MEDIOS DE CULTIVO Y

TÉCNICAS DE AISLAMIENTO
DE CULTIVOS
Norleyn Navas Guzmán, M.Sc – Revisó – Luis E
Ruiz M. Sc
Microbiología
Universidad del Atlántico
OBJETIVOS

 Distinguir entre medios de cultivo químicamente

definidos y complejos.

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 Clasificar a los medios de cultivo en diferenciales
o selectivos.
 Estudiar los métodos de aislamiento y
purificación de microorganismos.

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Norleyn Navas Guzmán, M.Sc
MEDIOS DE CULTIVO
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MEDIO DE CULTIVO

 Medio de cultivo es una solución de nutrientes

para el crecimiento de microorganismos en un
laboratorio.

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Microbios que Microbios que
se introducen crecen

INOCULO CULTIVO
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES

 Algunos requerimientos nutricionales son:

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 Nitrógeno (N)
 Carbono (C)
 Elementos no metálicos: S y P
 Elementos metálicos: Ca, Na, K, Cu, Mg,
Mn, Fe y Zn
 Vitaminas
 H20
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CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

 Formas de clasificación
 Estado físico

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 Composición química

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CLASIFICACIÓN FÍSICA

 Medios líquidos o Caldos

 Medios sólidos
 Medios semisólidos

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 El medio sólido contiene AGAR
 Polisacárido extraído de las algas.
 Agente solidificante.
 Se requiere una concentración de 1.5%
 Se licua a 100˚C.
 Solidifica a 40˚C.

 Medio semisólido contiene menos de 1% de agar.

 Medio líquido: no contiene agar.

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CLASIFICACIÓN QUÍMICA

 Químicamente definidos o sintéticos

 Se conoce la composición química exacta.
 Debe contener factores de crecimiento que actúen

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como fuente de carbono y energía.

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CLASIFICACION QUIMICA

 Complejos o no sintéticos
 Compuestos de nutrientes como:
 Peptonas: fuente de proteínas.

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 Extracto de levadura, extracto de carne, vitaminas y otros
factores de crecimiento.

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USOS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

 Medios líquidos: para cultivar microorganismos y

en pruebas bioquímicas.
 Ej. Caldo nutritivo

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 Medios semisólidos: para observar movilidad de
las bacterias y en crecimiento anaeróbico.
 Ej. Medio SIM

 Medios sólidos: para aislar cultivos puros,

caracterizar colonias, pruebas bioquímicas.
 Ej. Agar nutritivo
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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS
 Disponibles en forma de polvos deshidratados
 Preparación con agua destilada
 Aguas duras contienen iones de calcio, magnesio y

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fosfatos que forman complejos insolubles.
 Disolverlos y ajustar pH.
 Esterilización en autoclave (calor húmedo)
 Temperatura: 121°C
 Tiempo: 15 minutos
 Presión: 15 psi

 Algunos medios no necesitan esterilizarse: selectividad.

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SEGUIR INDICACIONES DEL FABRICANTE
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS

 Agar Mac Conkey

 Preparar 500 ml de agar Mac Conkey

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PREPARACIÓN DE MEDIOS SÓLIDOS
 Los medios sólidos, en su forma líquida pueden
servirse en tubos para preparar:
 Agar inclinado
Agar profundo

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

 También se sirven en platos Petri y luego se dejan

solidificar.

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TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

 Diferencial
 Distinguir entre grupos de organismos relacionados tanto
morfológica como bioquímicamente.
 Se le incorporan compuestos químicos que producen un

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cambio característico en el crecimiento de la bacteria y sus
alrededores.
 Ej. EMB (Eosina azul de metileno)

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TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

 Selectivo
 Para aislar un grupo de bacteria específico.
 Se incorporan sustancias químicas que ayudan al
crecimiento de un tipo de bacterias e inhiben el crecimiento

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de otras.
 Ej. Agar sulfito bismuto. Aísla Salmonella typhi e inhibe
bacterias grampositivas.

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TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

 Enriquecimiento
 Posee nutrientes específicos para estimular el crecimiento
de ciertos microorganismos presentes en pequeñas
cantidades aumentando su número.

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 Suele ser líquido.
 Es un tipo de medio selectivo ya que favorece crecimiento
de un microorganismo particular pero no de otros.
 Ej. Caldo selenito cistina para Salmonellas.

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 Norleyn Navas Guzmán, M.Sc
TÉCNICAS DE
AISLAMIENTO DE CULTIVO
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 CULTIVO PURO
 Un cultivo puro es aquel que tiene un solo
microorganismo.
 Un cultivo mixto contiene dos o mas microorganismos.

 Una colonia es una masa visible de células microbianas

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que se originan de una sola célula.

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 OBTENCION DE CULTIVOS PUROS
 Para obtener cultivos puros se utilizan técnicas
de dilución.
 Aísla colonias discretas que pueden subcultivarse en
un cultivo puro.

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A.

 Métodos para aislar cultivos puros:

 Estriado en plato (A)
 Vertido en plato (B)
 Esparcido en plato (C)

C.
B.

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ESTRIADO EN PLATO

 Técnica cualitativa.

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ESTRIADO EN PLATO
 VERTIDO EN PLATO
 Técnica cuantitativa

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PCA

Inóculo

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ESPARCIDO EN PLATO

 Técnica cuantitativa

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REFERENCIAS
 Tortora, G. J., B. R. Funke y C. L. Case. 2007.
Introducción a la Microbiología. 9a ed. Medica
Panamericana.

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 Madigan, M. T., J. M. Martinko, and J. Parker.
2002. Brock Biology of Microorganism. 10th ed.
Prentice Hall. NJ.
 Harley, J. P. 2005. Laboratory Exercises in
Microbiology. 6th ed. Mc Graw Hill. NY.
 Rodríguez, E., M. Gamboa, F. Hernández, y J.
García. 2005. Bacteriología general: Principios
y Prácticas de Laboratorio. Editorial
25
Universidad de Costa Rica.