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Practicas integrales II.

Tema 2:

Material de laboratorio

1. Materiales de vidrio usados en un laboratorio de microbiología.

Becker: para el transporte de líquidos, calentar o disolver sustancias.


Cilindros graduados: calcular volúmenes, aunque menos precisos que una pipeta.
Matraz Erlenmeyer: es indicado para realizar valoraciones ya que evita la perdida de
líquido mediante agitación por su forma cónica.
Matraz aforado: trazar disoluciones; ésta es facilitada por la parte cilíndrica en su cuello.
Tubos de ensayo: disolver, calentar o hacer reaccionar pequeñas cantidades de muestras.
Kitasato: similar al matraz Erlenmeyer pero con una pequeña parte sobresaliente.
Utilizado para filtraciones al vacío.
Bureta: es un tubo calibrado con una llave en su parte inferior utilizado para medir
líquidos en las valoraciones.
Vidrio reloj: es una lámina de vidrio ligeramente cóncava utilizada para pesar sólidos.
Varilla de vidrio: para agitar disoluciones.
Butirómetro: para determinar la materia grasa mediante el método volumétrico herver.
Placas Petri: utilizado para las siembras de cultivos en microbiología.
Pipetas graduadas: es un tubo volumétrico utilizado para la medición de pequeños
volúmenes con mayor precisión.
Pipetas aforadas: más exactas que las graduadas pero solo permiten una cantidad de
líquido especifica.
Tubos de extracción mojonnier: para la extracción de materia grasa según el método de
ross bornierg.
Frascos de vidrio: almacén de medios de cultivo, aunque también tienen otros usos.
Embudo cónico: para el trasvase de líquidos.

2. Material auxiliar utilizado en el laboratorio de microbiología.

Frascos lavadores: contienen agua destilada, con el fin de lavar el material de laboratorio o
para la adición de las mismas disoluciones.
Mecheros: para calentar o esterilizar muestras o reactivos químicos. En microbiología se
utiliza para esterilizar asas.
Asas: se emplea para tomar y extender las muestras por todo el medio de cultivo.
Diferentes según el tipo de siembra que se realice.
Soporte para buretas: permite sostener las buretas con unas pinzas durante la realización
de valoraciones.
Termómetro: medición de la temperatura.
Frascos de muestras: son de plástico estéril. De diferentes tipos y tamaños. Para la toma
de muestras.
Espátula: lamina de metal con una punta en forma de cuchara y la otra alargada. Utilizada
para la toma de pequeñas cantidades de compuestos.
Desecador: contiene en su interior una sustancia microscópica que permite desecar
sustancias o preservarlas de la humedad ambiental.

3. Equipos utilizados en laboratorio de microbiología.


Balanza analítica: tiene una mayor exactitud y precisión.
Destilador: para purificar el agua por la extracción de minerales.
Baño termostático: se basa en la circulación de un fluido caliente que generalmente es
agua. Esto permite tener una temperatura constante.
Centrifuga: separación de 2 fases de una mezcla en base a la diferencia de densidad que
existe entre ellas.
Autoclave: utilizada para la esterilización del material mediante el vapor de agua a alta
presión y temperatura.
Ph metro: para medir el ph de las muestras, en ocasiones cuenta con un termómetro para
determinar la temperatura de la misma.
Estufa: son de secado o bacteriológicas.
Mufla: horno en el que se alcanzan temperaturas mayores a los 1000°C con la intención de
calcinar las muestras para la determinación de cenizas.
Placas calefactoras: utilizadas para calentar disoluciones y pueden poseer un agitador
magnético.
Agitadores: agitan disoluciones rápida y uniformemente. Pueden ser magnéticos o para
tubos de ensayos.
Homogeneizador de paletas: se utiliza en microbiología para homogeneizar muestras
sólidas.
Cuenta colonias: en laboratorios de microbiología es un aparato que se utiliza para el
recuento de colonias en las placas de Petri.
Frigorífico: deben ser especialmente para laboratorios. Utilizados para la conservación de
muestras o almacenamientos de diversos productos.
Campana de flujo laminar: permite tener una zona estéril para la preparación de medios
de cultivos y los materiales a utilizar para ello y así proteger a los materiales como al
trabajador mediante rayos ultravioletas que contribuye a la esterilización.
Campana extractora: protege al ambiente de los posibles gases tóxicos que se liberen a los
momentos de realización de manipulación para con de estos.

4. Uso del agua destilada en los laboratorios.


Tema 3: Uso del autoclave

1. Autoclave:
Su uso básicamente es la esterilización de material de laboratorio con la utilización de
agua. El fundamento es la medición de temperaturas altas por el aumento de la presión de
vapor de agua esterilizada en el interior.
2. Una vez transcurrido el tiempo de esterilización:
Se debe liberar la presión en el interior de la autoclave, la liberación del agua restante por
una llave en la parte inferior.
3. Materiales que se esterilizan:
Todos los materiales que serán sometidos al aislamiento de muestras para la
determinación de cualquier tipo de cultivos y así evitar cualquier tipo de contaminación en
los materiales, y en su defecto que estos contaminen la muestra. También se esterilizan
equipos médicos como gasas. Placas de petri, matraces Erlenmeyer, tubos de ensayo,
buretas. Envueltas en papel para que no se contaminen al momento de sacarlas.

Tema 4: Esterilización al vapor.

1. La esterilización de materiales y de medios contaminados es necesaria en todo laboratorio


que se ejecuten siembras de cultivos. La esterilización elimina cualquier agente
microbiano en el material.
2. Es un equipo en el que se someten los materiales a esterilizar a temperaturas mayores a la
ebullición gracias a la generación de altas temperaturas por la alta presión en el interior
del equipo.
3. Válvula de control de presión; indica la presión interna del autoclave, ya que esta no debe
sobrepasar los 103 kPa. Válvula de seguridad; garantiza que se encuentre totalmente
sellada la tapa. Salida del aire; al finalizar la esterilización, se libera el vapor que estaba
contenido para la liberación de presión. Resistencia; es la que calienta el agua. Recipiente;
donde está situado todo el recipiente en el que están contenidos los materiales y agua.
Bandeja; lo que sirve como base en el fondo, y como separador con el líquido. Tapa; con lo
que se cierra la autoclave.
4. Durante un tiempo de 15-20 minutos a una temperatura de 120°C.
5. Evitar sobrecargar el autoclave, evitar que exploten los envases de vidrio aflojando sus
tapas antes de llevarlos al interior del autoclave, sellar bien la tapa para lograr un cierre
hermético y así se evitan quemadura por la exposición al vapor que salga por posibles
aberturas.
6. Asegurar que se libere el vapor de presión esperar unos minutos para luego abrir la tapa,
tener cubiertos rostros, manos y brazos ya que son los más propensos a que sufran
quemaduras por el contacto con las paredes de la autoclave.
7. Asepsia: Liberación total de agentes patógenos en un material y/o medio ambiente a
realizar experimentos.
Tema 5: Esterilización por calor seco.

1. El aire utilizado en este método es aire caliente. Aproximadamente el periodo de


enfriamiento es de 2h.
2. Pipetas, placas Petri. La temperatura idónea es de 170°C por un tiempo estimado de 20
min.

Tema 6: Esterilización de material.

1. Lo fundamental que debe ocurrir en un laboratorio de microbiología es la esterilización


total tanto del área de trabajo como la de los materiales. Ya que existe la probabilidad de
contaminación sino se cumple este principio.
2. Se debe cubrir el material para que cuando sea el momento de extracción de estos de la
autoclave no se contaminen de nuevo, por ello se cubren.
3. Algodón y gasas para cubrir las boquillas de los materiales, papel kraft para la protección
de estos ya que en la autoclave tienden a humedecerse y esto actúa como protección.
4. El matraz Erlenmeyer se prepara primero, tomando una porción de algodón con gasas, de
manera tal que esta quede totalmente insertada en la boquilla hasta una medida
especifica al interior del matraz y con espacio suficiente hacia arriba para sujetar el
algodón con el meñique y la muñeca al mismo tiempo, posteriormente se hace una
envoltura para el algodón con el papel Kraft y así mismo evitar que estas se humedezcan
durante la esterilización.

Tema 7: Equipos de laboratorio

1. A) Probeta: recipiente graduado que se utiliza en el laboratorio para medir el volumen de


los líquidos. B) termómetro: utilizado para medir la temperatura de manera cuantitativa.
C) Matraz Erlenmeyer: para el armado de equipos de destilación o para hacer reaccionar
las sustancias que requieren de un largo calentamiento. También para contener líquidos
que necesitan ser conservados por largo tiempo. D) Kitasato: se podrá recoger la parte
líquida de la mezcla, mientras que en la parte superior, por la boca esmerilada se puede
colocar un embudo.
2. Balanza granataria: se usa para determinar la masa de una sustancia, o para pesar una
cantidad de esta.
Balanza analítica: es un instrumento utilizado para medir la masa de manera más precisa.
3. Destilador:
4. La utilización de agua destilada es sumamente importante ya que esta se encuentra libre
de minerales y de agentes contaminantes al agua regular. Por ello es requerida esta agua
para lavar los materiales de laboratorio o también para la utilización de esta en lo
experimentos.

Tema 8: Medios de cultivo.


1. Para el recuento de organismos en agua, en heces de muestras clínicas y otros materiales.
2.
Según su estado físico
- Solidos: 1,5-2% agar agar
- Semisólidos: 0,5% agar.
- Líquidos: no contienen agar.
- Bifásicos: fase sólida y liquida listos para utilizar.
Según su composición
- Naturales: para cultivar microorganismos tal y como se encuentren en la naturaleza.
- Sintéticos: de composiciones conocidas. Medios comerciales deshidratados.
- Vivos: contienen células u organismos vivos.
Según su propósito;
Medios enriquecidos, selectivos, diferenciales y de identificación.
- Agar nutritivo: extracto de carne, peptona y agar.
- Caldo nutritivo: extracto acuoso de carne adicionado de peptona al 1%, cloruro de
sodio al 0.1%.
- Agar base sangre: medio solido que contiene peptona enriquecido con sangre de
conejo al 7%.
- Medios enriquecidos: con adición de sangre, suero o extracto de tejidos de animales o
plantas al caldo agar. Crecimientos de microorganismos exigentes. Entre estos agares
tenemos el agar sangre, agar chocolate, y el tioglicolato.
- Medios selectivos: se vetan el crecimiento de microorganismos indeseados y
promueven el desarrollo de los que se desean.
- Medios diferenciales: tienen reactivos químicos que atraen como resultado tipo
crecimiento bacteriano después de incubación.
Agares que son selectivos y diferenciales al mismo tiempo:
- Medio McConkey: para el crecimiento de Enterobacterias. Peptona, sales biliares,
lactosa y rojo neutro como indicador de ph.

Tema 9: técnicas de siembra.

1. Al momento de realizar cualquier ejecución de la siembra es necesario que se esterilice el


asa para evitar cualquier contaminación ajena al medio con la ayuda del mechero.
2. Agua peptonada: se utiliza como medio base para la determinación de fermentación de
carbohidratos y también no permite el crecimiento de microorganismos indeseados.
Disolver los componentes en 1L de agua ajustar pH a 7 con Cloruro de Sodio 1N. Distribuir
una porción de 99.9 y 9 ml según se requiera. Esterilizar a 121ºC por 15 min. Después de
la esterilización los volúmenes y el pH deben ser iguales a los iniciales.
3. Banco de diluciones: 1 ml de la muestra y añadir a 9ml de agua peptonada siempre
utilizando el mechero para la boquilla de los tubos de ensayo y crear condiciones estériles,
agotamiento en la superficie.
Siembra en profundidad: 1ml de la muestra, añadir 20ml del agar mezclar bien,
antibiograma, se mezcla, se coloca el disco antibiótico.
Agar inclinado y agar semisólido.
4. En el laboratorio de microbiología es imprescindible trabajar con material y soluciones
estériles con objeto de que los resultados que se obtengan correspondan a
microorganismos que están presentes en la muestra de estudio y no a contaminantes que
procedan del medio o los materiales, puedan desarrollarse y falsear las pruebas.

Tema 10: Técnicas de siembra.

1. Tubos de ensayo, mechero, asa bacteriológica, placas de Petri.


2. La siembra en vertido de placa.
3. Muestra liquida diluida.
4. Homogeneizar la muestra liquida con la ayuda de un vortex. Luego en condiciones
asépticas, tomar una muestra diluida con el asa bacteriológica y se deposita en el centro
de la caja de Petri y se cierra para dejarla en la mesa en condiciones de asepsia, tomar un
matraz que este en el baño de agua, se seca el exterior de este con un papel absorbente,
flamear la boca del recipiente con el mechero y se verte el contenido sobre el inoculo sin
tocar la placa con el matraz y tapa la placa y se deja en la mesa en condiciones de asepsia.
Se homogenizan ambos en movimientos envolvente 6 veces a la derecha y 6 veces hacia al
frente y atrás y posteriormente se deja solidificar.
5. Puntos críticos: el inoculo debe tener una temperatura entre 45-50°C para evitar la muerte
de los microorganismos o para que no se solidifique y forme grumos que impida la
correcta distribución del inoculo. En la homogeneización se debe aplicar los movimientos
en todos los sentidos que se indican lo que asegura que los microorganismos se
distribuyan correctamente y realizarlo de manera suave para evitar que el agar salpique o
se derrame.

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