Técnica[editar]

Esta técnica puede realizarse tanto en muestras histológicas (variante

histológica) como citológicas (variante clásica).

Variante histológica [editar]

Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Los
reactivos necesarios para su realización son los siguientes:

1. ácido peryódico 58%

2. carbol fucsina de Ziehl culina (fucsina fenicada). Preparar mezclando en
el orden dado:
1. 0,5 g fucsina básica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos
3. hematoxilina
4. alcohol ácido 1%:
1. alcohol de 35º
2. ácido clorhídrico
El procedimiento es el siguiente:

1. desparafinar e hidratar los cortes

2. ácido periódico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol ácido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio
9. deshidratar, aclarar y montar preparaciones
Resultados
BAAR: rojo-amarillo
Núcleos: rosas
Variante clásica "en caliente"[editar
1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede
adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede
darle resultados falsamente negativos y un frotis muy
 grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la
tinción.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla
de tinción con los extendidos hacia arriba.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tinción.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos
durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este
período,
4. Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5
minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina
fenicada penetre y tiña la pared celular de la bacteria. No
deje que hierva o se seque el colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con
agua corriente fría hasta que toda la tinción libre quede
lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no
se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-ácido.
1. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante, tal
como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos
durante 7 minutos. Si no se decolora suficientemente, el
contenido del esputo que no son bacilos TBC puede
permanecer teñido. Enjuague con agua una vez más los
portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos
aún están rosa, aplique una cantidad adicional de la
solución decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
1. Aplique la solución de contraste, azul de metileno, durante
1 minuto.
7. Enjuagar con agua
1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline
cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua.
Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a
que sequen al aire.
8. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y
haga la observación al microscopio con 100 x 100
Variante clásica en "frío" (Tinción de Kinyoun)[editar]
1. Hacer un frotis.
2. Dejarlo en el puente de tinción.
3. Aplicar fucsina-fenicada (solución con fenol y mayor
concentración de fucsina).
 4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol ácido.
6. Lavar con agua del grifo.
7. Contrastar con azul de metileno
Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes[editar]
 Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistentes.1
 Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistentes.2
 Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras fecales.3