UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE BIOTECNOLOGÍA

TÍTULO DEL PROYECTO:

Cultivo in vitro de Pelargonium grandiflorum

DOCENTE:

ESTUDIANTES:

➢ Iparraguirre Mendoza Omar

NUEVO CHIMBOTE – PERÚ

2019
ANTECEDENTES:

1. MERCEDES ALONSO GÓMEZ (Madrid, 2002): BIOTECNOLOGÍA

APLICADA A LA MEJORA DE Pelargonium
Establecimiento de los explantes in vitro Se ha realizado el estudio de la oxidación
fenólica de los exudados de los explantes de Pelargonium x hortorum al introducirlos in
vitro utilizando pecíolos y hojas de geranio zonal variedad 'Empress'. La exudación de
compuestos fenólicos se produjo inmediatamente después del corte de los explantes.
A las pocas horas de colocarlos sobre el medio de cultivo, se observó la formación de
un halo debido a la oxidación de los exudados. Los oxidados fenólicos se extendieron
alrededor de los explantes de forma concéntrica al perímetro del explante, tanto sobre
la superficie del medio como hacia el interior del mismo

Los

explantes procedentes de cultivo in vitro no presentaron oxidación en ninguno de los

experimentos realizados, por el contrario, en las hojas y pecíolos de las plantas
aclimatadas en el invernadero procedentes de cultivo in vitro y de los de las plantas
cultivadas en el invernadero, se observaron diferentes porcentajes de oxidación. Los
mayores porcentajes de oxidación correspondieron con las plantas cultivadas en el
invernadero. En los explantes cultivados en la oscuridad no se produjo inicialmente
ennegrecimiento en el medio de cultivo pero, su exposición posterior a condiciones de
luz indujo oxidación sobre todo en los explantes procedentes de plantas cultivadas en
el invernadero. Los explantes cultivados en los medios WA y WAC presentaron los
menores porcentajes de oxidación pero al final del experimento aparecieron cloróticos
y/o secos con una coloración marrón, haciéndolos inviables para posteriores cultivos.
Micropropagación a partir de explantes procedentes de plantas cultivadas en
invernadero
En la etapa de establecimiento de los pecíolos y hojas procedentes de invernadero se
produjo la contaminación debida a hongos y/o bacterias de un 49% de los explantes
(4253); el 6 % de los mismos aparecieron secos (520) y un 45% de los explantes se
repicaron. Se observaron diferencias significativas en la producción de callo y en el
índice de crecimiento entre las distintas variedades analizadas. El índice de
crecimiento aumentó a medida que aumentaba la concentración de auxinas en el
medio, salvo para el medio con 1 mgL-1 de BAP. En los medios en los que existían
combinaciones de auxinas y de citokininas, el porcentaje de explantes con callo
aumentó a medida que se incrementaba la concentración de las citokininas BAP o
KIN- en los medios de cultivo. En los explantes de hoja, el callo se indujo
generalmente en forma de nódulos. En los explantes de peciolo el índice de
crecimiento medio fue de 1,5 y 1,6 que indica que existe formación de callo en ambos
extremos. El mayor índice de crecimiento se produjo en los explantes de peciolo que
inicialmente se encontraban más alejados de la hoja. En las variedades diploides (MV
y MB), el índice medio de crecimiento fue menor que en las variedades tetraploides

Micropropagación a partir de secciones de tallo con yemas laterales

 E
n

los explantes de tallos con yemas axilares, la regeneración de plantas se produjo a

partir de las yemas mediante formación de brotes adventicios. No se observó
morfogénesis a partir de los callos formados en las zonas de corte (Figura 20)
CONCLUSIONES
Si el cultivo se inicia con explantes procedentes de plantas cultivadas en el
invernadero, existen pérdidas durante su establecimiento in vitro tanto por oxidación
fenólica, como por contaminación. El tipo de explantes y la época del año en la que se
inicia el cultivo influye en el estado fisiológico de la planta madre y afecta a los niveles
de fenoles que se exudan y por tanto al número de explantes establecidos
La respuesta de diferentes explantes a diferentes combinaciones de citokininas y
auxinas depende de la variedad utilizada y en especial de su nivel de ploidía.
La regeneración obtenida depende del tipo de explante y de la posición relativa que
ocupaba en el explante inicial. La mejor respuesta se obtuvo con combinaciones de la
citokinina BAP y la auxina ANA. Existen diferencias en el comportamiento de los
explantes con las diferentes sales de cultivo para una misma concentración de
reguladores de crecimiento. El protocolo desarrollado permite la regeneración de
plantas a partir de todos los explantes utilizados, hojas, peciolos, secciones de tallo
con una yema lateral y raíces.
En las raíces cuando sólo se incluye BAP en el medio, la regeneración de plantas se
produjo mediante embriogénesis somática y en el resto de los medios en los que se
desarrollaron plantas existió una fase intermedia de callo. El medio de cultivo utilizado
para el enraizamiento influye en el tipo de respuesta de las plantas tanto in vitro como
ex vitro.
El uso del antioxidante, L-cisteína, en el medio de cultivo en combinación con el medio
MS es el medio óptimo para el enraizamiento de plantas de geranio ya que las plantas
enraizadas en este medio se aclimatan mejor. Se pueden caracterizar las plantas que
se aclimatan mejor basándonos en ciertas características como la longitud de las
plantas, el número de hojas y el número y longitud de las raíces desarrolladas. Existe
una correlación entre estas variables y el éxito de la aclimatación.

2. Sandra Alva T.*, Maira Oropeza C.* y Teresa Edith Vargas C.*( dic. 2006) ,
Organogénesis de raíces en geranio

RESULTADOS
Bajo las condiciones anteriormente mencionadas, los explantes probados mostraron la
formación de callo a la primera semana de cultivo; apreciándose a los 3 meses
aproximadamente el desarrollo de raíces en los diferentes explantes; encontrándose el
mayor porcentaje de explantes con callo en secciones de hoja (73%) en el medio SH
(Cuadro). Así mismo, el mayor porcentaje de callo con formación de raíces se observó
en el medio ME1 (100%, Cuadro). Saxena et al. (2000) en su experiencia mostraron
que para inducir la formación de callo en los explantes se necesita colocar bajas
concentraciones de auxina frente a la concentración de citoquinina.
CUADRO. Porcentajes de formación de callos y raíces en diferentes explantes y
medios de cultivo a los tres meses de iniciado el cultivo.

En éste caso en todos los tratamientos se observó la formación de callo, pero sólo en
el medio SH donde la proporción auxina-citocinina fue intermedia se obtuvo el mayor
porcentaje de formación de callo.
Sin embargo, la organogénesis para la producción de raíces fue inducida en mayor
porcentaje sólo en el tratamiento ME1, sin la presencia de auxina, debido
posiblemente a que este tejido posee un alto contenido endógeno de la hormona.

Muestra la formación de callos y

raíces en estos medios de cultivo.

Conclusión:
La inducción de formación de raíces mediante técnicas de cultivo in vitro se propone
como una vía para la obtención de metabolitos secundarios de diferentes plantas en
condiciones asépticas, representando una alternativa para las diferentes especies de
 geranio, apreciadas por sus cualidades medicinales. En Pelargonium peltatum la
inducción hacia la formación de raíces fue observada al cultivar secciones de
diferentes explantes
Bajo estas condiciones en todos los explantes probados se observó la formación de
callo a la primera semana de cultivo. A los 3 meses se apreció el desarrollo de raíces
en los diferentes explantes, encontrándose el mayor porcentaje de explantes con callo
en los obtenidos a partir de secciones de hoja (73%), mientras que el mayor
porcentaje de callo con formación de raíces se observó en los obtenidos a partir de
microesquejes (100%).

3. EMMANUEL YAÑEZ REYES (NOVIEMBRE 2010), CULTIVO in vitro DE

Pelargonium grandiflorum Y UNA PROPUESTA PARA EXTRAER UN
COLORANTE DE LOS PÉTALOS DE LA FLOR

Procedenci Tejido % % % %
a
Siembr sembrado oxidaci contaminació necrosis respues
a del material ón n ta
1 Huixquiluc M H B 30% 27.5% 30% -----
an
2 Huixquiluc M H B 27% 30% 30% -----
an

5%
formación
de callos
3 Huixquiluc M H B 30% 35% 30%
an y
plántulas
2.5%
formación
4 Huixquiluc M H B 30% 37.5% 30% de callos
an
5 Cuautla -- -- B 0% 100% 0% -----------
- -
37%
6 Xochimilco -- - B 21% 21% 21% formación
- -
de raíces
-
Mercado 79%
7 -- H -- ---- 21% ----- formación
de Jamaica - -
de raíces
La respuesta obtenida in vitro para Pelargonium grandiflorum se describe a
continuación:

•Obtención de callos: esta se obtuvo en las siembras 3 y 4, en donde se pudo

observar con mayor facilidad esta respuesta fue en la siembra 4 en la cual se observó
en un fragmento de hoja, a las dos semanas de haber sido sembrada, inicio la
formación del tejido calloso, físicamente la hoja comenzó a ondularse (Figura 9), hacia
el interior de la misma.

Inicio de la formación de tejido calloso sembrado in vitro

Conclusión:
 Del factorial realizado la combinación ANA/KIN fue en
donde se obtuvo la mejor respuesta en las cinco primeras
siembras por lo mismo se utilizó para la realización de los
últimos experimentos.
 Respuesta organogenetica a la formación de raíces que
ocupan la mayor parte de la superficie del medio de cultivo.
 Respuesta a la formación de callo tanto colorido (verde),
como de un callo blanco que se fragmenta con facilidad.
 Lenta respuesta al crecimiento, en 5 meses se obtienen los
primeros resultados.
 Se identificó hasta género una bacteria asociada al cultivo
in vitro de Pelargonium

4. P.V. Lakshmana Rao (1994):Regeneración in vitro de plantas de geranio

perfumado Pelargonium graveolens
Resultados:
Inducción de callo
El efecto de los reguladores de crecimiento NAA, 2,4-D y
KIN individual y en combinación en la inducción del callo de segmentos de hoja
se resume en la Tabla1
Efecto de los reguladores del crecimiento en el porcentaje de inducción de callo
de segmentos de hojas de P. graveolen

En los medios que carecen de

reguladores de
crecimiento, solo el 35.0%.
Se observó inducción de callo. Adición de NAA o inducción de callo 2,4-D
mejorada hasta 5 #M concentración.
La inducción de callo más alta

Enraizamiento de las plántulas

Los brotes múltiples que
carecían de rizogénesis eran separados individualmente para enraizamiento
(fig. 3). Los la respuesta de enraizamiento en medios sólidos y líquidos .Adición
de IBA de 0.5 tzM Mejora significativamente el enraizamiento de las plántulas
sobre los medios de control.
Conclusiones:
Las plantas se regeneraron en cultivo a partir de segmentos de hojas del
geranio de hoja perfumada Pelargonium graveolens. Callo se indujo en medio
Murashige y Skoog (MS) suplementado con 5,0 ttM de ácido naftaleno acético,
cada uno de ellos, 2,4- ácido diclorofenoxiacético y 2,5um de cinética
Adición de sulfato de adenina en 108 uM promovió la prolífica formación de
brotes múltiples. Las plántulas extirpadas se enraizaron en medio líquido en
presencia de Ácido indol-3-butírico o fluoroglucinol. Las plantas regeneradas se
establecieron exitosamente en el suelo.

5.