UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DEL VALLE DE TOLUCA

DIVISIÓN DE INGENIERÍA EN
BIOTECNOLOGÍA

TAREA 5 videos de reactores

UNIDAD 1

P R E S E N T A

Carlos Daniel Telles Monge.

Salvador Yahir Villa Villacetin.

ASIGNATURA
Ingeniería de Birreactores.

PROFESOR

Rafael Gonzales García

ALMOLOYA DE JUÁREZ, EDO. DE MÉX.

Procesos de Fermentación
En la industria los procesos son muy importantes e la hora de
producción uno de los procesos que están muy familiarizados
es la fermentación que es uno de los primeros procesos que la
humanidad pudo controlar desde hace muchos años.
La fermentación es un proceso realizados por
microorganismo fermentadores de azucares que generan
productos o servicios por citar algunos productos:
 Quesos Foto de aspergillus Níger en una placa
 Vinos Petri.

 Antibióticos
 Vitaminas

Servicios:
 Estabilización y digestión de moléculas orgánicas en el agua residual
 Ayudan a la digestión para las especies animales , especialmente bacterias de
enterobacter(bacterias encontradas en la micro biota)

Ante de iniciar un proceso debe tener ciertas variables considerar:

 Temperatura
 Presión
 pH
 nivel de oxigeno

También un punto importante para llevar a cabo un proceso son las condiciones de asepsia
que etimológicamente significa "sin putrefacción'. Ausencia de materia séptica; estado libre
de infección (definición del Diccionario de la Real Academia) La asepsia produce la
ausencia de todo germen y de cualquiera de sus formas de resistencia, suprimiendo el
aporte de microbios y su penetración. El resultado de una técnica dé asepsia correcta es la
esterilización.
La esterilización se puede definir como
Técnica de saneamiento cuya finalidad es la desinfección de toda forma de vida,
aniquilando todos los microorganismos, tanto patógenos como no patógenos, incluidas sus
formas de resistencia (por ejemplo las esporas, que son formas de resistencia de los
gérmenes para poder sobrevivir en condiciones desfavorables del medio ambiente, como
calor o frío excesivo, desecación, etc).La esterilización sólo se puede aplicar sobre objetos
o material inanimado, mientras que la desinfección se aplica sobre objetos (desinfectantes)
y sobre tejidos vivos (antisépticos).Un objeto aséptico es un objeto estéril y, al trabajar con
él, decimos que se actúa con asepsia. La piel no se esteriliza sino que se desinfecta, la
industria utiliza la esterilización por calor carloar húmedo es decir utilizan vapor a una
temperatura de 121ªC a una presión de 15 lb durante 30 minutos algunos laboratorios
también utilizan esta técnica.
Inoculación:
Siembra Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo)
en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento. Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
Que se efectúen asépticamente Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén
esterilizados Que se realicen solo los manipuleos indispensables Que se trabaje fuera de
toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar. Existen
diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos del
microorganismo a estudiar.
Preparación de medios

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El
material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios
de cultivo diferentes.Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un
medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros
ingredientes.

Tipos de medios de cultivo:

 Medios sólidos:

Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo
se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios.

 Siembra en doble capa:

Se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidificado el medio se vierte
una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml.
aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y
microaerofílicos.
 Siembra en superficie:

se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca
sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el
inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda
para microorganismos aerobios estrictos.
 Siembra en estría:

Se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.
En la industria se una más en caldo que es un medio líquido donde las bacterias y los
nutrientes están suspendidos gracias a la acción de la agitación del reactor.
Hoy en día dependemos de la biotecnología en los productos que utilizamos diariamente,
muchos de estos productos de producen utilizando los tres procesos principales:
fermentación, recuperación y purificación
- La fermentación es básicamente el cultivo de células para producir un producto, las
células se nutren hasta que se reproducen y crean nuestro producto.
- En la recuperación, separamos nuestro producto de las células donde estás fueron
producidas
- En la purificación eliminamos todo o que está contaminando nuestro producto,
dejando un producto y realmente concentrado.
Estableciendo la configuración
Existen dos operaciones principales utilizadas en la purificación que son la cromatografía y
filtración, para algunos procesos nuestro producto se da dentro de la célula, es decir, que
tenemos que romper nuestra célula para que nuestro producto salga de la célula. Pero al
hacer eso podemos ver que nuestros componentes celulares estarán incluidos ahí: residuos
de membrana, citoplasma, ADN y proteínas que estarán mezclado con todo nuestro
producto en una solución.
Y aunque la mayoría de los sólidos fue removida en la recuperación aún sigue conservando
productos biológicos, a través de la fermentación podemos eliminar en su totalidad nuestros
contaminantes para solo obtener nuestro producto de interés.

Equipo y principios de cromatografía

La cromatografía en columna es la más utilizada, la columna es un cilindro lleno de vidrio,
perlas de cerámica o polímeros que están diseñadas para interactuar o unirse con moléculas
basadas en una o más propiedades físicas.
La cromatografía se basa en las diferencias, ya que cada molécula tiene un conjunto único
de características físicas; como el tamaño, la carga o el grado de integración con él agua. La
cromatografía usa estas diferencias para separar la proteína diana de otras. Utilizando
porosidad para atrapar moléculas o al menos ralentizar las moléculas más pequeñas a
medida que viajan a través de la columna. Mientras que las moléculas son demasiado
grandes para entrar este tipo de proceso se llama exclusión de tamaño. En el caso de los
componentes ionizados se utilizan las cargas de los componentes por lo que una perla de
cromatografía cargada negativamente atraerá y se unirá positivamente, esta cromatografía
se le conoce como cromatografía de intercambio iónico. Después tenemos la cromatografía
hidrofóbica donde, moléculas que fácilmente interactúan y se disuelven en agua se llaman
hidrofílicos, mientras que aquellos que no se llaman hidrofóbicos. Las proteínas contienen
regiones hidrófobas y regiones hidrofílicas. Por lo que el agua tiene a formar un escudo
alrededor de la hidrófoba y por ende las proteínas no están expuestas a interactuar con las
perlas de resina. Pero al agregar sal podemos romper estos enlaces por lo que así es como
lograremos hacer que interactúe la proteína y la resina para formar enlaces entre ellos. Y así
poder separar nuestra proteína y otros contaminantes de nuestro producto.
Para que funcionen de manera correcta nuestra cromatografía es importante que tenga una
serie de sensores que se encuentran a lo largo del producto. También hay un sensor de
conductividad eléctrica en la entrada de la columna, un sensor de presión, un medidor de
flujo para medir la velocidad de movimiento de la solución a través de la columna y un
sensor de aire para garantizar que no haya aire en la ruta del flujo.
La solución que sale de la columna se mide con un sensor UV que mide la densidad óptica
y un segundo sensor que mide la acidez o basicidad. El sensor UV controla la
concentración de la proteína en el producto al observar la densidad óptica. Nosotros
podemos determinar los estándares que tendrán nuestra densidad óptica y cuando no
alcance este parámetro, esta abrirá una válvula que dirigirá el flujo a los residuos. Por el
contrario, se la sobrepasa significa que tiene nuestro producto purificado y este abre una
válvula para que lo dirija a un recipiente de recogida.

Filtración de flujo tangencial.

Se refiere a bombear un luido a través de un filtro, conocido como ultrafiltración, este
permitirá solo pasar moléculas determinadas, mientras que las demás las detiene. Esto
permitirá elegir lo que queremos mantener. Por lo regular la sustancia que retenemos es el
flujo que más nos interesa.
Este proceso se utiliza para dos tareas importantes: concentración y di filtración. En la
diafiltración, agregamos un nuevo búfer al retenido, mientras que desplazamos el búfer
anterior, mientras que la concentración es la eliminación del agua y los componentes del
tampón de la solución de alimentación.

Antes de la purificación
Nuestras materias primas se encuentran el lisado clarificado del proceso de recuperación,
varas soluciones búfer que se adaptan a pasos específicos del proceso y sulfato de amonio
que agregamos a los tampones para que sea alto en sal. El proceso de purificación se
gestiona mediante el uso de un registro de lote. Esta hace que nuestro proceso esté
controlado y con cada paso que avanza requiere una firma para ser verificado por un
segundo operador. Nuestro lugar de trabajo debe estar limpio y desinfectado antes de
empezar el proceso y el material innecesario es removido, todo el equipo también debe
limpiarse y configurarse según lo requerido

Proceso de purificación
Este comienza como el tanque de transferencia de lisado clarificado de la recuperación y
este conectado a la bomba del cromatógrafo. Todo el equipo debe de estar listo para su uso
y nuestros sensores estar alerta para cualquier situación. K
Proceso final
Por último se concentra nuestro producto con ayuda de la ultrafiltración para eliminar
aquellos contaminantes que hayan quedado, así como también el búfer y algunas sales.
Después de todos los procesos mencionados anteriormente estará listo para su
empaquetamiento.