Sei sulla pagina 1di 3

Tecnológico Nacional de México «Ciencia es verdad, técnica es libertad»

Instituto Tecnológico de La Paz Enero – Junio 2018


Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica [REPORTE DE PRÁCTICA]

M icro cultivo
Microbiología, Mesa 6, 6°G
Fecha: 2019-05-24

Abstract
Mo ld s ar e mu l ti ce ll u lar o r ga n i s ms , fo r m c yl i nd r ica l a nd b r a nc hed t ub u le s c al led h yp ha e, ha v e a
d ia me ter o f 2 to 1 0 μ m a nd gr o w b y e x te n s io n i n le n gt h fro m t he e nd o f a fi la me n t, t h us fo r mi n g a ma s s
o f i nt erla ced h yp h ae c al led m yc el i u m, o f t he la t ter b e i n g T h e y p ro j ec t t he d i ffe re nt s tr uc t ure s o f t he
mo ld s . T o o b ser v e t h e m icr o sco p i c str u ct ur es o f th e fu n g i, b a si c st ai n i n g tec h n iq ue s ar e u sed , s u ch a s
lac to p he no l b l ue wi t ho u t s a mp l e fi x at io n, t hi s is a s i mp le st ai n ( wh i c h u se s a s i n gl e co lo ra nt ) a n d as
s uc h i s b a sed I n t he a f f i ni t y o f t he d ye fo r co mp o ne n t s o f t he c el ls , t h e o b j ecti ve s o f t he p re se n t
p ract ice wer e t h e so wi n g o f micr o s co p ic fu n gi b y p u n ct ure o n P D A a gar , as we ll a s t he id e n ti fic a tio n
o f mi cro sco p ic s tr uc t ur e s o f t he f u n g i to b e ab le to k no w t he ge n u s a nd sp ec ie s o f t he c ul ti v ated
fu n g u s, t he r es u lt s o b ta i ned i n t he p r es e nt p r ac ti ce we re p o s sib le t hro u g h t he ap p li ca tio n o f p u n ct ure
ino c ul at io n io n o n P D A ag ar a nd s tai n i n g wi t h l acto p he no l b l ue, yi e ld i n g b lac k, vel v et y a nd
fila me nto u s co lo n ie s, r e ac hi n g t he co ncl u s io n t h at t h e fu n g u s i n o c ul ated wa s Asp er gi ll u s n i ger d ue to
th e a fo r e me n tio n ed t h eo r eti ca l b a si s, f u l fil li n g t he o b j ect i ve s o f t he p r es en t p ra ct ice .

Keywords:
Molds, hyphae, PDA agar, staining, puncture inoculation

Introducción y objetivos de sustrato, los filamentos del micelio que se proyectan


por encima de la superficie del sustrato hacia el aire,
Los hongos son organismos heterótrofos, eucariotas, no
constituyen hifas aéreas o reproductoras ya que
fotosintéticos; la mayoría de ellos participan
activamente en la descomposición de la materia contienen las estructuras reproductoras del hongo
orgánica, otros son parásitos de animales y plant as o llamadas conidios o esporas, macroscópicamente, los
como simbiontes de plantas (Jawetz, 2011). mohos se desarrollan en el laboratorio sobre la
superficie de sustratos o medios de cultivo, formando
Microscópicamente, los mohos son organismos
colonias aéreas, de aspecto algodonoso, vellosas o
multicelulares, forman túbulos cilíndricos y ramificados
pulverulentas y de color variable (Jawetz, 2011)
denominados hifas, poseen un diámetro de 2 a 10 µm y
crecen por extensión en longitud desde el extremo de un El crecimiento de los mohos y levaduras puede ser
filamento, así se forma una masa de hifas entrelazada s observado al cultivar dichos hongos en medios
denominada micelio. En algunas especies de hongos las nutritivos específicos para los hongos, como el agar
hifas están divididas en células por tabiques o septos que papa dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus
se forman con intervalos regulares durante el siglas en inglés) que es un medio de propósito general
crecimiento filamentoso; cada tabique posee un poro para levaduras y mohos que puede ser suplementado con
septal que permite la continuidad citoplasmática entre ácidos o antibióticos para inhibir el crecimiento
una célula y otra del filamento. Otros especies carecen bacteriano puesto que muchos procedimientos
de tabiques septales por lo que se denominan hongos estándares usan una cantidad específica de ác ido
cenocíticos (Madigan, 2015). tartárico estéril (10%) para reducir el pH de este medio
En estas condiciones las hifas que penetran en el sustrato a 3,5  0.1, y así inhibir el crecimiento bacteriano
cumplen funciones de sostén y de absorción de (Downes, 2001).
nutrientes por lo que se denominan hifas vegetativas o
ITLP – Ingeniería bioquímica [2018] 1
Tecnológico Nacional de México «Ciencia es verdad, técnica es libertad»
Instituto Tecnológico de La Paz Enero – Junio 2018
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica [REPORTE DE PRÁCTICA]

Para observar las estructuras microscópicas de los corresponde a las características mismas de
hongos se emplean técnicas básicas de tinción, como la específicamente Aspergillus niger.
de azul de lactofenol sin fijación de muestra, esta una
tinción simple (que emplea un sólo colorante) y como Lo anterior se fundamenta también en las características
tal está basada en la afinidad del colorante por descritas por el instituto nacional de seguridad e higiene
componentes de las células, en este ca so por las en el trabajo, Aspergillus es un hongo filamentoso
estructuras fúngicas, el azul de lactofenol tiene hialino, saprofito, perteneciente al filo Ascomycota. Se
características que lo hacen especial para observar encuentra formado por hifas hialinas septadas y puede
dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos tener reproducción sexual (con formación de ascosporas
en los cultivos por aislamiento, el fenol destruye la flora en el interior de ascas) y asexual (con formación de
acompañante y El ácido láctico conserva las estructuras conidios). Las diferentes especies se diferencian en
fúngicas al crear una película que las protege provocado tamaño, tasa de crecimiento, textura (aterciopelada,
por un cambio de gradiente osmótico entre el interior y granular, algodonosa) y color de la colonia: verde-
el exterior de dicha estructura (Diaz, 2005). amarillento (A. flavus), negro (A. niger), marrón (A.
terreus). La coloración aparece casi siempre en todas las
Los objetivos de la presente práctica fueron el se mbrado
estructuras aéreas, tanto en el micelio como en las cabezas
de hongos microscópicos por punción en agar PDA, así
conidiales.
como la identificación de estructuras microscópicas de
los hongos para poder conocer el género y especie del Conclusiones
hongo cultivado. Con base a los resultados obtenidos, así como la
discusión de estos últimos se pudo deducir que en el
Materiales y métodos medio específico para el crecimiento de hongos, las
De un agar PDA estéril, se cortó un pequeño cuadro de estructuras observadas microscópicamente concuerdan
con el microorganismo propuesto, llegando a la
aproximadamente 1cm por lado y se trasladó a un
conclusion de que los objetivos planteados en la
portaobjetos dispuesto sobre un soporte en forma de ‘‘V’’
presente práctica fueron cumplidos.
en una caja de Petri, el cuadro de agar se inoculo por
punción de manera que un asa microbiológica dispuesta Referencias bibliográficas
en forma de L se infectó con una muestra de hongo y con
la punta del asa se inoculo cada cara lateral del cuadro de
agar, encima del cuadro de agar inoculado se colocó un
cubreobjetos, se agregaron 5ml de glicerol al 5%, se
sellaron con para film las cajas de Petri y se dejó incubar
Dehley, R. (2009). Sclerotinia sclerotiorum en plantas
por 48 horas, terminado este lapso, se añadieron 5ml de cultivadas e invasoras del sur pampeano .
hipoclorito comercial a la cámara y se dejó reposar por 30 Argentina.
mins, en seguida se retiró el cubreobjetos del cuadro de
agar y se le agrego una gota de azul de lactofenol al Diaz, R. (2005). Manual práctico de microbiología.
cubreobjetos retirado del cuadro de agar y otra gota al Barcelona: Masson.
cuadro de agar, el cubreobjetos teñido fue llevado a un
portaobjetos y se colocó un cubreobjetos limpio sobre el Downes, F. (2001). Compendium of methods for the
microbiological 4th Edition. Washington:
cuadro de agar, se observaron a diferentes objetivos tanto
American Public Health Association (APHA).
el cubreobjetos como el cuadro de agar y se anota ron
resultados. Jawetz, M. (2011). Microbiologia medica 25a Edicion.
Mexico: McGraw Hill Education.
Discusión
Con base a los resultados obtenidos en la observación Madigan, M. (2015). Brock: Biologia de los
macroscópica y microscópica del hongo inoculado se microorganismos 12va Edicion. Madrid: Pearson
puede deducir que se trata de un hongo del genero education.
aspergillus debido a que el hongo observado presento una
estructura aterciopelada, así como una coloración negra Murray, P. (2005). Manual of clinical microbiology, 6th ed.
en los extremos, esto último como producto de las esporas Washington : American Society for Microbiology.
del hongo, las hifas vegetativas incoloras y entrelazadas,
denotando que se trató de un hongo filamentoso, esto

ITLP – Ingeniería bioquímica [2018] 2


Tecnológico Nacional de México «Ciencia es verdad, técnica es libertad»
Instituto Tecnológico de La Paz Enero – Junio 2018
Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica [REPORTE DE PRÁCTICA]

Seminis. (2015). Seminis. Obtenido de


http://www.seminis.mx/recursos/guia-de-
enfermedades/tomates/black-root/

ITLP – Ingeniería bioquímica [2018] 3