Laboratorio Clínico III Ciclo

Blgo. Giancarlo Ubillús Celi

 Son compuestos orgánicos que tienen alguna
afinidad específica por algún componente.

 Los colorantes son compuestos químicos

utilizados para aumentar el contraste
a) Frotis (extensión)
b) Fijación
c) Coloración.
Tinción de células para la observación
microscópica

Extensión de una fina capa

de células sobre el porta

Adición del colorante

lavado y secado
Secado al aire

Se coloca una gota de aceite

de inmersión sobre el porta y
se observa con el objetivo de
Fijación por flameado del porta 100X
a) Frotis (extensión)
 Utilizar portaobjetos limpios y desengrasados
b) La fijación:
Los microorganismos queden adheridos al portaobjeto ( coagula las
sustancias proteicas)
TIPOS
◦ CON CALOR (O MÉTODO DE KOCH)
◦ FIJACIÓN QUÍMICA: alcohol metílico, formalina al 5 % (v/v), licor de Hoffman
(partes iguales) de etanol absoluto y éter)

Metanol
c) Coloración. SIMPLE
 Lunes
Tinción simple de azul de metileno.

Frotis y fijación

1.- Poner una gota de agua 2.- Tomar la muestra con el 3.-Extender sobre el agua y
en un porta asa de siembra fijar a la llama del mechero

Tinción

1.- Cubrir la preparación 2.- Lavar con agua, dejar

con Azul de Metileno 5’ secar y observar al
microscopio

Micrococcus luteus
 Hongos
 Tinción negativa
c) Coloración. Diferencial
Se utilizan para distinguir entre tipos de
microorganismos
Etapas :
1. Tinción primaria
2. Tinción de contraste o secundaria
- Ejemplo.: COLORACION GRAM, COLORACION DE
ZIEHL- NEELSEN, ESPORAS
 Los mordientes, aunque no son
colorantes, intensifican la tinción
porque aumentan la afinidad de la
célula por el colorante. También se
pueden utilizar para producir un
engrosamiento de ciertas
estructuras celulares externas,
como los flagelos, que debido a su
delgadez no podrían ser
visualizados de otra forma.
 Lunes

Tinción
L-3.2.3.- Tinción de Gram
Frotis y fijación

1.- Poner una gota 2.- Tomar la muestra 3.- Extender sobre el
de agua en un porta con el asa de siembra agua y fijar a la llama 1.- Cubrir la 2.- Añadir Lugol
del mechero preparación con (mordiente) durante 1’
Cristal Violeta 2’

3.- Decolorar con

4.- Lavar con agua 5.- Teñir con Safranina 1’ 6.- Lavar con agua,
Alcohol 96º hasta que
no suelte colorante dejar secar y observar
al microscopio
Tinción de esporas. Miercoles

Tinción
Frotis y fijación

1.-Poner una gota de 2.-Tomar la muestra de 3.-Extender sobre el 1.-Cubrir la

agua en un porta un cultivo de Bacillus agua y fijar a la llama preparación con
del mechero Verde Malaquita

5.-Lavar con agua,

2.-Calentar, con un 3.-Lavar con agua 4.-Teñir con Safranina 1’
dejar secar y observar
hisopo de algodón
al microscopio
empapado en alcohol
y prendido con la
Esporas
llama del mechero,
hasta la emisión de
vapores. Mantener
caliente durante 5
minutos. Bacterias
 Técnicas de tinción para bacterias
Tinción Uso Técnicas
Tinciones Un colorante; proporciona contraste Se tine con un colorante básico (azul de metileno, cristal violeta,
simples para observar mejor un organismo o fucsina básica) durante unos 5 minutos. Aclarar brevemente
completo con agua. Se tiñen casi todas las bacterias; la rnayoría de los
tejidos no se tiñen.
Tínciones
diferenciales
Tinción de Dos o más colorantes; distingue entre Se cubre la preparación de bacterias fijadas con cristal violeta y
Gram bacterias Gram positivas y Gram después con una solución de iodo (mordiente). Todas las células
negativas quedan tenidas de color violeta oscuro. Se decolora con acetona
al 95%.

Las células Gram positivas permanecen tenidas, pero las

negativas pierden el colorante. Se tiñe con safranina (contraste).
El color violeta de las Gram positivas se vuelve más oscuro y las
Gram negativas se tiñen de rosa.
Tinción de Dos colorantes; distingue entre las Se tiñen las células con fucsina básica y se calienta a emisión de
ácido-alcohol micobacterias (ácido-alcohol vapores durante 5 minutos. Todas las bacterias se tinen de rojo.
resistencia resistentes) y el resto de las bacterias Se decolora brevemente con una mezcla de alcohol-HCl. Las
(Ziehl- bacterias resistentes permanecen teñidas de rojo; todas las
Neelsen) demás se decoloran. Se trata con el colorante de contraste azul
de metileno. Las bacterias ácido-alcohol resistentes continúan
tenidas de rojo, las otras se tiñen de azul.
Tinciones
especificas
Tinción de Tiñe selectivamente las endosporas Se cubre la preparación con verde de malaquita y se calienta a
esporas de emisión de vapores durante 60 segundos. Se lava con agua
Wirtz- durante 30 segundos y se tiñe con safranina. Las endosporas
Cortitlin retienen el color verde; el resto de la célula toma el color rosa.
Tinción de Permite observar los flagelos A las células previamente fijadas, se le añade una mezcla de ácido
flagelos de tánico (mordiente) y del colorante rosanilina. El mordiente
Leifson engruesa los flagelos y el colorante los fine.
Tinción Revela la presencia de cápsulas Se utiliza tinta china o nigrosina para tenir una preparación en
 GIEMSA O WRIGHT