Universidad Nacional de Colombia – Sede Bogotá

Facultad de Ciencias – Departamento de química

Análisis químico instrumental (2015566 – Grupo 01) – Módulo de cromatografía
Docente: Zuly Jenny Rivera Monroy
Presentado por: Sergio Luis Dávila González
Diego Armando Rodríguez Delgado
Tarea Van Deemter-Knox – lunes, 29 de abril de 2019
Para evaluar la eficiencia de una columna SUPELCOSITM (150 X 4.6 mm) se analizaron a diferentes
flujos tres ácidos aromáticos (p-hidroxibenzoico, trans-ferúlico y benzoico), a 280 nm. Para determinar
el tiempo muerto se empleó NaNO3. De acuerdo con la información suministrada por los
cromatogramas obtenidos durante el análisis, se logró analizar para los ácidos trans-ferúlico y
benzoico, cuál fue el comportamiento de la presión (P), porosidad de la columna (ε) y de la resolución
de los picos (RS) con respecto al flujo de la fase móvil (μ), así como el comportamiento de los
siguientes parámetros cromatográficos frente al flujo μ: tiempo de retención (tR), respuesta del detector
(cuentas de área) y del factor de retención (k).
Para los analitos analizados se obtuvieron los siguientes datos:

Flujo NaNO3 Analito: Ácido trans-ferúlico

(mL/min) t0 (min) t0 (s) tR (min) W1/2 (min) P (bar) K

0,15 9,29 557,4 22,510 0,870 10 1,42 3712

0,30 4,67 280,2 11,213 0,396 19 1,40 4437
0,50 2,76 165,6 6,687 0,217 32 1,42 5251
0,80 1,72 103,2 4,173 0,178 52 1,43 3059
1,0 1,37 82,2 3,323 0,146 64 1,43 2862
1,5 0,92 55,2 2,213 0,101 97 1,41 2649

Tabla 1 – Datos obtenidos para el analito 2, donde 𝑁𝑒𝑥𝑝.𝑊 se obtuvo como el número de platos
1/2
teóricos experimental calculados a un medio de ancho de banda.
 Flujo NaNO3 Analito: Ácido trans-ferúlico
Hexp. Hteo.
(mL/min) t0 (min) Porosidad (𝞮) Área (cuentas de área) 𝞵(mm/s)
(mm) (mm)
0,15 9,29 0,56 60744538 0,269 0,0404 0,0388
0,30 4,67 0,56 30473658 0,535 0,0338 0,0359
0,50 2,76 0,55 18250092 0,906 0,0286 0,0378
0,80 1,72 0,55 11402754 1,453 0,0490 0,0428
1,0 1,37 0,55 9119360 1,825 0,0524 0,0467
1,5 0,92 0,55 6072564 2,717 0,0566 0,0565

Tabla 2 – Datos obtenidos para el analito 2, donde Hexp. se obtuvo como la altura de plato teórico
experimental calculado a un medio de ancho de banda, y Hteo. se obtuvo a partir del ajuste de los
modelos de Van Deemter y de Knox.

Flujo NaNO3 Analito: Ácido benzoico

(mL/min) t0 (min) t0 (s) tR (min) W1/2 (min) P (bar) K

0,15 9,29 557,4 32,060 0,833 10 2,45 8206

0,30 4,67 280,2 15,967 0,364 19 2,42 10683
0,50 2,76 165,6 9,503 0,222 32 2,44 10337
0,80 1,72 103,2 5,917 0,154 52 2,44 8179
1,0 1,37 82,2 4,710 0,133 64 2,44 6948
1,5 0,92 55,2 3,127 0,100 97 2,40 5417

Tabla 3 – Datos obtenidos para el analito 3, donde 𝑁𝑒𝑥𝑝.𝑊 se obtuvo como el número de platos
1/2
teóricos experimental calculados a un medio de ancho de banda.

Flujo NaNO3 Analito: Ácido benzoico

Hexp. Hteo.
(mL/min) t0 (min) Porosidad (𝞮) Área (cuentas de área) 𝞵(mm/s)
(mm) (mm)
0,15 9,29 0,56 57095248 0,0083 0,0183 0,0182
0,30 4,67 0,56 28582366 0,0164 0,0140 0,0142
0,50 2,76 0,55 17177612 0,0278 0,0145 0,0149
0,80 1,72 0,55 10728058 0,0446 0,0183 0,0182
1,0 1,37 0,55 8585977 0,0560 0,0216 0,0209
1,5 0,92 0,55 5720594 0,0833 0,0277 0,0281

Tabla 4 – Datos obtenidos para el analito 3, donde Hexp. se obtuvo como la altura de plato teórico
experimental calculado a un medio de ancho de banda, y Hteo. se obtuvo a partir del ajuste de los
modelos de Van Deemter y de Knox.
Los términos Hteo. de las tablas 2 y 4 fueron calculados a partir de los modelos teóricos de Van Deemter
y de Knox, los cuales expresan la relación entre la altura de plato (H) con respecto al flujo de la fase
móvil (μ), empleando un software que permitiera la obtención de dichos datos de altura teóricas a
partir del mejor ajuste tomando los datos experimentales de las alturas. De otra parte, a partir de los
datos obtenidos se pudieron algunas relaciones con el flujo de la fase móvil (μ).

Presión vs flujo de fase movil (𝞵)

120

100

80
Presión (bar)

y = 1157,9x + 0,0559 Ácido trans-ferúlico

60 R² = 0,9997 Ácido benzoico
Lineal (Ácido trans-ferúlico)
40
Lineal (Ácido benzoico)
y = 35,504x + 0,0677
20 R² = 0,9998

0
0,000 0,500 1,000 1,500 2,000 2,500 3,000
𝞵 (mm/s)

Figura 1 – Comportamiento experimental de la presión con respecto a 𝞵.

De acuerdo con la figura 1, se establece una relación de proporcionalidad lineal entre la presión y el
flujo de fase móvil, obteniendo una mayor correlación entre las dos variables para el ácido trans-
ferúlico (con un valor de R2 = 0,9998). De esta manera, se establece que un aumento en la presión
generó un aumento proporcional del flujo de fase móvil.
El comportamiento del tiempo de retención (tR) y de la respuesta del detector (medido como cuentas
de área) se determino con respecto al flujo de fase móvil (𝞵) para cada uno de los analitos estudiados;
los resultados se muestran en las siguientes figuras:
 Tiempo de retención vs flujo de fase móvil (𝞵)
Tiempo de retención (min) 35,00

30,00

25,00

20,00

15,00 Ácido trans-ferúlico

Ácido benzoico
10,00

5,00

0,00
0,000 1,000 2,000 3,000
𝞵 (mm/s)

Figura 2 – Comportamiento experimental del tiempo de retención con respecto a 𝞵 para cada uno de
los analitos.

Área vs flujo de fase móvil (𝞵)

7,00E+07

6,00E+07
Área (cuentas de área)

5,00E+07
Ácido trans-ferúlico
4,00E+07
Ácido benzoico
3,00E+07

2,00E+07

1,00E+07

0,00E+00
0,000 1,000 2,000 3,000
𝞵 (mm/s)

Figura 3 – Variación de la respuesta del detector con respecto a 𝞵 para cada uno de los analitos.
De acuerdo con las figuras 2 y 3, se observa que el tiempo de retención y la respuesta del detector
con respecto al flujo de fase móvil presentan una relación inversamente proporcional, sugiriendo que
dichos parámetros se pueden ajustar a un modelo de decrecimiento exponencial. De esta manera,
para los dos analitos un aumento de 𝞵 genera una disminución considerable en el tiempo de retención
y en la respuesta que genera el detector.
Lo anterior sugiere que debe haber un flujo de fase móvil óptimo qué generó una respuesta adecuada
del detector con un tiempo de retención lo más bajo posible; para el caso de ácido trans-ferúlico este
flujo es de 0,535 mm/s, y para el ácido benzoico este flujo es de 0,0278 mm/s. Además, se identificó
la relación entre el factor de retención (k) con respecto a 𝞵.

Factor de retención (k) vs flujo de fase móvil (𝞵)

2,40

2,20

2,00

1,80 Ácido trans-ferúlico

K

1,60

1,40

1,20

1,00
0,000 1,000 2,000 3,000
𝞵 (mm/s)

Figura 4 – Variación de la respuesta del detector con respecto a 𝞵 para el ácido trans-ferúlico.

2,60

2,55

2,50

2,45 Ácido benzoico

K

2,40

2,35

2,30
0,000 0,020 0,040 0,060 0,080
𝞵 (mm/s)

Figura 5 – Variación de la respuesta del detector con respecto a 𝞵 para el ácido benzoico.
Según las gráficas de las figuras 4 y 5, se identificó que el factor de retención (como la capacidad de
la columna cromatográfica de retener a los analitos) es aproximadamente constante con respecto al
flujo de fase móvil (𝞵), de esta manera es posible establecer que el factor de retención es invariante
con respecto a variaciones de 𝞵. Se complementó el estudio de la columna cromatográfica, analizando
que relación tuvo la resolución de los picos (Rs) y la porosidad de la columna con respecto al flujo de
la fase móvil (𝞵), obteniéndose los siguientes resultados:

Porosidad (ε) vs. flujo de fase móvil (μ)

0,56

0,56

0,56
Porosidad (ε)

0,56

0,56

0,55

0,55

0,55

0,55
0,000 1,000 2,000 3,000
μ (mm/s)

Figura 6 – Comportamiento de la porosidad de la columna con respecto a variaciones en el fujo de la

fase móvil.

Flujo
(mL/min) Rs
0,15 6,62
0,3 7,38
0,5 7,57
0,8 6,21
1,0 5,86
1,5 5,36

Tabla 5 – Resolución de los picos Figura 7 – Comportamiento de la resolución de los picos

cromatográficos para los analitos. cromatográficos con respecto a μ de los analitos.
Los datos obtenidos para la resolución (Rs) se calcularon teniendo en cuenta que las bases de los
picos cromatográficos de los analitos presentan la misma línea base, por ende, se tuvieron en cuenta
los anchos de banda medio (W1/2) de cada pico, calculándose Rs a partir de la siguiente ecuación:

1,18*(tR1 -tR2 )
R s = (W Ecuación 1
1/21 +W1/22 )

Donde t R1 y W1/21 son el tiempo de retención y ancho de banda medio del ácido benzoico,
respectivamente; t R2 y W1/22 son el tiempo de retención y ancho de banda medio del ácido
trans-ferúlico, respectivamente.

De acuerdo con la figura 6, la porosidad de la columna disminuye con respecto a μ, lo que sugiere que
a mayores flujos habrá una menor cantidad de espacios vacíos o espacios disponibles en la columna
que puedan favorecer la retención de los analitos, y por ende, puedan generar mayores tiempos de
retención en el cromatograma; no esta de más decir, que la porosidad de la columna es independiente
al analito que se analizó.

Con respecto a la resolución, se identificó que existe un flujo μ óptimo para el cual los picos
cromatográficos generan una mejor resolución, obteniendo una resolución de 5,36 para un flujo de
fase móvil de 1,5 mL/min; se observó que un aumento en μ generó una disminución en la resolución
de los picos cromatográficos, lo cual indica una relación inversamente proporcional entre μ y Rs.

Por último, se calcularon los valores experimentales para altura de plato teórico para cada uno de los
flujos de fase móvil, y estos valores se compararon con respecto a los valores obtenidos para altura
de plato teórico por medio de los modelos de Van Deemter y de Knox. Los resultados de dicho análisis
se reportan a continuación:

Términos de Eq. de Van Demmter Términos de Eq. de Knox

A
A (mm) 0,02365 ( 𝒎𝒎𝟑 𝒔𝟏/𝟑 ) -0,1288
B (𝒎𝒎𝟐 /𝒔) 0,003247 B (𝒎𝒎𝟐 /𝒔) -0,0314
C (s) 0,01164 C (s) -0,1449

Tablas 6 y 7 – Valores obtenidos para los términos de la ecuación de Van Deemter y de Knox, para el
ácido trans-ferúlico.

De esta manera, se establecieron las ecuaciones de Van Deemter y de Knox para el ácido trans-
ferúlico:

0,003247 mm2 /s
H(𝜇) = 0,02365 mm + + 0,01164 s*𝜇
𝜇

Ecuación 2 – Ecuación de Van Deemter

 -0,0314 mm2 /s
H(𝜇) = -0,1288 mm3 s1/3 *𝜇 1/3 -0,1449 s*𝜇
𝜇

Ecuación 3 – Ecuación de Knox

El siguiente gráfico representa el comportamiento de la altura H con respecto al flujo de fase móvil (𝜇)
para el ácido trans-ferúlico:

0,0600
Altura H vs flujo de fase móvil (𝞵)

0,0500

Altura (H) experimental

H(mm)

Altura (H) teórica

0,0400

0,0300
0,000 1,000 2,000 3,000
𝞵 (mm/s)

Figura 8 – Variación de la altura H de la columna con respecto a 𝜇; los valores teóricos de H fueron
obtenidos a partir de los modelos matemáticos de Van Deemter y de Knox.

De manera análoga, se obtuvieron los datos para el ácido benzoico:

Términos de Eq. de Van Demmter

A (mm) 0,003311
2
B(mm /s) 0,0001033
C (s) 0,2820

Tabla 8 - Valores obtenidos para los términos de la ecuación de Van Deemter.

La ecuación de Van Deemter para el ácido benzoico es:

0,0001033 mm2 /s
H(𝜇) = 0,003311 mm + + 0,2820 s*𝜇 Ecuación 4
𝜇

A continuación, se representa el comportamiento de la altura H con respecto al flujo de fase móvil (𝜇)
para el ácido benzoico:

Altura H vs flujo de fase móvil (𝞵)

0,0300

0,0250
H(mm)

0,0200
Altura (H) experimental
Altura (H) teórica
0,0150

0,0100
0,000 0,020 0,040 0,060 0,080
μ (mm/s)

Figura 9 – Variación de la altura H de la columna con respecto a 𝜇; los valores teóricos de H fueron
obtenidos a partir del módelo de Van Deemter.
A partir de las figuras 8 y 9, y de los parámetros de la ecuación de Van Deemter y de Knox obtenidas
para los analitos, se identificó que para el ácido trans-ferúlico el flujo 𝜇 óptimo es de 0,535 mm/s y
para el ácido benzoico el flujo óptimo 𝜇 es de 0,0164 mm/s. Además, el módelo teórico de Van
Deemter y de Knox se ajusta de mejor manera para el ácido benzoico que para el ácido trans-ferulico,
por tanto las dispersiones entre los valores obtenidos para las alturas H experimentales y las alturas
H del módelo de Van Deemter y de Knox, son menores para el ácido benzoico que para el ácido trans-
ferúlico.