LIC.

HUGO GARCIA VASQUEZ

HISTOTECNOLOGO CITOTECNOLOGO
EsSALUD HOSPITAL ALBERTO SABOGAL S
• En la Histotecnología se
denomina impregnación a
toda coloración especial
en la que se utiliza sales
metálicas (cloruro de oro,
nitrato de plata sales de
cromo, etc.). Para originar
precipitados metálicos en
las estructuras que van
hacer teñidas.
• El objetivo de impregnación
argéntica es precipitar plata
metálica a partir de sus sales
para conseguir que se deposite
sobre los tejidos.
• La sal argéntica más utilizada
es el nitrato de plata que tiene
la propiedad de ser muy Corteza cerebral (sustancia gris;
neuronas piramidales,
soluble en el agua. granulosas, estrelladas)
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y
físico químico.

En ellas se produce fenómenos de tipo físico y físico químico y no

reacciones químicas concretas entre los tejidos y la sal de plata
utilizada.

COLORACION DE LAS ESTRUCTURAS HISTOLOGICAS POR UN

MECANISMO PURO DE IMPREGNACION.
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y
físico químico.

DETERMINADAS ESTRUCTURAS HISTOLOGICAS ELECTRONEGATIAS

ATRAEN, POR UN MECANISMO ELECTROSTATICO, A IONES DE PLATA
CARGADOS POSITIVAMENTE Ag + QUE EXISTE EN LA SOLUCION DE
IMPREGNACION.
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y
físico químico.

POSTERIORMENTE ESTOS IONES SE HACEN PRECIPITAR COMO PLATA

METALICA SOBRE LAS ESTRUCTURAS HISTICAS MEDIANTE REDUCCION
EXTERNA.

LA PLATA METALICA EN FORMA DE FINOS PRECIPITADOS TIENE

ESPECIAL APETENCIA POR DEPOSITARSE SOBRE ESTRUCTURAS
FIBRILARES FINAS Y POR SUPERFICIES CELULARES DOTADAS DE
DELGADAS PROLONGACIONES TALES COMO CELULAS GLIA,
NEURONAS, FIBRAS RETICULARES DEL TEJIDO CONJUNTIVO.
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y
físico químico.

ARGIROFILIA: PROPIEDAD QUE POSEE DETERMINADAS ESTRUCTURAS

TISULARES EN UNIRSE A LOS IONES DE PLATA DERIVADOS DEL
NITRATO DE PLATA O PLATA AMONIACAL.

FIBRAS DE RETICULINA

GRANULACIONES INTRACITOPLASMATICA (GRIMELIUS)

• El tejido no interviene activamente en el mecanismo de
liberación de plata metálica a partir de su sal soluble.

• No todos los tejidos tienen idéntica apetencia por la

plata; como en todo impregnación, tanto la carga eléctrica
como la textura de las células para teñir (rugosidad
superficial, presencia de prolongaciones o vellosidades
etc.). Intervienen de manera decisiva.
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos.

Se basa en la actuación de un componente de tejido sobre el nitrato o

sus derivados a raíz de la cual ocurre una precipitación de plata
metálica a partir de sus correspondientes iones. Por tanto el tejido
interviene activamente en el deposito de plata a través de una
reacción química de reducción.
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos.

ARGENTAFINIDAD: ES LA PROPIEDAD QUE TIENEN ALGUNOS

TEJIDOS DE REDUCIR EL NITRATO DE PLATA AMONIACAL A PLATA
METALICA SIN INTERVENCION DE AGENTES REDUCTORES EXTERNOS.
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos.

ARGENTAFINIDAD:
PROPIEDAD CARACTERISTICO PARA DETERMINAR GRANULACIONES
CITOPLASMATICOS PRESENTES EN LAS CELULAS CUTANEAS COMO
LOS MELANOCITOS, QUE SECRETAN MELANINA, Y EN CIERTAS
SECRECIONES ENDOCRINAS PRESENTES EN EL TUBO DIGESTIVO
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos.

ARGENTAFINIDAD:
EN CIERTAS SECRECIONES ENDOCRINAS PRESENTES EN EL TUBO
DIGESTIVO Y QUE RECIBEN EL NOMBRE DE ARGENTALINES, ENTERO
CROMAFINES O CELULAS KULTSHITZKY. ESTAS CELULAS SE
ENCUENTRAN SOBRE TODO EN LAS GLANDULAS PILORICAS DEL
ESTOMAGO, CRIPTAS LIEBERKUN Y MUCOSA DEL APENDICE.

MASSON FONTANA
3.- impregnación argéntica no histoquimica o por métodos
predominantemente fisicos – físico químicos.

Los aspectos esenciales en este tipo de impregnación son las

siguientes:
1.-La fijación se hace fundamentalmente con formol como también se
puede utilizar Bouin que actúa como mordiente.
2.- La impregnación argéntica se divide en:
a).- Impregnación argéntica en dos tiempo.
b).- Impregnación argéntica en un tiempos
•Utiliza procedimientos químicos
para obtener plata metálica a
partir del Nitrato de plata
mediante varias reacciones
sucesivas.
• En una primera fase es necesario
tratar en Nitrato de plata con bases
fuertes como en hidróxido de sódico,
hidróxido potásico, hidróxido amónico
etc. Con la cual se obtiene oxido de
plata que precipita en granulaciones
parduzcas.
• Mediante la adición el amoniaco con
la solución anterior se obtiene un
complejo iónico de plata y amonio el
denominado óxido de diamino-
argéntico o plata amoniacal soluble
en agua aunque muy inestable.
• El óxido de diamino-argéntico o plata
amoniacal se reduce al añadirse formol 10%
el cual tiene capacidad de captar oxigeno
hasta precipitar la plata dando como
producto plata metálica, ácido fórmico y
amoníaco.
[(AgNH3 ) 2 ]2O+CHOOH=2Ag+4NH3+HCOOH
• Esta plata metálica es la que se deposita
sobre el tejido en forma molecular muy
estable.

• Las técnicas de coloración para fibras de

reticulina son el ejemplo más característicos
de esta forma de impregnación.
• En ella se suele a partir de nitrato de plata
(AgNo3).
• Esta impregnación se fundamenta en el uso de un
reductor severa directa de la sal de plata a plata
metálica a través de un agente reductor potente
como pirogalol ó hidroquinona.

AgNo3 + agente reductor= Ag + prod. oxidación

• Es una técnica más lenta que la de dos
tiempos, ya que el nitrato de plata es más
estable que el óxido diamino-argéntico, a
partir del cual se precipita a plata
metálica.
• Impregnar el tejido con nitrato de plata
• Reducir con un reductor fuerte como el
pirogalol o la hidroquinona
• EJ: Técnica de Bodian para neurofibrillas.
• Ej: Técnica de Grimelius para argirofilia
• Ej: Técnica de Wartin Starry H.
pylori.(argentafinidad)
• Las técnicas de impregnaciones
metálicas, especialmente las que
utilizan sales de plata, son
notoriamente caprichosas, de manera
que tomar ciertas precauciones en su
ejecución, ayudará a obtener mejores
resultados.
1. Portaobjetos: éstos deben ser silanizados,
pues las soluciones de plata suelen ser
alcalinas lo que favorece el desprendimiento
de los cortes.

2. No utilizar pinzas metálicas (tipo pato para

manipular las láminas), pues al contacto con
metal la plata se reduce. Mantener estas
precauciones al momento de pesar.
3. Usar reactivos pro análisis.

4. Usar agua destilada de buena calidad.

La calidad del agua se chequea
agregando un grano de plata al agua, si
se vuelve lechosa desecharla.

5. Lavado de material de vidrio acucioso.

6. Para la utilización de reactivos como el
amoníaco, hacerlo siempre bajo campana,
no pipetear ácidos ni bases fuertes.

7. Para las soluciones amoniacales eliminar

INMEDIATAMENTE aquellas donde se ha
formado un cristal negro brillante.
8. Mantener las soluciones de plata simples
(soluciones madres de nitrato de plata) en
frascos ambar, bien tapados y rotulados a 4°c

9. Evitar luz directa en soluciones y polvos de

plata.

10. Eliminar soluciones de plata precipitadas.

• Matriz extracelular o MEC.

• La MEC está constituida por la sustancia fundamental por fibras

(colágenas, reticulares y elásticas)

• III: Se conocen también como fibras reticulares porque se creía que

difería de la colágena. En la actualidad se sabe que la fibra
reticular es un tipo de colágena que se glucosilla en grado elevado
y forma fibras delgadas o redes.
• Se encuentran como un reticulado fino muy.
• Rodean a los adipocitos, a las células del músculo liso, se
encuentran por debajo del endotelio de los capilares a los
que dan cierta rigidez.
• Forman el retículo del tejido linfoide y de la médula ósea y
rodean a las células parenquimatosas de las glándulas.
• A causa del gran contenido de grupos carbohidratos las
fibras de colágena tipo III se tiñen de manera preferencial
con sales argénticas o por medio de la reacción del ácido
peryódico de Schiff (PAS).
 Fibras reticulares negro. Fibras colágenas amarillento
Fibras reticulares del bazo p = reticulina del parénquima
sv = reticulina de los senos venosos
• Es una impregnación argéntica en dos
tiempos, usa como base fuerte el
hidróxido de sodio y como agente
reductor el formol. Antes de la
impregnación se realizan manipulaciones
similares a la técnica de Gomori, se
reemplaza el metabisulfito por ácido
oxálico. Finalmente se contrasta con
cloruro de oro.
Fibras reticulares de hígado
EP = espacios porta
V = vena terminal del lobulillo
 • Un tiempo
• Demuestran granulaciones
intracitoplasmaticas
• Células argirófilas : negro

Demostración de oncocitos en una metástasis hepática

Oncocitos tienen su origen en células endocrinas del
sistema digestivo (intestino delgado).
 • Un tiempo
• Células argirófilas : negro

demostración de células neuroendocrinas y de los

tumores derivados se ellas.
• Impregnación argéntica en
dos tiempos
• Se impregna con plata
amonialcal
• La segunda reducción la
realiza el tejido
• Demuestra granulaciones
de melanocitos, células
argentafines intestinales.
• Es una impregnación argéntica en dos tiempos, en
la cual el amoniaco realiza La primera reducción
el nitrato de plata a óxido diaminoargéntico y el
tejido la segunda, precipitando la plata metálica
sobre las granulaciones con capacidad reductora.
La principal dificultad de la técnica se encuentra
en la preparación de las´soluciones, dado que es
importante encontrar el punto en que la plata esta
apunto de precipitar sin que llegue en realidad a
hacerlo.
Helicobacter pylori colonizado en la superficie del epitelio
regenerativo, teñidas con el método de Warthin-Starry
• En contraste con la escasez de fibras de reticulina en la piel normal
vemos abundancia en condiciones patológicas en las cuales la
actividad fibroblástica forma nuevo colágeno. Así vemos numerosas
fibras de reticulina en granulomas tales como Lepra, Tuberculosis,
Sarcoidosis, tumores fibroblásticos como dermatofibroma,
fibrosarcomas y queloides.
• Ayudan a reconocer ciertas patologías renales tales como
glomeruloesclerosis, glomerulonefritis lobular crónica.
• Retículo es una función de apoyo del cuerpo y es abundante en
hígado, el bazo y el riñón.
• En un hígado normal de las fibras se va a definir líneas, pero el hígado
necrótico y cirróticos muestran patrones discontinuos.
• Retículo también forma patrones característicos en relación con ciertas
las células tumorales.
En estas técnicas la sal de plata más empleada es el nitrato de plata,
de allí que esta operación se denomina también nitratación.
Con esta técnica se impregnan dos tipos de elementos:

• Las fibras reticulares de la MEC que rodean células y vasos para

poner en evidencia los límites de los elementos celulares obteniéndose
una imagen negativa de estos últimos.

• Los elementos citológicos (núcleo, aparato de Golgi) y elementos

nerviosos los cuales dan una imagen positiva
• Las técnicas para fibras reticulares esencialmente son de dos
tipos: 1) En cortes congelados, los cuales derivan del método
tanno-argéntico de Achucarro (1911) y 2) Las derivadas de la
técnica de Bielchowsky (1904) para cortes congelados o en
parafina.

• El número de variantes derivadas de las técnicas madres son

numerosas
• Los métodos modernos de impregnación argéntica, pueden ser
clasificados en dos grandes grupos, partiendo del tipo de
solución al que se exponen los tejidos para lograr la
impregnación. De esta manera, tenemos métodos de plata
amoniacal y de metenamina plata.
• 1) Métodos de Plata Amoniacal: Todos los métodos de plata amoniacal,
tienen los siguientes pasos principales:

• Oxidación, sensibilización, exposición a la solución de plata, reducción,

tonificación, remoción de la plata que no ha reaccionado y la coloración
de contraste.

• Muchos de los métodos de plata amoniacal tienen mecanismos similares.

Todos utilizan como base la solución de Bielchowsky que se prepara
precipitando 5cc de nitrato de plata al 5% con gotas de amoniaco para
el equilibrio ionico luego de agrega 5 cc de hidróxido de sodio al 3%.
Luego se redisuelve el precipitado resultante añadiendo gota a gota
amoníaco y se completa con agua destilada hasta obtener un volumen
total de 40cc.
• La Oxidación de los tejidos sirve para amplificar la
subsecuente tinción de las fibras reticulares. Los oxidantes
pueden variar de acuerdo a las técnicas. Los lavados, luego de
la oxidación sirven para remover el exceso de reactivo.
Oxidación:
• Permanganato de potasio, KMnO4–. Se trata de sustancias de
un intenso color violeta y alto poder oxidante que contienen el
anión.
• Las manchas generadas por el permanganato suelen ser
debidas a la formación de óxidos de manganeso y se eliminan
fácilmente con disoluciones ligeramente aciduladas de sulfito o
tiosulfato. Sin embargo estas sustancias pueden generar en los
tejidos, tras la exposición al sol, manchas amarillas, por lo que
se prefiere usar ácido oxálico.
Oxidación:
• El ácido oxálico es un reductor del permanganato y
neutralizante de los óxidos de manganeso que generan
manchas.
• es un ácido carboxílico H2C2O4.
• ácido orgánico relativamente fuerte.
• es tanto un agente reductor como un elemento de conexión en
la química.
• Reacciona con permanganato (MnO4-) reduciéndolo a
manganeso y oxidándose a carbonato o CO2:
• El paso de sensibilización es básicamente una impregnación con
una sal metálica que forma compuestos orgánico-metálicos con el
tejido y luego este metal sensibilizado es reemplazado por la
plata de la solución de nitrato de plata.
• Posteriormente, los tejidos son tratados con la solución de plata
amoniacal. Usualmente, no hay cambios de color hasta que las
secciones realmente se hayan reducido.
• Este proceso de reducción es comúnmente denominado revelado, y
las técnicas de plata-diamina requieren concentraciones variables
de formalina (formaldehido HCHO) como agente reductor.
• La plata metálica visible que resulta del proceso de reducción
puede ser marrón o negra, dependiendo de la cantidad de plata y
del tamaño de las partículas. Estos depósitos pueden ser
tonalizados convirtiéndolos en depósitos de oro metálico que son
púrpura negros, al tratarlos con cloruro de oro (AuCl3). El oro
metálico es mucho más estable que la plata metálica, y los cortes
tratados con esta solución muestran un mejor contraste y claridad
que los que no han sido tratados con la solución.
• Reforzamiento. Con cloruro de oro amarillo es un
paso de gran utilidad el reforzamiento consiste en
eliminar esta plata y substituirla por cloruro de
oro.
• El tratamiento final de la sección para su contraste es la inmersión
de las láminas en una solución de tiosulfato de sodio que forma
complejos solubles con la plata iónica que no ha reaccionado con el
tejido. Esta remoción de la plata no reactiva previene una tardía
reducción no específica de la plata con la luz, al igual que remueve
el exceso de cloruro de oro que pueda estar presente en el tejido.
 GRIDLEY WILDER SNOOK GOMORI

Oxidación Ácido Peryódico Ácido Permanganato de Ácido Periódico

0,5% Fosfomolíbdico Potasio 0,25% 0,5%
10%
Ácido Oxálico al
5%

Sensibilización Nitrato de Plata al Nitrato de Uranio Nitrato de Uranio ——

2% al 1% al 1%

Exposición a Nitrato de plata al Nitrato de plata al Nitrato de plata al Solución

Solución de plata 5% 10,2% 5% metenamina-
=20ml + =5ml + =20ml nitrato de plata
Hidróxido de Hidróxido de Hidróxido de Metenamine al
Sodio 10% amonio Sodio + 3%=
= 20 gotas. 10%=20 gotas Nitrato de Plata
al 5%
Hidróxido de
amonio = Borax al 1%
 GRIDLEY WILDER SNOOK GOMORI

Reducción Formalina al 30% Formalina al 40%= Formalina al 1% ——

0,5ml
Nitrato de Uranio
1%=1,5ml
Agua
destilada=50ml

Tonificación Cloruro de Oro Cloruro de Oro 1% Cloruro de Oro al Cloruro de Oro al

1% 1% 1%

Remoción de la Tiosulfato de Tiosulfato de Sodio Tiosulfato de sodio Tiosulfato de

plata no reactiva Sodio al 1% al 1% al 1% sodio al 1%

Contraste Kernechtrot Kernechtrot Kernechtrot Kernechtrot

• 2) Métodos de metenamina de plata: Los métodos de metenamina
de plata de Jones y Gomori, están basados en la producción de
grupos aldehidos a partir de los grupos a-glicol de los
carbohidratos presentes en las fibras reticulares y en las
membranas basales luego de la exposición de los tejidos a una
solución de ácido peryódico. Estos aldehidos se reducen con los
complejos de metenamina de plata dando como resultado plata
metálica visible. El cloruro de oro y el tiosulfato de sodio, son
usados en estos métodos y cumplen las mismas funciones que en las
impregnaciones de plata amoniacal
Métodos de metenamina de plata GROCOTT :
Ampliamente utilizada para revelar microorganismo fúngicos.

Tinción de JONES: Tinción Metenamina de plata y Acido periódico de

Shiff.
PARED CELULAR
• Esta formada por capas de polisacáridos-
• Glucanos (polímeros β -1,6, ramificados de glucosa)-
• Mananos (polímeros α – 1,6, ramificados de manosa)- Polímeros de
glucosamina-
• Proteínas-
• Lípidos (ergosterol)-
• Quitina (polímero β-1,4 de N-acetilglucosamina)
• 2) Métodos de metenamina de plata:

• ACIDO CROMICO 5 % (1 hora)

• OXIDACION: Los aldehídos se oxidan con relativa facilidad para

dar ácidos carboxílicos, y es suficiente el empleo de agentes
oxidantes suaves.

• BISULFITO SODIO 1% (1 minuto)

• Remueve todos los residuos de la solución de ácido crómico retira
las estructuras que no han sido
• 2) Métodos de metenamina de plata:

SOLUCION MATRIZ DE NITRATO DE PLATA Y METENAMINA

Solución nitrato de plata al 5% 5 cc
Solución metenamina al 3% 100 cc

SOLUCION DIARIA DE NITRATO DE PLATA Y METENAMINA

Solución matriz 25cc
Agua destilada 25cc
Borax 5% 2cc
• 2) Métodos de metenamina de plata:

CLORURO DE ORO

TISULFATO (HIPO) DE SODIO AL 5%

SOLUCION VERDE CLARO 0.2%

Biopsia de pulmón 40X. Tinción de plata-metenamina de Gomori.
Se observan vesículas, hifas septadas con ramificación dicotómica en ángulo de 45°, compatible
con Aspergillus sp.