UNAM, Facultad de Medicina 

Biología Celular e Histología 

Médica Anna Gugerli Lazos 

Microscopía 
 
Microscopía 
• Definición etimológica 
– Mikrós = pequeño – Skopéoo = 
Observar 
 
Microscopio 
Instrumento de precisión que 
proporciona imágenes 
amplificadas de los objetos y más 
detalles que los observados a 
simple vista. 
 
• ¿Cómo lo vamos a observar? 
→ vista (ambos ojos!) → microscopio → 
tejido procesado en laminillas (2D, ya no 3D) 
FIGURE 
1.10 
• 
 
 
 
 
 
UN POQUITO DE HISTORIA 
• 1590 – Zacharias Janssen 
 
• S.XVII 
– Robert Hooke 
– Marcello Malpighi 
 
S.XVII – Anton van Leeuwenhoek 
 
SE ACABO LA HISTORIA... 
 
x10 
x1000 
x1000 
x10 
x100 

Medidas 
• Angström = Å 
10,000 millones Å 

• Nanómetros = nm 
1000 millones nm 

• Micrómetros = μm 
1 millón μm 

• Milímetro = mm 
1000 mm 

• Centímetro = cm 
100 cm 
• Metro = m 
1 m 
 
 Célula nerviosa de jirafa 
Yema de huevo de avestruz 
Célula humana 
Núcleo de la célula hepática humana 
Membrana plasmática 
Amiba 
Bacteria 
Ribosoma 
Poro nuclear 

o 
120 
1 Å 
MICROSCOPIO ELECTRONICO 

1 nm 10 nm 100 nm 
1 um 10 um 100 um 
0.000 000 0001 de metro -0.000 000 001 de metro 0.000 000 01 de metro 
0.000 0001 de metro 0.000 001 de metro 
0.000 01 de metro 
0.0001 de metro 
MICROSCOPIO DE LUZ 
1 mm 
0.001 de metro 
10 mm 
0.01 de metro 
VISION HUMANA 
100 mm 
0.1 de metro 
1 metro 
1.0 metro 
10 metros 

10 metros 
Disminución en potencias 
de 10 

FIGURA  1-19.  Tamaños  relativos  de  las  células  y  de  los  componentes celulares. Cada 
unidad  de  medida  es  un  décimo  mayor  que  la  unidad  precedente.  Aunque  el  huevo 
completo  de  avestruz  es  técnicamente  una  célula,  la  porción viva sólo se encuentra como 
un  delgado  disco  microscópico  situado  sobre  el  borde  de  una  gran  masa  inerte  de  yema 
de huevo. 
 
Microscopía 
• ¿Qué vamos a observar? 
• 4 Tejidos Básicos: 
– Epitelial – Conectivo – Muscular – 
Nervioso 

* 
 
Variedades de 
Microscopía 
• Microscopio fotónico: Simple o 
Compuesto 
• Microscopio electrónico 
• Microscopio de rayos x 
• Microscopio de fuerza atómica 
 
Microscopio fotónico 
• Instrumento de precisión por 
medio del cual se modifican las 
propiedades de la luz por sistemas 
ópticos para ver propiedades 
físicas y químicas de la materia. 
• Simple: Lupa 
• Compuesto: Más de dos lentes 
 
 Microscopio fotónico 
Compuesto 
Simple 
Estereoscopio 
Lupa 
Contraste de fases 
Interferencial diferencial (Normansky) 
Fluorescencia 
Campo oscuro 
Campo claro 
Polarizado 
Confocal 

* 
 
 Componentes del 
microscopio fotónico 
compuesto 
Ópticos Mecánicos Eléctrico 
• Condensador 
• Oculares 
• Objetivos 
• Base o pie 
• Brazo o columna 
• Platina 
• Revolver 
• Tubo óptico 
• Platina 
• Tornillos macrométrico y micrométrico 
• Fuente luminosa 

* 
 
final image 
eyepiece 
O 
exit pupil (eyepoint) 
$ 
tube 

real intermediate image 

objective 
N ww 
focusing control 
exit pupil of objective specimen 

. 
NI 
took 
auxiliary a condenser lens lens SNS 
stage condenser IP 
diaphragm condenser stage control 
S field diaphragm 
condenser diaphragm 
light 
field diaphragm 
source 

te 
SD 
a 
light source 
KOHLER ILLUMINATION THROUGH THE MICROSCOPE 
IMAGING BEAM PATH 
ILLUMINATING BEAM PATH 

1 
Figure 1.9. Diagram of a typical light microscope. 
Copyright 
2003 Lippincott Williams and Wilkins 
 
Mecánicos – Base – Brazo – Platina – Revólver – 
Tornillos Macro y Micrométricos – Cremallera – 
Cabezal 
 
Iluminación – Luz Natural – Luz Artificial (Generador) 
– Filtros 
 
Ópticos 
– Condensador – Objetivos – Prismas 
– Ocular 
 
Sistema óptico: Lentes 
• Cuerpos transparentes limitados 
por 2 caras esféricas, una puede 
ser plana. 
• 
• 
Convergentes (+) 
Divergentes ( 
) - 
 
Lentes 
Convergentes Positivas 
Biconvexo Cóncavo-Convexo Plano-Convexo 
Divergentes Negativas 
Bicóncava Convexo-Cóncavo Plano-Cóncavo 
 
R 
EP 
F 
F 
R 
LC: LENTE CONVERGENTE 
EP: EJE PRINCIPAL O EJE OPTICO 
F: FOCO PRINCIPAL 
R: RAYOS DE LUZ 
 
EP 
LD 
R 
F 
R 
LD: LENTE DIVERGENTE 
EP: EJE PRINCIPAL O EJE OPTICO 
F: FOCO PRINCIPAL 
R: RAYOS DE LUZ 
F 
 
TIPOS DE IMAGENES 
• Real / Virtual 
• Aumentada / Disminuida 
• Normal / Invertida 
 
¿Qué imagen forma? 
FORMACIÓN DE LA IMAGEN 
OBJETIVO 
 
FORMACIÓN DE LA IMAGEN 
OCULAR 
¿Qué imagen forma? 
 
FORMACIÓN DE LA IMAGEN 
¿Qué imagen final se forma? 
 
 
 Características de las 
imágenes obtenidas 
• De acuerdo a su tamaño 
– Aumentadas (mayor tamaño) – 
Disminuidas (menor tamaño) – Mismo 
tamaño 
 
 Características de las 
imágenes obtenidas 
• De acuerdo a su posición que 
adopta en el espacio: 
• Derecha 
• Invertida 
 
 Características de las 
imágenes obtenidas 
• De acuerdo a su orientación que 
toma con respecto a la lente: 
• Real (Del otro lado, se recoge 
con una pantalla) 
• Virtual (Mismo lado) 
 
Imágenes obtenidas en sistemas 
ópticos 
Sistemas Imagen Final Esquema 
Lupa Ocular 
Mayor, Derecha, Virtual 
Proyector Objetivo 
Mayor, Invertida, Real 
Condensador Ojo humano Cámara digital 
Menor, Invertida, Real 
Microscopio Mayor, Invertida, Virtual 
= objeto = imagen = lente 

* 
 
• Son tres las lentes que lo 
componen: 
– Condensador – Objetivo – Ocular 
• Sólo el objetivo y el ocular 
amplían las imágenes 
4x 10x 40x 10x 
100x x 10x 

* 
= Aumento total 
aumento de objetivo x aumento ocular 

Sistema Óptico 
 
Aumento Total 
Lupa 5x 10x 50x 
Bajo aumento seco 
10x 10x 100x 
Gran aumento seco 
40x 10x 400x 
De Inmersión 100x 10x 1000x 

Aumento Total 
Aumento Objetivo 
Aumento Ocular 
 
Condensador 
• Lentes convergentes (1 - 2) 
• Reúnen los rayos luminosos y los orienta 
hacia la muestra 
• Diafragma 
 
Objetivos 
• Son los elementos más 
importantes en la formación de la 
imagen. 
• Formado por lentes 
convergentes y divergentes 
• Forman la imagen primaria del 
microscopio 
 
Objetivos 
 
Aumentos de los 
Objetivos 
• Capacidad de ampliar la imagen 
del objeto observado 
 
Aumentos de los 
Objetivos 
• Tipos: 
– 4x : Lupa – 10x : Objetivo seco de 
poca amplificación 
(aumento) – 40x : Objetivo seco de 
gran amplificación 
(aumento) – 100x : Objetivo de 
inmersión de gran 
amplificación 
 
Seco de poco aumento 
Seco de gran aumento 
De inmersión de gran aumento 
 
Poder de resolución 
• Abstracto 
• Capacidad que posee el objetivo 
para 
distinguir la distancia mínima 
entre 
puntos para que se vean 
visualizados como separados 
dos 

* 
 
Límite de resolución 
(=LR) 
• Concepto matemático 
• Distancia mínima requerida para 
distinguir dos puntos como separados 
• Entonces, ¿PODER = LÍMITE? 
– A mayor poder de resolución (más potente) 
menor será 
el límite de resolución. 

* 
 
Límite de resolución 
** 
 
Límite de resolución 
0.61!×!! !"#$%&$'!numérica 
Donde: LR: Límite de resolución 
λ: Longitud de onda 0.61: 
constante de Abbé AN: Apertura 
Numérica 
LR! = 
=! 
0.61!! !"! 
! 

* 
 
¿Pregunta? 
• ¿¿Se ven las membranas de las 
células con el microscopio 
fotónico????? 
 
Apertura Numérica 
• Capacidad de un objetivo de 
captar los rayos luminosos 
refractados 
• Tamaño del cono de luz que entra 
en la lente del microscopio después 
de pasar por la muestra 

* 
 
Seco de poco aumento 
Seco de gran aumento 
De inmersión de gran aumento 
 
Apertura Numérica 
Donde: AN = Apertura Numérica η = 
índice de refracción del medio α = Mitad 
del ángulo de aceptación 
Refracción: al cambiar la luz de un medio a otro (ej. aire a 
agua), cambia la dirección de la luz 

!" = n!×sinα!! 
* 
 
A mayor apertura numérica, menor límite 
de resolución 

Relación 
Objetivo-Aumento- Límite 
de resolución 
Con un aumento de 100x y una 
apertura numérica, el máximo 
poder de resolución del 
microscopio fotónico es de 0.2 
μm 
 
Oculares 
• Forman la segunda imagen 
ampliada a partir de la imagen 
primaria de los objetivos 
• Amplían a ciertos niveles: 
– 5x – 8x – 10x – 12x 
 
 Microscopio fotónico 
Compuesto 
Simple 
Estereoscopio 
Lupa 
Contraste de fases 
Interferencial diferencial (Normansky) 
Fluorescencia 
Campo oscuro 
Campo claro 
Polarizado 
Confocal 

* 
 
 Variedades de 
Microscopía Fotónica 
 
Microscopio de campo 
claro 
• Fundamento 
• Equipo: 
– Común 
• Material a observar: – Muestras procesadas 
mediante la técnica histológica ordinaria o 
algunas especiales 
 
 
 
 
. 
 
Ea 
ਟ 
 
 
 
Microscopio de campo 
oscuro 
• Fundamento 
– Fenómeno de Tyndall 
• Equipo: 
– Condensador 
• Material a observar: 
– Muestras vivas sin fijar ni 
teñir. – Cultivos – Cristales 
• Recuerda: fondo negro y la célula blanca 
 
 
 
 
り(SL) 
 
 Microscopio de contraste 
de fases 
• Fundamento 
• Equipo: 
– Anillo condensador PH – Filtro de color (verde) 
• Material a observar: 
– Muestras vivas sin fijar ni 
teñir. – Estructura interna – Análisis 
CUALITATIVO 
• Recuerda: Fondo gris, células oscuras y halo de LUZ 
al rededor de la célula 
 
Amplitude 
No light Maximum interference 

— 
A 

! 
1.2 out of phase 
Light= difference in amplitude 
< 142 out of phase 

k 
12 out of phase 
 
 
 
 
 Microscopio Interferencial 
Diferencial según 
Normansky 
• Fundamento: 
– prisma de 
Wallingston 
• Material a observar: 
– Muestras vivas sin 
fijar ni teñir. – Estructura externa 
(superficie) – Análisis 
CUANTITATIVO 
• Recuerda: efecto de falso relieve 
 
 
 
「ノノ○) 
」 
 
Microscopio de 
Polarización 
• Fundamento 
– Luz Polarizada – Birrefringenciaa 
• Equipo: 
– Polarizador – Analizador 
• Material a observar: 
– Muestras vivas sin fijar ni 
teñir. – Estructuras con anisotropía 
(Hueso, Músculo) 
• Recuerda: líneas claras y oscuras e imágenes 
“locas” 
 
 Luz normal (no polarizada) 
Luz polarizada horizontalmente 
- 
- 
- 
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT 

Luz totalmente bloqueada 

- 
wwwww 

Filtro horizontal 
Filtro Vertical 

Dirección de la luz 
 
 
 
 
 
untillitiliau 
m 
miss_ 
 
Microscopio de 
Fluorescencia 
• Fundamento – Rayos UV 
• Equipo: 
– Anticuerpos marcados con 
fluorocromo 
• Material a observar: 
– Muestras procesadas 
mediante técnica histológica especial 
(inmunofluorescencia) 
• Recuerda: colores fosfo en ciertas partes de la 
célula. 
 
DIRECT IMMUNOFLUORESCENCE 

Antibody 
Antigen 
Flourescent secondary antibody 
INDIRECT IMMUNOFLUORESCENCE 
Primary 
antibody 
DILUORESCENCE Permanente coming 
LI 
 
 
MICROSCOPIO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. 
FLUORESCENCIA 
El microscopio de fluorescencia equipado con un sistema óptico 
especial es indispensable para la observación de las técnicas de 
inmunofluorescencia. 
 
 
 
Microscopio Confocal 
(Scanning) 
 
 
Microscopio Confocal 
 
Microscopía Electrónica 
 
 Fundamento de la 
microscopía electrónica 
• ¿Qué variable se puede 
cambiar? 
• λ = uso de un diferente tren 
electromagnético Luz → 
Electrones !!!!! 
L.R = 
. 
λ 
 
 Fundamento de la 
microscopía electrónica 
• El microscopio electrónico es un 
instrumento que: 
– Permite conocer la ultraestructura 
biológica. – Tiene un poder de resolución 
mayor que el del 
microscopio fotónico, porque utiliza 
electrones que tienen una longitud de 
onda de 0.005 nm. – Utiliza la propiedad 
que tienen los haces de electrones de ser 
desviados por un campo electrostático o 
electromagnético, igual que un rayo de 
luz es refractado al atravesar una lente. 
 
Tipos de Microscopía 
Electrónica 
• Microscopia electrónica de 
transmisión (MET): 
– Recuerda: 2D, electrones atraviesan 
muestra, 
se ven estructuras internas de la célula. 
a. De bajo voltaje: 50-100 KV. b. De alto 
voltaje: 500-3000 KV. Permite estudiar 
cortes de 5 mm y células vivas en 
cámaras especiales. 
• Microscopia electrónica de barrido 
(MEB). 
– Recuerda: 3D, electrones no pasan 
 
- light source 
(lamp) 
electron source 
(cathode) 
- anode 
condenser lens 
condenser lens 
scanning coil – 
scanning beam 
secondary 
electron detector 
-specimen -objective lens 
backscattered 
electron detector specimen 

projection lens 
vacuum 
ocular lens 

image on viewing screen 

image in 
eye 
electron detector with CCD camera 
LIGHT MICROSCOPE 
TEM 
SEM image 
image 
TRANSMISSION ELECTRON 
MICROSCOPE 
SCANNING ELECTRON 
MICROSCOPE 
 
Aumentos 
• Aumentos que proporciona el 
MET: 
20,000 x 1,000,000 x ( lentes intermedias ). 
10,000,000 x ( negativos de fotografías ). 
• El microscopio electrónico tiene 
mayor profundidad de foco. 
 
 
 
 
 
。 
 
 
 
M.E.B (BARRIDO) 
 
 
 
 
 
 
 
 
The End