muestra hacia la superficie de un sólido que conforma la fase estacionaria. La fuerza con
la que es adsorbido un componente dependerá de la polaridad de los componentes, de la
actividad del adsorbente que conforma la fase estacionaria y de la polaridad de la fase
móvil. Generalmente la fase estacionaria de esta técnica es un gel.
En ambos casos el grado de retención o factor de retención se calcula con la siguiente
formula:
5. DETALLES EXPERIMENTALES
5.1. Cromatografía en capa fina (CCF)
Se utilizó hojas verdes y flores rosadas para obtener el extracto de estas; para ello se dejó
secar dentro la estufa a 60ºC. Seguido se trituraron la mitad de las hojas secas dentro de
un mortero (figura 1) hasta que estas se hagan polvo, en donde 2g de este polvo se
vaciaron en una vaso y se mezcló con etanol, figura 2. Se guardó en lo oscuro por unos
10 minutos aprox. Figura 3. Luego, mediante la ayuda de un tubo capilar se siembra la
muestra en el papel de Whatman (línea base) en dos puntos diferentes y se coloca dentro
de un vaso precipitado con solución de BAW.
Fig. 1. Trituración de las hojas

verdes
Fig. 2. Hojas verdes con
etanol.
5.2. Cromatografía en papel filtro
Siguiendo el mismo procedimiento de la cromatografía en capa fina, se realizó en el de

papel filtro. Se obtuvo los siguientes resultados en los dos papeles:
6. CÁLCULOS
Para la clorofila b:
Distancia de recorrido del disolvente: 2.3 cm
Distancia recorrida del compuesto requerido (clorofila b): 0.73 cm
Se calculará el Rf a partir de los datos obtenidos:
𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅
𝑅. 𝑅 = 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅
1.43
𝑅. 𝑅 = 4.51 = 0.317
0.31−0.317
𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 = 𝑅100 = −2.25%
0.31
Para el caroteno:
Distancia de recorrido del disolvente: 2.54 cm
Distancia recorrida del compuesto requerido (caroteno): 0.7 cm
Se calculará el Rf a partir de los datos obtenidos:
𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅
𝑅. 𝑅 = 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅
3.89
𝑅. 𝑅 = = 0.95
4.1
0.92−0.95
𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 𝑅𝑅 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 = 𝑅100 = −2.1%
0.95
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
El margen de error obtenido fue de -2.25% para la clorofila y -2.1 para el caroteno ,
esta diferencia entre el valor teórico y experimental se pudo haber debido a que
antes de que se empiece a realizar la cromatografía no se esperó a que los vapores
del solvente (en esta caso, el ) se saturen debidamente dentro del recipiente. Dicho
factor pudo haber tenido de consecuencia que la distribución de la muestra se
muestre con claridad,y que la calidad del cromatograma se vea afectada de forma
negativa.Además, otro factor que pudo haber afectado la experiencia pudo haber
sido no mantener tapado rápidamente los vasos precipitados cuando la muestra se
colocó; o también el haber colocado la muestra bastante cerca de la orilla del papel.
8. CONCLUSIONES
⮚ La cromatografía de capa fina (TLC) es una técnica muy simple, que presenta una
gran utilidad en separaciones de compuestos para llevar a cabo un análisis
cualitativo.
⮚ Resulta particularmente útil en la separación de colorantes, puesto que al tratarse
de sustancias detectables a simple vista, no se requiere la etapa de revelado de las
manchas.
⮚ En los tintes comerciales estudiados, esta técnica ha permitido detectar la presencia
de hasta 3 colorantes distintos en una misma formulación y comparar los
constituyentes de los diferentes tintes.

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Cromatografía en papel y capa fina

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El soporte de la fase estacionaria es una tira de papel de

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5.2. Cromatografía en papel filtro

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