FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS

BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Informe N°05

TEMA: CARACTERIZACIÓN CUALITATIVA DE DOS ENZIMAS

(CATALASA Y AMILASA)

NIVEL: Quinto “A”

INTEGRANTES:

Marcelo Vasco 2488

Tania Achance 2470

FECHA DE ENTREGA: 12 de julio del 2017

 1. OBJETIVOS:

1.1. Objetivo General:

 Caracterizar cualitativamente dos enzimas.

1.2. Objetivos Específicos:

 Determinar la presencia de la enzima catalasa en diversos tejidos.

 Comprobar el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática.
 Comprobar la acción hidrolítica de la amilasa.

2. FUNDAMENTO TEORICO:

ENZIMAS
Los enzimas son biomoléculas especializadas en la catálisis de las reacciones químicas que tienen lugar en la célula.
Son muy eficaces como catalizadores ya que son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones químicas mucho
más que cualquier catalizador artificial conocido, y además son altamente específicos ya que cada uno de ellos induce
la transformación de un sólo tipo de sustancia y no de otras que se puedan encontrar en el medio de reacción.
CARACTERÍSTICAS GENERALES:
 No sufren modificación al final de la reacción.
 No cambian la constante de equilibrio de una reacción química.
 Son muy específicas. Aceleran varios órdenes de magnitud mayor con respecto a la reacción no catalizada.
 Actúan en condiciones moderadas de presión y temperatura.

Los catalizadores son sustancias que aceleran o retardan la velocidad de una reacción, sin sufrir un cambio químico
en el proceso. A los que aceleran una reacción se les llama positivos y a los que las retardan, negativos.
Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan notablemente su
velocidad. No hacen factibles las reacciones imposibles, sino que sólamente aceleran las que espontáneamente
podrían producirse. Ello hace posible que en condiciones fisiológicas tengan lugar reacciones que sin catalizador
requerirían condiciones extremas de presión, temperatura o pH.
CATALASA
La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y cataliza la reacción de
descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.

El peróxido de hidrógeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos organismos, pero dada su
potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima catalasa. En la industria, se también se utiliza la enzima
catalasa, para diferentes fines.
Además, la catalasa cumple una función protectora contra determinados microorganismos patógenos, sobre todo
anaerobios. Las bacterias anaerobias, mueren al estar en contacto con oxígeno, es por esta razón que el oxígeno
producido por esta enzima tiene efecto bactericida sobre estos microorganismos.
La reacción catalizada por esta enzima, ocurre en dos etapas, en las cuales interviene el hierro del grupo hemo de la
hemoglobina como cofactor.
AMILASA
Es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un
polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina,
ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces C1-C4,
mientras que la amilopectina tiene, además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas
ramificadas. La amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales
y ramificadas (oligosacáridos) como productos. Enzima que fragmenta el almidón en sus componentes. La amilasa,
denominada también ptialina o tialina, es un enzima hidrolasa que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón
para formar azúcares simples.
Los órganos productores de amilasa sérica son: Las glándulas salivares; sobre todo en las glándulas parótidas, que
secretan amilasa que forma parte de la saliva para degradar almidones y el páncreas.
 Amilasa salival: Producida y segregada por varios tipos de glándulas salivales en la boca. Digiere
parcialmente almidones en cadenas más cortas de glucosa llamadas polisacáridos, así como en un disacárido
que consiste en dos moléculas de glucosa llamado maltosa.
 Amilasa pancreática: Las secreciones pancreáticas contienen alfa-amilasa pancreática. La amilasa
pancreática completa la descomposición de los almidones en maltosa.
 Amilasa en sangre: La amilasa es una enzima que ayuda a digerir los carbohidratos. Se produce en el
páncreas y en las glándulas salivales. Cuando el páncreas está enfermo o inflamado, se libera amilasa en la
sangre. Se puede hacer un examen para medir el nivel de esta enzima en la sangre.

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

MATERIALES REACTIVOS
Gradilla - Reverbero Trozos de hígado de pollo
Tubos de ensayo (5) Agua oxigenada
Pipeta de 10 mL Sol. Diluida de Almidón
Termómetro Reactivo de Benedict
Vaso de precipitación Reactivo de Lugol
4. Gráficos:

Hidrólisis del almidón

Equipo Baño María Reconocimiento de Desnaturalización
la catalasa

5. PROCEDIMIENTO:

3. Se observa un
1. Se coloca en un intenso burbujeo
A. RECONOCIMIENTO 2. Se añade 5 mL de
tubo de ensayo unos debido al
DE LA CATALASA agua oxigenada.
trocitos de hígado. desprendimiento de
oxígeno.

2.Se añade
1.Se coloca
agua para 3.Después de
en un tubo
B. hervir la este tiempo, 4.Se añade el
de ensayo
DESNATURALIZA muestra. se retira el agua
CIÓN varios
Hervir agua oxigenada.
trocitos de
durante unos sobrante.
hígado.
minutos.

HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN
En el tubo 1, se realiza la
Reacción de Fehling.
En el tubo 2, se realiza la
Reacción de Lugol.
A continuación realizar
las
siguientes reacciones:
2.Se añade a cada tubo
s de ensayo, numerados
1. Se toman cuatro tubo 5 mL de una solución
del 1 al 4.
diluida de almidón.
Para ayudarle a formar
3.A los tubos 3 y 4 se
comer. Así favorece que más saliva, piense en un
añade una pequeña
forme más saliva. limón o en algo que le
cantidad de saliva.
apetezca mucho
Los resultados son los
Los tubos 3 y 4 que
esperados para un os echado la saliva,
contienen el almidón, al
polisacárido como el ponerlos en
que le hem
almidón.
un vaso de
hierva, ya que lo que
precipitación al baño
intentamos, es que la
Dejarlo unos 15 minutos. María, controlando la
enzima de la saliva
temperatura del agua
trabaje a unos 37ºC .
que no
En el tubo número 3, se En el tubo número 4, se
realiza la Reacción de realiza la Prueba de
Fehling. Lugo
6. REACCIONES:

Reacción 1: Descomposición
del peróxido de hidrógeno
por acción de la catalasa.

Reacción 2: Hidrólisis del

almidón por acción de la α
amilasa

Reacción 3: Hidrólisis del

almidón por acción de la β
amilasa.
7. RESULTADOS y OBSERVACIONES :

7.2 RESULTADOS

7.1 OBSERVACIONES

Reconocimiento de la catalasa (anexo)

Al poner agua oxigenada se observa que por encima del hígado de pollo se produce una
efervescencia.
Desnaturalización (anexo)

Cuando se calentó con el agua oxigenada no se pudo observar ningún cambio.

Hidrolisis del almidón (anexo)

 En el tubo 1 al realizar Fehling la solución toma color celeste, con

un precipitado blanco
 En el tubo 2 al colocar Lugol, la Solución de almidón tome coloración negra.
 En los tubos 3 y 4 calentarlos a baño maria, a tempera constante de
37°C por 15 minutos por lo que si se forma algún tipo de precipitado
se dara la hidrolisis satisfactoriamente
8. CONCLUCIONES Y RECOMENDACIONES:
8.1. Conclusiones:
• Determinamos que el hígado de pollo tiene catalasa debido a que al colocar agua
oxigenada en el hígado la espuma que produce no es más que oxigeno desprendiéndose
con agua; estas manifestaciones son propias de la acción de esta enzima sobre el agua
oxigenada.
• Concluimos que la alta temperatura afecta la acción enzimática de la catalasa debido
a que el agua oxigenada en el hígado no produce ni agua ni oxígeno.
• Se determinó que la amilasa presente en la saliva hidroliza polisacáridos, en este caso al almidón.
• Comprobado gracias a la prueba con el reactivo de Fehling que da positivo, es decir la
solución presentan azucares reductores que son propios de monosacáridos y disacáridos, y
también la del Lugol que da negativo, es decir no es un polisacárido. La acción de esta
enzima se da a una temperatura óptima de 37°C.

8.2. Recomendaciones:
 Es necesario la utilización de un termómetro para poder controlar la
temperatura con la que trabaja la amilasa.
 Numerar los tubos para evitar confusiones.
 El hígado a utilizar debe estar completamente crudo.
 Seguir los pasos de la guía de laboratorio correctamente

9. CUESTIONARIO.

Describa la catalasa
La catalasa es una enzima oxidoreductasa que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales,
pero es especialmente abundante en la sangre y el hígado. De estos dos tejidos, se obtienen en forma cristalina
La función de esta enzimas actuar sobre el peróxido de hidrogeno para que se dé la formación de agua con
desprendimiento de oxígeno. Es muy importante porque el metabolismo celular produce esta sustancia que es
toxica.
Describa la amilasa
La amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón,
que es un polisacárido de reserva vegetal. Este almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y
la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La α-amilasa actúa rompiendo uniones C1-C4, tanto en la
amilasa Como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos) como productos
 del proceso
Indique que factores afectan la velocidad de una reacción catalizada por una enzima.
Concentración del sustrato
En toda reacción catalizada por un enzima, si se mantiene constante la concentración del E, la velocidad de la
reacción aumenta exponencialmente al incrementarse la concentración del sustrato, ya que al existir más
moléculas de sustrato es más probable el encuentro con el enzima y la formación del complejo E-S.
Este aumento de velocidad es rápido para concentraciones bajas de sustrato y, a medida que este aumenta, se
va haciendo más lento hasta que la concentración del sustrato alcanza un cierto valor, a partir del cual, aunque
aumente la concentración del mismo, no aumenta la velocidad de la reacción. Esto es debido a que el enzima
está saturado por el sustrato; es decir, todas las moléculas del enzima están unidas al sustrato formando el
complejo E-S.

Temperatura
Influye mucho en la actividad enzimática. En general por cada 10ºC que aumente la temperatura la velocidad
de la reacción aumenta de 2 a 4 veces. Esta regla se cumple hasta que la temperatura alcanza un valor máximo
(Tª óptima) donde la actividad es máxima. Esto se debe a que al aumentar la Tª aumenta el movimiento de las
moléculas y, por tanto aumenta la probabilidad de encuentro entre el S y el E.
Si la Tª aumenta por encima de la Tª óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la
enzima se desnaturaliza.
pH
El pH es otro factor que influye en la actividad enzimática, debido a que el pH influye en la ionización de los
grupos funcionales de los aminoácidos que forman la proteína enzimática. Cada enzima realiza su acción dentro
de un determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habrá un pH óptimo donde la actividad enzimática
será máxima. Por debajo del pH mínimo o por encima del pH máximo el enzima se inactiva ya que se
desnaturaliza. En la mayoría de las enzimas el pH óptimo está próximo a la neutralidad, aunque hay algunas
excepciones.
Inhibidores
Son compuestos que disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos compuestos pueden ser de distintos tipos:
iones, moléculas orgánicas y a veces el producto final de la reacción. A la acción que realizan se la denomina
inhibición.
La inhibición puede ser irreversible si el inhibidor impide permanentemente la actividad enzimática, por ejemplo
la penicilina que inhibe las enzimas que sintetizan la pared bacteriana; también puede ser irreversibles si el
inhibidor se une al enzima de forma temporal mediante enlaces débiles e impide el normal funcionamiento
del mismo
10. BIBLIOGRAFÍA.
 AMILASA, APUNTES DE BIOQUÍMICA HUMANA METABOLISMO INTERMEDIO. UNIVERSIDAD DE CUENCA. FACULTAD DE
CIENCIAS MÉDICAS. http://www.salud180.com/salud-z/amilasa
 Enzima catalasa | La Guía de Química http://quimica.laguia2000.com/conceptos -
basicos/enzima catalasa#ixzz4DOFsW8Vb

 ENZIMAS MSc Ana C. Colarossi Dpto de Bioquímica, Biología Molecular y

Farmacología
http://www.upch.edu.pe/facien/fc/dbmbqf/pherrera/cursos/Bioquimica08/clases/
Enzimas%20%20y%20cinetica%20enzimatica.pdf
 Anexos:

Hidrolisis del Almidón

Toma de una muestra de
Hígado de pollo Presencia de una Efervescencia
Reconocimiento de la Catalasa

Resultados finales de cada uno

de los ensayos