INSTITUTO POLITÉNCIO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INGENIERIÍA BIOQUÍMICA
"Bioquímica y Biología molecular"

Práctica 9. Separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina y determinación del colesterol en la yema de
huevo.

Grupo 3IM1 , Sección 3, Inés Martínez Valeria, Islas Vergara Valeria Renata, Nava López Alejandro

INTRODUCCIÓN:

Los lípidos son biomoléculas orgánicas que desempeñan OBJETIVOS:

numerosas funciones biológicas (principlamente constituyen
membranas). Se clasifican en saponificables (ácidos grasos,  Identificación de fosfolípidos en la yema de huevo
saturados e insaturados, fosfolípidos etc. Se dividen en triacil por cromatografía en capa fina.
glicéridos.) y no saponificables (terpenos, esteroides y 
eicosanoides). Los fosfolípidos, un tipo de lípido, en su
estructura química podemos observar una molécula de
glicerol, dos ácidos grasos,
RESULTADOS:
El colesterol es una sustancia cerosa, de tipo grasosa, que
 Separación de fosfolípidos por TLC:
existe naturalmente en todas las partes del cuerpo. El cuerpo
necesita determinada cantidad de colesterol para funcionar Tabla 1.
adecuadamente y este sirve para fabricar hormonas, ácidos Revelación por Tabla 2.
molibdato Revelación por
biliares, vitamina D, y otras sustancias. Se encuentra en las analito Rf yodo
membranas celulares de nuestros organismos, el sistema analito Rf
1 0.166
nervioso, hígado y corazón. El colesterol de nuestro 1 0.166
2 0.166
organismo se produce en el hígado y el resto es aportado a 2 0.166
3 0.3
través de la dieta y del colesterol presente en la bilis. 3 0.483
4 0.3
5 0.41 4 0.483

6 0.41 5 0.6

7 0.885 6 0.6
7 0.73
Tabla 3. 8 0.73
Revelación por 9 0.9
ninhidrina
analito Rf 10 0,9

1 0.166 a 0.3

2 0.166 b 0.3

3 0.333 c 0.333

4 0.333
5 0.6
6 0.9 Tabla 4.
7 0.9 Revelación por
bismuto
analito Rf
1 0.166
2 0.166
3 0.266
4 0.266
5 0.416
6 0.416
7 0.916
Figura 1. Resultado y avance de analitos por TLC
 De la placa revelada con bismuto se hacen las siguientes
aseveraciones: analito 7 corresponde a lípidos neutros,
Rf=distancia de inicio a muestra/distancia del disolvente analitos 5 y 6 a fosfatidil serina y lecitina, analitos 3 y 4 a
esfingomielina y analitos 1 y 2 a isolecitina.
Rf=1cm/6cm=0.166
Podemos ver que la revelación por iodo es la más efectiva ya
Distancia recorrida por el disolvente= 6cm
que provee el mayor número de analitos separados visibles (13
analitos). Por otro lado, vemos que la revelación por
 Determinación del colesterol en la yema de
molibdato, bismuto y ninhidrina separan el mismo número de
huevo: analitos (7 analitos) sin embargo solamente el molibdato y el
bismuto separan los mismos analitos (Rf aprox. iguales).
Tabla 1. Resultados de
espectrofotometría
De esto se concluye que la yema de huevo de pata como la de
Tubo
A mcol [Col.] guajolota contienen los mismos lípidos.
(nm) (µg) (ng/µl)
Blanco 0,044 0 0 CONCLUSIONES:
1 0,088 20 11,7
2 0,174 40 23,5  La yema de huevo de pata y guajolota contienen
3 0,241 60 35,29 lípidos neutros, fosfatidiletanolamina, fosfatidil
4 0,301 80 47 serina, lecitina, esfingomielina e isolecitina.
5 0,475 100 58,8  La cantidad de colesterol obtenida fue casi la mitad
Prob. 0,349 81,44 47,76 del reportado por la literatura.

BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA:
Cantidad de colesterol en extracto de lípidos:
 Medline plus. (29 septiembre 2016). Colesterol.
5 µl -----> 81.44 µg 2016, de Medline plus Sitio web:
https://medlineplus.gov/spanish/cholesterol.html
3000 µl -----> x = (48864 µg) (2) (1mg/1000µg) = 97.728 mg
 Blogspot. (27 de noviembre de 2012). Clasificación
de los Lipidos. 2016, de Blogspot Sitio web:
http://unpanutricion.blogspot.mx/2012/11/clasificacio
DISCUSIÓN: n-de-los-lipidos.html
 Profesor en linea. (2015). Fosfolipidos. octubre 2016,
 Separación de fosfolípidos por TLC: de Profesor en linea Sitio web:
http://www.profesorenlinea.com.mx/Ciencias/Fosfoli
De la placa revelada con molibdato y los Rf de los analitos pidos.html
podemos inferir la presencia de lípidos neutros, que
corresponden al analito 7, también contiene fosfatidil serina y
fosfatidil colina, asociados a los analitos 5 y 6, mientras que
los analitos 3 y 4 indican la existencia de esfingomielina; por
último, observamos que los analitos 1 y 2 revelan la presencia
de lisofosfatidil colina.

De la placa revelada con iodo se concluye lo siguiente:

analitos 9 y 10 corresponden a lípidos neutros, analitos 5 y 6 a
fosfatidiletanolamina, analitos 3 y 4 a fofatidil serina y
lecitina, analitos a, b y c a esfingomielina, analitos 1 y 2 a
isolecitina. Existe incertidumbre en cuanto a los analitos 7 y 8
ya que su Rf se encuentra entre el valor de la
fostidiletanolamina y el valor de los lípidos neutros.

De la placa revelada con ninhidrina observamos los siguiente:

analitos 6 y 7 están asociados a lípidos neutros, analito 5 a
fosfatidiletanolamina, analitos 3 y 4 a a fosfatidil serina y
lecitina, analitos 1 y 2 a isolecitina.