RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS PRIMARIOS DE INTERÉS EN FARMACOGNOSIA.

METODOLOGÍA

Reconocimiento del almidón Detección de Celulosa Detección de granos de Detección de Lipidos y aceites
en agua. Aleurona esenciales

5g de material seco y molido se
extrae con 10ml de agua.
Se toma una gota de la solución
filtrada y se observa con el
microscopio.
Observar cada muestra de
almidón preparada.
(Maíz, yuca, papa y arroz).
Reconocimiento del almidón
en Lugol.
Se toma 1 gota de la solución
filtrada de cada una de las
muestras de almidón preparada.
Posteriormente agregar una gota
de Lugol, colocar el cubreobjetos.
Primero colocamos de 2 a
3mg de la droga
polverizada sobre el
portaobjeto, agregamos 1 o
2 gotas de solución de
Cloruro de Zinc yodado.
Dejamos reposar 2 min y
agregamos 1 gota de Yodo
(0.1mol/L), dejamos reposar
nuevamente.
Luego removemos el
exceso de reactivo con
papel filtro, agregamos 1
gota de Acido Sulfurico al
60% y colocamos el
cubreobjeto para
posteriormente observar en
el microscopio.
Colocamos de 2 a 10mg de
la drogaen polvo sobre un
portaobjetos. Luego vertimos
de 2 a 3 gotas de solución de
yodo/etanol.
Observamos granulos de
Aleurona en un color
amarillo-café.
Agregar luego 2 a 3 gotas de
trinitrofenol en etanol y los
granulos se colocan de color
amarillo.
Colocamos 2mg de la droga en
polvo sobre el portaobjeto, vertimos
de 2 a 3 gotas de solución de Sudan
III y dejamos actuar unos minutos (2
a 3).
Escurrimos el liquito y lavamos bien
con alcohol al 70%, poesteriormente
colocamos el cubreobjeto y
observamos en el microscopio con
los objetivos de 10x y 40x.
Los lipidos se muestran como gotas
de color rojo.

Luego secamos los costados con Se observan las paredes de

el papel filtro y observamos en el la Celulosa en colores azul
microscopio que estructuras se y violeta, luego de realizar
tiñen de color azul, violeta o la observación se limpia los
nedro. lentes del microscopio.
 IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
METODOLOGÍA
1 2
Reconocimiento de alcaloides
en flores de borrachero
1. Obtención del extracto: Tomamos 5g de flores u hojas de
borrachero, maceramos en un mortero y adicionamos un
volumen suficiente de Acido Clorhidrico al 5% para luego
calentar en baño maría durante 10min.
Pasados los 10min dejamos enfriar, filtramos y rotulamos.
2. prueba cualitativa de alcaloides: Colocamos en dos tubos
de ensayo aproximadamente 0.5ml del filtrado ácido y
agregamos a uno de los tubos 2 gotas de reactivo de
Dragendorff y al otro tubo gotas del reactivo de Mayer.
Observamos si se presenta turbidez o precipitaciones en
ambos tubos, se concidera como prueba presuntiva de la
presencia de alcaloides.
3. Disposición de residuos prueba de alcaloides:
a. Se debe desechar la prueba de Mayer en el
recipiente rotulado con el nombre de reciduos de
Mayer.
b. Se debe desechar la prueba de Dragendorff en el
recipiente rotulado con el nombre de reciduos de
Dragendorff.
c. Tomamos el sobrante del extracto ácido obtenido
para la prueba de alcaloides para posteriormente
desecharlo en el recipiente rotulado con el nombre
de ácidos.
Reconocimiento de esteroides
y/o triterpenoides (semillas de
soya)
1. Obtención del extracto: Tomar 1g aproximadamente de
semillas de Soya secas y molidas en un Beaker,
posteriormente adicionar Diclorometano hasta que cubra la
muestra (realizar esta prueba bajo campana extractora de
gases).
Luego agitar con una varrila de vidrio para realizar una mejor
extracción para poesteriormente filtar sobre sulfato de Sodio
anhidro.
2. prueba cualitativa de esteroides: Tomamos 1 ml del
filtrado orgánico en un tubo de ensayo, luego agregamos por
la pared del tubo 1 ml (10 gotas) de anhídrido acético, con
mucha precaución agregamos de 1 a 2 gotas de ácido
sulfúrico concentrado.
Al observar el procedimiento anterior se debe presentar la
aparicion de coloraciones verde, azul, roja o violeta para
indicar que la prueba es positiva para esteroides y/o
triterpenoides en la muestra.
3. Disposición de residuos prueba de esteroides o
triterpenoides:
Se debe desechar la prueba y el sobrante del extracto
organico (diclorometano) obtenido para realizar la prueba en
el recipiente rotulado con el nombre de residuos clorados.
 IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
METODOLOGÍA
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Reconocimiento de saponinas en
epicarpio de semillas de chumbimbo
1. Obtención del extracto: Tomamos 5g del material vegetal
fresco, maceramos en un mortero y adicionamos una cantidad
sufuciente de agua hasta que cubra la muestra.
Con la ayuda de una gasa filtramos.
2. prueba cualitativa de saponinas: Colocamos en un tubo
de ensayo 4ml del filtrado y agitamos vigorosamente durante
un minuto.
Observamos si se presenta la formación de espuma que
permanece durante 5 minutos es prueba presuntiva de la
presencia de saponinas en la muestra.
3. Disposición de residuos prueba de saponinas:
Se debe desechar la prueba y el sobrante del extracto en el
recipiente de reciduos orgánicos no clorados.
Reconocimiento de flavonoides y
compuestos fenólicos en petalos de rosa
roja.
1. Obtención del extracto para reconocimiento de
flavonoides y compuestos fenólicos:Tomar 5g
aproximadamente de pétalos de rosa, posteriormente
maceramos en un mortero para facilitar el rompimiento de los
tejidos y luego pasamos la muestra completamente macerada
a un beaker y adicionamos cantidad suficiente de etanol hasta
cubrir la muestra.
Calentar en baño maría durante 10min, filtrar con la muestra
aun caliente y rotulamos el extracto.
2. Prueba cualitativa para flavonoides: Del extracto de rosa roja; tomamos un 1ml
del filtrado etanólico en un tubo de ensayo, posteriormente agregamos varias
limaduras de magnesio, luego agregamos lentamente por la pared del tubo HCl
concentrado (37%).
Al observar la aparición de colores: naranja, rojo, violeta ó rosado, nos indica que es
prueba presuntiva de la presencia de flavonoides en el material vegetal.
a. Disposición de residuos prueba de flavonoides:
La prueba se desecha en el recipiente de residuos de ácidos.
3. Prueba cualitativa para compuestos fenólicos: En un tubo de ensayo tomamos
1 ml del filtrado y adicionamos 2 gotas de solución de tricloruro férrico (FeCl3 al
10%).
Observamos si se presenta la aparición de un color verde, azul o negro esto nos
indica que la prueba es positiva para compuestos fenólicos.
a. Disposición de residuos prueba de compuestos fenólicos: Se debe
desechar la prueba en el recipiente de residuos de cloruro férrico. Lo que
sobra del extracto etanolico obtenido para realizar la prueba de
flavonoides y compuestos fenólicos, se desecha en el recipiente rotulado
con el nombre EXTRACTOS ETANOLICOS PARA RECUPERAR
 IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

METODOLOGÍA
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Reconocimiento de Leucoantocianidinas Reconocimiento de Cardiotónicos o

y Antocianinas (hojas de repollo morado)
1. Obtención del extracto para las pruebas de Leucoantocianidinas y
Antocianinas: Picamos finamente 10 g del material vegetal, tomamos un
erlenmeyer o beaker el cual estará previamente rotulado con el nombre de
extracto para prueba de leucoantocianidinas y antocianinas; luego adicinoamos al
recipiente suficiente cantidad de etanol hasta cubrir la muestra.
Calentar al baño maría durante 5 minutos, dejar enfriar, luego filtrar y rotular el
extracto.
lactonas α-β insaturadas (semillas de
catapis)
1. Obtención del extracto para las pruebas de cardiotonicos: Picamos
finamente 10 g del material vegetal; en un Erlenmeyer o beaker rotulado
como EXTRACTO PARA PRUEBA DE CARDIOTONICOS agregamos el
material. Posteriormente adicionamos suficiente cantidad de etanol que
cubra la muestra. Luego calentamos a baño maría durante 5 minutos,
dejamos enfriar, filtramos y rotulamos el extracto.

2. Prueba cualitativa para leucoantocianidinas: En un tubo de ensayo tomamos 2. Prueba cualitativa para cardiotónicos y lactonas α, β insaturadas: En
2 ml del filtrado y adicionamos 10 gotas de ácido (0.5 mL) clorhídrico concentrado un tubo de ensayo adicionamos 1 ml de filtrado y agregamos 0.5 ml (20
(37%), procedemos a mezclar suavemente. Calentamos en baño maría durante 10 gotas) de reactivo de Kedde A al igual que adicionamos 0.5 ml (20 gotas) del
minutos a 100°c, posteriormente dejamos enfriar miestras observamos. reactivo de Kedde B.

Añadimos de 10 a 20 gotas (0.4 -1.0 mL de alcohol amílico y agitamos. Dejamos
separar las fases. Consideramos la prueba positiva al observar y se nota una
coloración en la fase amílica que vaya desde el carmesí oscuro al rosado débil, la
aparición de coloraciones rojas es prueba presuntiva de la presencia de
leucoantocianidinas en la muestra.
a. Disposición de residuos prueba de leucoantocianidinas: Con ayuda
de la pipeta pasteur, la fase orgánica del alcohol amílico (superior) se
desecha en el recipiente de residuos orgánicos no clorados. La fase
acuosa (inferior) se desecha en el recipiente de residuos ácidos.
Es prueba presuntiva de la existencia de cardiotónicos la aparición de
coloraciones violetas o púrpuras en la muestra.
a. Disposición de residuos prueba de cardiotónicos: La prueba
se debe desechar en el recipiente de residuos básicos. El
sobrante del extracto (etanolico) que se obtubo para realizar la
prueba, se desecha en el recipiente rotulado con el nombre
EXTRACTOS ETANOLICOS PARA RECUPERAR.

3. Prueba cualitativa para reconocimiento de antocianinas: Tomamos dos tubos de

ensayo, en el primer tubo adicionamos 2 ml del filtrado y posteriormente añadimos 10
gotas (1 ml) de NaOH 10%. Luego observamos la coloración formada. En segundo tubo
adicionamos 2 ml del filtrado y añadimos 10 gotas de ácido mineral diluido (HCl ó H2SO4
al 10%). Posteriormente Observamos la coloración formada.

a. Disposición de residuos prueba de antocianinas: La prueba acida (HCL

10%) se descarta en el recipiente de residuos ácidos. La prueba básica (NaOH)
de la prueba se desecha en el recipiente de residuos básicos. El sobrante del
extracto (etanolico) obtenido para realizar la prueba, se desecha en el
recipiente EXTRACTOS ETANOLICOS PARA RECUPERAR.
 IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

METODOLOGÍA
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Reconocimiento de taninos (hojas de

Reconocimiento de antraquinonas
guayaba)

1. Obtención del extracto para taninos: Cortamos finamente 10 g del material

vegetal, llevamos el material a un beaker o Erlenmeyer y posteriormente 1.Obtención del extracto: En un beaker de 100 ml pesamos 2 g del
adicionamos agua hasta que cubra el material vegetal. material vegetal en polvo, adicionamos 20 ml de etanol al 95% y
posteriormente calentamos en baño maría durante 5 minutos hasta
Calentamos al baño maría 10 minutos, dejamos enfriar para luego filtrar y rotular ebullición y filtramos cuando aún esta caliente.

. 2. Hidrólisis: Tomamos 5 ml del filtrado y adicionamos 3 ml de H2SO4 al

2. Prueba cualitativa de reconocimiento de taninos: Tomamos un tubo de
ensayo al cual se le agrega 1 ml del filtrado y agregar 20 gotas de la solución de
gelatina-sal, observamos si se presenta turbidez o formación de precipitado es
prueba presuntiva de la presencia de taninos en la muestra.
3. Disposición de residuos prueba de taninos: Se debe desechar en el
recipiente de residuos de cloruro férrico, El sobrante del extracto (etanolico)
obtenido para realizar la prueba, se desecha en el recipiente EXTRACTO
ETANOLICOS PARA RECUPERAR.
10%,luego calentamos en baño maría durante 10 minutos hasta ebullición.
3. Oxidación: Agregamos al anterior filtrado 3 ml de peróxido de hidrogeno
20 de volúmenes para posteriormente calentar en baño maría durante 10
minutos hasta el punto de ebullición y dejamos enfriar la muestra.
4. Extracción liquido-liquido en embudo de separación con acetato de
etilo: adicionar 5 ml de acetato de etilo al extracto previamente oxidado,
agitar suavemente sin emulsionar (agregar un poco de agua para favorecer
la separación de las fases), realizar este procedimiento en la cabina de
extracción.

Con ayuda de un embudo de separación, se debe separar la fase acuosa acida inferior de la fase orgánica
superior y rotular cada una.

5. Prueba cualitativa para antraquinonas: En un segundo tubo de ensayo tomamos 2 ml de la fase orgánica (acetato de etilo: fase superior) y adicionamos 1 ml de
la solución previamente preparada de hidróxido de sodio al 5% en amoníaco al 2%, agitamos suavente. Con la aparición de un color rojo cereza en la capa acuosa
(fase inferior) se indica presencia de quinonas en la muestra.

6. Disposición de residuos prueba de antraquinonas: La fase acuosa acida de la prueba (ácido H2SO4 10%:) se deposita en el recipiente de residuos ácidos, (Para su
disposición final las dos fases de la prueba se deben separar con ayuda de una pipeta Pasteur o embudo de separación). La fase orgánica (acetato de etilo) de la prueba se
desecha en el recipiente de residuos no clorados, la fase acuosa (básica) de la prueba se desecha en el recipiente de residuos básicos. El sobrante del extracto (etanolico)
obtenido para realizar la prueba, se desecha en el recipiente rotulado con el nombre EXTRACTOS ETANOLICOS PARA RECUPERAR
 IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

METODOLOGÍA
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Reconocimiento de cumarinas en
cascaras de limón

1. Obtención del extracto y prueba: Tomamos un tubo de ensayo grande al cual adicionamos 1 g de material vegetal fresco y
finamente picado (cascara de limón) y agregamos etanol comercial hasta cubrir la muestra. Cubrimos la boca del tubo de
ensayo con un trozo de papel filtro blanco y mientras se sujeta con pinzas o una banda elástica. Se le agrega 5 gotas de NaOH
10% en el papel filtro y calentamos hasta ebullición durante 5 minutos, posteriormente enfriamos y retiramos el papel filtro.

2. Disposición de residuos prueba de cumarinas: El papel de filtro se deposita en el recipiente de residuos de placas, papel
filtro y algodones, el extracto (etanolico) liquido se desecha en el recipiente de residuos no clorados. El sobrante del extracto
(etanolico) obtenido para realizar la prueba, se desecha en el recipiente EXTRACTO ETANOLICOS PARA RECUPERAR.
 ANALISIS MICROSCOPICO DE MATERIA VEGETAL

METODOLOGÍA
1 2

Preparacion de placas o montajes

Ensayos preeliminares para la
deacuerdo el caso agua, hidrato de coral
identificacion de las caracteristicas
y floroglucina
organolepticas del material vegetal para
identificar
1. observacion del almidon: montar placa en agua, observar
los diferentes gránulos y ensayar si se trata de almidón
mediante la adición de agua de yodo (Lugol), colocando 2 a
1.Color: Es de gran importancia analizar el color del material 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos, verter 2 ó 3
vegetal gotas de solución de Lugol diluida (1:5) en agua. Colocar el
-Raiz: El color va desde blanco amarrillento hasta pardo
-Corteza: En general es color castaño cubreobjetos y observar al microscopio a 10x y 40x. Los
-Hojas y flores: El color depende de las especies granos de almidón se colorean de azul- violáceo intenso.

2.Olor: El olor se puede expresar como aromatico, citrico,

mentolado y cuando no es posible establecer comparacion, se
describe como caracteristico
. suavemente. El hidrato de clorar disuelve contenido celular y sustancias
3. Sabor: los sabores se pueden describir como autenticos
(amargo, dulce, ácido, salado o insipidos)
2. Observación de tricomas epidérmicos y oxalato de calcio: una solución de
hidrato de cloral (80 g de hidrato de cloral en 20 ml de agua) se utiliza como
agente clarificante. Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos
y agregar de 2 -8 gotas que impregnen todo el material vegetal y calentar
extracelular (granos de almidón, granos de aleurona) y permite una mejor
visualización de tejidos celulares como: pared celular, fibras, vasos, cristales de
oxalato de calcio, tricomas, estomas y polen.
.

3. Observación de lignina: colocar 2 a 3 mg de la droga en polvo sobre un

portaobjetos y humedecer este material vegetal con una solución alcohólica de
floroglucina (1% en etanol del 90%) y dejarlo secar sobre una plancha de
calentamiento a temperatura de 30°C. Agregar 1 gota de HCl concentrado (37%),
3 poner el cubreobjetos y secar muy bien los lados de placa con tiras de papel de
filtro observar los vasos lignificados en colores desde el rosado hasta el color rojo
carmín. Observar la presencia de fibras, parénquima, esclereidas, pelos.
Observar las estructuras presentes en los
ejemplares seleccionados de las
plantas medicinales, identificar los
elementos de valor diagnóstico en cada una
de las plantas y realizar el dibujo
correspondiente.