Receptores y señalización:
receptores de célula B y
de célula T
L
a coordinación de las funciones fisiológicas en todo
el organismo depende de la capacidad de células
individuales para detectar cambios en su ambiente y
para mostrar respuesta de manera apropiada. Una de
las principales rutas mediante las cuales una célula
interpreta su entorno es por medio de la unión de
moléculas de señales a proteínas receptoras asociadas
a la célula. Una molécula que se une a un receptor es un
ligando. La unión no covalente de un ligando a su receptor
puede inducir alteraciones en el receptor mismo, en su
estado de polimerización, o en el ambiente de ese receptor,
o en varios de estos factores a la vez; estos cambios actúan
para transmitir o transducir la señal de unión a ligando
hacia el interior de la célula, lo que lleva a alteraciones de
las funciones celulares. En el sistema nervioso las moléculas
transmisoras de señales se llamarían neurotransmisores,
y en el sistema endocrino, hormonas. En el sistema
inmunitario, las moléculas extrañas que indican la
presencia de entidades no propias son antígenos y
las moléculas pequeñas que se comunican entre las diversas
poblaciones de células inmunitarias son las citocinas. Las
citocinas especializadas que inducen quimioatracción o
quimiorrepulsión se denominan quimiocinas.
En este capítulo se proporciona una introducción general a
la unión de receptor-ligando, y a los conceptos y estrategias
a los que están por debajo de la transducción de señal. A
continuación la exposición se enfoca de manera específica en
los antígenos y receptores del sistema inmunitario
adaptativo; se introducen los receptores de célula B y de
célula T y los eventos de emisión de señales intracelulares
que se producen en el momento de unión al antígeno.
Dado que las células del sistema inmunitario están
distribuidas en todo el cuerpo —algunas residen en tejidos
fijos y otras circulan por los diversos tejidos linfoides, la
sangre y los linfáticos—, la capacidad de estas células para
comunicarse con otra y para emitir señales hacia otra por
medio de mensajeros moleculares citocinas y quimiocinas
solubles, es esencial para su función. En el capítulo 4 se
describen los eventos de transmisión de señales que se
producen cuando las citocinas y quimiocinas se unen a sus
receptores cognados (que coinciden con ellas). En el
capítulo 5 se incluye una descripción de los receptores de
reconocimiento de patrones (prr) del sistema inmunitario
innato, y de los eventos de emisión de señales iniciados por
su unión a antígeno.
65
3
Todos los eventos de señalización empie­zan
con una interacción complementaria entre un
ligando y un receptor. En esta figura se des­cribe
la interacción molecular entre las regiones
variables de una molécula de anticuerpo (las
cadenas ligera y pesada se muestran en azul y
rojo, respectivamente) y el extremo de la molécula
de hemaglutinina del virus de la influenza, que se
muestra en amarillo. [Ilustración basada en datos
de cristalografía de rayos X recabados por P.M.
Colman y W.R. Tulip de GJVH Nossal, 1993, Scientific
American 269(3):22.]
■ Interacciones receptor-ligando
■ Estrategias comunes usadas en muchas vías de
señalización
■ Vías de señalización que se encuentran con
frecuencia
■ La estructura de los anticuerpos
■ Transducción de señal en células B
■ Receptores de células T y señalización
Los conceptos esenciales que son la base de la
señalización celulares en el sistema inmunitario pueden
resumirse como sigue:
• Una señal celular es cualquier evento que da instrucciones
a una célula para que cambie su estado metabólico o proli­
ferativo.
• Las señales suelen ser generadas por la unión de un ligando
a un receptor unido a la célula complementaria.
• Una célula puede hacerse más o menos susceptible a las
acciones de un ligando al incrementar (regular en dirección
ascendente) o disminuir (regular en dirección descendente)
la expresión del receptor para este ligando.
66 sección I | Introducción

• El ligando puede ser una molécula soluble, o puede ser un
péptido, carbohidrato o lípido presentado sobre la superfi-
cie de una célula.
• Desde su punto de entrada, el ligando puede viajar largas
distancias por el cuerpo en el torrente sanguíneo o los lin-
fáticos antes de que llegue a una célula que porta el recep-
tor adecuado.
• La unión de ligando-receptor es no covalente, aunque
puede ser de afinidad bastante alta.
• La unión de ligando al receptor induce un cambio molecu-
lar en el receptor. Este cambio puede ser en la forma de una
alteración conformacional en el receptor, dimerización o
agrupación de receptor, un cambio de la ubicación del
receptor en la membrana, o una modificación covalente.
• Esas alteraciones de receptor ponen en marcha cascadas de
eventos intracelulares que incluyen la activación de enzi-
mas, y cambios de las ubicaciones intracelulares de molécu-
las importantes.
• El resultado final de la transmisión de señales celulares a
menudo, mas no siempre, es un cambio del programa de
transcripción de la célula blanco.
• A veces una célula debe recibir más de una señal por medio
de más de un receptor para que se llegue a un resultado
particular.
• La integración de las señales recibidas por una célula
ocurre en el ámbito molecular dentro de la célula receptora.
Interacciones receptor-ligando
para formar una conexión receptor-ligando biológicamente
significativa. Además, puesto que cada una de estas in­­teracciones
no covalentes sólo opera en una distancia muy corta —por lo
general alrededor de 1 Angstrom (1 Å = 10–10 m)—, una inte-
racción de alta afinidad entre receptor y ligando depende de un
“ajuste”, o grado de complementariedad, muy cercano, entre el
receptor y el ligando (figura 3-1).
¿Cómo se cuantifica la fuerza de interacciones
receptor-ligando?
Considérese un receptor, R, que se une a un ligando, L. Es posi-
ble describir su reacción de unión de acuerdo con la ecuación
que sigue:
k1
R+L RL (Ec. 3-1)
k –1
en la cual RL representa el complejo de receptor-ligando unido,
k1 es la constante de tasa hacia adelante o de asociación, y k–1 es
la constante de tasa de reversa o de disociación.
La proporción de k1/k–1 es igual a Ka, la constante de aso-
ciación de la reacción, y es una medida de la afinidad del par
de receptor-ligando. La constante de asociación se define como
la relación entre la concentración del producto de la reacción,
Ligando Receptor
NH2
Enlace de
CH2 OH ••• O C CH2 CH2
hidrógeno

CH2 CH2 NH3+ –O

Los receptores de antígeno del sistema inmunitario adaptativo C CH2 CH2 Enlace
son proteínas transmembrana situadas en la membrana plasmá- O iónico
tica. La unión del ligando a su receptor cognado normalmente
se produce por medio de interacciones no covalentes específicas CH2
entre el ligando y la porción extracelular del receptor de mem- CH CH3
brana. Aunque un linfocito individual sólo expresa un tipo de Interacciones
CH3 CH3 hidrofóbicas
receptor de antígeno, también puede expresar muchas molécu-
las receptoras diferentes para señales como citocinas y quimio- CH3 CH CH2
cinas y, por ende, una célula sana debe integrar las señales que Interacciones
provienen de todos los receptores que están ocupados en un CH CH3 CH3 CH de Van der Waals
momento dado. CH CH3

La unión de receptor-ligando ocurre O

por medio de múltiples enlaces no covalentes
La superficie de una molécula de receptor se une a la superficie de
su ligando complementario por medio de los mismos tipos
de enlaces químicos no covalentes que usan las enzimas para
unirse a sus sustratos, los cuales comprenden enlaces de hidró-
geno y enlaces iónicos, e interacciones hidrofóbicas y Van der
Waals. La clave para que la interacción receptor-ligando sea
significativa es que la suma total de estas interacciones de unión
se mantengan juntas, con suficiente energía de unión y durante
suficiente tiempo, las dos superficies que están interactuando, a fin
de permitir que una señal pase del ligando a la célula que porta el
receptor. Dado que estas interacciones no covalentes son indivi-
dualmente débiles, se requieren muchas interacciones de ese tipo
CH2 C +H
3N CH2 Enlace iónico
O–
FigurA 3-1  La unión de receptor-ligando obedece las
reglas de la química. Los receptores se unen a ligandos usando toda
la gama de interacciones de enlace no covalente, incluso enlaces iónicos
y de hidrógeno, e interacciones de Van der Waals e hidrofóbicas. Para que
se emitan señales, los enlaces deben ser suficientemente fuertes como
para mantener el ligando y el receptor en estrecha proximidad durante
suficiente tiempo como para que se inicien eventos torrente abajo. En
la señalización de células B y T, las interacciones activadoras también
requieren agrupación de receptor. En un ambiente acuoso, las interaccio-
nes no covalentes son débiles y dependen de la complementariedad
estrecha de las formas del receptor y el ligando.
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
[RL], y el producto de las concentraciones de reactantes [R],
multiplicado por [L]. Por consiguiente, las unidades de afinidad
son M–1. Mientras más alta es la Ka, más alta es la afinidad de la
interacción.
[RL]
Ka = (Ec. 3-2)
[R][L]
El recíproco de la constante de asociación, la constante de diso-
ciación, Kd, a menudo se usa para describir las interacciones
entre receptores y ligandos. Se define como:
[R][L]
Kd = (Ec. 3-3)
[RL]
Las unidades de la constante de disociación están en molaridad
(M). La inspección de esta ecuación revela que cuando la mitad
de los sitios receptores están ocupados con ligando —es decir,
[R] = [RL]—, la Kd es igual a la concentración de ligando libre
[L]. Mientras más baja es la Kd, más alta es la afinidad de la
interacción.
Para propósitos de comparación, es útil considerar que los
valores de Kd de muchas interacciones enzima-sustrato se ubi-
can en el rango de 10–3 a 10–5 M. Los valores de Kd de interac-
ciones antígeno-anticuerpo al principio de una respuesta
inmunitaria normalmente son del orden de 10–4 a 10–5 M; sin
embargo, puesto que los anticuerpos generados en el momento
de la estimulación con antígeno son mutados y seleccionados en
el transcurso de una respuesta inmunitaria, las interacciones
antígeno-anticuerpo en etapas tardías de una respuesta inmuni-
taria pueden alcanzar una Kd tan baja como de 10–12 M. En
estas condiciones, si un antígeno está presente en solución a una
concentración tan baja como de 10–12 M, la mitad de los sitios
de unión a anticuerpo disponibles estará ocupada. Ésta es una
interacción extraordinariamente fuerte entre receptor y ligando.
Las interacciones entre receptores y ligandos
pueden ser multivalentes
Muchos receptores biológicos, incluso receptores de célula B,
son multivalentes —es decir, tienen más de un sitio de unión a
ligando por cada molécula—. Cuando tanto los receptores
como los ligandos son multivalentes —como ocurre, por ejem-
plo, cuando un receptor de inmunoglobulina bivalente sobre la
superficie de una célula B se une a dos antígenos repetidos idén-
ticos sobre una superficie bacteriana—, la interacción de unión
general entre la célula bacteriana y el receptor de célula B está
notoriamente aumentada en comparación con una interacción
similar, pero univalente. De esta manera, múltiples interaccio-
nes receptor-ligando concurrentes aumentan la fuerza de unión
entre dos superficies celulares. Note que la unión por medio
de dos sitios receptores idénticos a dos ligandos idénticos sobre
la misma célula puede ser un poco menos de dos veces tan firme
como la unión por medio de un sitio receptor único. Esto se
debe a que la unión de ambos sitios receptores a dos ligandos
sobre un antígeno único puede tensar un poco las característi-
cas geométricas de la unión en uno de los sitios o en ambos y,
por ende, interferir un poco con el “ajuste” de las interacciones
individuales.
Gran parte del beneficio de la multivalencia depende del
hecho de que las interacciones de unión no covalente son inhe-
| Capítulo 3 67
rentemente reversibles; el ligando pasa parte del tiempo unido
al receptor, y parte del tiempo en un estado no unido, o “inac-
tivo” (figura 3-2a). Cuando está involucrado más de un sitio de
unión, es menos probable que todos los sitios receptores estén
simultáneamente en el estado “inactivo” y, por ende, que el
receptor libere el ligando (figuras 3-2b y 3-2c).
El término avidez se usa para describir la fuerza general de
las interacciones de unión colectivas que ocurren durante unión
multivalente. Durante las fases tempranas de la respuesta inmu-
nitaria adaptativa a antígenos multivalentes, las células B secre-
tan anticuerpo IgM, que tiene 10 sitios de unión a antígeno
disponibles por cada molécula. Por ende, la IgM tiene capaci-
dad de unión a antígenos a una magnitud importante desde el
punto de vista biológico, incluso si la afinidad de cada sitio de
unión individual por su antígeno es baja, debido a la avidez de la
interacción antígeno-anticuerpo entera. De igual modo, cuando
un receptor unido a célula se une a un ligando unido a célula,
su interacción puede ser funcionalmente multivalente, incluso
si las moléculas receptoras individuales son monovalentes, porque
múltiples moléculas receptoras pueden agruparse en la mem-
brana celular y participar en la interacción receptor-ligando.
Además, otras interacciones con correceptor también pueden
contribuir a la avidez general de la unión entre una célula y su
antígeno (véase más adelante).
La afinidad de las interacciones receptor-ligando puede
medirse mediante técnicas como diálisis de equilibrio o reso-
nancia de plasmón de superficie (spr). Estos dos métodos se
describen en el capítulo 20.
a)
“Activo”
“Inactivo”
FigurA 3-2  Unión monovalente y bivalente. a) Unión
monovalente. El receptor existe en equilibrio con su ligando, represen-
tado aquí como un círculo. Parte del tiempo está unido (la unión se
encuentra en el estado “activo”), y parte del tiempo está no unido (la
unión se encuentra en el estado “inactivo”). La proporción del tiempo que
se pasa en el estado “activo” en contraposición con “inactivo” determina la
afinidad de la interacción de receptor-ligando, y se relaciona con la fuerza
de la suma de las interacciones de unión no covalente entre el receptor
y el ligando. (Continúa)
68 sección I | Introducción
b)
FigurA 3-2  (continuación) b) Unión bivalente. Aquí se visua-
liza un receptor bivalente, que se une a dos sitios en un ligando multi-
valente único. Esto podría representar, por ejemplo, una molécula de
anticuerpo bivalente que se une a una bacteria que tiene antígenos
repetidos sobre su superficie. En esta representación, ambos sitios están
ocupados. c) En esta representación, el receptor bivalente se ha separado
La expresión de receptor y ligando puede variar en
el transcurso de una respuesta inmunitaria
Una de las características más notorias de la lógica molecular de
las respuestas inmunitarias es que los receptores para algunos
factores de crecimiento y citocinas sólo se expresan según se
re­­quiere. Por ejemplo, casi todos los linfocitos expresan una
forma de baja afinidad, heterodimérica (de dos cadenas), del
receptor para la citocina interleucina-2 (IL-2), que inicia una
señal que promueve la proliferación de linfocitos (esta citocina
y su receptor se cubren con mayor detalle en el capítulo 4). Esa
forma de baja afinidad del receptor es incapaz de unirse a la IL-2
a concentración fisiológica de citocina. Con todo, cuando un
linfocito es activado por unión a antígeno, la señal que proviene
del receptor unido a antígeno causa un incremento de la expre-
sión de una tercera cadena del receptor de IL-2 en la superficie
celular (figura 3-3). La adición de esta tercera cadena convierte
la forma de baja afinidad del receptor de IL-2 en una forma de
alta afinidad, capaz de responder a la concentración de citocina
que se encuentra en los órganos linfoides. El corolario funcional
de esto es que sólo los linfocitos que ya se han unido a antígeno
y han sido estimulados por esa unión, tienen receptores de
citocina de afinidad suficientemente alta para responder a la
concentración fisiológica de citocina. Al esperar hasta que ha
interactuado con su antígeno específico antes de expresar el re­­
ceptor de citocina de alta afinidad, el linfocito conserva energía
y evita el inicio accidental de una respuesta inmunitaria contra
un antígeno irrelevante.
Las concentraciones locales de citocinas y otros
ligandos pueden ser en extremo altas
Al considerar las interacciones entre receptores y sus ligandos,
es importante considerar el ambiente anatómico en el cual están
ocurriendo estas interacciones. Los linfocitos y las células presen-
tadoras de antígeno que participan en una respuesta inmunita-
c)
momentáneamente de uno de sus sitios, pero aún está fijo al ligando
con el otro. Las proteínas grandes, como los anticuerpos, vibran y “res-
piran” continuamente, lo que da lugar a esa cinética de activo-inactivo.
La unión bivalente o multivalente ayuda a asegurar que cuando un
sitio libera momentáneamente el ligando, la interacción no se pierde
por completo, como se pierde en la parte a).
ria pasan cantidades importantes de tiempo juntos por medio
de múltiples interacciones receptor-ligando. Las señales de cito-
cina liberadas por una célula T, por ejemplo, son recibidas por
una célula presentadora de antígeno unida en la interfaz entre
las células, antes de que la citocina haya tenido tiempo para
difundirse hacia los líquidos tisulares. La secreción de citocinas
hacia exactamente el sitio donde se necesitan es facilitada por la
capacidad de la señalización de receptor de antígeno para indu-
cir redistribución del centro organizador de microtúbulos
(mtoc) dentro de la célula T activada. A su vez, la reorienta-
ción del mtoc causa la redistribución de los orgánulos secre-
tores (el cuerpo de Golgi y vesículas secretoras) dentro del
citoplasma de la célula T, de modo que las citocinas sintetizadas
por la célula T son secretadas en la dirección del receptor de
célula T que, a su vez, está unido a la célula presentadora de antí-
geno. El término técnico para este fenómeno es la redistribución
vectorial (direccional) del aparato secretor. De este modo, las cito-
cinas son secretadas de manera directa hacia el espacio entre la
célula T activada y la célula presentadora de antígeno.
La redistribución vectorial del aparato secretor en células
dendríticas presentadoras de antígeno también ocurre en el
momento de interacción con células T específicas para antí-
geno. Esto asegura que las citocinas, como la IL-12, que son
secretadas por células dendríticas, sean suministradas con efi-
ciencia a las células T que reconocen antígeno. La figura 3-4
muestra la secreción direccional de la citocina IL-12 por una
célula dendrítica presentadora de antígeno que participa en la
activación de una célula T.
Las células efectoras del sistema inmunitario, como las célu-
las B, también son capaces de presentar antígenos sobre su
superficie celular para reconocimiento por células T auxiliares.
Una célula B que ha reconocido de manera específica un antí-
geno por medio de su propio receptor procesará el antígeno y
expresará una concentración en particular alta de los péptidos
antigénicos unidos a moléculas del complejo mayor de histo-
compatibilidad (mhc) sobre su superficie. Por ende, una célula T
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
FigurA 3-3  La expresión de algunos receptores de cito-
cina está regulada en dirección ascendente después de
estimulación celular. Leucocitos teñidos con dapi, un colorante
que detecta dna (azul), no se trataron (izquierda) o se estimularon con
el mitógeno de células T humanas fitohemaglutinina (derecha). En el
auxiliar, unida a un antígeno presentado sobre la superficie de
una célula B, suministrará una concentración alta de citocinas
directamente a una célula B activada, específica para antígeno.
Por consiguiente, la concentración local de citocinas en las inter-
fases celulares puede ser en extremo alta, mucho más alta que en
los líquidos tisulares en general.
Estrategias comunes usadas
en muchas vías de señalización
Una vía de transducción de señal es la ruta molecular mediante
la cual una interacción ligando-receptor se traduce en un cam-
bio bioquímico dentro de la célula afectada. La comunicación
del mensaje del ligando a la célula es iniciada por la comple-
mentariedad de estructura entre el ligando y su receptor, que da
| Capítulo 3 69
momento de la estimulación, la cadena alfa del receptor de IL-2 (IL-2Rα)
(amarillo) está regulada en dirección ascendente, lo que aumenta la
afinidad del receptor de IL-2 por la IL-2. En el momento de estimulación
con antígeno se observa una regulación ascendente similar del IL-2Rα.
[Cortesía de R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA.]
lugar a una interacción de unión de fuerza y duración suficien-
tes para desencadenar un cambio bioquímico en el receptor, o
en sus moléculas asociadas, o en ambos. A su vez, este cambio
bioquímico puede causar una diversa gama de consecuencias bio-
químicas en la célula (figura 3-5, Perspectiva general). Los
términos torrente arriba y torrente abajo a menudo se usan para
describir elementos de vías de señalización. Los componentes
torrente arriba de una vía de emisión de señales son los que
están más cerca del receptor; los componentes torrente abajo
son los que están más cerca de las moléculas efectoras que
determinan el resultado de la vía; por ejemplo, los factores de
transcripción o enzimas cuyas actividades son modificadas en
el momento en que se recibe la señal.
Pese a lo discrepantes y complejas que algunas de estas
vías de señalización pueden ser, muchas comparten caracte-
rísticas. En esta sección, para proporcionar un marco para
analizar las vías individuales empleadas por las células del sis-
FigurA 3-4  Secreción polarizada de IL-12 (rosado) por
células dendríticas (azul) en la dirección de una célula T
unida (verde). La micrografía con aumento más alto muestra la secre-
ción de paquetes de IL-12 a través de la membrana de la célula dendrí-
tica. [J. Pulecio et al., 2010, Journal of Experimental Medicine 207:2,719.]
 70 sección I | Introducción

Perspectiva general 3-5

Conceptos en la señalización de linfocitos

Correceptor
Ligando

Receptor
Moléculas asociadas Tirosina cinasa
a receptor asociada a receptor

PIP2
PIP2 PIP3 DAG PIP3 DAG DAG

Ras-GRP PKC
PLCγ
PI3 SOS
cinasa IP3 P P
P
Intercambio
P P de GDP/GTP
P
Liberación de Ca2+ P Adaptador
Adaptador
desde el retículo Fosforilación
P P
endoplasmático Ras

Activación de calmodulina Ubiquitinación

y calcineurina P y destrucción
NF-κB IκB
Cascada de la
P P MAP cinasa
NFAT

Citoplasma
NFAT AP-1 NF-κB

Núcleo
Activación de gen

La unión de ligando a receptores sobre una célula induce diversos
efectos torrente abajo, muchos de los cuales culminan en activación de
factor de transcripción. Aquí se ilustran algunas de las vías que se abor-
dan en este capítulo. La unión del receptor a ligando induce agrupa-
ción de receptores y moléculas emisoras de señales hacia regiones de
la membrana denominadas balsas de lípidos (rojo). La unión de recep-
tor a ligando puede acompañarse de unión de correceptores asociados
a sus propios ligandos, y causa la activación de tirosina cinasas asocia-
das con receptor, que fosforilan proteínas asociadas con receptor. La
unión de moléculas adaptadoras torrente abajo a los grupos fosfato
sobre proteínas adaptadoras crea un andamio en la membrana que
permite entonces la activación de diversas enzimas, entre ellas fosfatasa
Cγ (PLCγ), PI3 cinasa, y otras tirosina cinasas. PLCγ divide el fosfatidil
inositol bifosfato (PIP2) para dar trifosfato de inositol (IP3), que interactúa
con receptores sobre vesículas del retículo endoplasmático para causar
la liberación de iones calcio; éstos a su vez activan la calcineurina, que
desfosforila el factor de transcripción nfat, lo que le permite entrar al
núcleo. El diacilglicerol (dag), que permanece en la membrana des-
pués de división de PIP2 por PLCγ, se une a, y activa, la proteína cinasa
C (pkc), que fosforila y activa enzimas que llevan a la destrucción del
inhibidor del factor de transcripción NF-κB. Con la liberación del inhibi-
dor, NF-κB entra al núcleo y activa una serie de genes importantes para
el sistema inmunitario. La unión de la proteína adaptadora Ras-GRP al
complejo de emisión de señales permite la unión y la activación del
factor de intercambio de nucleótido guanina (gef ), Son of Sevenless
(sos) que, a su vez, inicia la cascada de fosforilación de las vías de la
MAP cinasa. Esto da pie a la entrada de un tercer grupo de factores de
transcripción al núcleo, y activación del factor de transcripción AP-1.
(Muchos detalles que se explican en el texto se han omitido de esta
figura en aras de la claridad.)
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
tema inmunitario, se describen algunas de las estrategias com-
partidas por muchas vías de emisión de señales. En la sección
que sigue se proporcionan tres ejemplos de vías de emisión de
señales usadas por el sistema inmunitario, así como por otros
sistemas.
La unión a ligando puede inducir cambios
conformacionales en el receptor, o agrupación del
receptor, o ambos
El primer paso necesario para la activación de una vía de seña-
lización es que el sitio de unión del ligando a sus receptores de
alguna manera induce un cambio físico o químico en el recep-
tor mismo, o en moléculas asociadas a él. En el caso de muchos
receptores de factor de crecimiento, la unión a ligando induce
un cambio conformacional en el receptor que da lugar a dime-
rización de receptor (figura 3-6). Puesto que las regiones cito-
plasmáticas de muchos receptores de factor de crecimiento
tienen actividad de tirosina cinasa, esto da lugar a la fosforila-
ción recíproca de las regiones citoplasmáticas de cada una de las
moléculas receptoras por su pareja de dimerización.
Otros receptores pasan por cambios conformacionales en el
momento de unión a ligando, que dan lugar a órdenes más altos
de polimerización de receptor. Los receptores sobre células B
son formas unidas a membrana de las moléculas de anticuerpo
que la célula B finalmente secretará. En la superficie de células
B vírgenes hay dos tipos de receptores de antígeno, que se deno-
minan inmunoglobulinas M y D (IgM e IgD). Estudios estruc-
turales de la forma IgM del receptor han revelado que la unión
a ligando induce un cambio conformacional en una parte no de
unión a antígeno del receptor, cerca de la membrana, que faci-
lita la agregación de receptores hacia complejos multiméricos, y
su movimiento subsiguiente hacia regiones de la membrana
especializadas. De modo similar, los receptores de célula T se
Factor de
crecimiento
Citosol P P
P P
Dominio
de tirosina P P
cinasa P P
Tirosina cinasas Actividad de cinasa estimulada
receptoras inactivas por fosforilación cruzada
FigurA 3-6   Algunos factores de crecimiento inducen
dimerización de sus receptores, seguida por fosforilación de
tirosina recíproca de las moléculas de receptor. Muchos recep-
tores de factor de crecimiento poseen actividad de tirosina cinasa en sus
regiones citoplasmáticas. La dimerización del receptor ocurre en el
momento de unión del ligando relevante y permite fosforilación recí-
proca en múltiples sitios de las cadenas de receptor dimerizadas, lo que
inicia la cascada de señalización. Como un ejemplo, el factor de células
madre se une a su receptor, c-kit (CD117), sobre la superficie de
células del estroma de la médula ósea.
| Capítulo 3 71
agrupan en el momento de unión a antígeno. Persisten las con-
troversias respecto a si pasan o no por un cambio conformacio-
nal en el momento de unión a antígeno.
Algunos receptores requieren moléculas asociadas
a receptor para emitir una señal de activación
celular
En contraste con los receptores de factor de crecimiento, que
tienen actividades enzimáticas inducibles integradas en la
molécula de receptor misma, los receptores de célula T y B tie-
nen componentes citoplasmáticos muy cortos y, por ende, nece-
sitan ayuda de moléculas asociadas a receptor intracelulares
para desencadenar transducción de señal. El heterodímero Igα/
Igβ (CD79α/β) en células B, y el complejo CD3 hexamérico en
células T, están estrechamente asociados con sus receptores de
antígeno respectivos, y se encargan de transmitir al interior de la
célula las señales iniciadas por unión a ligando (figura 3-7). Estos
dos complejos tienen un par de colas citoplasmáticas largas que
contienen múltiples copias del motivo de activación de inmu-
norreceptor basado en tirosina (Immuno-receptor Tyrosine
Activation Motif [itam]). Los itam son motivos de secuen-
cia recurrentes que se encuentran en muchas proteínas emiso-
ras de señales dentro del sistema inmunitario, que contienen
tirosinas que quedan fosforiladas después de transducción de
señal por medio del receptor asociado. La fosforilación de resi-
duos de itam-tirosina a continuación permite el acoplamiento
de moléculas adaptadoras, lo que facilita el inicio de la cascada de
señalización.
Otras moléculas asociadas con los receptores de antígeno de
célula B o T también pueden interactuar con el antígeno o con
otras moléculas sobre la superficie del agente patógeno. Por
ejemplo, en el caso de las células B, el complejo de CD19/CD21
se une a moléculas de complemento fijas de manera covalente al
antígeno (figura 3-7a). De modo similar, moléculas de CD4 y
CD8 sobre células T se unen a regiones no polimórficas de la
molécula de mhc que presenta antígenos, y ayudan en la trans-
ducción de señal (figura 3-7b). Por último, el correceptor CD28
sobre células T vírgenes debe interactuar con sus ligandos CD80
(B7-1) y CD86 (B7-2) para que ocurra activación completa de
célula T.
La agrupación de receptor inducida por ligando
puede alterar la ubicación de receptor
La agrupación inducida por ligando de receptores de célula B y
T lentifica las tasas de su difusión dentro de los planos de sus
respectivas membranas celulares, y facilita su movimiento hacia
regiones especializadas de la membrana del linfocito conocidas
como balsas de lípidos. Estas balsas son regiones de la mem-
brana ricas en colesterol y en esfingolípidos, insolubles en deter-
gente, muy ordenadas, pobladas por muchas moléculas cruciales
para la emisión de señales de receptor. El movimiento de recep-
tores y correceptores hacia las balsas de lípidos las hace suscepti-
bles a la acción de enzimas asociadas con esas balsas. En la
figura 3-8 se muestra cómo la tirosina cinasa asociada a balsa
Lyn inicia la cascada de emisión de señales de célula B al fosfo-
rilar las moléculas asociadas con receptor Igα e Igβ. La tirosina
cinasa Lck desempeña una función similar en la cascada de
señalización de tcr.
72 sección I | Introducción

C3d
Antígeno
CD21

mIgM CD4 MHC CD80 o

clase II CD86

Péptido
CD19 TCR
CD81 CD28
δ ε γ ε
(TAPA-1) ζ ζ

ss

lgα/lgβ
(CD79α,β)
ITAM
CD3

FigurA 3-7  Los receptores de células tanto B como T
requieren moléculas asociadas a receptor y correceptores
para la transducción de señal. a) Los receptores de célula B
requieren Igα/Igβ para transmitir su señal. El correceptor CD21, que está
asociado con CD19, se une a la molécula de complemento C3d, que se
une de manera covalente al antígeno. La interacción entre CD21 sobre
la célula B, y C3d asociada con el antígeno, mantiene el antígeno en
contacto con el receptor de célula B, incluso cuando la unión de antí-
geno-BCR es relativamente débil. Las bandas de color amarillo sobre las
re­giones citoplasmáticas de las moléculas asociadas a receptor indican
motivos de activación de inmunorreceptor basados en tirosina (Immuno-
receptor Tyrosine Activation Motifs [itam]). La fosforilación de residuos
tirosina en estos motivos permite la unión de moléculas adaptadoras
torrente abajo, y facilita la transducción de señal desde los receptores.
Tanto CD19 como Igα/Igβ portan itam intracitoplasmáticos y, junto
con CD81 (TAPA-1), participan en eventos de señalización torrente
abajo. b) Los receptores de célula T usan CD3, un complejo de cadenas
δε, γε, y un par de moléculas de cadena ζ o un par de ζν. Los correcep-
tores CD4 y CD8 se unen a la región no polimórfica de las moléculas del
mhc clase II o clase I, respectivamente; esta figura ilustra la unión de
CD4 a mhc clase II. Dicha unión asegura la conexión entre la célula T y
la célula presentadora de antígeno, e inicia también una señal por
medio de CD4/8. El correceptor CD28 proporciona otra señal en el
momento de unión a CD80 o CD86. La unión de CD28 a moléculas
coestimuladoras sobre células presentadoras de antígeno se requiere
para estimulación de células T vírgenes, pero no de memoria.

Antígeno

BCR

lgα/lgβ Balsa
+ Antígeno

Lyn Lyn – Antígeno Lyn

P P
BLNK P P BLNK

Syk Syk

Traducción Internalización
de señal de receptor

FigurA 3-8  Regiones balsa de lípidos dentro de membra-
nas. En células B en reposo, el receptor de célula B (bcr) es excluido de
las balsas de lípidos, que son regiones de la membrana altas en coles-
terol y ricas en glicoesfingolípidos. La balsa está poblada por moléculas
emisoras de señales de tirosina cinasa, como Lyn. En el momento de
unión a antígeno, el bcr se multimeriza (forma agrupaciones), y los
cambios en la conformación del bcr desencadenados por su multime-
rización aumentan la afinidad del bcr por los lípidos de la balsa. El
movimiento del bcr hacia la balsa lo pone en contacto con la tirosina
cinasa Lyn, que fosforila las proteínas asociadas a receptor Igα/Igβ lo
que, así, inicia la cascada de activación. Un movimiento similar de tcr
hacia balsas de lípidos ocurre en el momento de activación de célula T.
[Adaptado de S. K. Pierce, 2002, Nature Reviews Immunology 2:96.]
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T | Capítulo 3 73

Inactiva Activa constitutiva, v-src, induce una forma de cáncer, el fibrosarcoma,

SH2 SH2
P Las cinasas de la familia Src son importantes en las etapas
pY508
Y397
Y508
P pY397
Cinasa Cinasa
FigurA 3-9  Activación de cinasas de la familia Src. Las
cinasas de la familia Src son mantenidas en una configuración cerrada,
inactiva, por la unión de un residuo de tirosina inhibidor fosforilado
(pY508 en este ejemplo) con un dominio SH2 en la misma proteína. La
desfosforilación de esta tirosina abre la molécula, lo que permite que el
sustrato tenga acceso al sitio enzimático. La abertura de la cinasa también
permite la fosforilación de una tirosina interna diferente (pY397), que
estimula más la actividad de la cinasa Src.
La fosforilación de tirosina es un paso temprano en
muchas vías de señalización
Muchas vías de emisión de señales, en particular las que emiten
señales para el crecimiento de células o la proliferación de estas
últimas, se inician con un evento de fosforilación de tirosina.
Muchas de las tirosina cinasas que inician la activación de bcr
y tcr pertenecen a la familia de enzimas conocida como cinasas
de la familia Src. Las cinasas de la familia Src (que en idioma
inglés se pronuncia “sark”) tienen homología con un gen, c-src,
que se identificó por vez primera en aves. Se mostró que un
virus del sarcoma Rous homólogo de estos genes, activo de manera
en aves. El hecho de que una mutación sencilla en esta forma viral
de un gen que codifica para tirosina cinasa podría dar lugar a la
aparición de un tumor fue el primer indicio de que los genes que
codifican para tirosina cinasa pueden ser importantes en la regu-
lación de la proliferación celular y, de hecho, en muchos aspectos
de la señalización celular.
más tempranas de activación de células tanto T como B. Lck y
Fyn son cruciales para la activación de células T, y Lyn, Fyn y Blk
desempeñan los papeles iniciadores correspondientes en células B.
Puesto que la activación inadvertida de estas enzimas puede
llevar a proliferación incontrolada —un precursor para la forma-
ción de tumor—, no sorprende que su actividad esté estrecha-
mente regulada de dos maneras distintas pero interconectadas.
Las enzimas tirosina cinasa de la familia Src inactivas existen
en una conformación cerrada, en la cual una tirosina fosforilada
está estrechamente unida a un dominio SH2 (dominio de homo-
logía de SH2 [Src homology 2]) interno (figura 3-9, cuadro 3-1).
(Los dominios SH2 en proteínas se unen a residuos de tirosina
fosforilados.) Mientras la tirosina inhibitoria esté fosforilada, la
cinasa de la familia Src permanece plegada sobre sí misma e inac-
tiva. En linfocitos, la enzima tirosina cinasa Csk se encarga de
mantener la fosforilación de la tirosina inhibitoria. Aun así, en el
momento de la activación celular, una tirosina fosfatasa elimina
el fosfato inhibidor, y la cinasa de la familia Src se abre hacia una
conformación parcialmente activa. Así, el evento iniciador en la
transducción de señal a menudo es el movimiento de la tirosina
cinasa hacia una región de la célula o la membrana poblada por
una fosfatasa activadora, apropiada, y distante de la cinasa inhibi-
dora Csk. A continuación se logra actividad completa cuando la
cinasa de la familia Src se fosforila a sí misma en un segundo resi-
duo de tirosina activador.

cuadro 3-1 Dominios seleccionados de proteínas adaptadoras y sus motivos blanco de unión
Dominio de proteína adaptadora Especificidad de unión de dominio adaptador

Homología de Src 2 (SH2) Fosfotirosina específica (pY) —que contiene motivos en el contexto de tres a seis aminoácidos ubicados en
posición carboxilo terminal a la pY (se requiere una arginina invariable en el dominio SH2 para unión a pY)
Homología de Src 3 (SH3) Secuencias ricas en prolina en una hélice de poliprolina zurda (los residuos de prolina por lo
general van precedidos por un residuo alifático)
Unión a fosfotirosina (PTB) Motivos peptídicos que contienen pY (DPXpY, donde X es cualquier aminoácido) en el contexto
de secuencias amino terminal
Homología de pleckstrina (PH) Fosfoinositidas específicas, que permiten que proteínas que contienen PH respondan a la
generación de segundos mensajeros lípidos generados por enzimas como la PI3 cinasa
WW Se une a secuencias ricas en prolina (su nombre se deriva de dos residuos de triptófano [W]
conservados, con 20 a 22 aminoácidos de separación)
Secuencias ricas en cisteína (C1) Diacilglicerol (DAG) (en asociación con DAG, el dominio C1 muestra afinidad aumentada por la mem-
brana lipídica, lo que promueve el reclutamiento de proteínas que contienen C1 hacia la membrana)
Unión a tirosina cinasa (TKB) Dominio de unión a fosfotirosina divergente de los dominios SH2 y PTB típicos (consta de tres
motivos estructurales [un fascículo de cuatro hélices, una mano EF, y un dominio SH2 divergente],
que juntos forman un dominio de reconocimiento de fosfoproteína integrado)
Rico en prolina Tramos de secuencia de aminoácidos ricos en residuos de prolina, capaces de unirse a dominios
modulares, entre ellos dominios SH3 y WW
Motivos de unión a 14-3-3 Residuos de serina fosforilados en el contexto de uno de los dos motivos RSXpSXP y RXXXpSXp

[Según G.A. Koretsky y P.S. Myung, 2001, Nature Reviews Immunology 1:95]
74 sección I | Introducción
La fosforilación de tirosina puede desencadenar cambios en
una vía de emisión de señales de más de una manera. A veces,
la fosforilación de un residuo de tirosina puede inducir un cam-
bio conformacional en la proteína fosforilada misma, que puede
echar a andar esta actividad enzimática o desactivarla. De ma­­
nera alternativa, la fosforilación de tirosina de componentes de
un complejo receptor puede permitir que otras proteínas se unan
a él por medio de sus dominios SH2 o de unión a fosfotirosina
(cuadro 3-1), lo que altera sus ubicaciones dentro de la célula.
Note que una tirosina fosforilada a menudo se denomina un
residuo “pY”.
Las proteínas adaptadoras recolectan miembros
de vías de señalización
Es fácil imaginar el citoplasma como un océano de macromo-
léculas, con poca estructura u organización, en el cual las proteí-
nas se golpean una a otra a una frecuencia que sólo depende de
sus concentraciones citoplasmáticas generales. De cualquier
modo, nada podría estar más lejos de la verdad. El citoplasma
de hecho es un ambiente intrincadamente organizado, en el cual
disposiciones tridimensionales de proteínas se forman y disper-
san de una manera dirigida por eventos de emisión de señales
celulares. Muchas de estas interacciones reversibles entre pro-
teínas están mediadas por proteínas adaptadoras, así como por
interacciones entre miembros de vías de señalización con com-
ponentes del citoesqueleto.
Las proteínas adaptadoras carecen de función enzimática o
de receptor intrínseca; tampoco actúan como factores de trans-
cripción. Su función es unirse a motivos o dominios específicos
sobre proteínas o lípidos, enlazar uno al otro; poner sustratos al
alcance de enzimas, y en general mediar la redistribución de
moléculas dentro de la célula. El cuadro 3-1 lista varios domi-
nios adaptadores representativos, junto con sus especificidades
de unión. Las proteínas adaptadoras se caracterizan por tener
múltiples dominios de superficie, cada uno de los cuales posee
una especificidad de unión precisa para una estructura molecular
+ NH3
CH2 CH COO − + +
H3N
OH
Tirosina Serina
Tirosina
cinasa
+ NH3
CH2 CH COO −
+
H3N
OPO32−
Fosfotirosina 3-Fosfoserina
FigurA 3-10  Tirosina, serina y treonina fosforiladas.
particular. En muchas vías de emisión de señales, múltiples pro­
teínas adaptadoras pueden participar en la formación de un
andamio de proteína que proporciona un marco estructural
para la interacción entre miembros de una cascada de emisión
de señales. Los dominios en particular comunes en proteínas
adaptadoras que funcionan en la señalización del sistema inmu-
nitario son el dominio SH2 que se une a residuos de tirosina
fosforilados (pY), el dominio SH3 que se une a agrupaciones de
residuos de prolina, y el dominio de homología de plecstrina
(PH) que se une a fosfatidil inositol trifosfato en la membrana
plasmática.
La unión de proteínas adaptadoras puede simplemente poner
en contacto moléculas entre sí, de modo que, por ejemplo, una
enzima puede actuar sobre su sustrato. De modo alternativo, la
unión de una proteína adaptadora puede inducir un cambio
conformacional, que a su vez puede estabilizar la pareja de
unión, desestabilizarla o activarla.
La transducción de señal puede inducir cambios conforma-
cionales en proteínas que a su vez dan lugar a descubrimiento
de uno o más dominios de proteína con afinidad específica por
otras proteínas. Esas interacciones pueden ser homotípicas (in­­
teracciones entre dominios idénticos) o heterotípicas (interac-
ciones entre dominios diferentes).
La fosforilación sobre residuos de serina
y treonina también es un paso común en
vías de señalización
En tanto la fosforilación de tirosina suele observarse al inicio de
una cascada de emisión de señales, la fosforilación de proteínas
en residuos de serina y treonina (figura 3-10) tiende a ocurrir en
pasos más avanzados en la activación celular. La fosforilación
de serina o treonina puede servir para activar una enzima fos-
forilada, para inducir la interacción de una proteína fosforilada
con un grupo diferente de proteínas, para alterar la ubicación
de la proteína dentro de la célula, para proteger la proteína
contra destrucción o, en algunos casos importantes, para con-
COO − COO −
CH H 3N CH
CH2OH CH
H 3C OH
Treonina
Serina/treonina
cinasas
COO −
− +
COO H3N CH
CH CH
CH2O PO32− H 3C OPO32−
Fosfotreonina
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
vertir la proteína fosforilada en un blanco para la destrucción
proteosomal.
La fosforilación de fosfolípidos de membrana
recluta proteínas que contienen dominio PH hacia
la membrana celular
El fosfolípido fosfatidilinositol bifosfato (Phosphatidyl Inosi-
tol bis-Phosphate [PIP2]) es un componente de la cara interna
de membranas plasmáticas de eucariontes. No obstante, el PIP2
es mucho más que un fosfolípido estructural; también participa
de manera activa en la emisión de señales celulares. La enzima
fosfatidil inositol-3-cinasa (Phosphatidyl Inositol-3-kinase
[PI3 cinasa]), activada en el transcurso de la señalización por
medio de muchos receptores inmunitarios, fosforila el PIP2
para formar fosfatidil inositol trifosfato (Phosphatidyl Inosi-
tol tris-Phosphate [PIP3]) (figura 3-11). El PIP3 permanece en
la membrana y sirve como un sitio de unión para proteínas que
portan dominios de homología a plecstrina (PH) (cuadro 3-1).
Así, este evento de fosforilación de lípido sirve para mover pro-
teínas desde el citosol hacia la membrana y proporcionarles un
O O
O O
O intracelular alto.
O− P O
OH
O OH
O−
O O
O P O citoplasmática de iones Ca2+. La concentración de Ca2+ en la
O P O−
O−
O −
FigurA 3-11 El PIP2 puede ser fosforilado (rojo) por la PI3
cinasa para crear PIP3 durante la activación celular. El PIP3 a
continuación crea sitios de unión para proteínas con dominios PH en la
cara interna de la membrana plasmática.
| Capítulo 3 75
sitio de unión en la superficie de la membrana interna. La ubi-
cación de proteínas en la membrana las pone en contacto con
otros miembros de una cascada de señalización, lo que per-
mite que las enzimas tengan acceso a nuevos sustratos, y permite
la modificación de proteínas adaptadoras, con el montaje subsi-
guiente de complejos de emisión de señales.
La desintegración de PIP2 por plc, inducida por
señal, causa un incremento de la concentración
citoplasmática de ion calcio
Además de ser fosforilado por la PI3 cinasa, el PIP2 también es
susceptible a un segundo tipo de modificación bioquímica indu-
cida por señal. Una segunda enzima (más correctamente, una
familia de enzimas), la fosfolipasa C (Phospholipase C [plc]),
también es activada en el momento de emisión de señales
de antígeno de linfocitos (figura 3-12). La plc hidroliza el PIP2,
lo cual separa el azúcar trifosfato de inositol (IP3) desde el esqueleto
de diacilglicerol (dag). El dag permanece en la membrana,
donde se une a varias enzimas de señalización importantes, y las
activa. Se libera IP3 hacia el citoplasma, donde interactúa con
receptores de IP3 específicos sobre la superficie de vesículas de
retículo endoplasmático, lo que induce la liberación de iones
calcio (Ca2+) almacenados hacia el citoplasma. Estos iones calcio
a continuación se unen a varias proteínas celulares, y cambian su
conformación y alteran su actividad.
La doble carga positiva de los iones calcio, y el tamaño de
su radio iónico, los hacen en particular idóneos para unión a
muchas proteínas; sin embargo, en el campo de la emisión de
señales celulares, la calmodulina (CaM) es indiscutiblemente la
proteína de unión a calcio de mayor importancia. La CaM es
una proteína en forma de mancuerna, con dos subunidades
globulares separadas por un bastón α-helicoidal (figura 3-13a). Cada
una de las dos subunidades tiene dos sitios de unión a calcio, de
modo que la CaM tiene la capacidad para unirse a cuatro iones
Ca2+. En el momento de la unión a calcio, la CaM pasa por un
cambio conformacional notorio (figura 3-13b), que le permite
unirse a diversas proteínas celulares diferentes, y activarlas.
A medida que se usan iones Ca2+ citoplasmáticos en la unión
a proteínas citoplasmáticas, y la concentración de ion Ca2+ cito-
plasmática libre disminuye, empiezan a montarse proteínas de
canal de Ca2+ en la membrana. Finalmente, los canales se abren
para permitir la afluencia de más calcio desde el líquido extra-
celular y completar la activación de las proteínas reguladas por
calcio. El montaje de estas llamadas proteínas de canales de
calcio operados por depósito es imposible en presencia de calcio
Muchos tipos diferentes de iones se encuentran en una cé­­
lula, y es razonable preguntar por qué los eucariontes deben
haber adquirido por evolución proteínas con actividades que
muestran tanta capacidad de respuesta a la concentración de
O ion Ca2+ intracelular. La respuesta a esta pregunta yace en parte
P O−
en el hecho de que es relativamente fácil alterar la concentración
O−
sangre y los líquidos tisulares es del orden de 1 mM, mientras
que la concentración citosólica en una célula en reposo está más
cerca de 100 nM —10 000 veces más baja que la concentración
extracelular—. Esta diferencia es mantenida por un sistema de
bombas de membrana eficiente (aunque costoso desde el punto
de vista energético). Además, hay reservas de Ca2+ en concen-
tración más alta dentro de vesículas intracelulares asociadas
76 sección I | Introducción

O −O 2−
OH OPO3
P HO
O OPO32−
O O OH

O H

O
Fosfatidilinositol 4,5 bifosfato (PIP2)

Fosfolipasa C

O OH

2−
O H OH OPO3
+ HO OPO32−
2−O
O 3PO OH

O
Diacilglicerol (DAG) Inositol 1,4,5-trifosfato (IP3)
(Permanece asociado con la membrana) Entra al citoplasma e induce la liberación
de ion Ca2+ a partir de vesículas del ER

FigurA 3-12  El PIP2 puede ser hidrolizado por la PLC para crear DAG e IP3.

con el retículo endoplasmático y las mitocondrias. Así, cual-
quier evento de señalización que abre canales en la membrana
del retículo endoplasmático, o en la membrana plasmática, y
que permite el flujo libre de iones Ca2+ hacia el citoplasma, faci-
lita un aumento rápido de la concentración citoplasmática de
ion Ca2+.
La ubiquitinación puede inhibir la transducción
de señal o aumentarla
La proteína ubiquitina es una proteína monomérica pequeña,
de 76 residuos, altamente conservada. La unión del carboxilo
terminal de la ubiquitina a residuos de lisina de proteínas blanco

a) b) Ca2+

Ca2+ 1
Calmodulina La calmodulina se
Ca2+ une a iones Ca2+.

COOH 2
+NH La calmodulina cambia
3 Complejo
de conformación,
Ca2+ de calcio-
y se hace activa.
calmodulina

Proteína
blanco 3
La calmodulina se une
a una proteína blanco.
Sitio de unión
a calmodulina

FigurA 3-13  La proteína reguladora de la unión de calcio calmodulina pasa por un cambio conformacional en el momento
de unión a calcio, que le permite unirse a otras proteínas y activarlas. [Parte a) PDB ID 3CLN.]
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T | Capítulo 3 77

a menudo va seguida por polimerización de una cadena de La vía de la plc induce liberación de calcio
ubiquitinas sobre residuos de lisina seleccionados de la ubiqui- y activación de pkc
tina conjugada; esto da lugar a poliubiquitinación de la proteína
blanco. La monoubiquitinación o la poliubiquitinación casi Los elementos esenciales de esta vía se presentaron en la expo-
siempre sirve como un mecanismo mediante el cual las proteí- sición sobre las enzimas que modulan el PIP2 en el momento de
nas marcadas son establecidas como objetivo para destrucción la activación celular (figura 3-12), y ahora se sabe que la plc
por el proteasoma de la célula. Empero, se sabe que la ubiquiti- desintegra la PIP2 hacia IP3 y dag; sin embargo, ¿de qué modo
nación en ciertos residuos de proteínas también sirve como una la plc queda activada en primer lugar? Aquí se usan células T
señal activadora y esta función alternativa de la ubiquitina se como ejemplo.
abordará más adelante conforme se describa la activación del Como se mencionó, las células T usan la forma PLCγ1 de la
factor de transcripción NF-κB, así como en los capítulos 4 y 5. enzima. En el momento de la estimulación por antígeno, la fos­
forilación de tirosina de los residuos de itam del complejo
asociado a receptor CD3 da lugar a la localización de la proteína
Vías de señalización que se adaptadora lat a la membrana (figura 3-14). La lat a su vez es
fosforilada, y la PLCγ1 a continuación se une a lat fosforilada;
encuentran con frecuencia esta unión asegura que la PLCγ1 se localice a la membrana
El análisis de las rutas bioquímicas mediante las cuales las seña-
les moleculares pasan desde receptores de superficie celular CD4 TCR/CD3
hacia el interior de la célula ha revelado que algunas vías de
transducción de señal se utilizan repetidas veces en las respues-
tas celulares a diferentes ligandos. Estas vías se utilizan, de
maneras un poco diferentes, en múltiples sistemas celulares y
de órganos, y en muchas especies. El resultado final de casi todas
estas vías es una alteración del programa de transcripción de la PIP3 PIP2 DAG
célula. Aquí se describen brevemente tres de esas vías de par- Itk
ticular importancia para el sistema inmunitario adaptativo PLCγ1
(figura 3-5, Perspectiva general). Cada una de estas vías es des- P
P P
encadenada por unión de antígeno al receptor, y conduce a la Lck
LAT
activación de una familia de factores de transcripción diferente. IP3
La generación de estos factores de transcripción activos a su vez
inicia la regulación ascendente de una cascada de genes que
tienen importancia para la respuesta inmunitaria, incluso los
que codifican para citocinas, anticuerpos, factores de supervi-
vencia y señales proliferativas. Retículo
Si bien el marco conceptual de estas vías de emisión de seña- endoplasmático
les es compartido entre muchos tipos de células, pequeñas
modificaciones en los intermediarios moleculares y factores de
Ca2+
transcripción involucrados permiten que haya variaciones de las
identidades de los genes controlados por señales particulares, y Calcineurina
que haya mecanismos de control de la transcripción específicos
Calmodulina Calmodulina
para tipo de célula. Por ejemplo, la enzima plc existe en dife- (inactiva) (activa)
rentes formas; la PLCγ1 se usa en células T, y la PLCγ2 en
células B. De modo similar, la familia de factores de transcrip-
ción factor nuclear de células T activadas (Nuclear Factor of P
Activated T cells [nfat]) incluye cinco miembros, algunos NFAT
de los cuales son expresados como variantes empalmadas de
manera diferencial y cada uno de los cuales es afectado por
P
disposiciones diferentes de señales moleculares.
Además, la activación de la transcripción desde algunos
Citoplasma
promotores requiere la unión de múltiples factores de transcrip-
ción. Por ejemplo, la expresión completa del gen que codifica NFAT
Núcleo
para la interleucina-2 (IL-2) requiere la unión de AP-1, NF-κB
y nfat, además de varios otros factores de transcripción, al Activación de factor
promotor de interleucina. De esta manera, el promotor puede de transcripción
estar parcialmente activado en presencia de algunos de estos
factores de transcripción, pero no está por completo activo sino
hasta que todos ellos están en su sitio. La sección que sigue se
centra en los principios generales que rigen el control de estas FigurA 3-14  La activación de la calcineurina por unión
tres vías, desde la recepción de una señal de antígeno, hasta la del complejo de calcio-calmodulina induce la desfosfori-
activación de un tipo particular de factor de transcripción. lación de nfat y la entrada del mismo al núcleo.
78 sección I | Introducción
celular, el sitio de su sustrato, PIP2. Una vez ubicada en la mem-
brana plasmática, la PLCγ1 es más activada por fosforilación de
tirosina mediada por la cinasa activada por receptor, Lck, así
como por una segunda tirosina cinasa, Itk. La PLCγ1 fosfori-
lada y activada a continuación media la división de PIP2 hacia
IP3 y dag, como se describió.
¿De qué modo estos mediadores secundarios funcionan a
continuación para desencadenar la activación de linfocitos? Los
iones calcio, liberados a partir de reservas intracelulares de IP3, se
unen al intermediario emisor de señales, calmodulina. Cada
mo­lécula de calmodulina se une a cuatro iones calcio, unión que
da lugar a una profunda alteración de su conformación (figura
3-13). El complejo de calcio-calmodulina a continuación se une
a, y activa, la fosfatasa calcineurina, que desfosforila el factor de
transcripción nfat (figura 3-14). Esta desfosforilación induce
un cambio conformacional en nfat, que revela una secuencia de
localización nuclear, que dirige el nfat para que entre al núcleo
y active la transcripción de varios genes blanco importantes de
célula T. Los genes activados por la unión a nfat comprenden los
que codifican para interleucina-2, una citocina que tiene impor-
tancia fundamental en el control de la proliferación de células T.
La importancia de la vía de la PLCγ1 para la activación de
células T es ilustrada por los profundos efectos inmunosupreso-
res del fármaco ciclosporina, que se usa para tratar tanto enfer-
medad autoinmunitaria mediada por células T como rechazo de
trasplante de órgano. En las células T, la ciclosporina se une a la
proteína ciclofilina (inmunofilina), y el complejo de ciclospo-
rina/ciclofilina se une a la calcineurina y la inhibe, lo que sus-
pende con eficacia la proliferación de células T.
La división de PIP2 por plc es una estrategia de emisión de
señales en particular eficiente porque ambos productos de la
desintegración del PIP2 son activos en eventos celulares subsi-
guientes. El dag, el segundo producto de la desintegración del
PIP2 (figura 3-12), permanece en la membrana, donde se une a
enzimas de la familia de la proteína cinasa C (pkc) y las activa.
Estas cinasas son serina/treonina cinasas activas en diversas
vías de señalización. La proteína cinasa Cθ, importante en la
señalización de células T, sólo requiere unión de dag, mientras
que su pariente, la proteína cinasa C, también debe unirse a
iones Ca2+ para quedar activada por completo. El dag también
está implicado en la vía Ras (que se describe en la sección
siguiente).
La cascada de Ras/Map cinasa activa la
transcripción por medio de AP-1
La vía de emisión de señales Ras se descubrió inicialmente des-
pués de que se encontró que una forma viral mutada de la pro-
teína Ras induce cáncer en un modelo de rata. La Ras es una
proteína de unión a gtp, monomérica (que se abrevia proteína G).
Cuando Ras se une a gtp, su conformación cambia hacia
un estado activo, en el cual es capaz de unirse a varias serina/
treonina cinasas, y de activarlas. Empero, la proteína Ras posee
una actividad de GTPasa intrínseca que hidroliza gtp hacia
gdp, y la forma Ras-gdp de la proteína es incapaz de transmitir
una señal positiva a cinasas torrente abajo (figura 3-15); por
ende, la activación de la vía Ras depende de la capacidad para
mantener Ras en su estado unido a gtp. La modulación entre la
forma unida a gtp, activa, y la forma unida a gdp, inactiva, es
desencadenada por dos familias de enzimas. Los factores de
intercambio de guanina-nucleótido (gef) activan Ras al indu-
Factores de intercambio
de nucleótido guanina (GEF)
GTP
GDP
GDP GTP
Inactiva Activa
Pi
Proteínas activadoras
de GTPasa (GAP)
FigurA 3-15 Proteínas G monoméricas pequeñas, como
Ras, alteran la conformación dependiendo de si están unidas
a gtp o gdp. La forma unida a gdp de proteínas G pequeñas, como Ras
(verde pálido), es inactiva, y la forma unida a gtp (verde oscuro) es
activa. Las proteínas G pequeñas tienen actividad de GTPasa intrínseca,
que es aumentada por las Proteínas Activadoras de GTPasa (GTPase
activating proteins [gap]). Los factores de intercambio de nucleótido
guanina (guanine nucleotide exchange factors [gef ]) actúan de una
manera opuesta para liberar gdp y promover la unión de gtp.
cirla a liberar gdp y aceptar gtp; las proteínas activadoras de
GTPasa (GTPase Activating Proteins [gap]) inhiben la acti-
vidad de proteína al estimular la habilidad intrínseca de Ras
para hidrolizar gtp unido.
Al igual que la vía PLCγ, la vía Ras es iniciada durante acti-
vación de linfocitos tanto B como T y, de nuevo, se usarán las
células T como ejemplo. El dag, liberado después de división
de PIP2 mediada por PLCγ1, se une a, y activa, Ras-GRP, una
proteína adaptadora que a continuación recluta el gef, Son of
Sevenless (sos). sos se une a Ras, y la induce para que se una
a gtp, momento en el cual Ras adquiere la capacidad para
unirse a, y activar, el primer miembro de una cascada de enzi-
mas serina/treonina cinasa que se fosforilan y activan una a la
otra. Dado que los miembros de esta cascada se identificaron
por vez primera en experimentos en los que se estudió la acti-
vación de células por mitógenos (agentes que inducen prolife-
ración), se denominan la cascada de proteína cinasa activada
por mitógeno (Mitogen Activated Protein Kinase) o de map
cinasa. Los miembros de la cascada son mantenidos en estrecha
proximidad uno a otro mediante la proteína adaptadora ksr.
En la forma de esta cascada de activación de célula T (figura
3-16), RasGTP se une a la map cinasa cinasa cinasa (mapkkk)
Raf. La unión de RasGTP altera la conformación de Raf y es-
timula su actividad de serina/treonina cinasa. A continuación
Raf fosforila y activa la siguiente enzima en el relevo, una map
cinasa cinasa (mapkk). En este caso mek. mek activada a con-
tinuación fosforila su sustrato, la cinasa relacionada con señal
extracelular (Extracellular signal-Related Kinase) o Erk, una map
cinasa, que en consecuencia adquiere la capacidad para pasar a
través de la membrana nuclear.
Una vez dentro del núcleo, Erk fosforila y activa un factor de
transcripción, Elk-1, que coopera con una segunda proteína, el
factor de respuesta sérica (srf), para activar la transcripción
del gen fos. La proteína Fos también es fosforilada por Erk, y
junto con su pareja, Jun, forma el factor de transcripción maes-
tro, AP-1. Jun es fosforilada y activada por medio de una forma
un poco diferente de la vía de la map cinasa. AP-1 es otro de
los factores de transcripción que facilita la transcripción del gen
que codifica para IL-2.
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T | Capítulo 3 79

Señales mediadas por TCR TCR/CD3

DAG

GTP Ras-GRP
Pi GDP
SOS
(inactiva) DAG

PKC
GTP GDP

(activa)

Raf (MAPKKK) P
Cascada P
Complejo Carma-1
MEK (MAPKK) de MAP
de TAK1
cinasa Bcl10
MALT1
ERK (MAPK) TRAF6

Citoplasma NEMO Ub
P
IKK IKK P
Núcleo
Elk-1 P
P
NF- B I B Ub
Vía de
SRF Activación de gen NF-κB
Fos Fos P

Citoplasma
Jun P
NF- B Activación de gen Núcleo

5´ 3´
P Jun Fos P
AP-1 FigurA 3-17  La fosforilación y ubiquitinación activa IKK,
que fosforila I𝛋B y lo desactiva, lo que permite la translo-
Activación de gen cación de NF-𝛋B hacia el núcleo.

son mantenidos en el citoplasma mediante unión a la proteína

FigurA 3-16  La vía Ras involucra una cascada de fosfori-
laciones de serina/treonina, y culmina en la entrada de la
map cinasa, Erk, al núcleo, donde fosforila los factores de
transcripción Elk-1 y Fos.
La vía Ras es un componente de importancia de muchos pro-
gramas vinculados con el desarrollo, y de activación celular. Cada
vía usa combinaciones un poco diferentes de proteínas ci­nasas
torrente abajo, pero todas se apegan al mismo modo general de
pasar la señal desde la superficie celular hacia el núcleo por medio
de una cascada de reacciones de fosforilación, con la activación
resultante de un nuevo programa de transcripción.
La pkc activa el factor de transcripción NF-κB
El NF-𝛋B pertenece a una familia de factores de transcripción
heterodiméricos, y cada dímero activa su propio repertorio de
promotores. En las células en reposo, heterodímeros de NF-κB
Inhibidor de NF-𝛋B (I𝛋B). La activación celular induce la fos-
forilación de estas proteínas inhibidoras mediante un complejo
de IκB cinasa (IKK). La proteína IκB fosforilada a continua-
ción es establecida como objetivo para degradación proteoso-
mal, lo que libera el NF-κB para que entre al núcleo y se una a
los promotores de una amplia gama de genes importantes desde
el punto de vista inmunitario.
NF-κB es importante en el control de la transcripción de pro-
teínas necesarias para el funcionamiento apropiado de muchos
tipos de células de los sistemas inmunitarios innato y adapta-
tivo; en general, la transcripción mediada por NF-κB está aso-
ciada con eventos proinflamatorios y de activación, más que
con procesos reguladores. Diferentes tipos de células y recepto-
res usan diversas formas de activación de proteína cinasa, así
como diversas combinaciones de moléculas adaptadoras en
la vía que llevan a la activación de NF-κB. Con todo, todas estas
vías culminan en la fosforilación y la destrucción subsiguiente
del inhibidor de NF-κB, IκB. A continuación se describe la vía de
activación de NF-κB que es desencadenada por el reconoci-
miento de antígeno por tcr.
80 sección I | Introducción
En las células T, la activación de NF-κB empieza cuando el
dag, generado por PLCγ1, recluta la serina/treonina cinasa
PKC a la membrana (figura 3-17). Como se mencionó, PKCθ
es la forma de la serina/treonina cinasa que se usa en la vía de
emisión de señales de receptor de célula T. Una vez unida a
dag, la PKCθ es activada y fosforila proteínas adaptadoras,
incluso Carma1, que inician una cascada que finalmente recluta
la ubiquitina ligasa TRAF6. TRAF6 ubiquitina y activa parcial-
mente el complejo ikk, que está constituido de la proteína
reguladora nemo, y dos subunidades ikk catalíticas. El com-
plejo ikk sólo es activado por completo cuando está fosforilado
y ubiquitinado. (Note que éste es uno de los casos en los cuales
la ubiquitinación no da lugar a degradación subsiguiente de
proteína, sino más bien a su activación.) Otras señales mediadas
por células T activan el complejo TAK1, que fosforila ikk, lo
que completa su activación y permite que fosforile IκB. En este
paso, la fosforilación de IκB emite señales para su degradación,
más que para su activación. NF-κB a continuación está libre
para moverse hacia el núcleo y activar la transcripción de sus
genes blanco, incluso el gen que codifica para IL-2.
Además de esta vía de activación de NF-κB mediada por
receptor de célula T, la señalización por medio de CD28, el
correceptor de célula T, también ejerce control positivo de la
activación de NF-κB en células T.
Estas tres vías juntas ilustran cómo los conceptos amplios
antes introducidos en este capítulo pueden aplicarse a entender
los mecanismos que subyacen la activación de células T; estos
temas recurren en muchas formas en todo el sistema inmuni-
tario.
La estructura de los anticuerpos
Una vez esbozados algunos de los conceptos generales que
constituyen la base de muchas diferentes interacciones recep-
tor-ligando y vías de señalización, ahora se centrará la atención
de manera más específica en los receptores de antígeno del sis-
tema inmunitario adaptativo.
En el momento de la estimulación con antígeno, las células
B secretan anticuerpos que tienen sitios de unión a antígeno
idénticos a los que están en el receptor de antígeno de la mem-
brana de célula B. La identidad entre los sitios de unión del
anticuerpo secretado y el Receptor de Célula B (BCR) unido a
membrana se demostró por vez primera al sintetizar reactivos
que se unieron a anticuerpos secretados por una clona de célu-
las B particular, y mostrar que esos reactivos también se unie-
ron a los receptores sobre las células que habían secretado los
anticuerpos. Dado que trabajar con proteínas solubles es signi-
ficativamente más fácil que manipular proteínas receptoras de
membrana, la presencia de una forma soluble del receptor faci-
litó mucho la caracterización de la estructura del receptor de
célula B. En consecuencia, los aspectos de bioquímica básica del
receptor de célula B se establecieron mucho tiempo antes que
los del Receptor de Célula T (TCR) que, a diferencia del bcr,
no se libera en una forma secretada. El recuadro 3-1, Experi-
mento clásico, detalla los experimentos ganadores del Premio
Nobel que establecieron la estructura de cuatro cadenas de la
molécula de anticuerpo.
Esta sección empieza con una exposición de la estructura
de anticuerpos, y después se describe el receptor de mem-
brana de célula B y sus vías de señalización asociadas. Los
anticuerpos secretados y sus formas de receptor unidas a
membrana pertenecen a la familia de proteínas inmunoglobu-
lina. Esta familia grande de proteínas, que incluye receptores
tanto de célula B como de célula T, moléculas de adhesión,
algunas tirosina cinasas y otros receptores inmunitarios, se ca­-
racteriza por la presencia de uno o más dominios de inmuno­­
globulina.
Los anticuerpos están constituidos de múltiples
dominios de inmunoglobulina
El dominio de inmunoglobulina (figura 3-18) se genera cuando
una cadena polipeptídica se pliega hacia una serie organizada
de cadenas con plegamiento β paralelas. Dentro de cada domi-
nio, las cadenas β están dispuestas hacia un par de láminas β
que forman un dominio terciario, compacto. El número de
cadenas por cada lámina varía entre proteínas individuales. En
moléculas de anticuerpo, casi todos los dominios de inmuno-
globulina contienen aproximadamente 110 aminoácidos, y cada
lámina β contiene de tres a cinco cadenas. El par de láminas β
dentro de cada dominio son estabilizadas una respecto a la otra
por medio de un enlace disulfuro intracadena. Los dominios
vecinos están conectados uno a otro por medio de un tramo de
cadena polipeptídica relativamente no estructurada. Dentro
de las cadenas β, aminoácidos hidrofóbicos e hidrofílicos alternan,
y sus cadenas laterales están orientadas en posición perpen-
dicular al plano de la lámina. Los aminoácidos hidrofóbicos
sobre una lámina están orientados hacia la lámina opuesta y,
por ende, las dos láminas dentro de cada dominio son estabili-
zadas por interacciones hidrofóbicas entre las dos láminas, así
como por el enlace disulfuro covalente.
El plegamiento de inmunoglobulina proporciona un ejem-
plo perfecto de cómo la estructura determina la función, o la
facilita, o ambas cosas. En los extremos de cada una de las lámi-
nas β, regiones polipeptídicas que muestran plegamiento más
laxo enlazan una cadena β a la siguiente, y estas regiones laxa-
mente plegadas pueden dar cabida a diversas longitudes y
estructuras de cadena lateral de aminoácidos sin causar altera-
ción alguna de la estructura general de la molécula. Por ende, en
la molécula de anticuerpo, el plegamiento de inmunoglobulina
está muy bien adaptado para proporcionar un andamio único en
el cual pueden construirse múltiples sitios de unión diferentes,
puesto que los sitios de unión a antígeno pueden simplemente
integrarse hacia estas regiones laxamente plegadas de los domi-
nios de unión a antígeno. Estas propiedades explican por qué el
dominio de inmunoglobulina se ha usado en tantas proteínas
con funciones de reconocimiento o de adhesión. La estructura
del dominio esencial proporciona un esqueleto molecular,
mientras que las regiones laxamente plegadas se pueden adaptar
para que se unan de manera específica a muchas estructuras
adhesivas o antigénicas.
De hecho, la estructura del dominio de inmunoglobulina es
usada por muchas proteínas además de las cadenas de bcr. El
receptor de célula T también está constituido de unidades repe-
titivas del dominio de inmunoglobulina (véase más adelante).
Otras proteínas en las que se utilizan dominios de inmunoglo-
bulina comprenden receptores Fc; las proteínas accesorias del
receptor de célula T CD2, CD4, CD8 y CD28; las proteínas
asociadas a receptor tanto del tcr como del bcr; moléculas de
adhesión, y otras. En la figura 3-19 se ilustran algunas de estas
proteínas que contienen dominio de inmunoglobulina. Cada
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
a) Dominio CL
Cadenas β
COOH
Enlace disulfuro
b) Ordenamiento de cadena β
COOH
NH2
FigurA 3-18  Diagrama de la estructura plegada de inmu-
noglobulina de los dominios de región variable (VL) y cons­
tante (CL) de la cadena ligera de anticuerpo. a) Las dos láminas
con plegamiento β en cada dominio son mantenidas juntas por interac-
ciones hidrofóbicas y el enlace disulfuro conservado. Las cadenas β que
componen cada lámina se muestran en colores diferentes. Las tres asas
de cada dominio variable muestran considerable variación de longitud y
secuencia de aminoácidos; estas regiones hipervariables (azul) constitu-
yen el sitio de unión a antígeno. Las regiones hipervariables por lo gene-
una de estas proteínas es clasificada como un miembro de la
superfamilia de inmunoglobulina, un término que se usa para
denotar proteínas derivadas de un gen primordial común que
codifica para la estructura del dominio básica.
Los anticuerpos comparten una estructura de dos
cadenas ligeras y dos cadenas pesadas
Todos los anticuerpos comparten una estructura de cuatro
cadenas polipeptídicas (figura 3-20), que consta de dos cadenas
ligeras (L) idénticas y dos cadenas pesadas (heavy [H]) tam-
bién idénticas. Cada cadena ligera está unida a su cadena
pesada pareja mediante un enlace disulfuro entre residuos de
cisteína correspondientes, así como por interacciones no cova-
lentes entre los dominios VH y VL y los dominios CH1 y CL.
| Capítulo 3 81
Dominio VL
Asas
NH2 CDR
COOH
NH2
CDR
ral se llaman regiones determinantes de la complementariedad (cdr).
Los dominios de cadena pesada tienen la misma estructura característica.
b) Las láminas con plegamiento β están abiertas para revelar la relación
de las cadenas β individuales y las asas de unión. Note que el dominio
variable contiene dos cadenas β más que el dominio constante. [Parte a)
adaptada de M. Schiffer et al., 1973, Biochemistry 12:4620; reimpreso con autori-
zación; parte b) adaptada de A.F. Williams y A.N. Barclay, 1988, Annual Review of
Immunology 6:381.]
Estos enlaces permiten la formación de un heterodímero estre-
chamente asociado (H-L). Múltiples puentes disulfuro enlazan
juntas las dos cadenas pesadas a alrededor de la mitad de su
longitud, y las partes C terminal de las dos cadenas pesadas
también participan en interacciones de enlace no covalente
entre dominios correspondientes.
La molécula de anticuerpo forma una Y, con dos regiones de
unión a antígeno en los extremos de la Y (figura 3-21). Cada
región de unión a antígeno está constituida de aminoácidos
derivados de los dominios amino terminal de las cadenas tanto
pesada como ligera. Las cadenas tanto pesada como ligera con-
tribuyen con dos dominios a cada extremo de la Y; el dominio
no de unión a antígeno de cada cadena sirve para extender el
extremo de unión a antígeno. La base de la Y consta de los
dominios C terminal de la cadena pesada de anticuerpo.
experimento clásico

La elucidación de la estructura de anticuerpo

Los experimentos en los que se identificó
por vez primera a los anticuerpos como
inmunoglobulinas séricas y después se ca­­
racterizó su estructura de cuatro cadenas
familiar, representan algunas de las mejores
adaptaciones de la química de proteína al­­
guna vez usadas para resolver un problema
biológico.
Primer grupo de experimentos
Arne Tiselius, Pers Pederson, Michael
Heidelberger y Elvin Kabat
Desde finales del siglo xix se ha sabido que
los anticuerpos residen en el suero sanguí-
neo, es decir, en el componente de la sangre
que queda una vez que se han eliminado
células y proteínas de la coagulación. Em­­
pero, la naturaleza química de esos anticuer-
pos permaneció como un misterio hasta
que Tiselius y Pederson de Suecia, y Heidel-
berger y Kabat, en Estados Unidos, hicieron
sus experimentos, publicados en 1939. Hi­­
cieron uso del hecho de que, cuando los
anticuerpos reaccionan con un antígeno
proteínico multivalente, forman un comple­jo
multimolecular con enlaces covalentes que
salen de la solución. Este proceso se conoce
como inmunoprecipitación (véanse en el
capítulo 20 los usos modernos de esta téc-
nica). Inmunizaron conejos con la proteína
ovoalbúmina (el principal componente
de las yemas de huevo), extrajeron sangre de
los conejos para obtener un antisuero antio-
voalbúmina, y después dividieron su anti-
suero en dos alícuotas. Sujetaron la primera
alícuota a electroforesis y midieron la canti-
dad de proteína que avanzó distancias di­­
ferentes desde el origen en un campo
eléctrico. El gráfico azul en la figura 1 des-
en un complejo multivalente, que salió de la
solución y se precipitó. A continuación el
precipitado se extrajo mediante centrifuga-
ción. Ahora que habían logrado eliminar los
anticuerpos de un antisuero, la pregunta fue
¿qué pico de proteína quedaría afectado?
El gráfico de color negro en la figura 1
ilustra sus resultados. Se perdió muy poca
proteína de los picos de albúmina o de
globulina α o β. Aun así, la inmunoprecipita-
ción dio lugar a un decremento notorio del
tamaño del pico de globulina γ, lo que de­­
mostró que casi todos sus anticuerpos anti-
ovoalbúmina podían clasificarse como glo­­-
bulinas γ.
Ahora se sabe que casi todos los anti-
cuerpos de la clase IgG de hecho se encuen-
tran en la clase de globulina γ. No obstante,
se encuentran anticuerpos de otras clases
en los picos de globulina α y β, lo cual puede
explicar el decremento leve de la concentra-
ción de proteína que se encontró después de
inmunoprecipitación en estos otros picos
de proteína.
Segundo grupo de experimentos
Sir Rodney Porter, Gerald Edelman
y Alfred Nisonoff
Conocer la clase de proteína sérica en la cual
caen los anticuerpos fue un inicio, pero los
inmunoquímicos a continuación necesita-
+ −
Albúmina
Globulinas
Absorbancia
ron averiguar qué aspecto tenían los anti-
cuerpos. El hecho de que podían formar
complejos multivalentes precipitables sugi-
rió que cada anticuerpo tenía la capacidad
de unión a más de un sitio en un antígeno
multivalente. Sin embargo, los científicos
aún desconocían cómo muchas cadenas
polipeptídicas constituyen una molécula de
anticuerpo, y cómo muchos sitios de unión
a antígeno estuvieron presentes en cada
mo­lécula.
Dos líneas de experimentación llevadas a
cabo en un marco de tiempo similar en
ambos lados del Atlántico se combinaron
para proporcionar las respuestas a estas dos
preguntas. Experimentos de ultracentrifuga-
ción habían colocado el peso molecular de
las moléculas de anticuerpos IgG en aproxi-
madamente 150 000 daltones. La digestión
de IgG con la enzima papaína produjo tres
fragmentos, dos de los cuales fueron idénti-
cos, y un tercero que fue claramente distinto
(figura 2). El tercer fragmento, de aproxima-
damente 50 000 daltones, formó de manera
espontánea cristales y, por ende, se nombró
el fragmento cristalizable, o Fc. Al demostrar
que podían inhibir de manera competitiva la
unión de anticuerpos a su antígeno, se mos-
tró que los otros dos fragmentos retienen la
capacidad de unión a antígeno del anti-
cuerpo original. Por ende, estos fragmentos
se nombraron Fab, o fragmento de unión a
γ

cribe las cuatro subpoblaciones de proteínas

principales resueltas mediante su técnica. La
primera —y la de mayor tamaño— es el
pico de albúmina, la proteína más abun-
α β
dante en el suero, que se encarga de trans-
portar lípidos en la sangre. Nombraron a los
otros picos globulinas. Dos picos de menor
tamaño están denotados como los picos de
globulina α y β, y después un tercer pico Distancia de migración
de globulina, la globulina gamma, clara-
FigurA 1
mente representa un grupo de proteínas en
Demostración experimental de que casi todos los anticuerpos están en la frac-
concentración alta en el suero.
ción de globulina γ de las proteínas séricas. Después de que se inmunizó a conejos con
Con todo, la parte más notable del expe- ovoalbúmina (ova), sus antisueros se combinaron y se procesaron con electroforesis, que separó las
rimento ocurrió cuando los investigadores proteínas séricas de acuerdo con su carga eléctrica y masa. La línea azul muestra el patrón electroforé-
mezclaron su segunda alícuota del suero tico de antisuero no tratado. La línea negra muestra el patrón de antisuero que se incubó primero con
con ovoalbúmina, el antígeno. Los anticuer- ova para eliminar anticuerpos anti-ova, y después quedó sujeto a electroforesis. [Adaptado de A. Tiselius and
pos en el suero se unieron a la ovoalbúmina E. A. Kabat, 1939, Journal of Experimental Medicine 69:119, con permiso de copyright de Rockefeller University Press.]

82

antígeno (Fragment antigen binding). Este
experimento indicó que una molécula de
an­ticuerpo única contenía dos sitios de unión
a antígeno y una tercera parte de la mo-
lécula que no participaba en la reacción de
unión.
El uso de otra enzima proteolítica, la
pepsina, dio lugar a la formación de un frag-
mento único de 100 000 daltones, que con-
tuvo dos sitios de unión a antígeno que aún
fueron mantenidos juntos en una molécula
bivalente. Puesto que la molécula actuó
como si contuviera dos fragmentos Fab,
pero claramente tuvo un componente adi-
cional que facilitó la combinación de los dos
fragmentos hacia una molécula, se nombró
F(ab’)2. La digestión con pepsina no da lugar
a un fragmento Fc recuperable, puesto que
al parecer lo digiere hacia fragmentos más
pequeños. Empero, F(ab’)2 derivados de anti-
cuerpos se usan a menudo en experimentos
en los cuales los científicos desean evitar
artefactos originados por la unión de anti-
cuerpos a receptores Fc sobre superficies
celulares.
En el segundo grupo de experimentos,
los investigadores redujeron la molécula de
IgG entera usando β-mercaptoetanol, a fin
de romper enlaces disulfuro, y produjeron
alquilación del producto reducido de modo
que los enlaces disulfuro no podían volver a
formarse de manera espontánea. A conti-
nuación usaron una técnica llamada filtra-
ción en gel para separar y medir el tamaño
de los fragmentos de proteína generados
mediante esta reducción y alquilación. (En la
actualidad se usarían geles sds page para
hacer este experimento.) De esta manera, se
demostró que cada molécula de IgG conte-
nía dos cadenas pesadas, con peso molecu-
lar (mw) de 50 000 y dos cadenas ligeras, con
mw de 22 000.
Ahora el desafío fue combinar los resul-
tados de estos experimentos para crear un
modelo consistente de la molécula de anti-
cuerpo. Para hacer esto, los científicos tuvie-
ron que determinar cuál de las cadenas
estaba implicada en la unión a antígeno, y
cuál cadena contribuía a los fragmentos
cristalizables. Los inmunólogos a menudo
usan medios inmunológicos para responder
sus preguntas y ésta no fue la excepción.
Eligieron usar fragmentos Fab y Fc purifica-
dos a partir de anticuerpos IgG de conejo
para inmunizar dos cabras. A partir de estas
cabras, generaron anticuerpos anti-Fab y
anti-Fc, que hicieron reaccionar, en experi-
mentos separados, con las cadenas pesada y
RECUADRO 3-1
ligera provenientes de los experimentos de Gerald Edelman por su trabajo en el descu-
reducción y alquilación. La respuesta fue brimiento de la estructura de las inmunoglo-
inmediatamente clara. bulinas.
Los anticuerpos anti-Fab se unieron a Edelman, G.M., B.A. Cunningham, W.E. Gall,
cadenas tanto pesadas como ligeras y, por P.D. Gottlieb, U. Rutishauser, y M.J. Waxdal.
ende, el sitio de unión a antígeno de la IgG 1969. The covalent structure of an entire gam-
maG immunoglobulin molecule. Proceedings
original de conejo estuvo formado de com- of the National Academy of Sciences of the
ponentes de cadenas tanto pesada como United States of America 63:78-85.
ligera. Con todo, los anticuerpos anti-Fc sólo Fleishman, J., B., R.H. Pain, y R.R. Porter. 1962
se unieron a las cadenas pesadas, pero no a Sep. Reduction of gamma-globulins. Archives
las cadenas ligeras de la molécula de IgG, lo of Biochemistry and Biophysics Suppl 1:174-80.
que demostró que la parte Fc de la molécula Heidelberger, M., y K. O. Pedersen. 1937. The
sólo estaba constituida de cadenas pesadas. molecular weight of antibodies. The Journal of
Experimental Medicine 65:393-414.
Por último, experimentos de química de
Nisonoff, A., F.C. Wissler, y L.N. Lipman. 1960.
proteína cuidadosos demostraron que los
Properties of the major component of a peptic
aminos terminales de las dos cadenas resi- digest of rabbit antibody. Science 132:1770-
dían en la porción Fab de la molécula. De 1771.
esta manera, la estructura de cuatro cadenas Porter, R.R. (1972). Lecture for the Nobel Prize for
familiar, con los sitios de unión en los aminos physiology or medicine 1972: Structural studies
terminales de los pares de cadenas pesadas of immunoglobulins. Scandinavian Journal of
Immunology 34(4):381-389.
y ligeras, se dedujo a partir de algunos expe-
Tiselius, A., y E.A. Kabat. 1939. An electropho-
rimentos clásicos muy bien realizados. retic study of immune sera and purified anti-
En 1972 se otorgó el Premio Nobel en body preparations. The Journal of Experimental
Fisiología y Medicina a sir Rodney Porter y Medicine 69:119-131.
Enlaces Cadena L
disulfuro
SS
SS SS
SS
F(ab')2
Digestión
con pepsina
Cadena H SS SS SS
SS
+
Fragmentos Fc
Reducción con
Digestión con papaína
mercaptoetanol
Fab Fab
+ + + +
SS
SS
HS HS SH SH
SS
SS SH SH Cadenas L
SH SH
Fc
Cadenas H
FigurA 2
Estructura prototipo de IgG, que muestra la estructura de cadena y los enlaces
disulfuro intercadena. Se indican los fragmentos producidos por digestión enzimática con pep-
sina o papaína, o mediante división de los enlaces disulfuro con mercaptoetanol. Las cadenas ligeras (L)
están en azul claro y las cadenas pesadas (H) están en azul oscuro.
83
84 sección I | Introducción

Inmunoglobulina (IgM)

V V

S
S
S
C C
S

S
S

S
V V

S
S

S
S S S S

S
S

S
C C
Moléculas del MHC

S S Receptor de célula T
C C Clase I Clase II
S S
α
β
CHO S S
Heterodímero C
S S
C V S S
V
S S S
Ig-α/ Ig-β S
S
S
S S
S S C
S S
C C S S
C
C S S
C S S
C
S S
C β2 C
S S
C
S S S S
S S
SS microglobulina

Moléculas de adhesión

VCAM-1

S
C S

Receptor
S
poli-Ig C S
Proteínas accesorias de célula T ICAM-1
S
V S S S
CD4 C S C S CD64
S
V
V
S S S
C
S Fcγ RI
S C S S

S
S V S S
C
S
C
S C
CD2 CD3 S S ICAM-2 S LFA–3
S

S
S CD8 V S S S
C S
V C
S C C
S C C S
γ δ ε S S S
S S
V S S
V C S
S S S S S S S S S
C S
C S
C S C C S C
S
C C
S
C C S
S S S S S
γ γ
S S

FigurA 3-19  Algunos ejemplos de proteínas que portan dominios de inmunoglobulina. Cada dominio de inmunoglobulina se
representa mediante un asa azul y, cuando es importante, está marcado como variable (V) o constante (C).

La figura 3-21 muestra que la estructura general de la dada, se cristaliza fácilmente y, así, se llama la región Fc (frag-
molécula de anticuerpo consta de tres regiones relativamente mento cristalizable).
compactas unidas por una región bisagra más flexible. La re­­ Cada región Fab y región Fc de los anticuerpos media sus pro-
gión bisagra es en particular susceptible a división proteolítica pias funciones particulares durante una respuesta de anticuerpos a
por la enzima papaína. La división con papaína resuelve la un antígeno. Las regiones Fab se unen al antígeno, y la región Fc del
anticuerpo unido a antígeno se une a los receptores Fc sobre célu-
molécu­­la de anticuerpo hacia dos fragmentos idénticos que
las fagocíticas o citolíticas, o a moléculas efectoras inmunitarias. De
retienen la especificidad de unión a antígeno (antigen-bin- esta manera, los anticuerpos sirven como puentes fisiológicos entre
ding) del anticuerpo original (que se muestra como las regio- un antígeno presente en un agente patógeno, y las células o mo-
nes Fab en la figura 3-21), y la región restante de la molécula, léculas que finalmente lo destruirán. Hay una familia de receptores
que consta de la porción no de unión a antígeno. Esta última Fc; cada receptor Fc se expresa sobre una gama distinta de células,
región, que es idéntica para todos los anticuerpos de una clase y se une a una clase diferente de anticuerpos.
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T | Capítulo 3 85

3
+ NH Fab Fab
NH 3+ Cadenas

S
S
+ NH ligeras
3
NH 3+
VH

H
S
S

V
S
S
Bisagra
VL

S
S

V
H1
CH Unión a

S
S

C
1

S
S

S antígeno
S S S S
CL

L
S

S
S

C
S S
– CO Sitio de unión Sitio de unión

S
S

4 O S S O– a antígeno a antígeno
21 CO
CH2
CH2

Cadena Actividad
ligera CHO S S CHO efectora
Región bisagra
κoλ S S Fc = región abierta;
CH3

CH3

sitio de flexibilidad
Cadena pesada segmentaria
S S
μ, γ, α, δ o ϵ 446
Cadenas pesadas
COO– COO–

FigurA 3-20  Diagrama de la estructura de inmunoglobu-
linas derivado del análisis de la secuencia de aminoácidos.
Cada cadena pesada (azul oscuro) y ligera (azul claro) en una molécula
de inmunoglobulina contiene una región variable (V) amino terminal
que consta de 100 a 110 aminoácidos y difiere de un anticuerpo al
siguiente. El resto de cada cadena en la molécula —las regiones cons-
tantes (C)— muestra variación limitada que define los dos subtipos de
cadena ligera y las cinco subclases de cadena pesada. Algunas cadenas
pesadas (γ, δ y α) también contienen una región bisagra rica en prolina.
Las porciones amino terminal, que corresponden a las regiones V, se
unen a antígeno; las funciones efectoras están mediadas por los domi-
nios carboxilo terminal. Las cadenas pesadas μ y ϵ, que carecen de una
región bisagra, contienen un dominio adicional en la parte media de la
molécula. CHO denota un grupo carbohidrato enlazado a la cadena
pesada.
Hay dos clases principales de cadenas ligeras
de anticuerpo
La secuenciación de aminoácidos de cadenas ligeras de anti-
cuerpos reveló que la mitad amino terminal (alrededor de 110
aminoácidos) de la cadena ligera era en extremo variable, mien-
tras que la secuencia de la mitad carboxilo terminal podía
clasificarse en una de dos tipos de secuencias principales. Así, la
mitad N terminal de cadenas ligeras se denomina región varia-
ble, o VL, de la cadena ligera, y la parte menos variable de la
secuencia se llama región constante, o CL. Las dos secuencias
principales de región constante de cadena ligera se denominan
cadenas κ (kappa) o λ (lambda). Conforme se generaron más
secuencias de cadena ligera, quedó de manifiesto que las
secuencias de la región constante de la cadena λ podían sub-
dividirse en cuatro subtipos —λ1, λ2, λ3 y λ4— con base en
sustituciones de aminoácido en algunas posiciones. En seres
humanos, las cadenas ligeras están divididas de manera bas-
tante uniforme entre las dos clases de cadena ligera; 60% de las
cadenas ligeras de ser humano es κ, mientras que sólo 40% es λ.
En ratones, la situación es bastante distinta: sólo 5% de las
cadenas ligeras de ratón es del tipo de cadena ligera λ. Todas
las cadenas ligeras tienen un peso molecular de aproximada-
mente 22 kDa.
El análisis adicional de secuencias de cadena ligera demostró
que, incluso dentro de las regiones variables de la cadena ligera,
FigurA 3-21  La estructura tridimensional de la IgG. En
esta representación son claramente visibles los dominios de inmunoglo-
bulina de 110 aminoácidos de los cuales está construida la molécula,
junto con la estructura bisagra abierta en el centro de la molécula, que
proporciona flexibilidad en la unión a antígenos multivalentes. En la IgG,
la cadena ligera contiene dos dominios de inmunoglobulina, y la cadena
pesada, cuatro. Fab, porción del anticuerpo de unión a antígeno; con-
tiene dominios VL/VH y CL/CH1 pareados. Fc, región del anticuerpo no de
unión a antígeno, con dominios CH2/CH2 y CH3/CH3 pareados. [Fuente D.
Sadava, H.C. Heller, G.H. Orians, W.K. Purves, y D.M. Hillis. Life: The Science of
Biology, 7ed. (© 2004 Sinauer Associates, Inc., y W.H. Freeman & Co.), figura
18-10 con modificaciones.]
hubo regiones de hipervariabilidad. Dado que pudo mostrarse
que estas regiones hipervariables interactúan con el antígeno
unido, se renombraron las regiones determinantes de la com-
plementariedad o CDR.
Los lectores con conocimiento en genética identificarán de
inmediato un problema: ¿cómo es posible codificar una cadena
proteínica única con algunas regiones que son en extremo di­­
versas y otras regiones que son relativamente constantes, mien-
tras se mantiene esa distinción a través de millones de años de
deriva evolutiva? La solución a este enigma comprende la codi-
ficación de una región variable de anticuerpo única en múltiples
segmentos genéticos que después se unen entre sí en diferentes
combinaciones en cada célula productora de anticuerpos indi-
vidual. Este mecanismo singular se describirá a fondo en el ca­­
pítulo 7.
Hay cinco clases principales de cadenas pesadas
de anticuerpo
Al usar anticuerpos dirigidos hacia la región constante de
inmunoglobulinas, y la secuenciación de aminoácidos de inmu-
noglobulinas derivadas de células tumorales de plasmacitoma,
ciertos investigadores descubrieron que las secuencias de las
regiones constantes de cadena pesada caen dentro de cinco
patrones básicos. Estas cinco secuencias básicas se han llamado
con las letras griegas: μ (mu), δ (delta), γ (gamma), ϵ (épsilon)
y α (alfa). Cada región constante de cadena pesada diferente se
denomina isotipo, y el isotipo de las cadenas pesadas de una
 86 sección I | Introducción

cuadro 3-2 Composición de cadena de las cinco clases de inmunoglobulina

Cadena Número de Fórmula
Clase* pesada dominios de Ig CH Subclases Cadena ligera Cadena J molecular

IgG γ 3 γ1, γ2, γ3, γ4 (humana) κ o λ Ninguna γ2κ2

γ1, γ2a, γ2b, γ3 (ratón) γ2λ2
IgM µ 4 Ninguna κ o λ Sí (µ2κ2)n
(µ2λ2)n
n=1o5
IgA α 3 α1, α2 κ o λ Sí (α2κ2)n
(α2λ2)n
n = 1, 2, 3, o 4
IgE ϵ 4 Ninguna κ o λ Ninguna ϵ2κ2
ϵ2κ2
IgD δ 3 Ninguna κ o λ Ninguna δ2κ2
δ2λ2
*
Véanse en la figura 3-22 las estructuras generales de las cinco clases de anticuerpos.

molécula de anticuerpo dada determina su clase. Así, los anti-
cuerpos con una cadena pesada del isotipo μ son de la clase
IgM; aquellos con una cadena pesada δ son IgD; aquellos con γ,
IgG; aquellos con є, IgE, y aquellos con α, IgA. La longitud de la
región constante de las cadenas pesadas es de 330 residuos de
aminoácidos (para las cadenas γ, δ y α) o de 440 aminoácidos
(para las cadenas μ y ε). De modo correspondiente, los pesos
moleculares de las cadenas pesadas varían de acuerdo a su clase.
Las cadenas pesadas de IgA, IgD e IgG pesan alrededor de 55
kDa, mientras que los anticuerpos IgM e IgE son aproximada-
mente 20% más pesados.
Diferencias menores en las secuencias de aminoácidos de
grupos de cadenas pesadas α y γ llevaron a subclasificación
adicional de esas cadenas pesadas en subisotipos y, por ende,
sus anticuerpos correspondientes, hacia subclases (cuadro 3-2).
Hay dos subisotipos de la cadena pesada α, α1 y α2, y, así, dos
clases de IgA, IgA1 e IgA2. De modo similar, hay cuatro subiso-
tipos de las cadenas pesadas γ, γ1, γ2, γ3 y γ4, con la formación
correspondiente de las cuatro subclases de IgG: IgG1, IgG2,
IgG3 e IgG4. En ratones, los cuatro subisotipos de cadena γ son
γ1, γ2α, γ2β y γ3, y las subclases correspondientes de anticuer-
pos IgG de ratón son IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3, respectiva-
mente.
El análisis adicional reveló que el número exacto de enlaces
disulfuro entre las cadenas pesadas de anticuerpos, y las posi-
ciones precisas de dichos enlaces, varían entre anticuerpos de
distintas clases y subclases (figura 3-22).
Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpos
pueden servir como antígenos
Los principios esenciales de la estructura de anticuerpos se
establecieron antes del desarrollo de la tecnología requerida
para generar artificialmente anticuerpos monoclonales y, de
hecho, gran parte de la investigación básica de determinación
de la estructura se completó antes de que hubiera técnicas
disponibles para secuenciación rápida de dna. Por ende,
como una fuente de anticuerpos homogéneos, los inmunólo-
gos recurrieron a los productos proteínicos de tumores secre-
tores de anticuerpos. Los plasmacitomas son tumores de
células plasmáticas, la célula de etapa final de diferenciación
de células B, y las células de ese tumor normalmente están
situadas en la médula ósea. Cuando una clona única de célu-
las plasmáticas se hace cancerosa, se llama plasmacitoma en
tanto permanece en un solo hueso. Sin embargo, una vez que
metastatiza hacia múltiples sitios de la médula ósea, el tumor
se llama mieloma múltiple. Los tumores plasmacitoma o mie-
loma secretan grandes cantidades de anticuerpos monoclonales
hacia el suero y los líquidos tisulares de los pacientes, y estos
anticuerpos pueden purificarse en grandes cantidades. En lugar
de secretar el anticuerpo entero, algunos de estos tumores sólo
secretarán las cadenas ligeras, o a veces tanto las cadenas ligeras
como los anticuerpos enteros, hacia el suero. Las cadenas lige-
ras homogéneas secretadas por estos tumores mieloma se
llaman proteínas de Bence-Jones.
Entre mediados y finales del siglo xx se usaron anticuerpos
derivados de tumor para generar mucha información respecto
a la estructura de anticuerpos y la secuencia de los mismos.
Cuando se creó un medio por el cual generar estos tumores
artificialmente en ratones, los datos provenientes de tumores de
seres humanos se complementaron con información deri-
vada de líneas de células murinas generadas en el laboratorio,
muchas de las cuales aún se usan.
Los anticuerpos séricos tanto derivados de tumor como
purificados también se usaron como antígenos, y los anticuer-
pos anti-inmunoglobulina así derivados resultaron ser extra­
ordinariamente útiles en la elucidación de la estructura de
anticuerpos. Los anticuerpos o los fragmentos de anticuerpo
derivados de una especie de animal (por ejemplo, un conejo),
pueden inyectarse en una segunda especie (p. ej., una cabra), o
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T | Capítulo 3 87

a) IgG b) IgD c) IgE

VL VH VL VH VL VH

CL Cγ1 CL C δ1 CL Cε1

Región Cε2
bisagra
Cγ 2 Cδ2 Cε3

Cγ 3 C δ3 Cε4

d) IgA (dímero) e) IgM (pentámero)

VL VH
VH VL
CL C μ1
Cα1 CL
Enlace Cμ2
disulfuro

Región Cμ3
Cα2 bisagra Cμ4

Cα3
Cadena J
Cadena J

FigurA 3-22  Estructuras generales de las cinco clases
principales de anticuerpos. Las cadenas ligeras se muestran en
sombras más claras y los enlaces disulfuro están indicados mediante
líneas negras gruesas. Note que las cadenas pesadas de IgG, IgA e IgD
contienen cuatro dominios y una región bisagra, mientras que las cade-
nas pesadas de IgM e IgE contienen cinco dominios pero no región
bisagra. Las formas poliméricas de IgM e IgA contienen un polipéptido,
llamado cadena J, que está unido por dos enlaces disulfuro a la región
Fc en dos monómeros diferentes. La IgM sérica siempre es un pentámero;
casi toda la IgA sérica existe como un monómero, aunque a veces hay
dímeros, trímeros e incluso tetrámeros. En estas figuras no se muestran
los enlaces disulfuro intracadena ni los enlaces disulfuro que unen cade-
nas ligeras y pesadas (figura 3-23).

incluso en otro animal de la misma especie, en el cual el anti-
cuerpo o el fragmento de anticuerpo servirá como un antígeno.
En el recuadro 3-1 se describe la serie de experimentos en los
cuales anticuerpos sintetizados contra fragmentos proteolíticos
aislados de moléculas de inmunoglobulina se usaron para ayu-
dar a determinar la estructura de la inmunoglobulina. Para
entender estos experimentos, y muchos otros en los que tam-
bién se usan anticuerpos dirigidos contra inmunoglobulinas
enteras o contra fragmentos de inmunoglobulina, es importante
comprender bien la naturaleza de los determinantes antigénicos
sobre moléculas de inmunoglobulina. Un determinante antigé-
nico se define como una región de un antígeno que hace contacto
con la región de combinación a antígeno sobre un anticuerpo.
En el cuadro 3-3 se describen los diferentes tipos de anticuerpos
que reconocen determinantes de inmunoglobulina.
Los anticuerpos anti-isotipo se dirigen contra determinan-
tes antigénicos presentes en la región constante de una clase de
anticuerpo de cadena pesada o de cadena ligera particular, pero
no sobre cualquiera de las otras. Por ejemplo, un anticuerpo
anti-isotipo sólo puede unirse a cadenas pesadas μ humanas,
pero no a regiones constantes δ, γ, α o є humanas. De manera
alternativa, puede unirse a cadenas ligeras κ, pero no a cadenas
ligeras λ. Así, un anticuerpo anti-isotipo sólo se une a una clase
o subclase de región constante de anticuerpo única. Los anti-
cuerpos anti-isotipo por lo general son específicos para deter-
minantes presentes sobre la región constante de anticuerpos
 88 sección I | Introducción

cuadro 3-3 Anticuerpos que reconocen otros anticuerpos

Tipo de anticuerpo Qué reconoce

Anti-Fab (fragmento, unión a antígeno) Fragmento de anticuerpo generado con papaína, que consta de los dominios
VHCH1–VLCL.
Anti-Fc (fragmento, cristalizable) Fragmento de anticuerpo generado con papaína que consta de los dominios CH2CH3
(y, para IgM e IgD, CH4) pareados.
Anti-isotipo Determinantes antigénicos específicos para cada clase de cadena pesada.
Anti-alotipo Determinantes antigénicos que son específicos para alelo —diferencias pequeñas en la
región constante de las cadenas ligera y pesada que varían entre individuos.
Anti-idiotipo Determinantes antigénicos característicos de un sitio de combinación de un antígeno
particular. Cada anticuerpo tendrá sus propios determinantes idiotípicos característicos
hechos de residuos provenientes de las cadenas pesada y ligera que contribuyen a las
regiones de unión a antígeno.

provenientes de una especie de animal particular, aunque puede
ocurrir algo de reactividad cruzada entre especies relacionadas
—por ejemplo, ratones y ratas—.
Algunos genes que codifican para cadena pesada o ligera
existen en múltiples formas alélicas, y las formas alélicas al­­ter­
nativas del mismo isotipo se denominan alotipos. En general,
dos anticuerpos con diferencias alotípicas variarán en sólo algu-
nos residuos de una de las cadenas de inmunoglobulina, y estos
residuos constituyen los determinantes alotípicos. Los anti-
cuerpos antialotipo son generados al inmunizar a un in­­dividuo
de una especie con anticuerpos derivados de un se­­gundo ani-
mal de la misma especie que porta una forma al­­­ternativa (alelo)
del gen que codifica para inmunoglobulina par­­­ticular. Des-
pués de que ha ocurrido una respuesta inmunitaria, el investigador
purifica o selecciona los anticuerpos que reconocen los deter-
minantes alotípicos provenientes del individuo inmunizado.
Los anticuerpos antialotipo se usan, por ejemplo, para rastrear
poblaciones de células particulares en experimentos en los cua-
les células B que provienen de una cepa de animales que portan
un alotipo particular son transfe­ridas hacia una segunda cepa
que difiere en el alotipo de in­­munoglobulina.
Por último, anticuerpos dirigidos contra el sitio de unión a
antígeno de un anticuerpo particular se denominan anticuer-
pos anti-idiotípicos. Pueden generarse al inmunizar un animal
con grandes cantidades de un anticuerpo monoclonal purifi-
cado que, por definición, porta un sitio único de unión a antí-
geno. Los anticuerpos provenientes del animal inmunizado que
reconocen el sitio de unión a antígeno del anticuerpo original a
continuación se pueden purificar. Los anticuerpos anti-idiotípi-
cos se usaron en los experimentos iniciales que probaron que el
receptor de célula B tenía el mismo sitio de unión a antígeno
que el anticuerpo secretado por esa célula B, y ahora se usan
para dar seguimiento al destino de células B que portan una
especificidad de receptor única en experimentos de inmunolo-
calización.
Como se describió, el tratamiento de moléculas de anticuer-
pos enteras con la enzima papaína divide la molécula de anti-
cuerpo en la región bisagra, y libera dos fragmentos Fab de unión
a antígeno y un fragmento Fc por cada molécula de anticuerpo.
Los anticuerpos anti-Fab y anti-Fc se producen al inmunizar
una especie distinta de animal de la que proporcionó los frag-
mentos de anticuerpo, con fragmentos Fab o Fc, respectivamente.
Cada uno de los dominios de las cadenas
pesada y ligera de anticuerpo media funciones
específicas
Los anticuerpos protegen al huésped contra infecciones, al unirse
a agentes patógenos y facilitar su eliminación. Los anticuerpos
de diferentes clases de cadena pesada están especializados para
mediar funciones protectoras particulares, como activación de
complemento (capítulo 6), aglutinación de agente patógeno,
o fagocitosis (capítulo 13), y cada dominio diferente de la mo-
lécula de anticuerpo desempeña su propio papel en estos meca-
nismos de defensa del huésped. Aquí se examina brevemente la
estructura de cada uno de los dominios de cadena pesada de
anticuerpo a la vez, empezando con los dominios CH1 y CL, que
son los proximales a los dominios VH y VL, respectivamente
(figura 3-20).
Dominios CH1 y CL
Como se comentó, la multivalencia del receptor aumenta mucho
la fuerza (avidez) de la unión de receptor a antígeno. Los anti-
cuerpos han evolucionado para aprovechar esta propiedad al
emplear dos sitios de unión a antígeno, cada uno de los cuales
puede unirse a determinantes individuales sobre antígenos mul-
tivalentes, como los que se encuentran sobre superficies bacte-
rianas. Los dominios CH1 y CL sirven para extender los extremos
de unión a antígeno de la molécula de anticuerpo, lo que facilita
interacciones con antígenos multivalentes y maximiza la capaci-
dad del anticuerpo para unirse a más de un sitio sobre un antí-
geno multivalente. Un enlace disulfuro intercadena entre estos
dos dominios los mantiene juntos y puede facilitar la capacidad
de algunos pares VH-VL para unirse entre sí y formar un sitio de
combinación estable.
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
IgG1 IgG2
Enlace
disulfuro
FigurA 3-23  Estructura general de las cuatro subclases de IgG humana, que difieren en el número y el reordenamiento de los
enlaces disulfuro intercadena (líneas negras gruesas) que unen las cadenas pesadas. Una característica notable de la IgG3 humana son
sus 11 enlaces disulfuro intercadena.
Las regiones bisagra
Las cadenas pesadas γ, δ y α contienen una secuencia peptídica
extendida entre los dominios CH1 y CH2, que no tiene homolo-
gía con los otros dominios (figuras 3-20 y 3-22). Esta llamada
región bisagra es rica en residuos de prolina, que la hacen en
particular flexible y, como consecuencia, los dos extremos de
unión a antígeno de anticuerpos IgG, IgD e IgA pueden adoptar
una amplia variedad de ángulos uno respecto a otro, lo cual
FigurA 3-24   Los residuos de carbohidrato, que se
muestran en color rosa, evitan el contacto estrecho entre los
dominios CH2 de IgG1 humana. [PDB ID 1IGT.]
| Capítulo 3 89
IgG3 IgG4
facilita la unión eficiente a antígeno. La naturaleza extendida de
la cadena de aminoácidos en la región bisagra contribuye a la
vulnerabilidad de esta parte de la molécula a la división por
proteasa, una vulnerabilidad que se explotó ingeniosamente en
los experimentos tempranos que caracterizaron la estructura de
anticuerpos (recuadro 3-1).
Además de estos residuos de prolina, la región bisagra tam-
bién contiene varias cisteínas, que participan en la dimeriza-
ción de cadena pesada. El número real de enlaces disulfuro
intercadena en la región bisagra varía considerablemente
entre diferentes clases y subclases de cadena pesada de anti-
cuerpos (figura 3-23) así como entre especies. Al carecer de
una región bisagra, las cadenas pesadas de IgE hacen sus
enlaces disulfuro entre ca­­dena pesada entre los dominios CH1
y CH3. En la IgM, los enlaces disulfuro forman puentes entre
los pares de cadenas pesadas al nivel de CH3 y CH4. Aunque
las cadenas μ y ε carecen de regiones bisagra, tienen un domi-
nio de inmunoglobulina adicional que retiene algunas cualida-
des tipo bisagra.
Cadenas de carbohidratos
Los dos dominios CH2 de las cadenas α, δ y γ, y los dos domi-
nios CH3 de las cadenas μ y ε están separados de sus dominios
pareja de cadena pesada mediante cadenas laterales de oligosa-
cárido que evitan que las dos cadenas pesadas se enclaven una
cerca de la otra (figura 3-24). Como resultado, los dominios
pares están significativamente más accesibles al ambiente
acuoso que los otros dominios de región constante. Se cree que
esta accesibilidad contribuye a la capacidad de los anticuerpos
IgM e IgG para unirse a componentes del complemento. En
general, las inmunoglobulinas están extensamente glucosiladas,
y algunos anticuerpos incluso tienen carbohidratos fijos a sus
cadenas ligeras.
Los dominios carboxilo terminal
Las cinco clases de anticuerpos pueden expresarse como
inmunoglobulina de membrana o secretada. Los anticuerpos
secretados tienen una secuencia de aminoácidos hidrofílica de
90 sección I | Introducción
Transcrito primario
Transcritos procesados
AAA
Forma secretada
lgα/lgβ
Segmento
hidrofílico
FigurA 3-25  Las formas de inmunoglobulina de mem-
brana en contraposición con secretada se crean mediante
empalme de mRNA alternativo. Los cuadros de color azul oscuro
corresponden a las secciones de transcrito de mRNA de las secuencias
de región variable reordenadas, en tanto que los cuadros de color azul
claro ilustran las partes del transcrito de mRNA que corresponden a los
dominios de región constante individual de los genes que codifican
para cadena pesada. El gen que codifica para IgM, que se muestra aquí,
contiene una región variable y cuatro exones de región constante. El
diversas longitudes en el carboxilo terminal del dominio CH
final. En receptores de inmunoglobulina unidos a membrana,
esta región hidrofílica es reemplazada por tres regiones (figura
3-25):
• Una secuencia “espaciadora” hidrofílica, extracelular, de
aproximadamente 26 aminoácidos
• Un segmento transmembrana hidrofílico de alrededor de
25 aminoácidos
• Una cola citoplasmática muy corta, de aproximadamente
tres aminoácidos
Las células B expresan diferentes clases de inmunoglobulina
de membrana en etapas del desarrollo particulares, y bajo con-
diciones estimulatorias diferentes. Las células pre-B, inmaduras,
sólo expresan IgM de membrana. La coexpresión de IgD de
membrana, junto con IgM, es uno de los marcadores de diferen-
ciación hacia una célula B por completo madura que todavía no
ha encontrado antígeno. Después de la estimulación con antí-
geno, la IgD se pierde de la superficie celular, y la región cons-
tante de la membrana y la inmunoglobulina secretada pueden
cambiar hacia cualquiera de los otros isotipos. La clase de anti-
cuerpo secretado por células B estimuladas por antígeno está
determinada por citocinas liberadas por células T y células pre-
sentadoras de antígeno en la vecindad de la célula B activada.
Anticuerpos de diferentes clases de cadena pesada tienen afini-
dades selectivas por receptores Fc de superficie celular particu-
lares, así como por componentes del sistema de complemento.
Las funciones efectoras de clases de anticuerpos particulares se
comentan más en los capítulos 6 y 13.
AAA
Empalme
alternativo
AAA
Forma unida a membrana
Segmentos unidos a membrana
segmento de color rosado representa el transcrito que codifica para la
porción C terminal de la inmunoglobulina secretada. Los segmentos de
color verde representan el transcrito que codifica para las porciones C
terminal del receptor de inmunoglobulina unido a membrana, incluso
las regiones transmembrana y citoplasmática. El empalme alternativo
crea los dos tipos diferentes de moléculas de inmunoglobulina. Las
inmunoglobulinas unidas a membrana y secretadas sobre cualquier
célula B comparten las regiones de unión a antígeno idénticas y la
mayor parte de las secuencias de cadena pesada.
La cristalografía de rayos X se ha usado
para definir la base estructural de la unión
antígeno-anticuerpo
La cristalografía se ha usado para explorar la naturaleza de la
unión antígeno-anticuerpo para un gran número de anticuer-
pos, y ha demostrado que una u otra cadena, o ambas cadenas,
podrían proporcionar casi todos los residuos de contacto con
cualquier antígeno. Así, algunos anticuerpos se unen al antí-
geno principalmente por medio de contactos con residuos de la
región variable de cadena pesada; la cadena ligera meramente
proporciona apoyo estructural para el sitio de unión; sucede lo
contrario para otras interacciones antígeno-anticuerpo. Aun
otros anticuerpos usan residuos provenientes de ambas cadenas
para ponerse en contacto de manera directa con el antígeno.
Aun así, casi siempre los contactos entre antígeno y anticuerpo
ocurren en una amplia cara, y las protuberancias y depresiones
en la superficie del anticuerpo probablemente coinciden con
depresiones o abultamientos complementarios en el antígeno.
En la figura 3-26 se ilustra la unión de un anticuerpo al extremo
de la molécula de hemaglutinina del virus de la gripe. En otro
caso bien estudiado de una unión de anticuerpo a la proteína
lisozima, se mostró que el área de superficie de interacción es
bastante grande; en diferentes pares de anticuerpo-lisozima
varía de 650 a 900 Angstroms cuadrados. Dada la unión estre-
cha entre un anticuerpo y su antígeno complementario, no debe
sorprender que, al menos en algunos casos, la unión de antí-
geno a anticuerpo induce un cambio conformacional en el
anticuerpo, que puede visualizarse mediante cristalografía de
rayos X (figura 3-27).
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
a)
Antígeno Anticuerpo
FigurA 3-26  Simulación por computadora de una interacción entre anticuerpo y antígenos del virus de la gripe. a) El antí-
geno (amarillo) se muestra interactuando con la molécula de anticuerpo; la región variable de la cadena pesada está en rojo, y la región variable de la
cadena ligera está en azul. b) La complementariedad de las dos moléculas es revelada al separar el antígeno del anticuerpo 8 Å. [Basado en datos de
cristalografía de rayos X recabados por P.M. Colman y W.R. Tulip. Tomado de G.J.V.H. Nossal, 1993. Scientific American 269(3):22.]
H3
L1
H2
H1
L2 L3
FigurA 3-27  Puede ocurrir cambio conformacional en el
momento de la unión de antígeno a anticuerpo. Esta figura
muestra un complejo entre un péptido derivado de la proteasa del HIV y
un fragmento Fab proveniente de un anticuerpo antiproteasa. El péptido
se muestra en color negro. La línea roja muestra la estructura del frag-
mento Fab antes de que se una al péptido, y la línea azul muestra su
estructura después de unión. Hay cambios conformacionales importan-
tes en los CDR del Fab en el momento de la unión al antígeno; éstos son
en especial pronunciados en el CDR1 de la cadena ligera (L1) y CDR3 de
la cadena pesada (H3). [Tomado de J. Lescar et al., 1997, Journal of Molecular
Biology 267:/207; cortesía de G. Bentley, Institute Pasteur.]
Transducción de señal en células B
Una vez descrita la estructura de las moléculas de anticuerpo y
su forma unida a membrana, el receptor de célula B (bcr),
ahora se dirigirá la atención a la función del bcr. Recuérdese
| Capítulo 3 91
b)
que la estructura del bcr es idéntica a la de los anticuerpos que
la célula secretará en el momento de la estimulación por antí-
geno, excepto por la porción C– terminal de la cadena pesada;
esta porción es modificada de modo que fije el receptor a la
membrana plasmática de la célula B. Antes del reconocimiento
de antígeno, las células B maduras que residen en los tejidos
linfoides secundarios, como el bazo o los ganglios linfáticos,
expresan formas unidas a membrana tanto de IgM como de IgD.
Como se describió, la cola citoplasmática de la cadena pe­­sada
del bcr es en extremo corta —sólo tiene tres aminoácidos— y,
así, uno de los enigmas que tuvieron que resolver quienes explo-
raron la activación de antígeno mediado por bcr fue cómo una
cola citoplasmática tan corta podía transmitir con eficiencia
una señal hacia el citoplasma. Este problema se resolvió cuando
experimentos de coinmunoprecipitación revelaron que cada
molécula de bcr estaba asociada de manera no covalente con un
heterodímero, la Igα/Igβ (figura 3-7a) que se encarga de transdu-
cir la señal de antígeno hacia el interior de la célula. Recuerde que
las cadenas de Igα/Igβ contienen itam que incluyen residuos de
tirosina que quedan fosforilados en el momento de activación
por medio del receptor, y sirven como residuos de acoplamiento
para componentes de emisión de se­­ñales torrente abajo. Por
ende, el bcr se divide desde los puntos de vista estructural y
funcional en dos componentes: un componente de reconoci-
miento (el receptor de inmunoglobulina) y un componente de
transducción de señal (Igα/Igβ).
En secciones previas de este capítulo se describieron algunos
principios generales de la transducción de señal, y se esbozaron
tres vías de transducción de señal empleadas comúnmente (figura
3-5, Perspectiva general). En esta sección se muestra cómo esos
principios se aplican a los eventos intracelulares que suceden en el
momento de interacciones antígeno-receptor en células B.
La unión a antígeno da lugar a acoplamiento
de moléculas adaptadoras y enzimas hacia el
complejo de membrana de BCR-Igα/Igβ
La unión a antígeno induce alteraciones conformacionales en el
bcr, que exponen regiones en los dominios Cμ4 de las cadenas
92 sección I | Introducción

CD21

CD19

PIP3 PIP3 PIP3

Lyn Lyn P Akt PDK1
BCAP
lgα/lgβ P PI3K
PI3K
P P P P
P
P P P P Syk PLCγ2 Btk VAV
P P P P P
BLNK Fosforilación
Rac/Rho/ y desactivación
P cdc42
Grb-2
Reorganización
SOS del citoesqueleto
Ca2+
PKC Ras Bax Bad Antiapoptótica

Calmodulina Supervivencia celular

Cascada de la
Calcineurina MAP cinasa
Citoplasma

Núcleo
NFAT NF-κB AP-1

Activación de gen

FigurA 3-28  Vías de transducción de señal que emanan
del bcr. La agrupación de receptor mediada por antígeno hacia las
regiones balsas de lípidos de la membrana lleva a fosforilación por
cinasa de la familia src de los correceptores Igα/Igβ y CD19, las pro-
teínas adaptadoras BLNK y BCAP, y la tirosina cinasa, Syk. BCAP y
CD19 reclutan PI3 cinasa hacia la membrana, con generación de PIP3
y localización subsiguiente de PDK1 y Akt a la membrana. La fosfori-
lación por Akt aumenta la supervivencia celular y lleva a activación
de los factores de transcripción NF-κB y CREB, como se describió. La
activación de la isoforma de PLC de célula B, PLCγ2, ocurre en el
momento de unión al adaptador localizado a la membrana, BLNK y
fosforilación por Syk, lo que da lugar a la generación de DAG e IP3,
con activación de las vías de NFAT y NF-κB (véase el texto). Las vías
de MAP cinasa son activadas por medio de la unión de Grb2 a BLNK,
con activación subsiguiente de Ras y mediante la activación de la
proteína GEF, VAV, que activa Rac. [Adaptado de M. E. Conley et al. 2009.
Annual Reviews of Immunology 27:199-227.]

pesadas de receptor. Las interacciones entre moléculas receptoras
vecinas por medio de estos dominios generan oligomerización de
receptor (formación de agrupaciones pequeñas de complejos
de antígeno-receptor) y movimiento subsiguiente de estas agru-
paciones de receptor hacia regiones de balsas de lípidos especia-
lizadas de la membrana de la célula B. Por ende, los residuos
itam de Igα/Igβ son acercados mucho a las cinasas de la fami-
lia Src, Lyn (figura 3-28), Fyn y Blk. La fosforilación de tirosina
de los residuos de itam Igα/Igβ por estas cinasas de la familia
Src, en particular Lyn, a continuación proporciona sitios de
fijación para la proteína adaptadora blnk y una tirosina cinasa
adicional, Syk, que es fosforilada y activada por las cinasas de la
familia Src. A continuación, Syk fosforila blnk, lo que propor-
ciona sitios de acoplamiento para múltiples componentes to­­rrente
abajo de la vía de señalización. La proteína adaptadora bcap y
CD19, el co-receptor de célula B, también son fosforiladas por
estas tirosina cinasas, y sirven para reclutar la enzima PI3 cinasa
hacia la membrana plasmática.
Las células B usan muchas de las vías
de señalización torrente abajo antes descritas
Las vías de emisión de señales torrente abajo usadas por el bcr
ahora serán familiares. Las tirosina cinasas Syk y Btk juntas
fosforilan y activan PLCγ2, que hidroliza PIP2, como se describió.
El aumento resultante de las concentraciones intracitoplasmáticas
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T | Capítulo 3 93

de Ca2+ induce la activación de calcineurina y el mo­­vimiento de
nfat hacia el núcleo (figura 3-24). El otro producto de la hi­­
drólisis del PIP2, el dag (figura 3-12), permanece en la mem-
brana y se une a la isoforma de célula B de proteína cinasa C, lo
que da pie a la fosforilación y liberación del inhibidor de NF-κB,
como se describió para células T (figura 3-17). Esto da lugar a la
localización nuclear y activación de NF-κB.
Vías efectoras torrente abajo adicionales desencadenan los
muchos otros cambios que tienen lugar en el momento de acti-
vación de célula B; por ejemplo, la PI3 cinasa, ahora localizada
a la membrana, fosforila PIP2 hacia PIP3 (figura 3-11), lo que
permite el reclutamiento de las proteínas que contienen domi-
nio ph, PDK1 y Akt. En el momento de la fosforilación por la
serina-treonina cinasa PDK1, Akt promueve la supervivencia
celular al fosforilar moléculas proapoptóticas, como Bax y
Bad, y desactivarlas. También fosforila y activa los factores
de transcripción NF-κB y creb, que apoyan las funciones de
proliferación, diferenciación y supervivencia de las células B
acti­vadas.
La vía de la map cinasa (figura 3-16) también es activada
durante la activación de células B. La fijación de Grb2 a blnk
desencadena la unión del gef sos, seguida por la unión y
activación de Ras, como se describió. De modo similar, Rac,
otra proteína G monomérica pequeña de la familia Ras, es acti-
vada por la unión de la proteína gef, Vav. Tanto Ras como Rac
son proteínas G pequeñas que actúan para iniciar vías de emi-
sión de señales de map cinasa. Como se describió, la activación
de la vía de la map cinasa culmina en la expresión del factor de
transcripción fosforilado Elk. En células B, Elk promueve la
síntesis del factor de transcripción Egr-1, que actúa para inducir
alteraciones de la expresión de superficie celular de moléculas
de adhesión importantes, y finalmente sirve para ayudar a la
migración de linfocitos B hacia tejidos linfoides secundarios y
dentro de los mismos. Efectores torrente abajo desde Rac pro-
mueven la polimerización de actina, lo que facilita más la moti-
lidad de células B.
En conclusión, la unión de antígeno en el bcr lleva a múl-
tiples cambios de la actividad transcripcional, así como de la
localización de células B y la motilidad de las mismas, que
juntas dan lugar a su supervivencia, proliferación, diferencia-
ción y secreción final de anticuerpos, aumentadas. Como se
ejemplifica en el recuadro 3-2, los defectos en proteínas invo-
lucradas en la señalización de célula B pueden llevar a inmu-
nodeficiencias.

Enfoque clínico Recuadro 3-2

Los defectos en la proteína emisora de señales de célula B,
Btk, llevan a agammaglobulinemia ligada a X
La caracterización de las proteínas
necesarias para la señalización de células B
y T abrió nuevas avenidas de exploración
para médicos que estuvieron trabajando con
pacientes que sufrían trastornos de inmuno-
deficiencia. Los médicos y los es­­pecialistas en
inmunogenética ahora trabajan en estrecha
colaboración para diag­nosticar pacientes con
inmunodeficiencias y tratarlos, para el benefi-
cio tanto de la clínica como de las ciencias
básicas.
La caracterización de los genes de los
cuales dependen trastornos del sistema inmu-
nitario es complicada por el hecho de que las
deficiencias de anticuerpos pueden produ-
cirse por genes defectuosos que codifican
para proteínas de células T o B (porque las
células T proporcionan factores auxiliares
necesarios para la producción de anticuerpos
por células B), o incluso por mutaciones en
genes que codifican para proteínas en las
células del estroma importantes para el desa-
rrollo de células B saludables en la mé­­dula
ósea. Aun así, sin importar cuál es la causa,
todas las deficiencias de anticuerpos se mani-
fiestan en clínica por susceptibilidad aumen-
tada a infecciones bacterianas, en particular
de los pulmones, los intestinos y (en niños de
más corta edad) el oído.
En 1952, un pediatra, Ogden Bruton, re­­
portó en la revista Pediatrics el caso de un
niño de ocho años de edad que sufrió múl-
tiples episodios de neumonía. La electrofo-
resis del suero del niño mostró que carecía
por completo de globulinas séricas; por
ende, esta enfermedad se denominó agam-
maglobulinemia. Ésa fue la primera enfer-
medad de inmunodeficiencia para la cual un
dato de laboratorio explicó los síntomas clí-
nicos, y el tratamiento que Bruton aplicó —la
administración de inyecciones de gamma­
globulina por vía subcutánea— aún se usa.
Conforme se reportaron casos similares, se
notó que la mayor parte de los casos pediá-
tricos de agammaglobulinemia ocurría en
varones, mientras que en adultos la enfer-
medad parecía afectar a ambos sexos de
manera similar. El mapeo cuidadoso de la
susceptibilidad de la enfermedad al cromo-
soma X dio lugar a que la forma pediátrica
de la enfermedad se denominara xla, que
significa agammaglobulinemia ligada al cro-
mosoma X (X-Iinked agammaglobulinemia).
Con la caracterización de los componen-
tes de la vía de transducción de señal de BCR
durante los decenios de 1980-1989 y 1990-
1999, se tuvo la oportunidad de definir cuáles
proteínas están dañadas o cuáles proteínas
faltan en síndromes de inmunodeficiencia
par­­ticulares. En 1993, 41 años después de la
descripción inicial de la enfermedad, dos
grupos reportaron de manera independiente
que muchos casos de xla se producían por
mutaciones en una tirosina cinasa citoplas-
mática llamada tirosina cinasa de Bruton, o
Btk; ahora se sabe que un total de 85% de los
pacientes afectados por xla tiene mutacio-
nes en el gen Btk.
La Btk es un miembro de la familia de
tirosina cinasas citoplasmáticas Tec, que se
expresan de modo predominante en células
hematopoyéticas. Las cinasas de la familia Tec
comparten un dominio cinasa C terminal,
precedido por dominios SH2 y SH3, un domi-
nio rico en prolina, y un dominio PH amino
terminal, capaz de unirse a fosfolípidos PIP3
generados por la actividad de la PI3 cinasa. La
Btk se expresa tanto en células B como en
plaquetas, y es activada después de emisión
de señales por medio del bcr, el pre-BCR
(que se expresa en células B en desarrollo),
los receptores de IL-5 e IL-6, y el receptor de
quimiocina CXCR4. Su participación en la
señalización pre-BCR explica por qué los
niños con xla sufren desarrollo defectuoso
de células B.

(continúa)
 94 sección I | Introducción

Enfoque clínico (continuación) Recuadro 3-2

Después de la activación, la Btk se mueve
hacia el lado interno de la membrana plas-
mática, donde es fosforilada y parcialmente
activada (figura 3-28). La activación se com-
pleta cuando se autofosforila en un segundo
sitio de fosforilación. La Btk se une a la pro-
teína adaptadora blnk, junto con PLCγ2. La
Btk a continuación fosforila y activa PLCγ2 lo
que lleva, como se describió, a flujos de cal-
cio y activación de las vías de NF-κB y nfat;
por ende, la Btk ocupa una posición funda-
mental en la activación de células B y no
sorprende que las mutaciones en el gen que
la codifica den lugar a consecuencias tan
devastadoras.
Se han identificado más de 600 muta-
ciones diferentes en el gen btk; casi todas
se producen por sustituciones de par de
bases único o por la inserción o deleción
de menos de cinco pares de bases. Al
igual que para otras mutaciones ligadas a
X que son mortales sin intervención mé-
dica, la enfermedad xla se mantiene en
la población por la ge­­neración de nuevas
mutaciones.
Los pacientes con xla por lo general
están sanos durante el periodo neonatal
(inmediatamente después del nacimiento),
cuando aún se benefician de los anticuerpos
maternos. No obstante, entre tres y 18 meses
de edad empiezan infecciones bacterianas
recurrentes, y en la actualidad la edad media
en el momento del diagnóstico en la parte
no latina de América es de tres años. La xla
es un defecto denominado “con fugas”; la
mayoría de los niños con mutaciones en btk
tiene algo de inmunoglobulina sérica, y
algunas células B en la circulación periférica.
El pronóstico para pacientes que reciben
tratamiento con dosis regulares de gamma-
globulina ha mejorado de manera notoria
durante los últimos 25 años con el uso de
inyecciones profilácticas de gammaglo­
bulina.
Las células B en pacientes con xla tie-
nen un fenotipo característico que puede
usarse para propósitos diagnósticos. La
expresión de CD19 es baja y variable en
pacientes con xla, mientras que la expre-
sión de IgM de membrana, normalmente
variable en células B maduras, es relativa-
mente alta y consistente en pacientes con
xla. Este fenotipo puede observarse en la
figura 1, que muestra los perfiles en la cito-
metría de flujo de un individuo testigo nor-
mal (los dos gráficos de la izquierda) y un
paciente con gen btk defectuoso (los dos
gráficos de la derecha). En los dos gráficos
superiores, se nota que el paciente con xla
tiene muy pocas células CD19+ en compara-
ción con el testigo, y que las cifras de CD19
sobre la superficie de las células B que exis-
ten son más bajas que las que se observan
en las células testigo. En los dos gráficos
Testigo
CD19
Anticuerpo del testigo
CD19
sIgM
FigurA 1
Perfiles de FACS de un individuo normal y un paciente con XLA. [Adaptado de Conley et
al. 2009. Annual Review of Immunology 27:199.]
inferiores se nota que, si bien hay menos
células B CD19+ en general en el paciente
con btk alterado, todas las células B CD19+
tienen cifras relativamente altas de IgM de
superficie, mientras que las cifras de IgM
de membrana son mucho más variables en
los testigos saludables.
Bruton, O.C. 1952. Agammaglobulinemia. Pedi-
atrics 9:722-728.
Conley, M.E., et al. 2009. Primary B cell immuno-
deficiencies: Comparisons and contrasts.
Annual Review of Immunology 27:199-227.
Tsukuda, S., et al. 1993. Deficient expression of
a B cell cytoplasmic tyrosine kinase in
human X-linked agammaglobulinemia. Cell
72:279-290.
Vetrie, D., et al. 1993. The gene involved in
X-linked agammaglobulinemia is a member
of the src family of protein tyrosine kinases.
Nature 361:226-233.
Btk
CD19
Anticuerpo del testigo
CD19
sIgM

Las células B también reciben señales por medio
de co-receptores
El receptor de inmunoglobulina sobre la membrana de célula B
está asociado de manera no covalente con tres moléculas trans-
membrana: CD19, CD21 y CD81 (TAPA-1) (figura 3-7a). Los
antígenos a veces son presentados al bcr ya unidos de manera
covalente a proteínas del complemento, en particular al compo-
nente del complemento C3d. (La cascada de complemento
se comenta en el capítulo 6.) El co-receptor de célula B CD21 se
une de manera específica a C3d, sobre antígenos cubiertos por
C3d. Esta co-unión (co-engagement) del bcr y CD21 lleva el
co-receptor y el bcr hacia estrecha aposición uno con otro.
Cuando esto sucede, residuos de tirosina sobre la cara citoplas-
mática del co-receptor quedan fosforilados por las mismas
enzimas que fosforilan los itam sobre Igα/Igβ, lo que propor-
ciona sitios de fijación para PI3 cinasa. La localización de
la PI3 cinasa al co-receptor aumenta tanto la supervivencia
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
celular como las alteraciones del programa de transcripción
que acompañan a la activación celular (figura 3-28). CD19
también sirve como un sitio adicional de reclutamiento de
PLCγ.
Receptores de célula T y señalización
Las células T se unen a antígenos complejos constituidos de
péptidos ubicados en el surco de proteínas del mhc unidas a
membrana. Cuando el receptor de célula T hace contacto con
su mhc-antígeno peptídico sobre la superficie de una célula
presentadora de antígeno, las dos membranas celulares son
llevadas hacia aposición estrecha una con otra. Esto añade
otro estrato de complejidad al proceso de activación de célula
T que no encuentra paralelo en la señalización de célula B. Al
margen de esta complejidad adicional, los eventos de activa-
ción de célula T aún se despliegan de acuerdo con una mezcla
de las estrategias antes descritas, y tienen muchas similitudes
con la emisión de señales de receptor de célula B. Aquí, se
describe brevemente la estructura del receptor de célula T y a
continuación se caracterizan las rutas de emisión de señales
por medio de este receptor. El recuadro 3-3 describe los expe-
rimentos que dieron lugar al aislamiento y la caracterización
del αβTCR.
El receptor de célula T es un heterodímero
con regiones variable y constante
Hay dos tipos de receptores de célula T, ambos son heterodí-
meros (dímeros constituidos de dos polipéptidos diferentes).
Casi todas las células T recirculantes portan he­­terodímeros
αβ, que se unen a ligandos constituidos de un péptido antigé-
nico presentado en un surco molecular sobre la superficie de
una molécula del mhc tipo I o tipo II. Un se­­gundo sub­grupo
de células T expresa, en lugar de esto, un receptor de célula T
heterodimérico compuesto de un par diferente de cadenas de
proteína, llamadas γ y δ. Las células T que portan receptores
γδ tienen patrones de localización particulares (a menudo en
tejidos mucosos) y algunas células T γδ reconocen tipos de
antígenos diferentes de los que son unidos por células T αβ.
Aunque algunas células T γδ reconocen antígenos peptídicos
presentados por mhc convencionales, otras células T γδ se
unen a porciones de lípido y glicolípido presentadas por
moléculas del mhc no canónicas. Aún otras clonas de células
T γδ parecen reconocer proteínas de choque por calor auto-
generadas o fosfoantígenos derivados de microbios. No ha
logrado establecerse todavía una teoría unificada de la natu-
raleza precisa de antígenos reconocidos por células T γδ.
Empero, esta capacidad de dichas cé­­lulas para romper las
reglas de restricción del mhc tal vez explique la evolución de
una diferencia leve en el ángulo entre la región de unión a
antígeno y la región constante del receptor de cé­­lula T, que
queda de manifiesto en un análisis cristalográfico de rayos X
de los dos tipos de receptor (figura 3-29). A pesar de estas
diferencias funcionales en los receptores αβ en contraposi-
ción con γδ, sus características bioquímicas esenciales son
bastante similares.
| Capítulo 3 95
El resto de este capítulo se enfoca en la estructura y la seña-
lización del tipo de tcr αβ dominante, reconociendo que puede
haber diferencias menores entre los dos tipos de re­­ceptores y
sus componentes torrente abajo.
Aunque el tcr no es una inmunoglobulina en sí, las proteí-
nas del tcr son miembros de la superfamilia de proteínas
inmunoglobulina y, por ende, las estructuras dominio de hete-
rodímeros de tcr αβ y γδ son notoriamente similares a las de
las inmunoglobulinas (figura 3-19). La cadena α tiene un peso
molecular de 40 a 50 kDa, y la cadena β es de 40 a 45 kDa. Al
igual que las cadenas ligeras de anticuerpo, las cadenas de tcr
tienen dos dominios tipo inmunoglobulina, cada uno de los
cuales contiene un enlace disulfuro intracadena que abarca 60 a
75 aminoácidos. El dominio Cα del tcr difiere de casi todos los
dominios de inmunoglobulina en que posee sólo una lámina β
única, en lugar de un par, y el resto de la secuencia muestra
plegamiento más variable. El dominio amino terminal (varia-
ble) en ambas cadenas muestra notoria variación de secuencia,
pero las secuencias del resto de cada cadena están conservadas
(son constantes). Cada uno de los dominios variables de tcr
tiene tres regiones hipervariables, que parecen ser equivalentes
a las regiones determinantes de la complementariedad (cdr) en
las cadenas ligera y pesada de inmunoglobulina. Una cuarta
región hipervariable sobre la cadena β de tcr no parece tener
contacto con el antígeno, y, por ende, su importancia funcional
es incierta.
En el extremo C terminal del dominio constante, cada ca­­
dena de tcr contiene una secuencia conectora corta, en la cual
un residuo de cisteína forma un enlace disulfuro con la otra
cadena del heterodímero. En posición C– terminal a este disul-
furo hay una región transmembrana de 21 o 22 aminoácidos,
que ancla cada cadena en la membrana plasmática. Los domi-
nios transmembrana de las cadenas alfa y beta de tcr son poco
comunes por cuanto cada uno de ellos contiene residuos de
aminoácido con carga positiva que promueven la interacción
con residuos con carga negativa correspondientes sobre las
cadenas del complejo CD3 transductor de señal. Por último, al
igual que los bcr, cada cadena de tcr sólo contiene una cola
citoplasmática muy corta en el extremo carboxilo terminal.
Dominios V
Dominios C
γδ TCR αβ TCR
111° 147°
FigurA 3-29  Comparación de las estructuras cristalinas
de TCR 𝛄𝛅 y 𝛂𝛃. La diferencia (puesta de relieve con líneas negras) en
el ángulo codo entre formas γδ y αβ forma el TCR.
EXPERIMENTO CLÁSICO

El descubrimiento del receptor de células T αβ

Una vez que los científicos habían esta-
blecido que el bcr era simplemente una
forma unida a membrana del anticuerpo
secretado, la elucidación de la estructura del
bcr se convirtió en un problema significati-
vamente más tratable. Sin embargo, los
investigadores dedicados a caracterizar el
receptor de célula T (tcr) no disfrutaron de
la misma ventaja, porque el tcr no es secre-
tado en forma soluble. Por ende, las caracte-
rísticas bioquímicas del tcr se entendieron
después que las del bcr, hasta el decenio de
1980-1989, cuando un importante avance
científico —la capacidad para sintetizar anti-
cuerpos monoclonales a partir de tumores

1 4
Generación de un hibridoma de células T Producción de anticuerpos que se unen
con especificidad de antígeno conocida a TCR sobre el hibridoma de células T

Se inmuniza ratones con Se inmuniza a un nuevo ratón con

ovoalbúmina (OVA) células provenientes de un hibridoma
de células T específico para OVA
Se espera varios días
Se extirpan ganglios linfáticos
Se cultivan células T del ganglio linfático con OVA
Se espera varios días
Se aísla el bazo

5
Se fusionan células B provenientes del
bazo con línea de células B a largo plazo

2
Se añade polietilénglicol para inducir fusión
de células T específicas para antígeno con
línea de células T de vida prolongada

3
Se diluyen las células fusionadas de modo que 6
cada célula contenga un hibridoma de células T Selección y expansión de las clonas de células B a
único. Se permite que las células se dividan para largo plazo que secretan anticuerpos monoclonales
formar clonas y se prueba cada clona respecto que se unen al hibridoma de células T
a su capacidad para secretar IL-2 cuando es
estimulada con péptidos de ovoalbúmina. Se
hacen crecer clonas individuales de hibridomas
de células T que reconocen OVA.

Se recolectan anticuerpos monoclonales

que se unen a líneas de células T

FigurA 1
La generación de anticuerpos específicos para el tcr

96

de células B construidos de manera artificial,
o hibridomas— hizo técnicamente más fac-
tible el análisis del tcr.
Un hibridoma es un producto de fusión
de dos células. Los hibridomas de células B
se generan al fusionar de manera artificial
linfocitos de vida breve, productores de anti-
cuerpos, con células tumorales de vida pro-
longada a fin de generar células hijas de vida
prolongada que secretan grandes cantida-
des de anticuerpos monoclonales. (El tér-
mino monoclonal se refiere al hecho de
que todas las células en un cultivo de hibri-
doma dado se derivan de la clona única de
células y, por ende, portan el mismo dna; los
detalles de la tecnología se describen en el
capítulo 20.) Aunque esta técnica se desarro-
lló por vez primera para la generación de
células B de vida prolongada, los científicos
que trabajaban en el laboratorio de John
Kappler y Philippa Marrack también la apli-
caron a linfocitos T.
Los investigadores empezaron por inmu-
nizar un ratón con la proteína ovoalbúmina
(ova), y permitieron que células T específi-
cas para ova se dividieran y diferenciaran
durante algunos días, y después recolecta-
ron los ganglios linfáticos del animal inmuni-
zado. Para enriquecer su población inicial
con tantas células T específicas para ova
como fue posible, durante varias horas culti-
varon con ova in vitro las células de ganglio
linfático recolectadas (figura 1, paso 1). Des-
pués de cierto tiempo en cultivo, fusionaron
estas células T específicas para ova, activa-
das, con células derivadas de un tumor de
células T (figura 1, paso 2); de este modo ge-
neraron varios cultivos de hibridoma de
células T de vida prolongada que recono-
cieron péptidos de ova en el contexto del
mhc del ratón original, un alelo del mhc
llamado H-2d. A continuación diluyeron las
células fusionadas en cada cultivo, lo que
generó varias líneas de hibridoma de células T
en las cuales todas las células en una línea
de hibridoma individual se derivaron del
pro­ducto de un evento de fusión único (fi­­
gura 1, paso 3); esto se denomina clonación
por dilución limitante. De esta manera, aisla-
ron un hibridoma de células T que expresó
un tcr capaz de reconocer un péptido pro-
veniente de la ova, en el contexto de proteí-
nas del mhc clase 2 provenientes de ratones
de la cepa H-2d.
Entonces esas células T podían utilizarse
como antígenos e inyectarlas en un ratón
(figura 1, paso 4). Algunos días más tarde se
extirpó el bazo de este animal, y las células B
del ratón se fusionaron con células tumora-
les de la línea B (figura 1, paso 5). Después de
cultivar para estabilizar los híbridos, los
investigadores clonaron los hibridomas de
células B y seleccionaron una línea de hibri-
doma de células B que produjo anticuerpos
RECUADRO 3-3
monoclonales que se unieron de manera
específica al hibridoma de células T (figura 1,
paso 6). Lo que es más importante, estos
anticuerpos interfirieron con la capacidad
de las células T para reconocer su antígeno
cognado (figura 1, paso 7). El hecho de que
este anticuerpo monoclonal inhibió la unión
de antígeno a tcr sugirió que el anticuerpo
se estaba uniendo de manera directa al
receptor, y estaba compitiendo con el antí-
geno por unión al tcr. A continuación usa-
ron estos anticuerpos para inmunoprecipitar
el tcr desde preparaciones de membrana
solubilizadas con detergente, y purificaron la
proteína tcr (figura 1, paso 8).
De modo concurrente con estos experi-
mentos, en los laboratorios de Stephen
Hedrick y de Mark Davis en los nih y de Tak
Mak en Toronto, se habían estado buscando
los genes que codifican para receptor de
célula T, y se habían logrado avances. Estos
experimentos, así como investigación subsi-
guiente realizada por Susumu Tonegawa, que
completó la identificación de los genes
que codifican para el tcr, se describen con
detalle en el capítulo 7.
Haskins et al. 1983. The major histocompatibility
complex-restricted antigen receptor on T cells. I.
Isolation with a monoclonal antibody. The Jour-
nal of Experimental Medicine 157:1149-1169.
Haskins et al. 1984. The major histocompatibility
complex-restricted antigen receptor on T
cells. Annual Review of Immunology 2:51-66.

7
Identificación de anticuerpo monoclonal que interfiere con el
reconocimiento de antígeno por células de hibridoma de células T

La mezcla de hibridoma La mezcla de hibridoma

de células T con células
presentadoras de OVA en
ausencia de anticuerpo da
lugar a la proliferación de
hibridoma de células T
OVA
de células T con células
presentadoras de OVA en 8
presencia de anticuerpo da Las dos cadenas del receptor αβ
lugar a proliferación nula pueden observarse en la línea 1
del gel, corriendo una arriba de
de hibridoma de células T
la otra a aproximadamente 40
a 45 kDa. Se mostró que las dos
OVA bandas de peso molecular más
alto que se observan en esta línea
representan bandas inespecíficas.

Bandas de TCR αβ de 45 kDa

97
98 sección I | Introducción

El complejo de transducción de señal de célula T
incluye CD3
Del mismo modo que la señalización de célula B requiere la
participación del complejo de transducción de señal Igα/Igβ,
la emisión de señales por medio del tcr depende de un com-
plejo de proteínas denominadas en conjunto CD3 (figura 3-30).
El complejo CD3 está constituido de tres dímeros, un par δє
(delta épsilon), un par γє (gamma épsilon), y un tercer par que
consta de dos moléculas de CD3ζ (zeta) o un heterodímero
ζη (zeta, eta). (Note que las cadenas γ y δ de CD3 son distintas
de las cadenas que constituyen el tcr γδ.) Al igual que Igα e
Igβ, las colas citoplasmáticas de las moléculas de CD3 están
salpicadas de secuencias itam que sirven como sitios de aco-
plamiento para proteínas adaptadoras después de fosforilación
de tirosina inducida por activación. Cada uno de los dímeros
CD3 contiene aminoácidos con carga negativa en su dominio
transmembrana que forman enlaces iónicos con los residuos
que tienen carga positiva sobre las regiones intramembrana del
receptor de célula T.

a) TCR

α β
NH2 NH2

22 23
S S

S S

90 91 γε εδ

NH2 NH2 NH2 NH2

134 140
S S

S S

S S

S S

S S

S S
184 201
ζ ζ

S S 9 222 S S 255 90 105 105 80

+
− − + + − − − −
30 116 130 130 106
COOH COOH
(248) (282)
160 150
COOH 185 COOH
185
COOH COOH
ITAM
143
COOH COOH

b) TCR–CD3

TCR
γε

δε
FigurA 3-30  Diagrama del complejo de TCR-CD3, que
− constituye el receptor de unión a antígeno de célula T.
+ a) Los componentes del complejo CD3 incluyen los homodímeros ζζ
+
(de manera alternativa, un heterodímero ζη) más heterodímeros γϵ y δϵ.
+ Los dominios externos de las cadenas γ, δ y ϵ de CD3 constan de plie-
gues de inmunoglobulina, que facilita su interacción con el receptor de
−
ζζ célula T y uno con otro. Las colas citoplasmáticas largas de las cadenas
CD3 contienen una secuencia común, el motivo de activación de inmu-
− norreceptor basado en tirosina (Immunoreceptor Tyrosine Activation
Motif [itam]), que funciona en la transducción de señal; estas secuencias
se muestran como cuadros de color azul. b) También pueden ocurrir
interacciones iónicas entre las regiones transmembrana que tienen carga
opuesta en el tcr y las cadenas CD3. Se muestran las interacciones pro-
puestas entre los componentes de CD3 y el TCR αβ. [Adaptado de M.E. Call
y K.W. Wucherpfenning, 2004. Molecular mechanisms for the assembly of the T cell
ITAM receptor-CD3 complex. Molecular Immunology 40:1295.]
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T | Capítulo 3 99


Moléculas accesorias de células T seleccionadas que participan en la transducción de señal
cuadro 3-4 de células T
FUNCIÓN

Nombre Ligando Adhesión Transducción Miembro de

de señal la superfamilia Ig

CD4 MHC clase II + + +

CD8 MHC clase I + + +
CD2 (LFA-2) CD58 (LFA-3) + + +
CD28 CD80, CD86 ? + +
CTLA-4 CD80, CD86 ? + −
CD45R CD22 + + +
CD5 CD72 ? + −

Los co-receptores de célula T CD4 y CD8
también se unen al mhc
El receptor de célula T está asociado de manera no covalente
con varias moléculas accesorias sobre la superficie celular
(cuadro 3-4). Con todo, las únicas dos de esas moléculas que
también reconocen el mhc-antígeno peptídico son CD4 y
CD8. Recuérdese que las células T maduras pueden subdivi-
dirse en dos poblaciones de acuerdo con su expresión de CD4
o CD8 sobre la membrana plasmática. Las células T CD4+
reconocen péptidos que están combinados con moléculas del
mhc clase II, y funcionan principalmente como células T
auxiliares o re­guladoras, mientras que las células T CD8+ reco-
nocen antígeno que es expresado sobre la superficie de mo­­
léculas del mhc clase I, y funcionan principalmente como
células T citotóxicas.
CD4 es una glucoproteína de membrana monomérica de 55
kDa que contiene cuatro dominios tipo inmunoglobulina extra-
La señalización por medio del receptor de antígeno, incluso
cuando se combina con la que ocurre por medio de CD4 o CD8,
es insuficiente para activar una célula T que no ha tenido con-
tacto previo con antígeno (una célula T virgen). Una célula T
virgen necesita recibir simultáneamente señales por medio del
tcr y su co-receptor, CD28, para ser activada. Las moléculas
de tcr y CD28 sobre una célula T virgen deben co-unirse al
mhc-péptido presentado y el ligando CD28, CD80 (o CD86),
respectivamente, sobre la célula presentadora de antígeno para
que ocurra activación completa. Ya se hizo alusión a los eventos
de señalización mediados por CD28, que incluyen la estimulación
de la síntesis de interleucina-2 por la célula T, y se comentan a
fondo en el capítulo 11.
CD4
CD8
S S

D1 α β
celulares (D1 a D4), una región transmembrana hidrofóbica, y
una cola citoplasmática larga que contiene tres residuos de
S S

S S

serina que pueden ser fosforilados (figura 3-31). CD8 adopta la

S S

D2
forma de un heterodímero αβ u homodímero αα enlazado con
enlace disulfuro (no son lo mismo que las cadenas α y β que
constituyen el heterodímero de tcr). Las cadenas tanto α D3
como β del CD8 son glucoproteínas pequeñas de aproximada-
mente 30 a 38 kDa. Cada cadena consta de un dominio tipo
S S

D4
inmunoglobulina, extracelular, único, una región tallo, una re­­
gión transmembrana hidrofóbica, y una cola citoplasmática que S S

contiene 25 a 27 residuos, varios de los cuales pueden ser fosfo-

rilados.
Los dominios extracelulares de CD4 y CD8 se unen a re­­
giones conservadas de moléculas del mhc clase II y clase I,
respectivamente (figura 3-7b). La co-unión de una molécula
del mhc única tanto por el tcr como por su co-receptor
CD4 o CD8 aumenta la avidez de la unión de célula T a su FigurA 3-31  Estructura general de los correceptores CD4
blanco. Esta co-unión también acerca mucho los dominios y CD8; los dominios tipo Ig se muestran como círculos. CD8
citoplasmáticos del TCR/CD3 y el co-receptor respectivo, y adopta la forma de un heterodímero αβ o un homodímero αα. La mo-
ayuda a iniciar la cascada de eventos intracelulares que activan lécula de CD4 monomérica contiene cuatro dominios con plegamiento Ig;
una célula T. cada cadena en la molécula de CD8 contiene uno.
100 sección I | Introducción

CD45
TCR/CD3 CD4
CD28

ss

PIP3 PIP3
Itk GADS Grb-2 PI3K Akt PDK1
P
LAT SLP76
P P P
P P P
P P Lck
VAV ZAP-70 P P
P P
P
Grb-2
PLCγ1
SOS Bax Bad

Ras Rac/Rho/ Reorganización

DAG del citoesqueleto
cdc42 Supervivencia

Cascada de
Ca2+ PKCθ MAP cinasa
FigurA 3-32  Vías de transducción de señal que
emanan del tcr. La unión de antígeno a célula T activa
la cinasa de la familia src, Lck, que fosforila la cinasa ZAP-70. La
ZAP-70 a su vez fosforila las moléculas adaptadoras LAT,
SLP76 y GADS que forman un andamio que permite la fosfo-
Calmodulina rilación y activación de PLCγ1 y PKCθ, con los efectos consi-
Calcineurina guientes sobre la activación de factor de transcripción
Citoplasma descrita en el texto. Las proteínas GEF Vav y SOS también son
activadas en el momento de la unión a LAT, lo que conduce
Núcleo a activación de la vía del factor de transcripción Ras/MAP
NFAT NF-κB AP-1 cinasa y la vía Rac/Rho/cdc42; ello da pie a cambios de la
forma de la célula y la motilidad de la misma. La PI3 cinasa,
translocada hacia el lado citoplasmático de CD28, forma
Activación de gen PIP3, lo que induce la localización de las enzimas PDK1 y Akt
a la membrana. Esto lleva a más activación de NF-κB y super-
vivencia celular aumentada, como se describió.

La Lck es la primera tirosina cinasa activada
en la señalización de célula T
Cuando el receptor de célula T interactúa con su antígeno unido
a célula, receptores, co-receptores y moléculas emisoras de se­­
ñales se agrupan hacia las balsas de lípidos ricas en colesterol de
la membrana plasmática (figura 3-32). La tirosina cinasa de la
familia Src, Lck, en circunstancias normales se encuentra aso-
ciada con CD4 y CD8, y la asociación entre Lck y CD4 es en
particular estrecha. La agrupación (inducida por antígeno) del
complejo de receptor-co-receptor lleva Lck hacia la vecindad de
la tirosina fosfatasa asociada a membrana, CD45, que elimina el
grupo fosfato inhibitorio sobre Lck. La fosforilación recíproca
por moléculas de Lck cercanas en sus sitios de tirosina activado-
res (figura 3-9) a continuación induce a Lck para que fosforile
residuos de itam de CD3. (Note que estos eventos tem­pranos
corren parejos con los inducidos en células B por la cinasa de la
familia SRC, Lyn, que también está regulada por la actividad de
fosfatasa de CD45.)
Una vez que los itam de CD3 son fosforilados, una segunda
tirosina cinasa, ZAP-70, se acopla en los residuos de tirosina
fosforilados de las cadenas CD3ζ. ZAP-70 es activada por fosfo-
rilación mediada por Lck, y fosforila muchas moléculas adapta-
doras, incluso SLP-76 y LAT, así como enzimas importantes en
la activación de células T, como PLCγ1.
Las células T usan estrategias de señalización
torrente abajo similares a las de las células B
Del mismo modo que en las células B, las señales iniciadoras en
el receptor de antígeno de células T con eventos de fosforilación
de tirosina a continuación son diseminadas a enzimas y fac-
tores de transcripción intracelulares usando una red de mo-
léculas adaptadoras y enzimas.
En células T, una de las moléculas adaptadoras más tempra-
nas que se incorpora en el complejo de emisión de señales es
LAT (proteína enlazadora de células T activadas [Linker protein
of activated T cells]), una proteína transmembrana asociada
con balsas de lípidos en la membrana plasmática. Después de
ligadura a tcr, lat es fosforilada en múltiples residuos por
ZAP-70, y estos residuos fosforilados ahora proporcionan sitios
de acoplamiento para varias enzimas importantes que portan
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
dominios SH2, incluso PLCγ1 (figura 3-32). La lat fosforilada
también se une a la proteína adaptadora gads, que está
asociada de manera constitutiva con el adaptador SLP-76.
Esta combinación de proteínas adaptadoras es crucial para la
señalización de receptor de célula T; proporciona el marco
estructural para casi todos los eventos de emisión de señales
torrente abajo.
Muchos de estos eventos torrente abajo ahora serán familia-
res. PLCγ1, localizado a la membrana plasmática por unión a
lat, es más activado por fosforilación de tirosina, mediada por
la cinasa Itk (que pertenece a una familia de cinasa denominada
cinasas Tec). Como se describió, PLCγ1 desintegra PIP2, lo que
libera IP3, que induce la liberación de calcio y la activación de
nfat por medio de la activación de calcineurina. El dag creado
por hidrólisis de PIP2 se une, en células T, a una forma especia-
lizada de pkc llamada la PKCθ (theta). Como se describió, esta
parte de la cascada de emisión de señales culmina de modo
similar en la degradación de los inhibidores de NF-κB y la
translocación del factor de transcripción activo hacia el núcleo
(figura 3-17).
La lat fosforilada también se asocia con el dominio SH2 de
Grb2, la ahora familiar molécula adaptadora que introduce
componentes de la vía Ras al complejo de señalización. Recuerde
que Grb2 se une de manera constitutiva a sos, el gef que facilita
r e s u m e n
■■ Los antígenos se unen a receptores por medio de interacciones
de enlace no covalentes.
■■ Las interacciones entre antígenos y receptores del sistema inmu-
nitario son aumentadas por interacciones simultáneas entre co-
receptores expresados por linfocitos y moléculas sobre células
presentadoras de antígeno o sobre antígenos complejos.
■■ Casi todas las interacciones receptor-antígeno son multivalentes,
y esta multivalencia aumenta significativamente la avidez de la
interacción de unión de receptor-antígeno.
■■ La unión de antígeno a receptor induce una cascada de señalización
en la célula que porta el receptor, que da pie a alteraciones de la
motilidad, las propiedades adhesivas y el programa de transcrip-
ción de la célula activada.
■■ La señalización de antígeno es iniciada por células tanto T como
B por agrupación de receptor mediada por antígeno. Los recep-
tores agrupados están situados en regiones especializadas de las
membranas, llamadas balsas de lípidos.
■■ Las proteínas CD3 e Igα/Igβ, que son elementos de transducción
de señal asociados con receptor de células B y T, son fosforiladas
sobre motivos de activación de inmunorreceptor basados en
tirosina (Immuno-receptor Tyrosine Activation Motifs [itam]),
y éstos sirven como puntos de acoplamiento para moléculas
adaptadoras.
■■ Enzimas emisoras de señales torrente abajo y gef se acoplan
sobre las moléculas adaptadoras y hacen contacto con sus sustra-
tos. Estas enzimas incluyen fosfolipasa Cγ, que desintegra PIP2
hacia dag e IP3. La interacción de IP3 con receptores localizados
al er lleva a la liberación de calcio intracelular y la activación de
proteínas reguladas por calcio, como la fosfatasa calcineurina. La
calcineurina desfosforila el factor de transcripción nfat, lo que
permite que éste tenga acceso al núcleo. El dag se une a la pro-
teína cinasa C y la activa, lo que finalmente conduce a activación
| Capítulo 3 101
la activación de la vía Ras. En células T, la vía Ras es importante
tanto para la activación del factor de transcripción AP-1, que
funciona para emitir señales para la secreción de citocina, como
para el paso de señales que reorganizan el citoesqueleto de
actina para liberación de citocina dirigida.
Así, al igual que para células B, la unión de tcr-antígeno
conduce a una multitud de consecuencias, entre ellas regulación
ascendente de factor de transcripción, reorganización del cito­
esqueleto, y secreción de citocina. De nuevo, al igual que para
células B, la emisión de señales de células T también afecta la
expresión de moléculas de adhesión como integrinas sobre
la su­­perficie celular y quimiocinas, que tiene efectos subsi-
guientes sobre la localización celular.
Está claro que la descripción de la señalización de la inmu-
nidad adaptativa ofrecida en este capítulo representa sólo
la punta del iceberg, y estas cascadas de emisión de señales con-
tienen más componentes y resultados que aquellos a los que
puede hacerse alusión en este breve esbozo. No obstante, del
mismo modo que las proteínas adaptadoras proporcionan un
andamio para que el sistema inmunitario organice sus proteí-
nas emisoras de señales, los autores esperan que este capítulo
haya proporcionado un andamio similar para la organización
de los pensamientos del lector respecto a estos procesos fasci-
nantes y complejos.
de NF-κB. El acoplamiento de la molécula adaptadora Grb2 a
proteínas adaptadoras facilita su unión a la proteína gef, sos, y
la activación de la vía de la map cinasa, lo que da por resultado
activación del factor de transcripción AP-1.
■■ El receptor de antígeno sobre células B es una forma unida a
membrana de la molécula de inmunoglobulina de cuatro cade-
nas que la célula B secreta en el momento de estimulación. Una
molécula de inmunoglobulina comúnmente se conoce como un
anticuerpo. Los anticuerpos tienen dos cadenas pesadas y dos
cadenas ligeras.
■■ Los anticuerpos secretados por células B en el momento de
estimulación se clasifican de acuerdo con la secuencia de ami-
noácidos de la cadena pesada, y anticuerpos de diferentes clases
desempeñan diversas funciones durante una respuesta inmuni-
taria.
■■ La señalización de antígeno en células B procede de acuerdo
con las estrategias de emisión de señales compartidas entre
muchos tipos de células.
■■ El receptor de antígeno sobre células T no es una molécula de
inmunoglobulina, aunque sus dominios de proteína están clasifi-
cados como pertenecientes a la superfamilia de proteínas inmu-
noglobulina.
■■ Casi todas las células T portan receptores constituidos por un
heterodímero αβ que reconoce un antígeno complejo, que con-
siste en un péptido corto insertado en un surco en la superficie
de una proteína codificada por el complejo principal de histo-
compatibilidad (mhc) de genes.
■■ Algunas células T portan receptores formados de cadenas recep-
toras γδ que reconocen una gama diferente de antígenos.
■■ La señalización de antígeno en células T comparte muchas estrate-
gias características con la señalización de célula B.
102 sección I | Introducción
R e f e r e n c i a s
Andreotti, A.H., P.L. Schwartzberg, R.E. Joseph, y L.J. Berg.
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Sitios web útiles
www.genego.com  Este sitio ofrece una base de datos de vías
metabólicas y reguladoras en la cual pueden efectuarse búsquedas.
www.nature.com/subject/cellsignaling  Es una colección
de artículos de investigación originales, revisiones y comentarios
respecto a la emisión de señales celulares.
http://stke.sciencemag.org  El sitio web de Signal Transduc-
tion Knowledge Environment, mantenido por la revista Science. Es
un excelente sitio, pero partes del mismo están cerradas a quienes
carecen de una suscripción.
www.signaling-gateway.org  Este portal es presentado por la
University of California en San Diego, y es apoyado por Genentech
y Nature. Un excelente recurso, completo, con artículos especiales.
www.qiagen.com/geneglobe/pathwayview.aspx   Qia-
gen. Un útil sitio web comercial.
www.biosignaling.com  Parte de Springer Science+Business
Media.
www.youtube.com  Muchos videos y animaciones excelentes
de sitios web de emisión de señales están disponibles en Youtube,
demasiado numerosos como para mencionarlos aquí. Simplemente
hay que escribir las vías en un navegador de web e ingresar. Sin em­­
bargo, es necesario conocer de dónde proviene el video. No todos
los videos son exactos, de modo que es necesario verificar los he­­
chos con la literatura médica publicada.
www.hhmi.org/biointeractive/immunology/tcell.
html  Película del Howard Hughes Medical Institute (HHMI):
Cloning an Army of T Cells for Immune Defense.
 Receptores y señalización: receptores de célula B y de célula T
P r e g u n t a s d e e s t u d i o
1. La familia nfat es una familia omnipresente de factores de
transcripción.
a. En condiciones de reposo, ¿dónde está ubicado el nfat en
una célula?
b. En condiciones activadas, ¿dónde está ubicado el nfat en
una célula?
c. ¿Cómo se libera desde su estado en reposo y se le permite
que se reubique?
d. Los fármacos inmunosupresores, como la ciclosporina, ac­­
túan por medio de inhibición de la fosfatasa calcineu-
rina. Si nfat es omnipresente, ¿cómo cree que estos
fármacos pueden actuar con tan pocos efectos secunda­
rios sobre otros procesos de señalización dentro del
cuerpo?
2. Durante los primeros días de los experimentos diseñados para
detectar el receptor de célula T, varios grupos de investigación
diferentes encontraron que los anticuerpos dirigidos contra
proteínas de inmunoglobulina parecieron unirse al receptor
de célula T. Dado lo que ahora se sabe acerca de la estruc-
tura de las inmunoglobulinas y el receptor de célula T, ¿por
qué esto no es por completo sorprendente?
3. ¿Cierto o falso? Explique sus respuestas.
Las interacciones entre receptores y ligandos en la superficie
celular:
a. están mediadas por interacciones covalentes.
b. pueden dar lugar a la creación de nuevas interacciones co­­
valentes dentro de la célula.
4. Describa cómo las manipulaciones experimentales que siguen
se usaron para determinar la estructura de anticuerpos.
a. Reducción y alquilación de la molécula de anticuerpo
b. Digestión enzimática de la molécula de anticuerpo
c. Detección de fragmentos de inmunoglobulina por anti-
cuerpo
5. ¿Qué es un itam, y qué proteínas modifican el itam en Igα e
Igβ?
6. Defina una proteína adaptadora. Describa cómo una interac-
ción entre proteínas que portan SH2 y grupos de tirosina fos-
forilados (pY) ayuda a transducir una señal desde el receptor
de célula T hacia la proteína cinasa ZAP-70.
7. La IgM tiene 10 sitios de unión a antígeno por cada molécula,
mientras que la IgM sólo tiene dos. ¿Esperaría que la IgM
fuera capaz de unirse a cinco veces más sitios antigénicos en
un antígeno multivalente que la IgG? ¿Por qué sí/por qué no?
| Capítulo 3 103
8. Usted y otra compañera están estudiando un receptor de cito-
cina sobre una célula B que tiene un Kd de 10–6 M. Usted sabe
que los sitios receptores de citocina sobre la superficie celular
deben estar ocupados al menos 50% para que la célula B reciba
una señal de citocina desde una célula T auxiliar. Su compa-
ñera de laboratorio mide la concentración de citocina en la
sangre del animal de experimentación y detecta una concen-
tración de 10–7 M. Ella le dice a usted que el efecto que ustedes
han estado midiendo posiblemente no podría depender de las
citocina que están estudiando. Usted está en desacuerdo. ¿Por
qué?
9. La activación de cinasas de la familia Src es el primer paso en
varios tipos diferentes de vías de señalización. Por ende tiene
sentido biológico que la actividad de esta familia de tirosina
cinasas esté regulada de manera en extremo estrecha. Describa
cómo la fosforilación de cinasas de la familia Src puede
suministrar señales tanto activadoras como inhibidoras a
cinasas Src.
10. Usted ha generado una clona de células T en la cual la tirosina
cinasa de la familia Src, Lck, es inactiva. Estimula esa clona
con su péptido antigénico cognado, presentado sobre la plata-
forma de mhc apropiada, y hace pruebas para secreción de
interleucina-2, como una medida de activación de células T.
¿Espera ver secreción de IL-2 o no? Explique.
11. Nombre una proteína que se ha mostrado que es defectuosa en
muchos casos de agammaglobulinemia ligada a X, y describa
cómo una reducción de la actividad de esta proteína podría
llevar a inmunodeficiencia.
12. Las proteínas receptoras de células B y T tienen regiones in­­
tracitoplasmáticas notoriamente cortas, de sólo algunos
aminoácidos. ¿Cómo puede usted conciliar esta característica
estructural con la necesidad de emitir una señal al interior de
la célula de la presencia de antígeno unido?
13. Describa una manera en la cual la estructura de los anticuer-
pos está muy bien adaptada a su función.
14. Como un estudiante graduado, su asesor ha dado a usted una
clona de células T que parece estar constitutivamente (siem-
pre) activada, aunque a un bajo nivel, incluso en ausencia de
estimulación antigénica, y le ha pedido que averigüe por qué.
Su compañero de pupitre le sugiere empezar por verificar la
secuencia de su gen lck, o el estado de la actividad de Csk en
la célula. Usted está de acuerdo en que son buenas ideas. ¿Cuál
es su razonamiento?