La identificación de microorganismos basada en la espectrometría de

masas conocida como matrix-assisted laser desorption/ionization time-

of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) es una técnica que existe
hace más de 30 años. Sin embargo, en los últimos años han aparecido
diversas plataformas comerciales que han permitido a los laboratorios de
microbiología clínica acceder más fácilmente a esta tecnología y aplicarla
como un método confiable, específico y rápido de identificación de
bacterias, micobacterias y hongos basado en el perfil de
proteínas1, 3, 12, 15. Esta técnica permite la identificación de
microorganismos mediante el análisis de proteínas, principalmente
ribosómicas, a través de la creación de un espectro de masas que es
específico para cada especie. Un microorganismo dado presentará siempre
una serie de picos característicos en el espectro, y esto permite la creación
de bases de datos con los espectros de masas que presentan los distintos
microorganismos. El espectro obtenido para un determinado
microorganismo se compara automáticamente con la base de datos, y el
resultado se emite junto a un puntaje o score1, 3.
Este sistema constituye una herramienta útil para el laboratorio
microbiológico, pues permite una identificación rápida de bacterias y
levaduras a partir de colonias aisladas, e incluso es capaz de diferenciar a
nivel de subespecie
https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-cientifica/unidad-de-genomica-y-
proteomica/espectrometria-de-masas-maldi-tof.html

http://www.scielo.org.co/pdf/inf/v22n1/0123-9392-inf-22-01-00035.pdf

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0325754115000346

https://www.biospectrumasia.com/news/49/3211/apollo-india-sets-up-auto-microbe-detection-
system-.html

https://www.biomerieux-usa.com/clinical/vitek-ms-healthcare

MALDITOF:

Introducción :

La mayor parte del trabajo en el laboratorio de microbiología es realizado de manera manual ,

diagnosticando los distintos microorganismos mediante pruebas in vitro como baterías
bioquímicas con el empleo de distintos medios o cultivos. Estos métodos fenotípicos se basan
principalemente en detectar las características fenotípicas de las bacterias , pero para obtener un
resulado adecuado existe una gran dependencia de los procesos metabólicos del microorganismo
que siempre necesitan la utilización de una temperatura adecuada o tiempos de incubación
minimos que generalmente son prologandos (18-24 hrs aprox) .
Es por todo lo anterior que a lo largo del tiempo se han comenzado a desarrollar métodos que
permitan complementar a los métodos fenotípicos clásicos o simplemente generar una
identificación mas rápida y en cierta medida menos tediosa con el fin de llegar a un diagnostico en
menor tiempo y de manera efectiva generando optimización de los tiempos y aumentado la
cantidad de muestras que se pueden procesar diariamente en un laboratorio. Una de estas
técnicas es MALDITOF.

MALDITOF ha permitido la utilización de espectrometría de masas en la identificación de

microorganismos mediante el análisis de proteínas , principalmente ribosomales, a través de la
creación de un espectro de masas que es especifico para cada genero y especie.

¿Cómo se llega a la implementación de MALDITOF?

En 1975 fue propuesto el uso de la espectrometría de masas con el fin de identificar bacterias a
través de la detección de biomarcadores , en este método se demostró que al analizar pequeñas
moléculas derivadas de bacterias en estado liofilizado, se logró diferenciar organismos
taxonómicamente distintos, sin embargo no se puedo llegar a la identificación de microorganismos
similares.

A finales de los años ochenta la inclusión de técnicas de ionización suave en la espectrometría de

masas permitieron el análisis de macromoléculas biológicas, desarrollo que mereció el Premio
Nobel de Química en el año 2002 .

A finales de los años noventa, se encontró que al realizar la aplicación de espectrometría de

masas en células bacterianas enteras producía espectros de proteínas característicos que servían
para la identificación bacteriana tanto en género como especie.

Posteriormente el desarrollo de bibliotecas de espectros con cepas de referencia, en programas

informáticos permitió la aplicación de la espectrometría de masas en el análisis de la composición
a nivel proteico de los microorganismos de manera rutinaria en los laboratorios de microbiología
con alto grado de precisión.

FUNDAMENTO DEL METODO :

Un espectrómetro de masas se compone de tres unidades:

- Una fuente de ionizante para transferir iones a las moléculas de la muestra en una fase
gaseosa.

- Un analizador de masas que separa los iones de acuerdo con su relación masa/carga

- Un dispositivo de detección para detectar los iones separados

PROCEDIMIENTO:

1. Una pequeña porción de una colonia de bacterias crecida en medio de cultivo sólido se
deposita directamente sobre una placa metálica conductora
2. Posteriormente, a la placa con el microorganismo se adiciona una solución concentrada de
un compuesto orgánico denominada matriz. Tras el secado, la muestra del
microorganismo y la matriz se cristalizan y forman un depósito sólido de muestra
incrustado en la matriz. La matriz es un componente esencial para la ionización exitosa de
la muestra pues actúa como una base en la cual puede tener lugar la ionización y además
actúa como un proveedor de protones que serán utilizados en la ionización.

3. Después de la cristalización de la matriz y del compuesto, la placa metálica se introduce en

el espectrómetro de masas, en donde la mezcla es irradiada con pulsos cortos de un rayo
láser UV.

4. La interacción entre los fotones de las moléculas de láser y de la matriz, causados por la
absorción de la energía del haz, desencadena una sublimación de la matriz en una fase
gaseosa, seguida por la ionización de la muestra del microorganismo con mínima
fragmentación (por ello se denomina “ionización suave”).

5. Al ionizarse, las proteínas son aceleradas a través de un campo electrostático y luego son
expulsadas en un tubo de vuelo al vacío donde se separan en función de su velocidad o
tiempo de vuelo, llegando finalmente al detector de masas que genera información
característica de la composición del microorganismo mediante un espectro de picos
llamada también huella digital.

6. Esta huella digital se compara con una base de datos y se genera la identificación del
microorganismo.

Esquema que ejemplifica y resume el procedimiento de manera grafica:

 REQUISITOS DE LAS MUESTRAS:

 Las muestras deben entregarse adecuadamente etiquetadas, envasadas y

acondicionadas para asegurar su identificación, integridad y conservación
durante el transporte y garantizar la seguridad del personal que lo realiza.
 Para el análisis de proteínas y péptidos:

La manipulación de las muestras de proteínas debe realizarse siempre con guantes

de látex sin polvo, para evitar la contaminación de muestras.

Los sistemas comerciales más empleados en la actualidad que usan la tecnología MALDI-
TOF MS son :

- Sistema VITEK®MS y el sistema MALDI Biotyper®

EJEMPLO DE EQUIPO CON EL SISTEMA MALDITOF:

Fuente: www.biomerieux-usa.com Fuente: www.biospectrumasia.com

EJEMPLO DE HUELLAS PROTEINICAS DE LAS MUESTRAS EMITIDOS POR EL EQUIPO:

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL MÉTODO:

VENTAJAS DESVENTAJAS
Facilidad de uso Elevados costos de adquisición del equipo
Capacidad para analizar un gran número de Elevados costos de mantenimiento del equipo
muestras simultáneamente. que han sido calculados de hasta un 10% del
costo del equipo anualmente
Menor costo de identificación por aislamiento Operador dependiente.
comparado con el de otros sistemas