Diferentes cepas de Trypanosoma
microscopio electrónico con magnificación de 10000 y
cruzi producen distintas alteraciones en
la estructura de las mitocondrias y la
cadena respiratoria en la miocardiopatía
chagósica
Báez A., Lo Presti S., Rivarola W., Pons
P., Fretes R., Paglini P.,
Cátedra de Física Biomédica, Facultad de
Ciencias Médicas, Universidad Nacional de
Córdoba, Córdoba Argentina.
Cátedras de Histología y de Microscopía
Electrónica, Facultad de Ciencias Médicas,
Universidad Nacional de Córdoba, Córdoba,
Argentina.
Introducción
Las mitocondrias son muy abundantes en el corazón,
donde constituyen un 20-40% del volumen celular, por
ser un tejido de gran demanda energética. Diversas vías
bioenergéticas interaccionan contribuyendo al
metabolismo energético mitocondrial, como la oxidación
del piruvato, el ciclo de Krebs, la betaoxidación
mitocondrial de los ácidos grasos y la vía final común de
la fosforilación oxidativa que genera el 80-90% del ATP
celular. La infección por T. cruzi induce la producción de
citoquinas inflamatorias que juegan un rol importante en
modular la resistencia del parásito. Es de interés destacar
que las mitocondrias son el blanco de estos mediadores
inflamatorios, como así también de otras noxas de origen
endógeno y exógeno.
Todos los tipos celulares incluyendo los cardiomiocitos
son capaces de generar especies reactivas del oxígeno
(ROS) y las mayores fuentes de producción incluyen: a la
mitocondria, la xantina oxidasa y la NADPH oxidasa. Bajo
condiciones fisiopatológicas los niveles de ROS se
incrementan y causan daño y disfunción celular
principalmente de la mitocondria. Los cardiomiocitos y
fundamentalmente sus mitocondrias pueden neutralizar
el ROS formando enzimas antioxidantes. Bajo
condiciones fisiológicas normales, la principal fuente de
ROS es la cadena de transporte de electrones
mitocondrial. Esta generación de ROS es propia del
metabolismo normal y ocurre a partir de la producción de
electrones o el transporte de éstos desde la cadena
transportadora de electrones a los complejos I, III y IV.
La generación de ROS mitocondrial puede ser amplificada
en células con un anormal funcionamiento de la cadena
respiratoria, así como, bajo condiciones fisiológicas y
patológicas, donde el consumo de oxígeno está
incrementado [1].
Debido a que el ingreso del T. cruzi a las células
miocárdicas genera un intenso proceso inflamatorio con
producción de citoquinas y grandes cantidades de
radicales libres, factores que tienen acción directa sobre
las mitocondrias, es que en el presente trabajo
estudiamos la relación entre daño mitocondrial y
actividad enzimática del CI y CIII en miocardios de
ratones infectados con diferentes cepas de T. cruzi en
distintos momentos de la infección.
Materiales y Métodos
Se utilizaron ratones Albino Suizos G1= sin infectar
(n=10); e infectados con 50 tripomastigotes de
Trypanosoma cruzi G2= cepa Tulahuen (n=20) y G3= con
aislamiento SGOZ12 (n=20). Estudios
histopatológicos de corazón: 50 cortes de cada grupo
fueron analizados con objetivo de 40 x. Parasitemia de
todos los grupos determinada en cámara de Neubawer en
muestras de sangre obtenidas cada 7 días; Estructura
de las mitocondrias los cortes finos se contrastaron con
acetato de uranilo y citrato de plomo y se analizaron en
27800 x, Aislamiento mitocondrial: se realizó por
fraccionamiento subcelular de ventrículos derecho e
izquierdo de los diferentes grupos. La concentración de
proteínas se midió por el método de Bradford [2]. Esta
fracción mitocondrial así obtenida sirvió para determinar:
Actividad de los complejos de la cadena
respiratoria: CI: NADH-ubiquinona reductasa y CIII:
ubiquinona-citocromo c-reductasa, se realizó por técnicas
espectrofotométricas [3,4,5].
Análisis estadístico: de acuerdo a la naturaleza de la
variable en estudio (ANAVA, datos categóricos y test de
comparaciones múltiples). La cuantificación mitocondrial
mediante el programa Axiovisión 3.0., estableciéndose
diferencias significativas cuando p<0.05 para todos los
casos.
Resultados
Parasitemia: G2 y G3 mostraron un pico de parasitemia
a los 14 d.p.i., siendo significativamente menor el valor
detectado en G3 (p<0.01).
Actividad Enzimática de los Complejos de la Cadena
Respiratoria (I y III):
Complejo I (Fig 1): en el grupo G2, hubo un aumento de
la actividad enzimática con respecto al grupo G1 (control,
0.04 ± 0.02) a los 10 dpi. (0.08 ± 0.02), que disminuyó
al año (0.02 ± 0.01). Semejante aumento a los 10 dpi.
(0.08 ± 0.05) y disminución al año (0.01 ± 0.001), pudo
observarse en el grupo G3 con respecto al grupo G1 (0.04
± 0.02) (p<0.05).
Complejo III (Fig 2): fue notoria la significativa
disminución de la actividad enzimática en ambos grupos
G2 y G3 a los 10 dpi (G2: 0.04 ± 3.9 x 10-03; G3: 0.04 ±
0.01), y a los 365 dpi.(G2: 0.04 ± 0.01; G3: 0.06 ± 0.02)
con respecto al grupo G1 (0.17 ± 0.03) (p< 0.0001).
Análisis de la estructura del miocardio y de las
mitocondrias en los diferentes grupos en estudio. A
los 10 dpi, el miocardio de G2 presentó infiltrados
inflamatorios y nidos de amastigotes, hechos similares y
de menor magnitud se observaron en G3. Los estudios
ultraestructurales mostraron 60% de las mitocondrias
con alteraciones tales como crestas mitocondriales
desorganizadas, poco definidas y dilatadas con aumento
de la matriz mitocondrial y disminución en el número y
mayor tamaño de las mismas en G2. Similares
alteraciones fueron encontradas en el 44% de las
mitocondrias de G3 y no se observó disminución marcada
ni en número ni en el tamaño de las mismas
(p<0.05)(Fig.3 y 4). A los 365 dpi, el miocardio de
G2 presentó fragmentación de las fibras, hecho similar y
de menor magnitud se observó en G3 además de
infiltrados inflamatorios. Los estudios ultraestructurles
mostraron 89% de las mitocondrias con alteraciones tales
como disrupción de membranas, dilatación de crestas y
disminución del número, alteraciones observadas en
ambos grupos pero con menor frecuencia en G3, donde el
58% de las mitocondrias presentaban estas alteraciones
(p<0.05)(Fig. 5 y 6).

Figura 6: Micrograf�a electr�nica de miocardio de rat�n infectado
con T. cruzi aislamiento SGO Z12 a los 365 d.p.i. Se observan
mitocondrias con diferente morfolog�a (Aumento 27800 x).
Figura 3: Micrograf�a electr�nica de miocardio de rat�n infectado
con T. cruzi cepa Tulahuen a los 10 d.p.i. Se observan m�ofibrillas y
mitocondrias con crestas desorganizadas y dilatadas (Aumento 27800
x).
Figura 4: Micrograf�a electr�nica de miocardio de rat�n infectado con
T. cruzi aislamiento SGO Z12 a los 10 d.p.i. Se observa mitocondria con
desorganizaci�n y disminuci�n de crestas (Aumento 27800 x).
Figura 5: Micrograf�a electr�nica de miocardio de rat�n infectado
con T. cruzi cepa Tulahuen a los 365 d.p.i. Se observa modificaci�n
de crestas internas (dilataci�n) (Aumento 27800 x).
Discusión
El corazón, órgano afectado en la Enfermedad de Chagas,
es altamente dependiente de la energía que le otorgan
las mitocondrias debido a su actividad contráctil y
metabólica. Las mitocondrias representan el 30% del
volumen total de los cardiomiocitos y proveen el 90% de
la energía a través de la fosforilación oxidativa generada
en las mismas. Un defecto en cualquier componente de
la cadena respiratoria puede comprometer la capacidad
de la fosforilación oxidativa y la disponibilidad de energía
para el corazón [6]. El stress oxidativo aparece en la
enfermedad de Chagas cuando el T. cruzi ingresa e
infecta un huésped. Este induce la producción de
citoquinas (TNF a, IL-1 y IL-6) que juegan un rol
importante en modular la resistencia del parásito. El ROS
(especie reactiva del oxígeno) generado tiene una acción
directa sobre la cadena respiratoria [7]. En el presente
trabajo analizamos el efecto de la infección por T. cruzi ,
en la etapa aguda, a los 10 dpi y en la crónica a los 365
dpi. En la etapa aguda (10 dpi) la actividad enzimática
del complejo I mostró una marcada tendencia al
aumento. Resultados diferentes han sido descriptos por
otros autores [3] con otras cepas de parásitos, hecho que
debe relacionarse con que la concentración de
mediadores inflamatorios son diferentes de acuerdo a la
cepa de T. cruzi [3]. El complejo III presentó una
disminución significativa en su actividad en ambos grupos
en estudio (p<0.0001), hecho descripto [3] en momentos
más avanzados de la infección aguda. Los complejos I y
III contienen grupos prostéticos (4 Fe, 4 S), que son
capaces de interactuar con especies reactivas resultando
en daño oxidativo de los componentes de la cadena
respiratoria e inactivación enzimática [7], hecho que se
relaciona con el importante infiltrado inflamatorio
descripto en los corazones de ambos grupos infectados.
La patogenia de la miocardiopatía chagásica crónica aún
es un tema de amplia discusión, aunque existen hallazgos
que intentan explicar los sucesos lentos y progresivos que
llevan a la instalación de la cardiopatía, tales como:
hallazgo del parásito o de componentes antigénicos del
mismo en el tejido cardiaco [8] que se caracteriza por la
progresión difusa a la fibrosis. En nuestro modelo
experimental la etapa crónica tardía de la infección (365
dpi); mostró: el CI con valores de actividad enzimática
con tendencia a la disminución (p<0.05) y el CIII
mantuvo su actividad significativamente disminuída,
como a lo largo de toda la infección. Estos resultados de
cadena respiratoria son similares a los descriptos por
otros autores [3] si bien estos experimentos fueron
realizados con otra cepa de T. cruzi. Cabe agregar que en
la vía mitocondrial de la apoptosis, la liberación desde la
mitocondria al citosol de proteínas proapoptósicas,
citocromo c y factor inductor de apoptosis (AIF) es un
hecho crucial en la puesta en marcha de la subsiguiente
cascada de cambios citoplasmáticos, incluída la
activación de las cisterna aspartato proteasas (caspasas)
y las endonucleasas nucleares que desencadenan la
muerte celular [9]. La disminución de la actividad de las
enzimas respiratorias mitocondriales (particularmente
del complejo III) y de la fosforilación oxidativa pueden
contribuír al comienzo de la apoptosis, hecho importante
si se tiene en cuenta que el CIII presentó una actividad
disminuida tanto en la etapa aguda como en la crónica
tardía de la infección por T. cruzi.
Nuestros resultados muestran una pérdida en la actividad
del complejo I y III en la cadena respiratoria, hecho que
indicaría que el T. cruzi produce la generación de
radicales libres provocando disfunción de la cadena
respiratoria, lo cual debe estar relacionado con los
mecanismos que generan la miocardiopatía chagásica con
compromiso diferente de acuerdo a la cepa del parásito
que infectó al huésped.
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA: (Báez A., 2007)
URL:
http://www.fac.org.ar/qcvc/llave/tl036e/tl036e.php