¿Cómo funcionan los factores de virulencia de Shigella para causar enfermedad?

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Introducción
Shigella fue reconocido como el agente causal de la disentería bacilar en 1897 por Kiyoshi Shiga. Él determinó que era un bacilo
Gram negativo, que era capaz de fermentar la dextrosa, pero era negativo a la reacción de indol e incapaz de producir ácido a partir
del manitol (Trofa et al., 1999 ). Shigella es un anaerobio no esporulante y facultativo. Shigella es también un patógeno restringido
por primates, que lo diferencia de los otros miembros de la familia Enterobacteriaceae en el que se clasifica.
El género Shigella se divide en cuatro especies: Shigella dysenteriae (serogrupo A, 15 serotipos), Shigella flexneri(serogrupo B,
19 serotipos), Shigella boydii (serogrupo C, 20 serotipos) y Shigella sonnei (serogrupo D, 1 serotipo). Estos se dividen en
múltiples serotipos que dependen del O-antígeno y las diferencias bioquímicas. Las diferentes especies están relacionadas con
enfermedades en diferentes ubicaciones geográficas. S. dysenteriaecausa enfermedad epidémica severa en países menos
desarrollados, S. flexneri causa enfermedad en países en desarrollo, S. boydii está confinada al subcontinente indio, y S.
sonnei ocurre tanto en países en transición como en países desarrollados (Levine et al., 2013 ) .
La shigelosis es la presentación clínica de la infección por Shigella . La enfermedad se transmite por vía fecal-oral, con una dosis
infecciosa de solo 10-100 organismos (Levine et al., 2013 ). Después de 1-4 días, la infección es aguda, no sistémica y
entéricamente invasiva, lo que lleva a la destrucción del epitelio colónico (detallado en la Figura 1). 1 ). El daño a lo largo del
epitelio colónico es dramático pero errático, y conduce al principal síntoma clínico de la diarrea, que contiene sangre y a veces
mucosidad, que puede estar acompañada de cólicos abdominales y fiebre. Otras complicaciones, según la
especie Shigella infectante y el subtipo HLA del huésped, incluyen el síndrome urémico hemolítico (SUH) y la artritis
postoreactiva (OMS, 2005 ). El SUH ocurre en 2-7% de las infecciones por S. dysenteriae tipo 1, por lo que la toxina Shiga
alojada por esta especie se adhiere al endotelio y activa las plaquetas, que se adhieren al endotelio y ocluyen los vasos sanguíneos
y producen hemólisis microangiopática de glóbulos rojos al apretar a través de la luz restringida de los vasos sanguíneos
(O'Loughlin y Robins-Browne, 2001 ). Los síntomas incluyen insuficiencia renal aguda, trombocitopenia, anemia hemolítica
microangiopática, con una tasa de mortalidad del 35% (Mayer et al., 2012 ). La artritis postoreactiva es otra complicación de la
infección por Shigella , que ocurre en el 2% de los casos, y se caracteriza por dolor en las articulaciones, dolor al orinar e irritación
de los ojos, con artritis crónica que dura de meses a años.

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Figura 1

Ciclo infeccioso de Shigella (Roerich-Doenitz, 2013 ) modificado a partir de Schroeder y Hilbi ( 2008 ) . La entrada en el epitelio colónico
está mediada de dos maneras: fruncimiento de la membrana de la célula M y desestabilización de la barrera epitelial. La entrada a través de
células M se logra a través de la ondulación de la membrana ( 1 ), y el bacilo se transporta a la bolsa de células M, donde es endocitada por los
macrófagos residentes ( 2). La destrucción de la barrera epitelial está mediada por citocinas proinflamatorias (IL-1) y quimiotaxicas (IL-8). La
IL-8 producida por las células epiteliales vecinas recluta leucocitos PMN ( 12 ), que viajan desde el epitelio colónico basolateral al apical,
desestabilizando las uniones entre las células epiteliales y permitiendo una mayor invasión de Shigella ( 5 ). La inducción de la muerte de los
macrófagos piropépticos ocurre después de que Shigella escapa de la vacuola fagocítica ( 3 y 6 ). Caspasa-1, cuando se activa, escinde y activa
IL-1β e IL-18, lo que lleva a la liberación de estas citocinas proinflamatorias ( 4 ) (Jennison y Verma, 2004 ). La captación de Shigella es un
proceso macropinocítico en la membrana basolateral de las células epiteliales ( 7 ). La estimulación de las GTPasas de la familia Rho
desencadena la polimerización de la actina y luego la despolimerización, formando extensiones filopodiales y lamellipodiales de la membrana
epitelial, lo que lleva a la absorción de los bacilos. La lisis de la vacuola macropinocítica permite a Shigella acceder al citoplasma epitelial,
donde se multiplica rápidamente, escapa a la autofagia y fragmenta el aparato de Golgi ( 8 y 9 ). La explotación de la maquinaria de ensamblaje
de actina epitelial permite que Shigella se mueva tanto intra como intercelularmente ( 10 ). Las protrusiones mediadas por bacilos se endocitan
activamente mediante las vías endocíticas mediadas por clatrina en las uniones intercelulares, y la vacuola de doble membrana se lisa para dar
acceso a Shigella al citoplasma de las células vecinas ( 11 ). Los leucocitos PMN finalmente eliminan la infección por Shigella del epitelio
colónico ( 13 ).
Comparación de los principales subtipos de estas especies por Yang et al. ( 2005 ) indica que cada especie Shigellacontiene un
solo cromosoma circular y un plásmido de virulencia. El plásmido de virulencia se ha investigado a fondo en relación con la
patogénesis, y la mayoría de los factores de virulencia importantes implicados en el ciclo de vida de Shigella se localizan en una
región de 30 kb denominada "región de entrada" (Figura 2 ). Esta región contiene el locus mxi - spa , que codifica el sistema de
secreción tipo III (T3SS) y los genes ipa e ipg , que son esenciales para la invasión de células epiteliales y el inicio de la infección
por Shigella . Además del plásmido de virulencia, también se ha demostrado que distintas regiones dentro del
cromosoma Shigella contribuyen a la infección. Estos se denominan "islas de patogenicidad" (PAI) (Tabla 1 ), que son elementos
transferibles inestables que se pueden encontrar en una variedad de combinaciones dependiendo de la especie y subtipo
de Shigella (Yang et al., 2005 ). Una combinación de factores de virulencia cromosómica y factores de virulencia del plásmido
median el ciclo de vida de Shigella que conduce a la destrucción del epitelio colónico y los síntomas de la enfermedad.

Figura 2

Organización genómica de la región de entrada en el plásmido pWR100 (Roerich-Doenitz, 2013 ) . Los genes se agrupan en dos operones,
el operón ipa / ipg y el mxi / spa . Están coloreados en la leyenda de acuerdo con su clase de proteína, algunos de los cuales, como
los efectores T3SS, se detallan en el texto. La maquinaria de secreción se refiere a los componentes que construyen el T3SS. Los
translocadores son componentes del translocon, un poro insertado en la membrana del huésped para permitir la translocación del efector y
los chaperones son componentes que estabilizan los efectores individuales antes de la secreción de la bacteria. Los reguladores modulan la
expresión y la función de T3SS, pero están fuera del alcance de esta revisión. Esta figura se modificó a partir del mapa del plásmido de
virulencia por Buchrieser et al. ( 2000 )

tabla 1
Funciones de genes y proteínas involucradas en la virulencia en el cromosoma Shigella .

PAI Gene (s) Función proteica Referencias

SHI-1 SigA Enterotoxina putativa Al-Hasani et al., 2009

Foto Colonización intestinal Navarro-Garcia et

al., 2010

set1A, set1B ShET1 enterotoxin Fasano et al., 1997

SHI-2 iucA-D Siderophore, complejos con hierro Vokes et al., 1999

iutA Receptor bacteriano para el complejo hierro-sideróforo Vokes et al., 1999

 PAI Gene (s) Función proteica Referencias

shiA-G Novela ORFS, ShiA implicado en la reducción de la respuesta inflamatoria del Ingersoll et al., 2003

huésped

SHI-3 iucA-D Siderophore, complejos con hierro Purdy y Payne, 2001

iutA Receptor bacteriano para el complejo hierro-sideróforo Purdy y Payne, 2001

SHI-O gtrA, gtrB, Conversión de serotipo y modificación de O-antígeno Allison y Verma, 2000

gtr

Stx-fagot stxAB Toxina Shiga Yang et al., 2005

P27

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El T3SS albergado por Shigella es fundamental para la infección, desde el citoplasma bacteriano hasta los efectores de células
hospedadoras que desempeñan un papel en la invasión celular, la manipulación y la apoptosis (Parsot, 2009 ). A 37 ° C los
componentes T3SS se ensamblan (Figura 3] pero la secreción de efectores se previene hasta que el T3SS se active por contacto
con la célula huésped (Veenendaal et al., 2007 ). Estos efectores pueden clasificarse dependiendo del momento de la expresión
génica como efectores tempranos, medios o tardíos, y a menos que se indique lo contrario, todos los efectores discutidos a
continuación están codificados en el plásmido de virulencia y secretados de una manera dependiente de T3SS (Tabla (Tabla2 2 ).

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figura 3
Dibujo esquemático del sistema de secreción tipo III de Shigella (Roerich-Doenitz, 2013 ) . La arquitectura de Shigella T3SS se basa en el
locus de virulencia mxi - spa locus (Figura 2 ], que codifica las proteínas que producen el aparato T3SS, una estructura compuesta por una aguja
extracelular hueca de 60 nm, un dominio transmembrana y un bulbo citoplásmico (Blocker et al., 1999 ).

Tabla 2
Efectores secretados de una manera dependiente de T3SS .

Efectores Temprano / Actividad Función Referencias

Medio / enzimática

Tardío

IcsB Temprano Inhibe la autofagia Allaoui y otros, 1992 ; Ambrosi et al., 2014 ; Baxt y

Goldberg, 2014 ; Huang y

Brumell, 2014 ;Campbell-Valois y otros, 2015

IpaA Temprano Despolimerización de actina Tran Van Nhieu y otros, 1997 ; Bourdet-Sicard y

otros, 1999 ; Izard et al., 2006 ; Ramarao et

al., 2007

IpaB Temprano Formación de poros translocón High et al., 1992 ; Thirumalai y otros, 1997 ; Page

et al., 1999 ; Skoudy et al., 2000 ; Lafont et

al., 2002 ; Yang et al., 2013 ; Suzuki et al., 2014b

IpaC Temprano Formación de poros Bârzu et al., 1997 ; Tran Van Nhieu y

translocón; Polimerización de otros, 1999 ;Osiecki y otros, 2001 ; Terry et

actina; Docking e inducción efector. al., 2008 ; Mounier et al., 2009 ; Du et

al., 2016 ; Russo et al., 2016

IpaD Temprano Activación de T3SS Blocker et al., 1999 ; Arizmendi et al., 2016

IpaH0722 E3 ubiquitina Ubiquitinates TRAF2 Ashida et al., 2013

ligasa
Efectores Temprano / Actividad Función Referencias

Medio / enzimática

Tardío

IpaH7.8 Tarde E3 ubiquitina Ubiquitinates glomulin Suzuki et al., 2014a

ligasa

IpaH9.8 Tarde E3 ubiquitina Ubiquitinates U2AF 35 y NEMO / Okuda et al., 2005 ; Ashida et al., 2010

ligasa IKKγ

IpaJ Proteasa de Cleaves ARF1-GTP Burnaevskiy et al., 2015 ; Dobbs et al., 2015

cisteína

IpgB1 Temprano GEF Activa Rac1 y Cdc42 Ohya et al., 2005 ; Hachani et al., 2007 ; Huang et

al., 2009

IpgB2 Temprano GEF Activa RhoA Hachani et al., 2007 ; Huang et al., 2009 ; Klink et

al., 2010

IpgD Temprano Inositol 4- Convierte PtdIns (4,5) P 2 en PtdIns (5) Niebuhr et al., 2000 ; Mayo y

fosfatasa P Donner, 2001 ;Mellouk et al., 2014 ; Garza-Mayers

et al., 2015

OspB Medio Fosforilación de ERK y p38 MAPK Zurawski et al., 2009 ; Ambrosi et al., 2014 ; Lu et

al., 2015

OspC1 Medio Fosforilación de ERK Zurawski et al., 2006

Efectores Temprano / Actividad Función Referencias

Medio / enzimática

Tardío

OspC3 Temprano Enlaza p19 Kobayashi et al., 2013

OspD3 Tarde Actividad enterotóxica Farfán et al., 2011 ; Faherty et al., 2016

OspE1 / 2 Tarde Adhesin interactúa con ILK Miura et al., 2006 ; Kim et al., 2009 ; Faherty y

otros, 2012a

OspF Medio Phosphothr- Desfosforila las MAPK Arbibe y otros, 2007 ; Li et al., 2007 ; Zhu y

eonine lyase otros, 2007

OspG Tarde Kinase Inhibe SCF β-TrCPubiquitinating IκBα Kim et al., 2005 ; Zhou et al., 2013 ; Grishin et

al., 2014 ; Pruneda et al., 2014

OspI Glutamina Deamidates UBC13 Sanada et al., 2012 ; Nishide et al., 2013

deamidasa

OspZ 1- Fosforilación de ERK Newton et al., 2010

188

OspZ Bloquea la translocación nuclear p65 Zurawski et al., 2008 ; Nadler et al., 2010

VirA Medio BRECHA Inactiva las proteínas Rab Germane et al., 2008 ; Dong et al., 2012 ;Campbell-

Valois y otros, 2015

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La disentería, el principal síntoma clínico de la shigelosis, se debe al ciclo infeccioso de Shigella y a su capacidad para penetrar y
colonizar el epitelio colónico, lo que lleva a la pérdida de la función de barrera y la inflamación (Jennison y Verma, 2004 ). Esta
inflamación inicial (Figura 1 ] es primordial para una infección eficiente. Sin embargo, Shigella también debe superar esta
respuesta inmune innata y frenar la inflamación con el fin de establecer la infección, especialmente en el nicho de las células
epiteliales. Shigella disminuye la respuesta inflamatoria entregando efectores para inhibir las vías de señalización de NFκB y
MAPK y regulando epigenéticamente la represión de citoquinas proinflamatorias tales como IL-8 (Ashida et
al., 2011 ). Además, Shigella es capaz de regular negativamente la producción de péptidos antimicrobianos, incluida la β-defensina
humana hBD-3, y las quimiocinas, como CCL20, lo que conduce a un reclutamiento defectuoso de células dendríticas (Sperandio
et al., 2008 ). Esto permite una mayor replicación, infección eficiente de las células vecinas, y la evasión de la respuesta inmune
(Figura 1 ]. Eventualmente, sin embargo, la respuesta inflamatoria inicial que permite una infección eficiente en consecuencia
conduce a la eliminación de Shigella . Los leucocitos polimorfonucleares (PMN), como los neutrófilos, eliminan la infección en 5-
7 días en individuos sanos (Figura 1 ).
Shigella ha evolucionado para volver a infectar con éxito a su huésped y probablemente revierte la producción de memoria
inmunológica eficiente para hacerlo. Después de la infección, la seroconversión produce anticuerpos protectores contra el
lipopolisacárido de Shigella (LPS), sin embargo, los anticuerpos producidos son específicos del serogrupo. La diversidad de los
serotipos de LPS de Shigella significa que la protección contra la reinfección se limita a la enfermedad homóloga, y estos
anticuerpos específicos de LPS también son de corta duración (Cohen et al., 1991 ). La adquisición progresiva de memoria
inmunológica panespecie ocurre después de muchas infecciones, y probablemente se logre mediante el reconocimiento de
antígenos específicos basados en proteínas, como las proteínas "antígenos de plásmidos de invasión" (Ipa). Estos antígenos
codificados por plásmidos de virulencia son, por lo tanto, objetivos importantes para el desarrollo de vacunas (Levine et
al., 2013 ). La respuesta inmune adaptativa, incluidos los linfocitos T y B, tarda de 4 a 7 días en comenzar a funcionar de manera
eficiente, lo que coincide con la resolución de la infección por Shigella en individuos sanos. Shigella previene el reclutamiento de
células dendríticas regulando negativamente el quimioatractor principal CCL20, como se describió previamente, y también media
la apoptosis de células dendríticas (Kim et al., 2008 ). Las células dendríticas son un vínculo clave entre la respuesta inmune
innata y adaptativa, y la inhibición de su función interfiere con la transición T H 1-T H 2-T H 17 requerida para una respuesta
inmune adaptativa eficiente (Sperandio et al., 2008 ) Por lo tanto, es posible que la prevención de una respuesta inmune adaptativa
eficiente se logre mediante una combinación de modulación inmune innata del sistema y subversión de la producción de memoria
inmunológica.
Los factores de virulencia individuales de Shigella han sido compilados y revisados previamente. Aquí pretendemos entender
cómo colaboran para causar la destrucción entérica aguda, lo que lleva a la manifestación clínica de la shigelosis. Analizaremos
los datos primarios disponibles para la función de las proteínas efectoras Shigella y su efecto sobre las células hospedadoras, y
luego discutiremos cómo se coordinan en tiempo y espacio para crear una imagen detallada de la infección por Shigella , cómo
conduce a la enfermedad y manipula la respuesta inmune.

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Análisis

Desestabilización de la barrera epitelial e inflamación

OspB: promueve la migración de PMN, la inflamación y la proliferación celular

Como la mayoría de los efectores, OspB se encuentra en las cuatro especies de Shigella , y tiene homólogo en especies
de Salmonella (Zurawski et al., 2009 ). Aunque se desconoce su función bioquímica, se cree que OspB desempeña un papel en la
activación de las quinasas reguladas por señal extracelular (ERK) y las rutas p38 MAPK, lo que da como resultado la fosforilación
de la fosfolipasa A2 y la generación de eicosanoides. OspB es capaz de localización nuclear para la activación de las vías de
señalización MAPK. Esto contribuye a la inflamación y migración de PMN, posiblemente induciendo hepoxilina A3, un derivado
de ácido araquidónico, y secreción apical de IL-8, un quimioatrayente de PMN (Ambrosi et al., 2014 ). Un mutante ospB - tuvo
una disminución del 60% en la migración de PMN y una disminución del 30% en la activación de ERK1 / 2 90 minutos después
de la infección en comparación con Shigella de tipo salvaje (Zurawski et al., 2009 ). Además, Ambrosi et al. ( 2014 ) demostraron
que un ospB -knockout mostraba una reducción significativa en el inicio y la gravedad de los síntomas en el modelo de infección
por queratoconjuntivitis en conejillos de indias (prueba de Sereny). Sin embargo, OspB también activa el regulador principal del
crecimiento celular mTOR a través de una interacción directa con la proteína del andamio celular IQGAP1, que también interactúa
con los activadores de mTOR ERK1 / 2. Esto parece restringir la propagación de S. flexneri en monocapas celulares, posiblemente
al aumentar la proliferación celular en focos infectados (Lu et al., 2015 ).

OspC1: promueve la migración e inflamación de PMN

OspC1 es parte de la familia ospC . Existe un 96% de identidad entre ospC2, ospC3 y ospC4 , pero solo el 74% de identidad entre
estos tres genes ospC y ospC1(Buchrieser et al., 2000 ). Este nivel de similitud puede indicar redundancia. Sin embargo, ospC4 es
un pseudogen y se han identificado diferentes funciones para OspC1 y OspC3 (discutido más adelante). Etiquetado OspC1 se
encuentra en todo el citoplasma del huésped, localizándose principalmente en el núcleo (Zurawski et
al., 2006 ). Un ospC1 - knockout mostró una disminución significativa en la cantidad de reclutamiento de neutrófilos a las células
epiteliales en los ensayos de migración de PMN, que se restauró a los niveles de tipo salvaje en la complementación con un
plásmido que expresa ospC1 . Zurawski y col. ( 2006 ) mostraron que este aumento en la migración de PMN se correlacionaba con
un aumento en la fosforilación de las rutas ERK1 / 2 mediadas por OspC1. Un ospC1 - knockout mostró una disminución en la
fosforilación de ERK1 / 2 en comparación con los niveles de tipo salvaje, pero sin reducción en la secreción de IL-8. OspC1
desempeña un papel en la virulencia de Shigella in vivo ya que ospC1 - knockout redujo las cantidades de hinchazón e inflamación
en la prueba de Sereny, con eliminación de la infección después de 2 días (Zurawski et al., 2006 ).

OspZ: promueve la migración e inflamación de PMN

En S. flexneri 2a , un ospZ - knockout no tiene ningún efecto en la prueba de Sereny. Sin embargo, un ospZ - knockout causó una
disminución significativa en la migración de PMN. El knockout también tenía 63 y 53% de fosforilación de ERK1 / 2 y activación
de NFκB, respectivamente, en comparación con S. flexneri de tipo salvaje (Zurawski et al., 2008 ). Por lo tanto, OspZ desempeña
un papel en la migración de leucocitos de PMN a través de la barrera epitelial. Sin embargo, Newton et al. ( 2010 ) descubrieron
que las especies de S. flexneri , excluyendo S. flexneri serotipo 6, contienen un codón de terminación en el aminoácido 188,
formando una proteína truncada que carece de un motivo IDSYMK en la posición 209. Se encontraron proteínas OspZ de longitud
completa en las restantes especies de Shigella tener una función inmunosupresora a través de la prevención de la activación de
NFκB. Finalmente, un homólogo de OspZ, NleE, se encuentra en Escherichia coli enteropatógena (EPEC), y tanto NleE como
OspZ pueden sustituirse entre sí (Zurawski et al., 2008 ).

Serina proteasa autotransporters de enterobacteriaceae

Los autotransportadores de Serina Proteasa de Enterobacteriaceae (SPATE) son una familia de proteasas que catalizan su propia
secreción a través de la vía de secreción de Tipo V. Shigella tiene tres SPATE conocidos, no todos los cuales se encuentran en
cada especie. Su secreción está termorregulada (37 ° C) y depende del pH (Dautin, 2010 ). Tienen diferentes actividades
propuestas relevantes para la penetración intestinal: inducción de secreción y escisión de mucina (Pic), desestabilización de
adherencias focales por escisión de fodrina (SigA) y, a través de objetivos desconocidos, enterotoxicidad, acumulación de líquido
y descamación epitelial (SigA y SepA) (Tabla (Tabla 3 3 ).

Tabla 3
SPATES alojados por Shigella y su función en la infección .

AVALANCHA Ubicación Función Papel en la infección Referencias

genética putativa

Foto SHI-1 Escisión de Penetrar la capa de moco del colon para acceder al Gutiérrez-Jiménez et

(opuesto set1AB ) mucina epitelio al., 2008

Secretagogo de Disentería que contiene mucosidad en la shigelosis Navarro-Garcia et al., 2010

Mucin

SigA SHI-1 Actividad Escisión de fodrina para desestabilizar los enlaces Canizalez-Roman y Navarro-

citopática entre el citoesqueleto de actina y las proteínas de García, 2003; Al-Hasani et

membrana, desprendimiento de adherencias al., 2009

focales
 AVALANCHA Ubicación Función Papel en la infección Referencias

genética putativa

Actividad Acumulación de fluido Al-Hasani y otros, 2000

enterotóxica

SepA Plásmido de Actividad Acumulación de fluido Benjelloun-Touimi et

virulencia enterotóxica al., 1995

Descamación Enfermedad progresiva Coron et al., 2009

epitelial

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Shigella enterotoxin 1 y Shigella enterotoxin 2: actividad enterotóxica en el yeyuno

Shigella enterotoxin 1 (ShET1) y Shigella enterotoxin 2 (ShET2) son determinantes de virulencia propuestos para mediar en la
secreción temprana de líquido en el yeyuno a fin de establecer la infección en el colon y producir la característica diarrea acuosa
que se observa al comienzo de la shigelosis. El nombre compartido se debe a sus propiedades similares a las enterotoxinas, ya que
no hay homología entre ShET1 y ShET2.
ShET1 está codificado por los genes set1A y set1B en el cromosoma Shigella como parte del SHI-1 PAI, y solo presente en
aislados de S. flexneri 2a (Vargas et al., 1999 ) (Yavzori et al., 2002 ). Las dos subunidades se proponen para formar un complejo
de toxina de tipo holo-AB en una configuración A1-B5, produciendo un complejo de 55 kDa (Fasano et al., 1995 ). La holotoxina
puede seguir un mecanismo de secreción similar al de la holotoxina del cólera, a través de la vía Sec y la secreción de tipo
II. Cuando el transporte de iones a través de un epitelio cultivado se midió en una cámara de uso, un set1AB - knockout tenía un
60% menos de I sc (corriente de cortocircuito) en comparación con las cepas de tipo salvaje (Faherty et al., 2012b ). El efecto sobre
I sc de ShET1 también fue dependiente de la dosis, y el lavado de ShET1 no produjo cambios en I sc , lo que indica unión
irreversible de ShET1 a los receptores epiteliales (Fasano et al., 1997 ). Sin embargo, los genes set1A y set1B sesuperponen con el
gen pic pero se transcriben de forma divergente. Por lo tanto, el pic - knockout adicional puede haber causado estos
efectos. Faherty et al. ( 2012b ) complementó el mutante pic / set1AB con pic y set1ABindividualmente, mostrando que pic tiene
una contribución más significativa para restaurar los niveles de I sc a wild-type, aunque la complementación set1AB también
produjo un aumento significativo en I sc .
ShET2 es una proteína de 63 kDa codificada por ospD3 ( sen ). Se encuentra en todos los serotipos y en uno de los tres genes
de ospD encontrados en el plásmido de virulencia. Las alineaciones de secuencia entre ospD2 y ospD3muestran un alto grado de
homología mientras que ospD1 es más divergente. OspD1 tiene un papel único en la regulación de la secreción de tipo III no
compartida con OspD2 y OspD3 (Parsot et al., 2005 ), pero se desconoce la redundancia en su (s) función (es) efectora (s). A
diferencia de SHET1, la secreción de ShET2 depende del T3SS (Farfán et al., 2011 ) pero no está claro cómo se regula esto
(Faherty et al., 2016 ). El knockout ospD3 - (ShET2) tiene efectos similares en el uso de experimentos de cámara a un knockout
set1AB - (ShET1), con un aumento reducido de I sc en comparación con la cepa salvaje (Nataro et al., 1995 ). Un
mutante ospD3 también tenía una reducción en la secreción de IL-8, que podría restablecerse a niveles de tipo salvaje mediante la
complementación del plásmido ospD3 , lo que indica un posible papel en la secreción de IL-8 por células epiteliales (Farfán et
al., 2011 ).

Adherencia al epitelio colónico en la superficie basolateral

Lipopolisacárido: glucosilación para la accesibilidad de T3SS

El lipopolisacárido (LPS) es una característica común de los patógenos Gram negativos, desencadenando la respuesta inmune del
huésped y las reacciones inflamatorias durante la infección. Se cree que la modificación de LPS por glucosilación contribuye a la
adhesión e invasión de Shigella al revelar el T3SS para una activación eficiente al entrar en contacto con la célula huésped. Guan
et al. ( 1999 ) demostraron que los mutantes glucosiltransferasa gtrA - y gtrB - solo tenían una conversión parcial del serotipo O-
antígeno, y un mutante gtrX - no tenía conversión en absoluto. Una mutación en el operón gtr conduce a una capacidad reducida
para invadir, y esta invasión se restablece cuando se reintroduce el operón gtr (West et al., 2005 ). La reducción en la longitud del
antígeno O por glucosilación mejora la accesibilidad del T3SS para el contacto con la célula epitelial del huésped para iniciar la
invasión.

IpaB: une CD44 en la superficie basolateral

IpaB media la adhesión a la membrana basolateral a través de interacciones con la ubicua glicoproteína CD44 (Figura 1 , paso 7).
CD44 se encuentra dentro de las balsas de microdominios de lípidos y participa en la unión de proteínas ezrin, radixin y moesina
(ERM) para producir reordenamientos del citoesqueleto de actina. IpaB se une al dominio N-terminal CD44 con afinidad débil
pero la regulación positiva de la expresión de CD44 a niveles encontrados en microdominios lipídicos aumenta la unión e
internalización de Shigella (Skoudy et al., 2000 ). se encuentran en la superficie basolateral y la interacción de adhesión IpaB-
CD44 puede contribuir a la polaridad de la invasión de Shigella de células epiteliales (Lafont et al., 2002 ). Aunque una mayor
adherencia mediada por la unión de IpaB-CD44 puede mejorar la eficacia de invasión. no es suficiente para inducir la entrada
de Shigella , ya que tanto los mutantes ipaC - como ipaD - (véase a continuación) son incapaces de mediar la invasión (Skoudy et
al., 2000 ).

IcsA (VirG): adhesión polar

IcsA, también conocida como VirG, es una proteína de membrana externa de 120 kDa.IcsA no depende del T3SS para su
secreción ya que es un autotransportador, con una secuencia señal N-terminal atípica que media la secreción a través de la vía Sec
(Brandon et al., 2003 ). Es muy conocido por su implicación en la motilidad basada en actina, sin embargo, se ha descrito una
función más reciente, por la cual IcsA participa en la adhesión polar de Shigella a las células epiteliales (Brotcke Zumsteg et
al., 2014 ). La función de adhesión puede separarse de la motilidad basada en actina, como un mutante icsA - complementado con
un plásmido que codifica una adhesión icsA defectuosa formada placas similares a Shigella de tipo salvaje (Brotcke Zumsteg et
al., 2014 ).El icsA con defectos de adhesión también produjo un fenotipo de infección atenuada en la prueba de Sereny, lo que
indica la importancia de IcsA como adhesina en la patogénesis de Shigella . La adhesión mediada por IcsA estaba presente en
un mutante ipaBCDA - mxiE , pero no en una cepa ipaD - spa33 - , lo que indica que el T3SS ensamblado, pero no la secreción de
efectores T3SS, se requiere para la actividad de adhesión. Esta observación inicial se vinculó luego a la activación de IcsA
dependiente de T3SS para mediar este fenotipo adhesivo, ya que la aplicación del desoxicolato de sal biliar (DOC) condujo a un
aumento en la adhesión dependiente de IcsA (Brotcke Zumsteg et al., 2014 ). Se ha descrito anteriormente que el desoxicolato se
une a la IpaD en la punta de la aguja de T3SS e induce el reclutamiento de IpaB para la activación de T3SS (Barta et
al., 2012 ). Sin embargo, también se sabe que el DOC afecta las moléculas de LPS, lo que hace que se dispersen dentro de la
membrana (Shands y Chun, 1980 ). La evaluación del acceso a la proteasa usando proteinasa K con un mutante ipaD y después del
tratamiento con DOC mostró que la IcsA hiperadhesiva era más resistente a la degradación, y se propuso que se debía a una
conformación alternativa de IcsA inducida por activación de T3SS (Figuras 4C, 5D-Brotcke Zumsteg et al., 2014 ). Sin embargo,
dado que DOC no activa el T3SS, es más probable que los cambios en las bandas de proteólisis se produzcan debido a la
alteración del LPS, lo que conduce a una accesibilidad alterada del IcsA que produce diferentes patrones de escisión. Los cambios
observados en el mutante ipaD - podrían ocurrir a través de una vía reguladora independiente, por lo que la activación del T3SS
conduce a la modulación de la estructura de LPS.

OpsE1 / E2: adhesión dependiente de sales biliares

Faherty et al. ( 2012a ) también notaron que el subcultivo en medios que contienen sales biliares mejoraba significativamente la
capacidad de Shigella para adherirse a la superficie apical de las células epiteliales polarizadas. Sin embargo, el análisis de
expresión de microarrays indicó que los genes ospE1 / ospE2 se indujeron en presencia de bilis, y se perdió la adherencia inducida
por bilis en un mutante Δ ospE1 / Δ ospE2 . Las proteínas OspE1 / OspE2, que son efectores secretados por T3SS, también se ha
demostrado que permanecen localizadas en la membrana bacteriana externa después de la exposición a sales biliares, donde
pueden servir como adhesinas.

Absorción macropinocítica en células epiteliales colónicas

IpaD e IpaB: activación del T3SS

IpaD es parte de la familia Ipa requerida para la invasión de Shigella , y se polimeriza en la punta de la aguja T3SS (Espina et
al., 2006 ). La identificación de los mutantes ipaD de clase I, que tenían secreción prematura de efectores, y de los mutantes ipaD
de clase II, que no eran inducibles, muestra que IpaD tiene un doble papel en la activación del T3SS (Roehrich-Doenitz et
al. 2013 ). IpaD actúa como la proteína del andamio en la punta de la aguja T3SS que actúa como soporte de visualización para
IpaB, ubicado en la punta de la aguja junto con IpaD (Veenendaal et al., 2007 ) y el mecanismo de entrega del poro de
translocación hidrofóbico IpaB-IpaC. (translocon) para alojar membranas celulares (Blocker et al., 1999 ). Desde allí IpaD actúa
como un transductor de señal para activar la secreción efector (Figura 4 ] (Roehrich-Doenitz et al., 2013 ). IpaD, junto con MxiC,
también es parte de la vía de transducción de señal citoplásmica requerida para la activación completa del T3SS y la secreción de
los efectores T3SS restantes (Martinez-Argudo y Blocker, 2010 ). IpaB inicialmente detecta la membrana de la célula huésped de
una manera que aún no se comprende y, con IpaD, co-transduce esta señal por la aguja T3SS para activar la secreción (Murillo et
al., 2016 ).

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Figura 4

Papel de IpaD, IpaB e IpaC en la regulación del T3SS (Martinez-Argudo y Blocker, 2010 ) . Cuatro moléculas de IpaD hidrofílicas y una
molécula de IpaB hidrófoba se localizan en la punta de la aguja T3SS en el estado "apagado".IpaB detecta las células anfitrionas al contacto de la
punta de la aguja T3SS, y se inserta en la membrana para señalar "translocadores en". La secreción de los efectores se señala por cambios
conformacionales en IpaD a través de una vía de transducción de señales a la base del secreton. Cuatro IpaC pueden subir por el secreton y
asociarse con la punta de la aguja, uno encima de cada IpaD, e insertarse alrededor del único IpaB para formar un translocon en la membrana de
la célula epitelial. Esto indica "efectores en" y los efectores tempranos se inyectan en el citoplasma de la célula epitelial del huésped (Veenendaal
et al., 2007 ).

IpaC: polimerización de actina e inducción de translocación de efector

IpaC pertenece al grupo de proteínas Ipa cruciales para la formación de translocon y la invasión celular. La estructura de IpaC
incluye una secuencia señal N-terminal, una región para asociación con IpgC (chaperona citoplásmica), una región hidrofóbica
central para la penetración de membranas y un dominio C-terminal para oligomerización (Terry et al., 2008 ). La región
hidrofóbica permite que IpaC interactúe con IpaB e inserte en las membranas del hospedador, sin embargo, se cuestiona su
topología en la membrana. El uso de anticuerpos monoclonales anti-IpaC ha demostrado que las regiones N y C terminales se
enfrentan al citoplasma de la célula huésped (Tran Van Nhieu et al., 1999 ) aunque otros experimentos han encontrado que el
bucle central está en la cara citoplásmica, con las regiones N y C terminales siendo extracelulares (Kuwae et al., 2001 ). IpaC
inserción en la membrana de la célula epitelial desencadena citoesqueleto reordenamientos para la absorción macropinocítica
de Shigella (Figura 4 ]. Menard et al.( 1996 ) describen cómo un complejo IpaB-IpaC en la superficie de las perlas de látex es
suficiente para ser engullido por células no fagocíticas. Sin embargo, esto no se ha reproducido y, por lo tanto, puede no
aplicarse in vivo . Es probable que el C-terminal IpaC se enfrente al citoplasma del huésped porque a IpaC se le ha atribuido la
capacidad de polimerizar actina indirectamente en su C-terminal, mediante interacciones con Cdc42 y Rac GTPasas (Tran Van
Nhieu et al., 1999 ) y activación de Ruta de la tirosina quinasa Src (Mounier et al., 2009 ). Sin embargo, el homólogo
de Salmonella , SipC, puede polimerizar la actina en su dominio C-terminal, independientemente de cualquier factor de la célula
huésped (Hayward y Koronakis, 1999 ). IpaC muestra similitud de secuencia con SipC dentro de su dominio de nucleación de
actina C-terminal, y tanto IpaC como SipC usan este dominio para oligomerizar. Por lo tanto, IpaC también puede ser capaz de
polimerizar actina de forma independiente. En los ensayos desplegables, el dominio C-terminal de IpaC era incapaz de unirse a
Cdc42 y Rac1, lo que indica que la polimerización de actina no se produce mediante interacciones directas con estas GTPasas
(Terry et al., 2008 ). Finalmente, también se ha demostrado que el C-terminal de IpaC se une a vimentina y al filamento
intermedio epitelial del intestino queratina 18. Esta interacción es necesaria para el acoplamiento estable de las bacterias a las
células y un requisito previo para la inducción de la secreción de los otros efectores (Russo et al. al., 2016 ).

IpgB1 e IpgB2: remodelación de la actina

IpgB1 e IpgB2 comparten 25% de identidad de aminoácidos y ambos requieren Spa15 como acompañante para la secreción, con
un requerimiento adicional de estabilidad por IpgB1 (Hachani et al., 2007 ). Contienen un motivo WxxxE que es común en los
factores de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) implicados en la activación de Rho GTPasas. Estas GTPasas son
necesarias para la inducción de estructuras de filamentos de actina para producir mechones de membrana para la entrada
bacteriana en células no fagocíticas. Un ipgB1 - knockout tiene una reducción del 50% en la invasión de células epiteliales en
comparación con la tinción de tipo salvaje, que se restauró cuando se complementó con la expresión plasmídica de ipgB1 (Ohya et
al., 2005 ). El tamaño del volante de membrana también se ve afectado, ya que las cepas de tipo silvestre alcanzaron un tamaño de
60 μm 2 , un mutante de ipgB1 logró 16 μm 2 y una cepa de producción de ipgB1 logró 138 μm 2 (Ohya et al., 2005 ). Esto indica
que IpgB1 está involucrado en la producción de colmenas de membrana de una manera dependiente de la dosis. Se disputó si
IpgB1 activaba Rac1 directamente (Alto et al., 2006 ) o si IpgB1 imitaba RhoG para la activación de Rac1 indirectamente a través
de la vía ELMO-Dock180 (Handa et al., 2007 ). Sin embargo, las estructuras cristalinas de IpgB1 confirmaron que actúa como un
GEF, reconociendo específicamente los residuos β2-3 de Cdc42 y Rac1 GTPasas para catalizar el intercambio GDP-GTP para la
activación (Huang et al., 2009 ). Las estructuras cristalinas y los estudios funcionales también confirmaron que IpgB2 es un GEF
capaz de unirse directamente y activar RhoA (Huang et al., 2009 ; Klink et al., 2010 ). La activación de Rac1 y RhoA por IpgB1 e
IpgB2 contribuye a la formación de fibras de tensión de actina y lamellipodia, respectivamente. En la prueba de Sereny, un
mutante ipgB2 produjo el mismo fenotipo de enfermedad que la cepa salvaje, y un resultado negativo solo se produjo en
un mutante ipgB1 - ipgB2 , lo que indica redundancia (Hachani et al., 2007 ). Sin embargo, un mutante ipgB1 solo produjo un
fenotipo inflamatorio más severo que la cepa de tipo salvaje, que fue inesperado.

IpaA: despolimerización de actina

IpaA participa en la regulación de las protrusiones de actina en la membrana epitelial y la despolimerización de los filamentos de
actina en la célula huésped durante la entrada de Shigella . Se postula que esto se logra a través de sus interacciones con la
vinculina, una proteína del huésped que une el citoesqueleto a la matriz extracelular y participa en las estructuras de adhesión
focal. Hay tres sitios de unión de vinculina, que están dispuestos en tándem en el extremo C de IpaA, cada uno de los cuales puede
unir una cabeza de vinculina. La unión de IpaA a la cabeza de vinculina induce un cambio conformacional en vinculina, revelando
un sitio de unión a actina F en la cola de vinculina (Izard et al., 2006 ). IpaA es importante para la entrada de células, ya que un
mutante ipaA tiene una disminución de 10 veces en la capacidad de invasión y requiere vinculina para mediar sus efectos, ya que
las células deficientes en vinculina tenían un defecto de invasión similar (Tran Van Nhieu et al., 1997 ) . Los ensayos de
peletización mostraron que no se producía depolimerización de actina en presencia de IpaA o vinculina sola, con actina
principalmente en el sedimento, pero cuando se agregaba el complejo IpaA: vinculina, la actina se encontraba principalmente en el
sobrenadante, y la cantidad de despolimerización se correlacionaba con vinculina concentración (Bourdet-Sicard et al., 1999 ). El
complejo IpaA: vinculina tiene una afinidad 3 veces mayor por la F-actina en comparación con la vinculina sola y actúa como un
"tapón con fugas" en el extremo con púas de los filamentos de F-actina para evitar la adición de monómeros adicionales y causar
despolimerización (Bourdet- Sicard et al., 1999 ; Ramarao et al., 2007 ). Por lo tanto, IpaA evita la formación incontrolada de
estructuras microspike inducidas por IpaC en el sitio de contacto bacteriano, que repelería a Shigella de la superficie de las células
epiteliales (Tran Van Nhieu et al., 1997 ).

IpgD: volantes de membrana

IpgD juega un papel importante en la formación de estructuras de entrada bacterianas en contacto con las células epiteliales del
huésped. Un ipgD - mutante induce una estructura de entrada menos eficiente que el tipo salvaje, debido a pequeños mechones de
membrana y una reducción en los reordenamientos de actina (Niebuhr et al., 2000 ). IpgD funciona como una inositol
(fosfoinositida) 4-fosfatasa, y tiene motivos de secuencia similares a fosfoinositida fosfatasas de mamíferos y homólogo
de Salmonella SopB / SigD con actividad de inositol fosfato fosfatasa similar (Niebuhr et al., 2002 ). Su sustrato principal en la
célula huésped es fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato [PtdIns (4,5) P 2 / PIP2] que se desfosforila para producir fosfatidilinositol 5-
monofosfato [PtdIns (5) P / PI5P]. Un ipgD - mutante, o IpgD con una sustitución de cisteína a serina (C438S) en su sitio activo,
no tiene efecto en los niveles de PtdIns (4,5) P 2 (Niebuhr et al., 2002 ). La actividad de defosforilación de IpgD en PtdIns (4,5) P 2
se correlaciona con una disminución en la fuerza de fijación de la membrana, ya que PtdIns (4,5) P 2 controla la fuerza de adhesión
entre la membrana plasmática de la célula epitelial y el citoesqueleto de actina (Niebuhr et al., 2002 ). Combinado con los
reordenamientos del citoesqueleto de actina mediado por otros efectores de Shigella , la reducción del lazo de membrana permite
la extensión de filopodia y volantes de membrana característicos del mecanismo desencadenante observado en la entrada
de Shigella a células no fagocíticas (Figura 1 , paso 7) ( Niebuhr et al., 2002 ). La actividad de IpgD inositol-4 fosfatasa también
ha sido implicada en un ciclo de retroalimentación positiva que involucra ARF6 GTPasa (Garza-Mayers et al., 2015 ), que
estimula la remodelación de actina y los mechones de membrana mediante la activación de Rac1. de PtdIns (5) P por IpgD activa
phosphoinositide 3-kinase (PI3K), que genera PtdIns ( 3, 4, 5 ) P 3. Esto recluta ARF nucleótido sitio de apertura de campo (ARNO),
un GEF que activa ARF6 GTPasa. Active ARF6 -GTP promueve la remodelación de la actina a través de vías dependientes de
Rac1, contribuyendo aún más a los mechones de membrana para la entrada de Shigella .

Replicación y diseminación dentro del epitelio colónico

IpaB e IpaC: lisis de la vacuola de entrada a una sola membrana

Debido al requisito previo para la invasión de las células epiteliales y el acoplamiento temporal entre la entrada y la lisis vacuolar
(15 min), la alteración de los componentes requeridos para la entrada puede parecer tener efectos pleotróficos en los eventos de
infección aguas abajo. Esto crea limitaciones intrínsecas en el estudio de su papel en la patogénesis intracelular (Guichon et
al., 2001 ). No obstante, se ha demostrado que una "región de entrada" que codifica solo T3SS e IpaD, IpaB e IpaC es suficiente
para la lisis vacuolar (Figura 1 , etapa 8) (Sansonetti et al., 1986 ; Du et al. , 2016 ). High et al. ( 1992 ) utilizaron macrófagos, que
son fagocíticos de forma natural, para superar el fenotipo ipaB - no invasivo, y describieron cómo IpaB desempeña un papel en la
lisis de la vacuola fagocítica. Se ha postulado que la inserción del translocon IpaB-IpaC en la membrana vacuolar es la causa de la
lisis de la membrana (High et al., 1992 ). Esto ocurriría a través de la formación de poros, que podría conducir a desestabilización
vacuolar, o mediante la translocación de efectores membranolíticos no identificados a través la membrana (Page et al., 1999 ).
Senerovic y otros ( 2012 ) encontraron que la IpaB purificada se internaliza en células oligomerizadas en membranas endocíticas
para formar canales iónicos que afectan su integridad. Sin embargo, el IpaB utilizado se purificó de forma recombinante usando un
detergente. que natu rally lyses membranas, y este efecto no fue controlado.Además, cuando dentro del translocon insertado
naturalmente IpaB está conectado al T3SS a través de la punta de la aguja, lo que, junto con la baja osmolaridad en la vacuola,
evitaría que la entrada de agua en la vacuola cause lisis. Además, al explorar la intercambiabilidad funcional de los componentes
de translocon de Shigella y Salmonella , que permanece en su vacuola de invasión, se demostró que IpaC estaba directamente
implicado en la lisis de la vacuola de membrana única (Osiecki et al., 2001 ; Du et al., 2016). ) Sin embargo, cualquier indicio
ambiental para que el translocon cambie entre las posibles conformaciones de invasión, translocación y lisis sigue siendo
desconocido.

IpgD: lisis de la vacuola de entrada a una sola membrana?

IpgD puede estar involucrado en la modulación de la vacuola de entrada inducida por Shigella mediante el reclutamiento de Rab11
a macropinosomas. Una pantalla de ARNip y células agotadas de Rab11 mostraron que la ausencia de Rab11, una pequeña
GTPasa implicada en el reciclado endocítico, conduce a una ruptura vacuolar inducida por Shigella desacelerada. Al igual que las
células Rab11-agotadas, la ruptura vacuolar se retrasó en un mutante ipgD - , tomando el doble de tiempo que para la cepa salvaje
(Mellouk et al., 2014 ). El Rab11 con deterioro funcional y un Rab11 negativo dominante bloqueado con GDP mostraron que es la
ausencia de actividad de Rab11 la que causa este retraso en la ruptura vacuolar (Weiner et al., 2016 ). Tinción de
inmunofluorescencia vesículas Rab11 co-localizadas positivas en el sitio de invasión de Shigella y vacuolas conteniendo Shigella ,
sin embargo esta acumulación no ocurrió si un mutante ipgD - o IpgD que carecía de su actividad inositol - 4 fosfatasa estaba
presente en la vacuola (Mellouk et al. , 2014 ). Usando C-FIB / SET, Weiner et al. ( 2016 ) mostraron que las vesículas Rab11-
positivas son macropinosomas, que se forman durante el fruncido de la membrana inducido por Shigella . IpgD está involucrado
en la formación de macropinosomas, a través de su estimulación de fruncimiento, y por lo tanto en la disposición de estos
orgánulos para la vacuola de entrada Shigella (Weiner et al., 2016 ). Los macropinosomas son necesarios para la rotura eficiente
de las vacuolas de entrada y se han visualizado cerca de la entrada de la vacuola, estableciendo contacto directo justo antes de la
rotura vacuolar (Weiner et al., 2016 ). Esto sugiere que se requiere la actividad fosfoinositida fosfatasa de IpgD para regular el
reclutamiento de Rab11 a macropinosomas para su unión a la vacuola de entrada que contiene Shigella ( Figura 6 ). Cómo se
desconoce la unión de los macropinosomas, que no conduce a la fusión con la vacuola, conduce a una ruptura vacuolar rápida.

IcsA (VirG): motilidad basada en actina

IcsA es un autotransporter y se compone de tres dominios: una secuencia señal N-terminal, un núcleo de barril β C-terminal que
forma un poro en la membrana externa, y un dominio α central que se transloca a través del poro de la membrana del núcleo β y
presente en la superficie de Shigella(Suzuki et al., 1995 ). La IcsA expuesta a la superficie a veces se divide, sin embargo, esto no
es necesario para la función IcsA (Fukuda et al., 1995 ). La importancia de la IcsA en la propagación intercelular de Shigella se
identificó tempranamente, ya que un mutante icsA no pudo diseminarse dentro de una monocapa epitelial (medida por la
formación de placa) y tuvo una prueba de Sereny negativa (Bernardini et al., 1989 ). La motilidad basada en actina mediada por
IcsA es suficiente para la formación de protrusión de membrana (Figura 1 , paso 10) y entrada en células vecinas (Figura 5 ). IcsA
actúa como un imitador de Cdc42 para activar N-WASP. , lo que permite al N-WASP C-terminal reclutar Arp2 / 3 (Egile et
al., 1999 ; Shibata et al., 2002 ). Esto promueve el rápido ensamblaje de F-actina y el crecimiento de filamentos en el N-terminal
de N-WASP , proporcionando una fuerza propulsora para que Shigella se mueva a través de la célula. Cuando icsA se expresa
en E. coli , estas bacterias son capaces de formar protuberancias de membrana con una morfología similar a las protrusiones
inducidas por Shigella , lo que indica que no se requieren otros factores de Shigella para este proceso (Monack and
Theriot, 2001 ). Se requieren factores de Shigella , como IcsP (SopA), para la localización y escisión correctas de IcsA en la
superficie de Shigella , lo que contribuye a una motilidad eficiente (Egile et al., 1999 ). Además de icsP para icsA- expresando E.
coli hubo un aumento en actin polymeri zación y aumentar la frecuencia de protrusión. Además, en E. Coli LPS O-antígeno
mutantes hubo una disminución en la formación de las colas de actina en comparación con el tipo salvaje.Un galU - mutante, que
normalmente codifica una UDP-glucosa pirofosforilasa implicada en la biosíntesis de antígeno O, produce un patrón
circunferencial difuso de IcsA en la superficie de Shigella , que todavía es capaz de polimerizar actina pero no forma
protuberancias de membrana (Sandlin et al. 1995 ). Sin embargo, no se sabe cómo el LPS modula la localización de IcsA. Por lo
tanto, tanto IcsP como LPS son necesarios para la localización unipolar de IcsA para producir un movimiento unidireccional
eficiente, que está fuertemente correlacionado con la frecuencia de protuberancias de la membrana (Monack y Theriot, 2001 ).
 Abrir en una ventana separada
Figura 5

IcsA media la motilidad basada en actina e IcsB previene la autofagia . IcsA se localiza de forma unipolar para promover el movimiento
intracelular unidireccional eficiente paralelo al eje largo de Shigella para el movimiento intra e intercelular. IcsB enmascara el sitio de
reconocimiento Atg5 en IcsA, recluta a Toca-I y previene la formación de jaulas de septinto.

IcsB: inhibición de la autofagia

IcsB requiere el chaperón IpgA tanto para su estabilidad como para su secreción (Ogawa et al., 2003 ). Un mutante icsB - produjo
placas con un diámetro más pequeño que el tipo salvaje y un resultado negativo en la prueba de Sereny, lo que sugiere un papel
para IcsB después de la invasión. Este papel es la prevención de la autofagia (Figura 5 ]. IcsB evita el reconocimiento autofágico
enmascarando el sitio de unión Atg5 en IcsA, evitando que Atg5 se una e inicie la formación de autofagosomas. IcsB también es
capaz de reclutar a Toca-I para prevenir la fagocitosis mediada por LC3 (Baxt y Goldberg, 2014 ). IcsB previene la formación de
jaulas de septinas, lo que a su vez puede prevenir el reclutamiento de ubiquitina (Ub), p62 y NDP52 (Huang y Brumell, 2014 ). En
un knockout icsB , se visualizaron membranas dobles autofágicas alrededor del bacilo Shigella, con una distribución asimétrica
similar a la colocación de IcsA (Ogawa et al., 2005 ). IcsB, junto con VirA, también ha sido implicado en la lisis de la vacuola
doble entrada de membrana después de la propagación intercelular (Figura 1 , paso 11). Microscopía electrónica (EM) 3 h después
de la infección de células visualiza ics B - mutantes que quedan atrapados en una membrana doble, con varias bacterias en una
vacuola (Allaoui et al., 1992 ). Galectin-3 se había utilizado para demostrar que un mutante icsB - tiene solo una interrupción del
53% de la vacuola de doble membrana, en comparación con el 70% interrupción mediada por el tipo salvaje (Campbell-Valois et
al., 2015 ). Sin embargo, en una inspección más cercana, creemos que las imágenes EM (Allaoui et al., 1992 , Figura 8B) fueron
malinterpretadas, y la doble membrana interpretada como la secundaria la vacuola de entrada era en realidad un autofagosoma de
partida que rodea al mutante icsB - incapaz de inhibir la autofagia. Además, la galectina-3 puede usarse para marcar
endomembranas o membranas autofágicas, ya que interactúa con glicoconjugados que contienen β-galactosa presentes en
ambos compartimentos endocíticos y secretores (Maejima et al., 2013 ). Por lo tanto, en lugar de romper la entrada secundaria, la
vacuola IcsB inhibe la autofagia de Shigella.

VirA: inhibición de la autofagia y promoción de la fragmentación de Golgi

Inicialmente, se pensó que VirA desempeñaba un papel en la invasión de Shigella , ya que un mutante virA tenía una capacidad 5
veces reducida para la invasión (Uchiya et al., 1995 ). Esto se relacionó con su actividad aparente de cisteína proteasa y su
capacidad para la degradación de microtúbulos (Yoshida et al., 2002 ). Sin embargo, el análisis estructural mostró que VirA carece
de la actividad de proteasa de tipo papaína sugerida para la escisión de tubulina, y en su lugar muestra homología con EspG, un
efector EPEC que fragmenta el Golgi (Germane et al., 2008 ). VirA pertenece a una familia de proteínas activadoras de GTPasa,
que comparten el dominio catalítico conservado de Rab GTPasa Tre-2 / Bub2 / Cdc16 para mediar en la hidrólisis de Rab1 GTP
(Dong et al., 2012 ). La Rab1 GTPasa está involucrada en el transporte vesicular de ER a Golgi y es crucial en la formación de
autophagosomes (Zoppino et al., 2010 ). VirA estabiliza Rab1 en el estado inactivo del PIB, lo que interfiere directamente con la
inducción de la autofagia y el tráfico ER-a-Golgi (Figura 6 ] (Dong et al., 2012 ; Huang y Brumell, 2014 ). Un mutante virA -
conduce a una persistencia intercelular reducida de Shigella , pero no reduce en gran medida la fragmentación de Golgi, ya que
IpaJ es más potente en la fragmentación del Golgi (Figura 6 ) (Dong et al., 2012 ; Burnaevskiy et al., 2013). ) VirA, de forma
similar a IcsB, ha sido implicado en la disrupción de la vacuola secundaria después de la propagación intercelular después de la
formación de protrusión de membrana (Figura 1 , paso 10) (Campbell-Valois et al., 2015 ). Sin embargo, como para IcsB , esto
puede haber sido malinterpretado. En nuestra opinión, la evidencia indica que VirA está involucrado en la lisis de la vacuola de
entrada de membrana única (Figura 1 , paso 8). De hecho, la proteína de membrana asociada a Lysosomal 2 (LAMP2), una
marcador para la fusión lisosomal con la vacuola de entrada, se ha localizado mediante microscopía confocal a vacuolas de entrada
que contienen un solo mutante virA - y un doble icsB - virA - mutante (Campbell - Valois et al., 2015 , Figuras 2B, 3C) (Dong et al.
al., 2012 , Figura S3). Un solo mutante icsB - es capaz de escapar de la vacuola de entrada, visualizada por la formación de la cola
del cometa de actina (Allaoui et al., 1992 , Figura 8A) Por lo tanto, la falta de escape de una sola membrana vacuola de entrada
por el doble icsB - virA - mutante (Campbe ll-Valois et al., 2015 , Figura 4 ] se puede atribuir a la pérdida de la función VirA. Para
confirmar esto, se requiere el análisis EM de un único mutante virA - . VirA puede mediar lisis vacuolar a través de un mecanismo
indirecto, por lo que su inhibición del tráfico endosomal impide la fusión de la vesícula de membrana a la vacuola de entrada
(Figura 6 ]. Esto podría ocurrir a través de interacciones con múltiples Rab GTPasas, ya que los ensayos in vitro han indicado que
VirA puede unir muchas proteínas Rab implicadas en el tráfico y reciclado de ER a Golgi (Dong et al., 2012 ). Por lo tanto, la
vacuola puede lisarse ya que no puede crecer para acomodar la replicación de Shigella . La lisis pasiva de la vacuola se ha
demostrado para Salmonella , por lo que un sifA - knockout evita el reclutamiento de la membrana a la vacuola de entrada. La
vacuola no puede sostener la replicación de Salmonella y posteriormente se lisa, liberando Salmonella en el citoplasma epitelial
(Beuzón et al., 2000 ).

Abrir en una ventana separada

Figura 6

VirA e IpaJ median la fragmentación de Golgi, lo que puede contribuir a la interrupción de la vacuola de entrada . Existe un nivel de
semi redundancia entre VirA e IpaJ, ya que se requiere un doble virA - ipaJ - knockout para abolir por completo la fragmentación de Golgi
inducida por Shigella . IpaJ es el efector dominante, y se dirige a ARF1-GTP para la escisión N-miristoilada en el motivo de di-glicina
expuesto. La ARF1 se pierde irreversiblemente de la membrana de Golgi, lo que lleva a la inhibición del tráfico de Golgi (Burnaevskiy et
al., 2013 ). VirA es capaz de interactuar e inactivar muchas Rab GTPasas para mediar en la fragmentación de Golgi, incluyendo Rab1 en el ER y
Rab33 en el Golgi (Dong et al., 2012 ). Esto causa la interrupción del tráfico de ER-a-Golgi, lo que lleva a la fragmentación del aparato de
Golgi. La inactivación de Rab35 en el endosoma de reciclaje puede evitar el reclutamiento de membrana adicional a la vacuola de entrada
de Shigella . La replicación de Shigella dentro de la vacuola de entrada sin membrana adicional puede permitir la lisis de la vacuola. IpgD
también puede contribuir a la lisis de vacuolas mediante el reclutamiento de Rab11 a macropinosomas, que se ha demostrado que entran en
contacto con la vacuola de entrada para acelerar la ruptura vacuolar (Mellouk et al., 2014 ; Weiner et al., 2016 ).

IpaJ: fragmentación de Golgi

ipaJ se codifica aguas abajo del operón ipaBCDA y se transcribe de manera divergente a él. Pero el mutante original ipaJ - no
mostró ningún defecto en la formación de placa y la prueba de Sereny fue positiva. Por lo tanto, no parece jugar un papel crucial
en la invasión epitelial o la propagación de célula a célula (Buysse et al., 1997 ). El análisis bioinformático estructural indicó que
IpaJ albergaba los residuos catalíticos necesarios para la hidrólisis de los enlaces peptídicos, y otros experimentos identificaron
que IpaJ es una cisteína proteasa que escinde preferentemente proteínas N-miristoiladas (Burnaevskiy et al., 2013 ). Aunque los
estudios in vitro indicaron que IpaJ tiene un gran espectro de dianas N-miristoiladas (Burnaevskiy et al., 2015 , Figura 1D), in
vivo se dirige específicamente a los factores de ribosilación de ADP (ARF), particularmente ARF1 (Burnaevskiy et al., 2015 ,
Figura 4D). ARF1 GTPase se localiza en la membrana de Golgi y la membrana plasmática, ya que desempeña un papel en el
transporte de ER a Golgi, incluida la formación de vesículas para el transporte de carga y mantenimiento del aparato de Golgi
(D'Souza-Schorey y Chavrier, 2006 ). La eliminación de myristoyl grupo de GTP-active ARF1 por IpaJ provoca su liberación
irreversible del aparato de Golgi, la inhibición del tráfico vesicular (Figura 6 ]. Un mutante ipaJ - no tiene efecto sobre el conjunto
intracelular de ARF1, pero la cepa de tipo silvestre disminuye la cantidad de ARF1 GTPasa unida al Golgi (Burnaevskiy et
al., 2015 ). Mounier et al. ( 2012 ) sugirieron que IpaB media la fragmentación de Golgi a través de la modulación de la
concentración de colesterol de la membrana, y afirman que VirA no tiene un efecto evidente sobre la alteración. Sin embargo, los
efectos de IpaJ no se tuvieron en cuenta, y como el efector dominante en este par semi redundante, es probable que los efectos
atribuidos a IpaB en realidad fueron mediados por IpaJ. Las consecuencias de la alteración de Golgi por IpaJ no se comprenden
completamente, pero la inhibición de la relocalización de STING desde el retículo endoplásmico (ER) al compartimiento
intermedio entre ER y Golgi (ERGIC) puede ser una de ellas (Dobbs et al., 2015 ). STING es un importante sensor de patógenos
citoplásmicos a través de la detección de ADN y dinucleótidos cíclicos, donde se transloca desde el ER a ERGIC y activa la ruta
del IFN-I.

OspE1 y OspE2: promoción de la adherencia de la célula huésped a la membrana basal

OspE1 y OspE2 son idénticos en un 99%, lo que sugiere que pueden haber surgido de un evento de duplicación de genes
(Buchrieser et al., 2000 ). Son capaces de funcionar de forma redundante, sin embargo, en S. sonnei, ospE1 es un pseudogen
(Miura et al., 2006 ). Un ospE2 - knockout provocó un redondeo celular que no fue el resultado de apoptosis o necrosis, y el
fenotipo de tipo salvaje se restableció cuando los knockouts ospE2 se complementaron con ospE2funcional codificado en un
plásmido (Miura et al., 2006 ). Los ospEs son capaces de interactuar con la quinasa ligada a integrinas (ILK), que se encuentra en
la membrana de las células del huésped donde refuerza las adherencias focales (Kim et al., 2009 ). La interacción entre OspE e
ILK refuerza los contactos de adhesión entre la célula epitelial y la membrana basal (Miura et al., 2006 ). El complejo OspE-ILK
interfiere con el desensamblaje de la adhesión focal, reduciendo la fosforilación de la quinasa de adhesión focal y aumentando las
integrinas β1 superficiales (Kim et al., 2009 ). Tagged OspE se visualizó en adherencias focales, sin embargo fue difuso en células
ILK - / - , lo que indica que se requiere ILK para la localización de la membrana OspE, y esto a su vez aumenta la cantidad de ILK
en la membrana del hospedador (Miura et al., 2006 ) . Un modelo de inoculación in vivo en el colon distal de conejillos de indias
no mostró síntomas inducidos por Shigella cuando se usó un doble ospE knockout, sin embargo, la complementación dual
de ospE restauró el fenotipo de tipo salvaje, con inflamación y hemorragia (Kim et al., 2009 )

IpaB: detención del ciclo celular

IpaB se ha relacionado con la detención del ciclo celular mediante interacciones con Mad2L2, un inhibidor complejo que
promueve la anafase (Iwai et al., 2007 ). Mad2L2 participa en la promoción de la entrada de células epiteliales en la mitosis
durante la fase G2 / M mediante la interacción con el Cdh1, un factor asociado a la promoción de la anafase (APC) que interviene
en la prevención de la mitosis.Después de que se ha producido la mitosis, Mad2L2 y Cdh1 se disocian y Cdh1 se activa para
suprimir las ciclinas mitóticas. IpaB interfiere con la unión de Mad2L2-Cdh1, causando que Cdh1 se active constitutivamente
(Iwai et al., 2007 ). La supresión permanente de la ciclina mitótica por Cdh1 previene el recambio epitelial durante la infección
por Shigella , promoviendo una replicación bacteriana más eficaz manteniendo las células mejor unidas a las células adyacentes y
a la lámina. La detención del ciclo celular evita el recambio celular epitelial y permite a Shigella establecer un mejor nicho para la
replicación. Las interacciones con Mad2L2 permiten que IpaB se transloque en el núcleo epitelial (Iwai et al., 2007 ). IpaB vincula
Mad2L2, y esto ocurre en la misma ubicación en IpaB donde el chaperón IpgC se une. La introducción de una única sustitución de
aminoácidos que confiere una unión más débil de IpaB a Mad2L2 conduce a una reducción en la colonización de asas ileales de
conejo, lo que sugiere que IpaB y su interacción con Mad2L2 contribuyen a una colonización más eficiente del epitelio
de Shigella (Iwai et al., 2007 , Figura 6B). Sin embargo, la mutación puntual podría tener efectos pleotrópicos en la función IpaB
(ver IpaB e IpaC: ¿Lisis de la vacuola de entrada de una sola membrana?) En lugar de afectar directamente la unión de Mad2L2.

Lisis de la vacuola de doble membrana

Vps y VacJ: transportador ABC propuesto

El operón vpsABC se encuentra en el cromosoma Shigella y consiste en VpsA, una posible proteína transportadora de casete de
unión a ATP (ABC) y VspB y VspC, proteínas transmembrana propuestas. Ambos knockouts , vpsC y vspA , tenían un defecto en
la formación de placa, pero eran similares a las cepas de tipo salvaje en su capacidad para invadir, lo que indica que desempeñan
un papel en la propagación intercelular (Hong et al., 1998 ). La VacJ también está codificada en el cromosoma, y un vacío
vacunal es incapaz de escapar al citoplasma de la célula receptora, lo que sugiere que VacJ también juega un papel en la
diseminación intercelular (Suzuki et al., 1994 ). Carpenter et al. ( 2014 ) describen un transportador Vps / VacJ ABC, que
mantiene la asimetría de los lípidos en la membrana externa y en el contexto de la infección por Shigella es necesaria para la lisis
de la vacuola de doble membrana. La transformación de vps / vacJ knockouts con un plásmido que expresa pldA , una fosfolipasa
en otras bacterias Gram negativas, pudo restablecer el mantenimiento de la asimetría lipídica de la membrana externa pero no
pudo lisar la vacuola de doble membrana, lo que indica que estas dos funciones del Vps propuesto / VacJ ABC transporter están
separados (Carpenter et al., 2014 ). Por lo tanto, otro sustrato puede ser transportado a través de la membrana para inducir la lisis
vacuolar, sin embargo, esto aún no se ha descubierto.

IpaB e IpaC: formación de translocon y lisis de la vacuola de doble membrana

El estudio de los roles intracelulares de IpaB e IpaC es difícil ya que sus mutantes no invasivos tienen efectos pleotrópicos. Sin
embargo, Page et al. ( 1999 ) superaron este problema utilizando un plásmido recombinante con promotor lac inducible por IPTG
para regular la expresión de IpaB e IpaC. Después de la entrada inicial, se eliminó IPTG del medio, produciendo fenotipos
ipaB e ipaC que tienen una disminución de 3 veces en el diámetro de la placa en comparación con el tipo
silvestre. Los mutantes inducibles ipaB - o ipaC - ambos exhibieron un defecto en la lisis de la vacuola de doble membrana
(Figura 1 , paso 11), con la formación de contacto de membrana abolida (Campbell-Valois et al., 2014 ). Varias bacterias fueron
visualizado dentro de tales vacuolas, indicando que se gastó suficiente tiempo en la vacuola para que ocurra la replicación (Page et
al., 1999 ). IpaB se localiza en la punta de la aguja junto con IpaD, desde donde detecta la membrana de la célula hospedadora
(Murillo et al ., 2016 ). Por lo tanto, sus interacciones con la superficie interna de la membrana plasmática durante la protrusión de
la membrana pueden inducir la regulación on-off del T3SS en el citoplasma de la célula epitelial (Campbell-Valois et al., 2014 ) y
la inserción fresca de translocon y / o translocación de efector (es) no identificados implicados en la lisis de la primera o la
segunda membrana de la vacuola de doble membrana.

Modulación del sistema inmune innato

Cubrimos aquí efectores directamente implicados en la supresión de la respuesta inmune innata en las células epiteliales y / o
macrófagos, en lugar de los eventos secuencia arriba descritos anteriormente, como la autofagia.

OspC3: inhibe la muerte celular inflamatoria mediada por caspasa-4

OspC3 es parte de la familia de genes ospC .Un mutante ospC3 - tiene una mayor muerte celular inflamatoria cuando se compara
con mutantes de tipo salvaje Shigella y ospC1 - / ospC2 - (Kobayashi et al., 2013 ). Esto indica que OspC3 desempeña un papel en
la baja regulación de la muerte celular inflamatoria aguda, y sugiere una falta de redundancia en la familia ospC como OspC1
tiene efectos proinflamatorios. La muerte celular inflamatoria no fue abolida con un inhibidor de citocromo c o caspasa-3 /
caspasa-7. Sin embargo, un inhibidor de caspasa-1 / caspasa-4 / caspasa-5 redujo la citotoxicidad y su actividad aumentó durante
la infección ospC3 , lo que sugiere que OspC3 media su actividad a través de una de estas vías de caspasa (Kobayashi et
al., 2013 ). Etiquetado OspC3 unido a la subunidad caspasa-4 p19 en un ensayo de reducción, y las eliminaciones en marco
mostraron que los restos 190-484 terminales de OspC3 estaban implicados en la unión de p19, específicamente en una secuencia
consensuada conservada, X 1 -YX 2 -DX 3(Kobayashi et al., 2013 ). La sustitución de los cinco residuos con alanina, además de la
sustitución de los 450-478 residuos conservados en la región de anquirina C-terminal, perjudicó la unión de OspC3 a p19 y
aumentó la citotoxicidad epitelial (Kobayashi et al., 2013 ). La incubación de la subunidad p19 con concentraciones crecientes de
OspC3 se correlacionó con una unión p19-p10 cada vez más deteriorada (Kobayashi et al., 2013 ). La función bioquímica de
OspC3 por lo tanto, puede estar interactuando con p19 para inhibir la activación de caspasa-4 y prevenir la muerte celular
inflamatoria (Figura 7 ].

Figura 7

Shigella modula la respuesta inmune innata en las células epiteliales . El NFκB puede activarse a través de muchas vías durante la infección
por Shigella , incluido el estrés genotóxico durante la invasión y el reconocimiento del lipopolisacárido en la superficie bacteriana. Esto puede
explicar la redundancia de los efectores de Shigella , muchos de los cuales tienen la capacidad de interferir con estas vías, conduciendo a la
inhibición eficiente de NFκB. IpgD aumenta los niveles de PI5P, que activa PI3K y Akt e inhibe p53 y caspasa 3. OspC3 secuestra el precursor
p19 de caspasa 4, lo que impide su heterodimerización con p10 e inhibe la activación de capase 4. OspI deamida Ubc13, que inhibe la
ubiquitinación de TRAF6 y evita la activación de la vía TRAF6-NFκB. IpaH0722 ubiquitylates TRAF2, lo que lleva a su degradación
proteasomal y la prevención del reclutamiento de IKK y la activación de NFκB. La poliubiquitinación de NEMO / IKKγ depende de la unión de
IpaH9.8 al inhibidor de unión a A20 de NFκB (ABIN-1), que conduce a la degradación proteasómica de NEMO / IKKγ, la activación de IκBα y
la inhibición de NFκB. IpaH9.8 también se localiza en el núcleo donde cataliza la ubiquitinación de U2AF 35 , lo que provoca su degradación y,
en consecuencia, reduce la expresión de il-8 y la disminución del reclutamiento de neutrófilos. Por un mecanismo desconocido, OspG previene
que SCF β-TrCP ubiquitine el IκBα, previniendo la degradación de IκBα y la activación de NFκB. OspZ bloquea la translocación nuclear de p65,
una subunidad de NFκB, inhibiendo de este modo la activación de NFκB. La desfosforilación de treonina de MAPK por OspF conduce a la
inactivación de las rutas ERK1 / 2 y p38 MAPK y a la inhibición de la fosforilación de histona H3 (H3pS10). Esto produce una conformación de
cromatina inaccesible en los promotores genéticos de las citocinas y quimiocinas inflamatorias, lo que significa que el NFκB no puede activar su
transcripción.

OspF: inactiva MAPKs que previene la fosforilación de la histona H3

OspF se describió por primera vez como una fosfatasa específica doble (Arbibe et al., 2007 ), desfosforilando residuos de treonina
y tirosina en la vía de señalización de MAPK (Figura 7 ). Sin embargo, fue determinado por Li et al. ( 2007 ) a través de
espectrometría de masas en tándem que OspF en cambio muestra la actividad fosfotreonina liasa en que desfosforila
irreversiblemente la treonina, pero no la tirosina, a través de la eliminación beta (Zhu et al., 2007 ). Un mutante ospF - ha
aumentado el reclutamiento de PMN y la severidad de la destrucción epitelial en el modelo de asa ileal de conejo en comparación
con la cepa salvaje, indicando un papel en la regulación negativa de la respuesta inmune a la infección por Shigella (Arbibe et
al., 2007 ). La actividad de la fosfotreonina liasa también se observa en SpvC, un homólogo de Salmonella con un 63% de
identidad de aminoácidos con OspF. Los anticuerpos contra los fosfoaminoácidos confirmaron la eliminación específica de fosfato
de treonina que inactiva las MAPK (Mazurkiewicz et al., 2008 ). A OspF también se le han atribuido funciones proinflamatorias
(Zurawski et al., 2006; Reiterer et al., 2011 ). La identificación de sustratos precisos in vivo puede explicar los aparentes papeles
pro y antiinflamatorios mediados por OspF.

OspG: inhibe la activación de NFκB

OspG desempeña un papel en la amortiguación de la respuesta inmune del huésped, demostrado por un mutante ospG - que exhibe
una mayor inflamación y destrucción de la mucosa en comparación con Shigella salvaje en el modelo de asa ileal de conejo (Kim
et al., 2005 ). OspG tiene un dominio de quinasa mínimo, y su actividad quinasa requiere la unión de una enzima de conjugación
de ubiquitina E2 junto con ubiquitina (Pruneda et al., 2014 ). La unión de UbcH7 ~ Ub estabiliza OspG y confiere una
conformación de quinasa activa, incrementando la actividad de quinasa 20 veces (Grishin et al., 2014 ). OspG también es capaz de
unirse a UbcH5b ~ Ub, que es un componente de la enzima ligante E3 SCF β-TrCP (Kim et al., 2005 ). Un mutante ospG - exhibe una
degradación de IκBα 20 minutos después de la invasión, mientras que en Shigella de tipo salvaje esta degradación ocurre después
de 60 minutos (Kim et al., 2005 ). El mecanismo exacto de cómo OspG evita SCF β-TrCP de ubiquitinating phospho -IκBα es
desconocido, pero la actividad de OspG quinasa se postula que participa en la atenuación de la activación de NFκB (Figura 7 ]
(Zhou et al., 2013) )

OspI: inhibe la activación de NFκB

OspI funciona como una glutamina deamidasa y se ha demostrado que interfiere con la activación de NFκB a través de la vía del
factor asociado al receptor de TNF (TRAF) 6 (Sanada et al., 2012). Un ospI - mutante, cuando se compara con Shigella silvestre,
conduce a niveles elevados de transcritos de ARNm de citocina, fosforilación incrementada de IκBα y un aumento de 4 veces en la
translocación nuclear de la subunidad p65 de NFκB (Sanada et al., 2012 ). Todos estos conducen a una mayor activación de NFκB
y, en consecuencia, a un aumento en la respuesta inflamatoria del huésped. OspI tiene una tríada catalítica de ácido cisteína-
histidina-aspártico que es crucial para la desamidación, ya que la actividad fue abolida por una sustitución de cisteína a serina
(Sanada et al., 2012 ). Un sustrato de OspI es UBC13, una enzima de conjugación de ubiquitina E2 requerida para la activación de
NFκB inducida por TRAF6, mostrada por la unión de OspI a His-UBC13 durante ensayos de pull-down (Nishide et
al., 2013 ). Las interacciones hidrofóbicas son importantes para esta unión, y una estructura cristalina muestra un residuo de
glutamina en la posición 100 en que el UBC13 se coloca en el sitio activo OspI (Nishide et al., 2013 ). OspI desamida
específicamente Gln100, convirtiéndolo en ácido glutámico y aboliendo la función de conjugación de ubiquitina E2 de UBC13
para prevenir la activación de la vía TRAF6-NFκB (Figura 7 ) (Sanada et al., 2012 ).

OspZ: inhibe la activación de NFκB

Como se describió previamente, OspZ tiene un papel proinflamatorio en algunas especies de S. flexneri . En el resto de las
especies de Shigella, el OspZ completo tiene un papel antiinflamatorio, similar al de su homólogo NleE en EPEC (Newton et
al., 2010 ). Se ha demostrado que tanto NleE como OspZ bloquean la translocación nuclear de p65, una subunidad de NFκB, en
respuesta a TNFα e IL-1β (Figura 7 ). Esto conduce a una reducción en la transcripción de genes de citocinas proinflamatorias,
como il-8 , reduciendo así la inflamación durante la infección por Shigella . OspZ y NleE también son capaces de inhibir la
degradación de IκB, suprimiendo aún más la actividad de NFκB. Newton et al. ( 2010 ) determinaron que la región crucial para el
efecto antiinflamatorio de OspZ y NleE estaba entre los aminoácidos 208-214, y tiene la secuencia IDSYMK. La deleción de esta
región o sustituciones de un solo aminoácido para alanina en NleE condujo a un aumento en la transcripción dependiente de NFκB
(Newton et al., 2010 , Figura 6D). La actividad de NFκB no fue abolida, lo que indica que esta región es un sitio de unión en lugar
de un sitio activo de la enzima. El mecanismo preciso de cómo OspZ inhibe la degradación de IκB es desconocido. Sin embargo,
Nadler et al. ( 2010 ) proponen que NleE inhibe IKKβ, que normalmente es responsable de la fosforilación y degradación de IκB
en respuesta a estímulos proinflamatorios. Por lo tanto, OspZ puede funcionar por un mecanismo similar para prevenir la
activación de NFκB.

IpaH9.8: inhibe la respuesta de NFκB

IpaH9.8 es un miembro de la familia de genes ipaH , y uno de los cuatro encontrados en el plásmido de virulencia, que
incluye ipaH1.4, ipaH2.5, ipaH4.5 e ipaH9.8 . Las proteínas IpaH se caracterizan por una región N-terminal de repetición rica en
leucina (LRR) y una región C-terminal altamente conservada (CTR) que contiene un residuo de cisteína (Suzuki et al., 2014a ). Se
cree que el motivo LRR desempeña un papel en las interacciones proteína-proteína, tales como adhesión celular y señalización,
mientras que el residuo de cisteína en el CTR es necesario para la actividad de ubiquitina ligasa de la enzima 3 (E3). Un
mutante ipaH9.8 tiene un fenotipo inflamatorio incrementado en comparación con Shigella de tipo salvaje en el modelo de pulmón
murino, lo que indica que IpaH9.8 tiene un papel en la atenuación de la inflamación durante la infección por Shigella (Okuda et
al., 2005 ). Esto se logra a través de la actividad de la ubiquitina ligasa E3 a través del CTR de IpaH9.8 (Rohde et al., 2007 ). Los
sustratos de IpaH9.8 incluyen U2AF 35 y NEMO / IKKγ (Okuda et al., 2005 ; Ashida et al., 2010 ). Los ensayos de reducción
confirmaron la unión de IpaH9.8 y U2AF35, que se produce específicamente en el extremo C de IpaH9.8 y 107-197 residuos en
U2AF 35 (Okuda et al., 2005 ). La unión de IpaH9.8 a NEMO / IKKγ requiere un adaptador ABIN-1 (Inhibidor de Unión A20), ya
que ABIN-1 knockdown conduce a la falta de efecto inducido por IpaH9.8 en los niveles de NEMO (Ashida et al., 2010 ). La
ubiquitinación de U2AF 35 y NEMO / IKKγ mediada por IpaH9.8 conduce a su degradación de una manera dependiente del
proteasoma (Figura 7 ) (Ashida et al., 2010 ; Perrett et al., 2011 ). Seyedarabi et al. ( 2010 ) describen cómo ocurre el intercambio
de dominios IpaH9.8 en respuesta al daño de la célula huésped y esto conduce a la dimerización e inactivación de su actividad de
ubiquitina ligasa E3. Shigella puede, por lo tanto, sentir las condiciones de la célula huésped para mantener un entorno adecuado
para su continua proliferación y supervivencia.

IpaH0722: inhibe la activación de NFκB

IpaH0722 está codificado en el cromosoma Shigella . En un mutante ipaH-null , mediante el cual se eliminaron los siete genes de
la familia ipaH cromosómica, hubo un aumento en la severidad de la inflamación en el modelo de pulmón murino en comparación
con la infección de Shigella salvaje (Ashida et al., 2007 ). Cuando se examinaron los knockouts individuales de ipaH , se encontró
que IpaH0722 desempeña un papel en la amortiguación de la respuesta inflamatoria, ya que un ipaH0722 - knockout había
aumentado los niveles de degradación de IκBα que conducen a la activación de NFκB (Ashida et al., 2013 ).IpaH0722 es también
una ubiquitina ligasa E3, con la CTR conservada y el residuo de cisteína crucial que se encuentra en otras proteínas IpaH . Una
sustitución de cisteína a alanina aumentó la activación de NFκB, lo que indica que la actividad de la ubiquitina ligasa E3 es crucial
para la regulación negativa de NFκB (Ashida et al., 2013 ). Los ensayos de reducción mostraron que IpaH0722 podría unirse a
TRAF2, sin embargo, un truncamiento de CTR no pudo interactuar con TRAF2, lo que indica aún más la importancia de la
actividad de la ubiquitina ligasa IpaH0722 (Ashida et al., 2013 ). IpaH0722 provoca una mayor degradación de TRAF2 que
conduce a una reducción en la actividad de NFκB, lo que amortigua la respuesta inflamatoria del huésped (Figura 7 ].

IpgD: activa la vía de señalización Akt / PI3K

Se ha demostrado que el aumento de PtdIns (5) P mediado por IpgD induce la fosforilación de Akt a través de la activación de la
fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) (Mayo y Donner, 2001 ). Un ipgD - knockout ha abolido la fosforilación de Akt, que también
ocurre si PtdIns (5) P es secuestrado o fosforilado a PtdIns (4,5) P 2 (Pendaries et al., 2006 ). La reducción en la fosforilación de
Akt se correlacionó con un aumento en la apoptosis y una fosforilación disminuida de Mdm2, el regulador negativo de p53, por la
serina-treonina quinasa de Akt (Mayo y Donner, 2001 ). Bergounioux et al. ( 2012 ) mostraron que un mutante de ipgD -tenía una
reducción en la fosforilación de Mdm2 en fase temprana, causando un retraso en la degradación de p53 y un aumento en el
fenotipo apoptótico. El homólogo de Salmonella SopB y SigD también tienen funciones pro-supervivencia a través de
interacciones con Akt y la activación de la vía de supervivencia PI3K-Akt (Steele-Mortimer et al., 2000 ; Knodler et al., 2005 ).

Rotura y piroptosis vacuolar de macrófagos

IpaC: ruptura de la vacuola fagocítica

IpaC interactúa con IpaB en la punta de la aguja T3SS para formar un translocon que se inserta en las membranas lipídicas
(Blocker et al., 1999 ). Un mutante ipaC - no tiene actividad hemolítica y no puede escapar de la vacuola fagocítica (Bârzu et
al., 1997 ). Dado el papel determinado por IpaC en la lisis de la vacuola de invasión en células epiteliales (Osiecki et al., 2001 ; Du
et al., 2016 ), es muy probable que IpaC también desempeñe un papel en este proceso en macrófagos (Figura Figure1,1 , step
3). Salmonella -induced vacuoles in macrophages have an acidic pH, and it was proposed that acidification may also be the cue to
change IpaC function from cell entry to membrane lysis (De Geyter et al., 1997 ). If acidification is not the cue for vacuolar lysis,
blocking acidification of endosomes using Bafilomycin-A 1 should not prevent Shigella from exiting the vacuole.

IpaB: promueve la piroptosis de macrófagos

La región hidrofóbica de IpaB (310-430 residuos de aminoácidos) tiene un 65% de identidad de secuencia con la proteína B
invasiva de Salmonella (SipB) y está involucrada en la invasión del epitelio mediante la formación de translocon, escape de
fagosomas e inducción de piroptosis de macrófagos (Guichon et al. , 2001 ). El sitio de unión para la caspasa-1 pro-piroptótica y
proinflamatoria, también conocida como enzima convertidora de interleucina-1β (ICE), está localizada en los residuos 311-401
dentro de la región hidrofóbica (Guichon et al., 2001 ). IpaB se localiza en la superficie bacteriana y en agregados discretos en el
citoplasma de los macrófagos, lo que sugiere que IpaB interactúa con caspasa-1 después de la lisis vacuolar en lugar de inyectarse
en el citoplasma de la vacuola (Thirumalai et al., 1997) Los escinde complejos IPAB-ICE los precursores de citoquinas pro-
inflamatorias IL-1 y IL-18 a producen madura IL-1β y IL-18, que se liberan en paralelo a la pyroptosis inducida (Figura (Figura
1,1 , Etapas 4 6). IpaB también puede promover la piroptosis de macrófagos al permitir la administración del T3SS de las
proteínas de aguja y varilla, MxiI y MxiH, en el citosol, que se unen a la familia NAIP de receptores inflamasoma que
desencadenan la activación de caspasa-1 (Yang et al. , 2013 ; Suzuki et al., 2014b ). Trabajos recientes también sugieren que IpaD
promueve la apoptosis de macrófagos independiente de la caspasa-1 pero a través de caspasas del huésped acompañadas de
disrupción mitocondrial (Arizmendi et al., 2016 ).

IpaH7.8: promueve la piroptosis de macrófagos

IpaH7.8 es parte de la familia de genes ipaH que se encuentra en el plásmido de virulencia de Shigella . Se sugirió que IpaH7.8
tenía un papel en la lisis vacuolar como un ipaH7.8 -espectáculo mutante reducido a partir del escape de la vacuola fagocítica
(Fernandez-Prada et al., 2000 ). Sin embargo, no está claro cómo se fabricó esta cepa mutante (PWR700) y su complementación
fue deficiente. Paetzold et al. ( 2007 ) describieron cómo ipaH7.8 -knockout fue capaz de escapar del fagosoma. Por lo tanto,
IpaH7.8 no tiene ningún papel en el escape vacuolar. En cambio, la ubiquitina ligasa IpaH7.8 se dirige a la glomulina, un inhibidor
de la activación del inflamasoma, para la ubiquitinación que conduce a la degradación de la glomulina. Muerte específico de
macrófagos de células (Figura (Figura 1,1 , paso 6), entonces se activa a través de inflamosomas activados (Suzuki et al., 2014A ).

Modulación del sistema inmune adaptativo

Conversión del serotipo LPS y activación de las células T independientes del timo
La adquisición de la SHI-O PAI significa que Shigella es capaz de modificar su LPS (Figura (Figure8).8 ). Como la inmunidad
humoral es específica del serotipo, y la protección contra la reinfección a menudo no tiene éxito debido a la variedad
de serotipos de Shigella. Además, el O-antígeno de LPS es un antígeno carbohidrato, independiente del timo tipo 1 (TI-1), que
activa las células B en ausencia de células T auxiliares (Murphy, 2012).) La falta de participación de las células T auxiliares
significa que estas células B activadas no pueden someterse a un cambio de clase o desarrollar una respuesta de memoria de las
células B para proteger contra la reinfección. A baja concentración de antígenos TI-1, como cuando las moléculas LPS se liberan
de bacterias dañadas, las células B vírgenes se activan debido a la unión específica de sus receptores de células B al antígeno (es
decir, antígeno O de LPS) . Esto induce la producción de anticuerpos específicos de antígeno O, que son protectores contra
la infección por Shigella , sin embargo, no son de larga duración y se superan mediante la conversión del serotipo. Una alta
concentración de antígenos TI-1, como el O-antígeno en LPS en la superficie bacteriana, conduce a la activación policlonal no
específica de las células B y la producción de anticuerpos no específicos y, por lo tanto, probablemente no protectores
(Murphy,2012 ). Por lo tanto, el O-antígeno se comporta como un "señuelo inmunológico" en más de un nivel, lo que lo convierte
en una opción particularmente mala como antígeno vacunal.

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Figura 8

Composición y conversión del serotipo S. flexneri . Las modificaciones del antígeno O LPS incluyen glucosilación (la adición de grupos
glucosilo), mediada por el operón gtr y la adición de grupos O-acetilo, conseguida por la proteína O-acetiltransferasa codificada por el
gen oac .Esta es la base de la conversión del serotipo, ya que Shigella comienza con el serotipo Y y la estructura básica del antígeno O, y la
modificación posterior produce diferentes serotipos (Allison y Verma, 2000 ).

IpgD: interfiere con la migración de linfocitos T

IpgD es capaz de interferir con la migración de células T por PtdIns-de fosforilar (4,5) P 2 (Figura (Figure9).9 ). La Shigella
de tipo salvaje causa una disminución del 50% en la migración de células T hacia una quimioquina, como CXCL12 (Konradt et
al., 2011 ). Las células transfectadas con IpgD-GFP e incubadas con CXCL12 no tenían localización de proteína ERM en el polo,
lo que impedía la polarización y la migración de las células T (Konradt et al., 2011 ). La velocidad media de las células T se
midió in vivo , con células T no infectadas que exhibían 9 y 4 μm / min para las células T infectadas con Shigella de tipo
salvaje (Salgado-Pabón et al., 2013 ). Esto indica queShigella es capaz de afectar a las células T en el contexto de la infección y de
que esta capacidad depende de IpgD. Shigella puede prevenir la migración de células T y el reclutamiento a áreas de infección, ya
que podrían ser cebadas por células presentadoras de antígeno CD1, que están involucradas en la presentación de antígenos
lipídicos, incluido LPS (Murphy, 2012 ). Esto podría inducir una respuesta antigénica específica ya que el cebado de las células T
conduce a la estimulación de las células B para el cambio de isotipo y la memoria inmunológica, por lo tanto, es ventajoso evitar
la participación de las células T en la respuesta inmune adaptativa. La reducción de la migración de células T
citotóxicas CD8 + también puede ralentizar el aclaramiento de las células infectadas del epitelio.
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Figura 9

IpgD inhibe la migración de las células T e IpaD induce la apoptosis de las células B. (A) La concentración de PIP2 en la membrana
plasmática es responsable del intercambio dinámico entre las conformaciones activas e inactivas de las proteínas ezrina, radixina y moesina
(ERM) (Konradt et al., 2011 ). Las proteínas ERM están involucradas en la organización del córtex celular de las células T, y sus
conformaciones activas se localizan en la membrana en respuesta a la estimulación con quimiocinas para permitir la migración de las células T
hacia los quimioatrayentes (Konradt et al., 2011 ). En el seno subcapsular del ganglio linfático (Salgado-Pabón et al., 2013 ) Shigella puede
invadir las células T o inyectar IpgD a través del T3SS en las células T para reducir PtdIns (4,5) P 2concentración. Esto evita la polarización
celular inducida por las proteínas ERM activas y la migración de las células T a los sitios de infección (Konradt et al., 2011 ). (B) Las co-señales
bacterianas aumentan las proteínas proapoptóticas, inducen la pérdida del potencial de membrana mitocondrial (MMP) y también
regulan positivamente el ARNm de tlr2 , lo que conduce a una expresión de TLR2 aumentada en la superficie de la célula.La señalización de
IpaD a través del heterodímero TLR2-1 conduce a la regulación positiva de la proteína del dominio de muerte asociado a FAS (FADD), que
finalmente induce la apoptosis de células B (Nothelfer et al., 2014 ).

IpaD: promueve la apoptosis de los linfocitos B

Para prevenir la respuesta de un anticuerpo al LPS, específico o no específico, y la producción de memoria
inmunológica, Shigella también induce la apoptosis en las células B. Esto está mediado por IpaD de una manera independiente de
la invasión de Shigella y la inyección efectora (Nothelfer et al., 2014 ). La incubación de células B con IpaD sola no induce la
muerte celular, y se dedujo que las co-señales bacterianas funcionan junto con IpaD para mediar la apoptosis de células B
(Figura 9 ) (Nothelfer et al., 2014 ) .Cuando los anticuerpos anti-IpaD se aplican a biopsias rectales de pacientes con shigelosis, se
visualizan dentro de folículos linfoides aislados y están en contacto con células B, lo que sugiere que la apoptosis de células B
inducida por IpaD ocurre in vivo (Nothelfer et al., 2014 ).

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Discusión

¿Cómo funcionan los factores de virulencia?

La desestabilización de la barrera epitelial y la secreción de líquido causa inflamación intestinal grave y

diarrea
Una vez ingerido, S. flexneri 2a administra ShET1 en el yeyuno para provocar la secreción de líquido (Fasano et al., 1997 ). Otras
especies de Shigella que albergan ShET2 requieren la activación del T3SS para su secreción y lo más probable es que ocurra
después del contacto con el epitelio colónico (Farfán et al., 2011 ). Pic y SigA, también abrigados por especies de S. flexneri 2a ,
actúan dentro de la luz del colon, en el lado apical del epitelio. Pic degrada la capa de mucosidad espesa por su actividad
mucinolítica para dar a Shigella un mejor acceso al epitelio (Gutiérrez-Jiménez et al., 2008 ). SigA media la actividad enterotóxica
similar a ShET1 (Al-Hasani et al., 2000 ) y puede tener efectos citopáticos para desestabilizar inicialmente la barrera epitelial (Al-
Hasani et al., 2009 ). SepA causa la secreción de fluidos en S. flexneri 5a (Benjelloun-Touimi et al., 1995 ). Shigella atraviesa el
epitelio a través de células M y alcanza la superficie basolateral del epitelio. Aquí el T3SS se activa y Shigella puede producir
ShET2 para inducir una mayor secreción de fluidos (Nataro et al., 1995 ). Otros efectores T3SS, que incluyen OspB (Zurawski y
otros, 2009 ; Ambrosi et al., 2014 ), OspC1 (Zurawski y otros, 2006 ) y OspZ (Zurawski y otros, 2008 ) (en S. flexneri ) se
secretan para fosforilar y activar las rutas de MAPK. En consecuencia, el aumento de la secreción apical del quimioatrayente IL-8
hace que los leucocitos de PMN migren a través del epitelio en una dirección basolateral a apical. Esto desestabiliza la barrera
epitelial, y las bacterias restantes en la superficie apical pueden acceder a la superficie basolateral. Shigella que son fagocitadas
por los macrófagos median la piroptosis a través de IpaB, componentes T3SS y probablemente LPS, que se unen y activan la
caspasa-1 (Thirumalai et al., 1997 ), y la ubiquitina ligasa IpaH7.8 E3, que se dirige a la glomulina, un inhibidor del inflamasoma,
para degradación (Suzuki et al., 2014a ). La piro- ptosis conduce a la liberación de citoquinas proinflamatorias IL-1β e IL-18, que
reclutan más leucocitos de PMN y aumentan la inflamación. Todos estos factores determinantes y efectores de la virulencia están,
por lo tanto, implicados en la inflamación característica que se observa en la shigelosis, incluida la diarrea acuosa observada en las
primeras etapas. En la infección por S. flexneri 2a, la mucosidad y la sangre también pueden estar presentes debido a la actividad
secretagoga de mucina de Pic, y los efectos citopáticos de SigA. La toxina Shiga, que se encuentra solo en S. dysenteriae , puede
causar disentería sanguinolenta severa al dañar el endotelio vascular del colon (Fontaine et al., 1988 ).

La adherencia y la entrada al epitelio causa una respuesta de estrés genotóxico epitelial

En la superficie basolateral, la glucosilación del LPS es inducida por un disparador desconocido, y permite que el T3SS acceda al
epitelio para la activación (West et al., 2005 ). IpaB en la punta del complejo de aguja T3SS puede unirse a microdominios de
lípidos CD44 para mantener el contacto del T3SS con la célula epitelial (Skoudy et al., 2000 ), y la IcsA aumenta la adhesión polar
(Brotcke Zumsteg et al., 2014 ). IpaB se inserta en la membrana epitelial, activando IpaD y llevando al reclutamiento de IpaC a la
membrana del huésped para formar el poro translocon (Blocker et al., 1999 ). La activación de IpaD también indica que el T3SS
facilita la transposición temprana del efector a través de la aguja T3SS y hacia la célula epitelial (Roehrich-Doenitz et
al., 2013 ). IpaC, como uno de los efectores inmediatos que acceden a la célula epitelial, media la polimerización de la actina, de
forma independiente o indirecta a través de Cdc42 y Rac1 (Tran Van Nhieu et al., 1999 ; Mounier et al., 2009 ). Esto inicia
volantes de membrana y focos de entrada, promovidos además por IpgB1 e IpgB2, que remodelan la actina y el citoesqueleto del
huésped a través de su actividad GEF (Huang et al., 2009 ). IpaA, junto con las proteínas del huésped, facilita la despolimerización
de la actina, interfiere con las adherencias focales y previene la polimerización de actina no controlada por IpaC (Tran Van Nhieu
et al., 1997 ; Bourdet-Sicard et al., 1999 ). IpgD convierte PtdIns (4,5) P 2 en PtdIns (5) P, lo que reduce la fuerza de la correa de la
membrana y estimula aún más la formación de colmenas en la membrana (Niebuhr et al., 2002 ). En conjunto, estos efectores
median el mecanismo desencadenante de la captación de Shigella en células epiteliales no fagocíticas. Tras el cierre en la vacuola
de entrada primaria, Shigellamedia la lisis de la membrana. Esto implica principalmente IpaB y / o IpaC en el poro translocón
(Osiecki et al., 2001 ; Du et al., 2016 ), y como procesos accesorios reclutamiento IpgD de Rab11 a macropinosomas que entran
en contacto con la vacuola de entrada (Weiner et al. al., 2016 ), y / o VirA que previene el crecimiento de la membrana de la
vacuola (Mellouk et al., 2014 ).

La diseminación intercelular y la evasión inmune provocan una destrucción epitelial errática y la prevención
de la memoria inmunológica
Una vez dentro del citoplasma epitelial, Shigella usa VirA e IpaJ para inactivar principalmente Rab1 y ARF6,
respectivamente. Esto detiene el tráfico de ER-a-Golgi, impidiendo la formación de la membrana autofágica e induciendo la
fragmentación de Golgi (Dong et al., 2012 ; Burnaevskiy et al., 2013 , 2015 ). Shigella además previene la autofagia utilizando
IcsB para enmascarar el sitio de unión Atg5 en IcsA (Ogawa et al., 2005 ). La localización unipolar de IcsA en el polo viejo
de Shigella , posiblemente lograda por LPS e IcsP, es crucial para un movimiento unidireccional eficiente (Monack y
Theriot, 2001 ) y permite que Shigella se mueva a través del citoplasma epitelial hasta que haga contacto con la superficie interna
del plasma membrana. A continuación, sobresale en la célula epitelial adyacente, formando una vacuola de entrada secundaria que
consiste en una membrana doble. Posteriormente, se lisa mediante un mecanismo desconocido para permitir el acceso al
citoplasma de la célula epitelial adyacente. Permanecer dentro de la capa epitelial es importante para renovar el nicho de
replicación de Shigella y también evadir la detección inmune. La evasión de la respuesta inmune se logra mediante efectores T3SS
que inhiben las vías de activación de NFκB, que incluyen OspG (Kim et al., 2005 ), OspI (Sanada et al., 2012 ), OspZ (Newton et
al., 2010 ), IpaH9. 8 (Ashida et al., 2010 ) e IpaH0722 (Ashida et al., 2013 ). La degradación del factor pro-apoptótico p53 se logra
mediante IpgD (Mayo y Donner, 2001 ). La inhibición de la respuesta inmune innata también previene el desarrollo de una
respuesta inmune adaptativa. El movimiento de Shigella a través del epitelio y la posterior muerte de células epiteliales necróticas
es la causa de la destrucción del colon y el dolor abdominal en pacientes con shigelosis, lo que contribuye a la prevención de la
absorción de líquidos y la disentería que contiene sangre.

Determinantes de virulencia en especies que causan enfermedades

S. flexneri tiene un genoma relativamente estable y adquirió el plásmido de virulencia al principio de su evolución.S. flexneri es
capaz de persistir en el agua durante varios meses, de manera similar al cólera Vibrio (Faruque et al., 2002 ). Esto puede explicar
su prevalencia epidemiológica, ya que el acceso a huéspedes humanos durante meses podría facilitar las especies endémicas
observadas en países con un saneamiento deficiente del agua.Especulativamente, puede causar la mayoría de las enfermedades ya
que S. flexneri 2a alberga el SHI-1 PAI, que codifica Pic, SigA y ShET1. Pic puede conferir una ventaja para los nutrientes de
barrido, por lo tanto, otras cepas pueden tener una desventaja metabólica en comparación con S. flexneri (Henderson et al., 1999 ,
Harrington et al., 2009 ). La importancia de Pic y ShET1 en la patogénesis también ha sido destacada por Kotloff et al. ( 2004 ) La
eliminación de pic y set1AB , además de ospD3 , en un fondo autotrófico de guanina ( guaAB ) produjo una vacuna cada vez más
atenuada, y ninguno de los 14 voluntarios desarrolló diarrea (Kotloff et al., 2004 ). El OspZ truncado encontrado en S.
flexneri tiene un papel proinflamatorio, en comparación con su antiinflamatorio en las subespecies restantes, que puede conferir
una ventaja inflamatoria para el establecimiento inicial de la infección (Zurawski et al., 2008 ).
S. sonnei causa endemias en países industrializados. Su aparición se definió por su adquisición del plásmido pINVB, que alberga
genes para el antígeno O del serotipo 17 relacionado con Plesiomonas shigelloides (Shepherd et al., 2000 ). P. shigelloides , de
forma similar a S. flexneri , puede contaminar y persistir en las fuentes de agua. La infección con P. shigelloides del agua
contaminada puede proteger a los huéspedes humanos de la infección establecida de S. sonnei debido a la memoria inmunológica
y a los anticuerpos de reacción cruzada contra el antígeno O idéntico (Sack et al., 1994 ). Esta hipótesis también podría explicar
por qué una mejora en el saneamiento del agua causa una disminución en la infección por S. flexneri pero un aumento en las
infecciones por S. sonnei , ya que no hay infección previa por P. shigelloides del agua contaminada para inducir una respuesta
protectora de memoria inmunológica. La transmisión directa de S. sonnei en las escuelas y centros de atención también es capaz de
mantener especies endémicas en las comunidades, sin la necesidad de un reservorio ambiental.
La infección por S. dysenteriae es la más grave, que se ha relacionado con los efectos de la toxina Shiga albergada por S.
dysenteriae tipo 1. No se conoce ningún reservorio natural para S. dysenteriae , y causa epidemias esporádicas relacionadas con la
falta de higiene y la sobrepoblación . La toxina Shiga no desempeña un papel en la infección intracelular, pero puede estimular el
reclutamiento de leucocitos de PMN y dañar el endotelio vascular colónico, dando lugar a la característica disentería que contiene
sangre (Fontaine et al., 1988 ). Se ha sugerido que, como Salmonella enterica serovar Typhi, S. dysenteriae puede mantenerse y
transmitirse dentro de una comunidad por un portador asintomático. Los portadores a largo plazo con síntomas atenuados han sido
reportados previamente (Levine et al., 1973 ; Clements et al., 1988 ), y esto puede explicar la epidemiología de las epidemias de S.
dysenteriae , que desaparecen para luego reaparecer años después, y también se transfieren intercontinentalmente (Rohmer et
al., 2014 ).
S. boydii causa la menor carga de enfermedad en todo el mundo. Representa el 1-2% de Shigella aislado, y se limita
principalmente al subcontinente indio. En 2000, se descubrió S. boydii serotipo 20. Su transmisión estuvo relacionada con los
viajes en México (Kalluir et al., 2004 ) y fue el agente más frecuente de la infección por S. boydii en Canadá (Woodward et
al., 2005 ). Sin embargo, S. boydii solo causó el 1% de las infecciones por Shigellaen los Estados Unidos, en comparación con el
77% de las infecciones causadas por S. sonnei (Kalluir et al., 2004 ).Debido a la diversidad de los serotipos de S. boydii , y su falta
de relevancia clínica, se conoce poco acerca de sus determinantes de virulencia y por qué causa menos enfermedades que S.
flexneri, S. sonnei y S. dysenteriae .

Interacción efector

Múltiples efectores para una vía de destino

La Patología Inmune Activada por Efectores (ETIP) es un modelo avanzado tanto de la Hipótesis de Guardia como de la
Inmunidad activada por Efector (ETI). Si el huésped es "resistente" y codifica la proteína guardee, es capaz de reconocer el daño
mediado por los efectores de Shigella y esto induce una respuesta inmune innata eficiente. Shigella puede usar esto para su
beneficio, aumentando la inflamación intestinal que se requiere para el establecimiento de la infección y la transmisión por diarrea
(Stuart et al., 2013 ). Sin embargo, esta inflamación finalmente conduce a la eliminación de la infección, por lo
tanto Shigellaalberga un amplio repertorio de mecanismos antiinflamatorios para la regulación negativa de ETIP. El anfitrión no es
capaz de "proteger" todos los pasos / vías de señalización involucradas en la activación de NFκB, por lo tanto múltiples efectores
con diferentes funciones bioquímicas son capaces de interferir de manera eficiente con estas vías y amortiguar la respuesta inmune
del huésped. Del mismo modo, VirA y IpaJ actúan para fragmentar el Golgi a través del ejercicio de diferentes actividades
bioquímicas en diferentes pequeñas proteínas de unión a GTP involucradas en su mantenimiento.

Más de un efector con una función bioquímica similar

IpgB1 e IpgB2 son similares en su motivo WxxxE y su actividad GEF, pero tienen sustratos que no se superponen. Solo un
doble ipgB1 - ipgB2 - knockout tuvo una prueba de Sereny negativa, lo que indica que también tienen funciones similares pero no
superpuestas (Hachani et al., 2007 ). La falta de redundancia también se confirmó, ya que un ipgB2 - knockout tiene el mismo
fenotipo que la cepa salvaje, sin embargo, el ipgB1 - knockout tuvo un aumento en la inflamación en comparación con la cepa
salvaje. Esto puede vincular a la hipótesis de la guardia, por lo que IpgB1 impide la detección de IpgB2 por las proteínas guardee
del huésped, tal vez a través de su propia actividad enzimática no superpuesta, para evitar una respuesta inflamatoria excesiva.

¿Un efector con múltiples funciones?

Un efector caracterizado con múltiples funciones en la patogénesis normalmente se debe a una única función que media varios
efectos. Por ejemplo, la única actividad caracterizada de IpgD es que desfosforila fosfoinosítidos, disminuyendo los niveles de
PtdIns (4,5) P 2 y aumentando los niveles de PtdIns (5) P. Los cambios en las concentraciones intracelulares de estos
fosfoinosítidos producen efectos directamente, como los surcos de membrana (Niebuhr et al., 2002 ) o indirectamente, como la
lisis vacuolar (Mellouk et al., 2014 ), la activación de la vía de señalización Akt / PI3K ( Pendaries et al., 2006 ), y la interferencia
con la migración de linfocitos T (Konradt et al., 2011 ). Por lo tanto, IpgD tiene una actividad bioquímica, que media múltiples
efectos en la célula huésped. Este también es probablemente el caso de IpaJ en la fragmentación de Golgi y la activación de
STING y para OspB en la modulación de la propagación de célula a célula a través de la señalización de mTOR y ERK /
MAPK. Algunos factores, como la IcsA involucrada en la adhesión y la formación de la cola de actina, pueden tener
genuinamente dos funciones bioquímicas muy diferentes, utilizadas en diferentes puntos del ciclo infeccioso. OspE1 / E2 parece
estar involucrado en la adhesión a las células del huésped y la estabilidad de las uniones estrechas. Sin embargo, otros pueden
no. En su posición en la punta de la aguja T3SS, IpaB participa en las interacciones CD44 (Skoudy et al., 2000 ), detección de
células hospedadoras, formación de poros translocón (Blocker et al., 1999 ), y directa o indirectamente, y lisis del único y vacuolas
de doble entrada de membrana (High et al., 1992 ; Page et al., 1999 ). Una vez secretada, IpaB desempeña un papel en la
piroptosis de los macrófagos (Guichon et al., 2001 ) y el arresto del ciclo celular (Iwai et al., 2007 ).Es difícil comprender cómo
IpaB podría ejercer todas estas funciones sin poseer múltiples actividades biológicas, que siguen sin estar claras. Sin embargo,
algunas de estas funciones pueden haber sido mal atribuidas a IpaB debido a los efectos pleotrópicos derivados de su participación
en la formación de translocon, que es crucial para la entrada de Shigella .

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Observaciones finales
La gran mayoría del trabajo funcional presentado aquí se ha realizado sobre S. flexneri . El análisis comparativo de los genomas
de Shigella dominantes que causan la enfermedad es necesario para un análisis adicional de los determinantes de la virulencia,
como cualquier lisis implicada de las vacuolas de entrada de membrana única y doble, que permanecen completamente confusas, y
sus consecuencias epidemiológicas. La importancia de tales investigaciones genómicas se ha destacado recientemente (The et
al., 2016 ). La identificación de efectores importantes y conservados y otros factores determinantes de la virulencia que causan
enfermedades contribuirán a una comprensión general de la infección, lo que iluminará más el tropismo y la transmisión de las
especies y ayudará a crear una vacuna pan- Shigella , que hasta ahora no ha tenido éxito.