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Este documento describe el protocolo para incluir tejidos vegetales en polietileno glicol (PEG), un polímero de peso molecular variable que se puede usar para incluir tejidos frescos o fijados. El protocolo implica transferir los tejidos a una solución acuosa de PEG al 10% y evaporar el agua, luego cambiar a PEG puro y dejar solidificar para obtener cortes en el microtomo que pueden teñirse y montarse para su estudio.
Este documento describe el protocolo para incluir tejidos vegetales en polietileno glicol (PEG), un polímero de peso molecular variable que se puede usar para incluir tejidos frescos o fijados. El protocolo implica transferir los tejidos a una solución acuosa de PEG al 10% y evaporar el agua, luego cambiar a PEG puro y dejar solidificar para obtener cortes en el microtomo que pueden teñirse y montarse para su estudio.
Este documento describe el protocolo para incluir tejidos vegetales en polietileno glicol (PEG), un polímero de peso molecular variable que se puede usar para incluir tejidos frescos o fijados. El protocolo implica transferir los tejidos a una solución acuosa de PEG al 10% y evaporar el agua, luego cambiar a PEG puro y dejar solidificar para obtener cortes en el microtomo que pueden teñirse y montarse para su estudio.
Protocolo para la inclusión de tejidos vegetales en Polietileno glicol (PEG)
El ploietilen glicol (PEG), también conocido como Carbowax, es un polímero de peso
molecular variable. El que utilizamos en microtecnia tiene un peso molecular de 1,500. Bajo condiciones ambientales, es sólido, de consistencia firme, semejante a la parafina. A diferencia de ésta, se disuelve fácilmente en agua, por lo que no es necesario deshidratar los tejidos para incluirlos en este material. Se puede partir de tejidos frescos o fijados en alcohol etílico, FAA o cualquier otro fijador histológico. Si se han fijado previamente, los tejidos se deben lavar en agua, hasta que desaparezca el fijador. De allí, se sigue el siguiente protocolo:
1. Transferir a una solución acuosa de PEG al 10%, cubriendo completamente la
muestra a incluir. 2. Colocar en una estufa a 60 ºC por 24 horas o más, hasta que el agua se haya evaporado (es preferible utilizar un frasco alto y marcar el nivel correspondiente al 10%, para saber cuando se haya evaporado el agua). 3. Decantar la solución y sustituir con PEG puro, previamente fundido en la estufa, a 60 ºC. Dejar en la estufa por 24 horas. 4. Transferir las muestras a charolas de plástico (las que se utilizan para hacer cubos de hielo). Orientarlas debidamente y cubrirlas completamente con PEG puro, fundido. Con una aguja de disección caliente, se destruyen las burbujas de aire que se hayan formado. Dejar enfriar a temperatura ambiente. 5. Extraer las muestras de las charolas. Eliminar el exceso de PEG con una navaja de seguridad. Se monta cada muestra sobre un bloque de madera de tamaño conveniente, dependiendo de la mordaza del microtomo, utilizando una espátula calentada con un mechero de gas. 6. Se deja enfriar a temperatura ambiente y se monta al microtomo. Se pueden obtener cortes al microtomo inmediatamente, o se guardan envueltas en servilletas de papel, en un desecador. 7. Los cortes obtenidos se pueden colocar sobre portaobjetos y atarse con hilo de algodón. Se sumergen las preparaciones en varios cambios de agua, para eliminar el PEG, o bien, los cortes pueden transferirse a cajas de Petri llenas de agua, para eliminar el PEG. 8. Teñir y montar, para hacer preparaciones temporales o permanentes.