LABORATORIO #3

OBSERVACIÓN DE BACTERIAS

JUAN CARLOS ACOSTA

JOSÉ GABRIEL RAMOS

ANÍBAL ENRIQUE RODRÍGUEZ

Lic. LEIDY LORENA MENDOZA

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE INGENIERÍA

INGENIERÍA AMBIENTAL

MONTERÍA

2019
INTRODUCCION

Las bacterias son microorganismos unicelulares procariotas, es decir, tienen su material

genético disperso en el citoplasma. Las células bacterianas presentan unas estructuras
constantes: pared celular, membrana citoplasmática, citoplasma y material nuclear, y otras
estructuras externas facultativas: fimbrias o pili, flagelos y cápsula. A pesar de variar
morfológicamente de una especia a otra, solamente pueden diferenciarse 3 formas
fundamentales en las bacterias: cocos (esférica), bacilos (cilíndrica recta) y espirilos
(cilíndrica curvada). Adicional a esto, al dividirse, las células hijas pueden quedar unidas o
próximas unas a otras dando origen a agrupaciones típicas que ayudan a su estudio
morfológico. Los cocos se agrupan en parejas (diplococos), en cadenas más o menos largas
(streptococos), en racimos (estafilococos) y en tétradas o paquetes cúbicos (micrococos);
los bacilos se agrupan en parejas (diplobacilos), raramente en cadenas (streptobacilos), en
empalizada, los espirilos no suelen agruparce pero pueden distinguirse formas con una sola
curvatura semejantes a una coma (Vibrios), y con varias curvaturas y aspecto ondulado
(campilobacterias). La mayoría de las bacterias pueden visualizarse al microscopio óptico,
bien directamente o tras tinción con colorantes apropiados. El examen microscópico se
practica con fines diagnósticos sobre los productos patológicos o sobre los cultivos de los
mismos.

OBJETIVOS

Objetivo general: determinar la presencia de bacterias y clasificarlas según sus

características, en muestras de origen natural (yogurt, vinagre, cultivos de bacterias, sarro
dental )

Objetivos Específicos:

Identificar las morfologías de las bacterias presentes en las distintas muestras.

Observar que tipos de bacterias existen dependiendo de la muestra orgánica utilizada

METODOLOGÍA

1. Bacterias del yogur: Primero se agregó 1 gota de agua destilada en el porta objetos,
luego se agregó una pequeña cantidad de yogur, se extendió suavemente la gota de agua
con el yogur sobre el porta objetos, luego se le agregó calor a la muestra mediante el
mechero de bunsen. Después se le añadió a la muestra azul de metileno y se dejó secar por
2-3 minutos o se utilizó un secador de cabello para acelerar el proceso para luego llevar el
porta objetos con la muestra al microscopio y agregar aceite de inmersión, luego se puso el
objetivo de X100 para observar las bacterias presentes.
2. Bacterias del vinagre: Se agrega una pequeña porción de vinagre de plátano luego se
agrega una gota de agua destilada, se extendió suavemente y se le aplica calor mediante el
mechero de bunsen para que luego se fije, luego se adiciona azul de metileno y después se
lava y deja secar o se le pone un secador de cabello para acelerar el proceso. Luego se
agrega aceite de inmersión y se pone el objetivo de X100 para observar las bacterias
presentes.

3. Bacterias del sarro dental: Se agrega 1 gota de agua destilada en el porta objetos, luego
se agrega una pequeña cantidad de sarro dental con ayuda del hisopo y se deja secar para
fijarlo con calor gracias al mechero de bunsen. Luego se agrega azul de metileno se dejar
secar 2-3 minutos y se lava el exceso de colorante, luego para acelerar el proceso se utiliza
un secador de cabello, luego se monta la muestra en el microscopio y se agrega aceite de
inmersión y se pone el objetivo de X100 para observar las bacterias presentes en la muestra.

4. Bacterias del cultivo:

5. Bacterias tinción negativa:

Resultados y Discusión

Yogurt: En el microscopio con objetivo de 100x, la muestra de yogurt, se observaron unos

puntos, unas rayas y cadenas de puntos de color azul, identificadas como bacterias, el color
azul se da por teñir con azul de metileno. Las bacterias en forma de punto son de la familia
cocos, como: Coco Diplococo y por estar unidas en forma de cadenas son estreptococos,
en este caso llamada streptococcus. Las de forma de rayas son de la familia bacilos, se unen
por los polos, estas bacterias reciben el nombre de Bacilo lactobacillus ulgaricus, el cual es
muy acidificante.
Sarro dental: El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el
esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales
y bacterias junto con sus productos metabólicos. En el microscopio con objetico de 100X,
se observó distintos tipos de bacterias como, Cocos, Estreptococo, Estafilococo,
Diplococos.

Vinagre de plátano:

Tinción negativa: Para la tinción negativa con tinta china utilizando el objetivo de 100X
pudimos observar la capsula de las bacterias de color blanco sobre un fondo de color
oscuro, así como también pudimos observar algunas estructuras de bacilos como los cocos
(Cocobacilo).
Cultivos:
CUESTIONARIO.

1. ¿Qué tipos de morfología y agrupación aparecen en los frotis de los cultivos?

La morfología bacteriana puede ser estudiada de dos formas:

Por visualización de los microorganismos vivos sin teñir, lo que nos permite observar su
movilidad. Por visualización de los microorganismos teñidos mediante colorantes con una
concentración que le hace morir y permiten observara la movilidad.

En general todas la bacterias vivas son prácticamente incoloras es decir no presenta

suficiente contraste con el medio acuoso que se encuentra; por tal razón es necesario
teñirlas para que produzcan un contraste con respecto al medio que se encuentra. La
morfología típica es redondeada u ovaladas o cilíndricas, a los primeros se les llama cocos
y a los segundos bacilos, algunos bacilos están en forma de espiral y se les llama vidrios o
espirilos. Las bacterias pueden mantenerse unidas unas con otras después de la división
celular, pero conservando siempre la independencia celular

2. ¿Qué fin tiene la fijación de muestras al realizar un frotis bacteriano?

El fin es la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con
objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la
preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.

3. Señale las ventajas y desventajas de la tinción simple respecto del examen en fresco.

La tinción simple tiene la finalidad de aumentar el contraste para que puedas observar
estructuras celulares en el microscopio. La ventaja principal es que nos permite observar
estructuras que en su forma natural carecen de coloración suficiente para ser distinguidas
por microscopio. Otra ventaja es que nos permite distinguir entre diferentes tipos celulares,
ya que distintas células responden de manera diferente a las tinciones, además de que,
mediante el uso de las llamadas técnicas histoquímicas, podemos teñir un determinado tipo
celular y hacer que sólo estas células se tiñan, mientras que las otras no, así podemos seguir
células que tengan una enzima determinada o donde tenga una reacción particular que no
ocurra en otras, siempre que se usen colorantes adecuados.
Por otro lado, la principal desventaja es que, debido al tratamiento al que debe someterse un
tejido vivo para su tinción, las células acaban muriendo, con lo cual, no es posible observar
esas células activas en su estado natural, sino muertas.

4. Investigue. ¿Cuál es el fundamento de la técnica de coloración Ziehl-Neelsen? ¿Para

qué tipos de microorganismos está diseñada esta técnica?

Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de
cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se
denominan ácido-alcohol resistente. Las micobacterias como Mycobacterium
tuberculosis y M. marinum se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia.
La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante
atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar
con agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que el colorante
ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía
cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias.
Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y las que no, se ven de color
azul ya que se utiliza azul de metileno como tinción de contraste.

Usada para la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR), como M.

tuberculosis o el Phylum Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros.

5. Investigue. ¿Qué técnicas que se pueden emplear para tinción de flagelos, esporas y
capsulas bacterianas?

Se pueden emplear las siguientes técnicas: Tinción de Casares, Tinción de Olt, Tinción de
Schaffer y Fulton

6. Explica el fundamento de las técnicas de la pregunta anterior.

Fundamento de Schaffer y Fulton. La mancha Schaeffer-Fulton es una técnica diseñada

para aislar endosporas tiñendo cualquier endosporas presentes verde, y cualesquiera otros
organismos bacterianos rojo. La mancha verde es verde malaquita, y la de contraste es
safranina, que tiñe cualquier otro organismo bacteriano rojo.

Fundamento de tensión de casares o tinción de flagelos. Los flagelos se observan de color

rojo al igual que las bacterias La observación de flagelos en preparaciones teñidas es muy
difícil, debido a que se retraen con mucha facilidad y se adhieren a la pared celular. Se
deben utilizar cultivos jóvenes (de menos de 24 horas), sembrados en agar semisólido,
empleándose técnicas que engruesan los flagelos para facilitar su observación. Tras la
realización de la delicada técnica (extensión por inclinación -sin asa-, secado sin calor,
fijación con vapores de óxido de osmio) los flagelos aparecen visibles al microscopio
debido al precipitado de plata formado a su alrededor.

Tinción de Olt o tinción de capsula. La cápsula se observa de color anaranjado y las

bacterias de color rojo (específica para Bacillus anthracis). La cápsula es una capa
gelatinosa, de espesor variable, situada alrededor de la pared celular bacteriana. Como es
difícil teñirlas, se consiguen mejores resultados utilizando métodos que, coloreando el
fondo de la preparación y el microorganismo, hacen resaltar las cápsulas sin teñir. El
método más utilizado es el de Burri o de la tinta china, en el que se tiñen primero los
microorganismos con fucsina diluida y posteriormente se cubre la preparación con tinta
china. Tras el procedimiento de tinción, se observan sobre un fondo negro los
microorganismos teñidos de rojo y la cápsula como un halo blanco que los rodea.
 BIBLIOGRAFIA.
 Tinciones en microbiología. http://www.monografias.com/docs113/tinciones-
microbiologia/tinciones-microbiologia.shtml
 Microbiología y parasitología humana de Raül Romero Cabello 3ra edición.