Tecnológico Nacional de México «Ciencia es verdad, técnica es libertad»

Instituto Tecnológico de La Paz Enero – Junio 2018

Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica [REPORTE DE PRÁCTICA]

M icro cultivo
Microbiología, Mesa 6, 6°G
Fecha: 2019-05-24

Abstract
Mo ld s ar e mu l ti ce ll u lar o r ga n i s ms , fo r m c yl i nd r ica l a nd b r a nc hed t ub u le s c al led h yp ha e, ha v e a
d ia me ter o f 2 to 1 0 μ m a nd gr o w b y e x te n s io n i n le n gt h fro m t he e nd o f a fi la me n t, t h us fo r mi n g a ma s s
o f i nt erla ced h yp h ae c al led m yc el i u m, o f t he la t ter b e i n g T h e y p ro j ec t t he d i ffe re nt s tr uc t ure s o f t he
mo ld s . T o o b ser v e t h e m icr o sco p i c str u ct ur es o f th e fu n g i, b a si c st ai n i n g tec h n iq ue s ar e u sed , s u ch a s
lac to p he no l b l ue wi t ho u t s a mp l e fi x at io n, t hi s is a s i mp le st ai n ( wh i c h u se s a s i n gl e co lo ra nt ) a n d as
s uc h i s b a sed I n t he a f f i ni t y o f t he d ye fo r co mp o ne n t s o f t he c el ls , t h e o b j ecti ve s o f t he p re se n t
p ract ice wer e t h e so wi n g o f micr o s co p ic fu n gi b y p u n ct ure o n P D A a gar , as we ll a s t he id e n ti fic a tio n
o f mi cro sco p ic s tr uc t ur e s o f t he f u n g i to b e ab le to k no w t he ge n u s a nd sp ec ie s o f t he c ul ti v ated
fu n g u s, t he r es u lt s o b ta i ned i n t he p r es e nt p r ac ti ce we re p o s sib le t hro u g h t he ap p li ca tio n o f p u n ct ure
ino c ul at io n io n o n P D A ag ar a nd s tai n i n g wi t h l acto p he no l b l ue, yi e ld i n g b lac k, vel v et y a nd
fila me nto u s co lo n ie s, r e ac hi n g t he co ncl u s io n t h at t h e fu n g u s i n o c ul ated wa s Asp er gi ll u s n i ger d ue to
th e a fo r e me n tio n ed t h eo r eti ca l b a si s, f u l fil li n g t he o b j ect i ve s o f t he p r es en t p ra ct ice .

Keywords:
Molds, hyphae, PDA agar, staining, puncture inoculation

Introducción y objetivos de sustrato, los filamentos del micelio que se proyectan

Los hongos son organismos heterótrofos, eucariotas, no
fotosintéticos; la mayoría de ellos participan
activamente en la descomposición de la materia
orgánica, otros son parásitos de animales y plant as o
como simbiontes de plantas (Jawetz, 2011).
Microscópicamente, los mohos son organismos
multicelulares, forman túbulos cilíndricos y ramificados
denominados hifas, poseen un diámetro de 2 a 10 µm y
crecen por extensión en longitud desde el extremo de un
filamento, así se forma una masa de hifas entrelazada s
denominada micelio. En algunas especies de hongos las
hifas están divididas en células por tabiques o septos que
se forman con intervalos regulares durante el
crecimiento filamentoso; cada tabique posee un poro
septal que permite la continuidad citoplasmática entre
una célula y otra del filamento. Otros especies carecen
de tabiques septales por lo que se denominan hongos
cenocíticos (Madigan, 2015).
En estas condiciones las hifas que penetran en el sustrato
cumplen funciones de sostén y de absorción de
nutrientes por lo que se denominan hifas vegetativas o
por encima de la superficie del sustrato hacia el aire,
constituyen hifas aéreas o reproductoras ya que
contienen las estructuras reproductoras del hongo
llamadas conidios o esporas, macroscópicamente, los
mohos se desarrollan en el laboratorio sobre la
superficie de sustratos o medios de cultivo, formando
colonias aéreas, de aspecto algodonoso, vellosas o
pulverulentas y de color variable (Jawetz, 2011)
El crecimiento de los mohos y levaduras puede ser
observado al cultivar dichos hongos en medios
nutritivos específicos para los hongos, como el agar
papa dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus
siglas en inglés) que es un medio de propósito general
para levaduras y mohos que puede ser suplementado con
ácidos o antibióticos para inhibir el crecimiento
bacteriano puesto que muchos procedimientos
estándares usan una cantidad específica de ác ido
tartárico estéril (10%) para reducir el pH de este medio
a 3,5  0.1, y así inhibir el crecimiento bacteriano
(Downes, 2001).
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Para observar las estructuras microscópicas de los
hongos se emplean técnicas básicas de tinción, como la
de azul de lactofenol sin fijación de muestra, esta una
tinción simple (que emplea un sólo colorante) y como
tal está basada en la afinidad del colorante por
componentes de las células, en este ca so por las
estructuras fúngicas, el azul de lactofenol tiene
características que lo hacen especial para observar
dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos
en los cultivos por aislamiento, el fenol destruye la flora
acompañante y El ácido láctico conserva las estructuras
fúngicas al crear una película que las protege provocado
por un cambio de gradiente osmótico entre el interior y
el exterior de dicha estructura (Diaz, 2005).
Los objetivos de la presente práctica fueron el se mbrado
de hongos microscópicos por punción en agar PDA, así
como la identificación de estructuras microscópicas de
los hongos para poder conocer el género y especie del
hongo cultivado.
Materiales y métodos
De un agar PDA estéril, se cortó un pequeño cuadro de
aproximadamente 1cm por lado y se trasladó a un
portaobjetos dispuesto sobre un soporte en forma de ‘‘V’’
en una caja de Petri, el cuadro de agar se inoculo por
punción de manera que un asa microbiológica dispuesta
en forma de L se infectó con una muestra de hongo y con
la punta del asa se inoculo cada cara lateral del cuadro de
agar, encima del cuadro de agar inoculado se colocó un
cubreobjetos, se agregaron 5ml de glicerol al 5%, se
sellaron con para film las cajas de Petri y se dejó incubar
por 48 horas, terminado este lapso, se añadieron 5ml de
hipoclorito comercial a la cámara y se dejó reposar por 30
mins, en seguida se retiró el cubreobjetos del cuadro de
agar y se le agrego una gota de azul de lactofenol al
cubreobjetos retirado del cuadro de agar y otra gota al
cuadro de agar, el cubreobjetos teñido fue llevado a un
portaobjetos y se colocó un cubreobjetos limpio sobre el
cuadro de agar, se observaron a diferentes objetivos tanto
el cubreobjetos como el cuadro de agar y se anota ron
resultados.
Discusión
Con base a los resultados obtenidos en la observación
macroscópica y microscópica del hongo inoculado se
puede deducir que se trata de un hongo del genero
aspergillus debido a que el hongo observado presento una
estructura aterciopelada, así como una coloración negra
en los extremos, esto último como producto de las esporas
del hongo, las hifas vegetativas incoloras y entrelazadas,
denotando que se trató de un hongo filamentoso, esto
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corresponde a las características mismas de
específicamente Aspergillus niger.
Lo anterior se fundamenta también en las características
descritas por el instituto nacional de seguridad e higiene
en el trabajo, Aspergillus es un hongo filamentoso
hialino, saprofito, perteneciente al filo Ascomycota. Se
encuentra formado por hifas hialinas septadas y puede
tener reproducción sexual (con formación de ascosporas
en el interior de ascas) y asexual (con formación de
conidios). Las diferentes especies se diferencian en
tamaño, tasa de crecimiento, textura (aterciopelada,
granular, algodonosa) y color de la colonia: verde-
amarillento (A. flavus), negro (A. niger), marrón (A.
terreus). La coloración aparece casi siempre en todas las
estructuras aéreas, tanto en el micelio como en las cabezas
conidiales.
Conclusiones
Con base a los resultados obtenidos, así como la
discusión de estos últimos se pudo deducir que en el
medio específico para el crecimiento de hongos, las
estructuras observadas microscópicamente concuerdan
con el microorganismo propuesto, llegando a la
conclusion de que los objetivos planteados en la
presente práctica fueron cumplidos.
Referencias bibliográficas
Dehley, R. (2009). Sclerotinia sclerotiorum en plantas
cultivadas e invasoras del sur pampeano .
Argentina.
Diaz, R. (2005). Manual práctico de microbiología.
Barcelona: Masson.
Downes, F. (2001). Compendium of methods for the
microbiological 4th Edition. Washington:
American Public Health Association (APHA).
Jawetz, M. (2011). Microbiologia medica 25a Edicion.
Mexico: McGraw Hill Education.
Madigan, M. (2015). Brock: Biologia de los
microorganismos 12va Edicion. Madrid: Pearson
education.
Murray, P. (2005). Manual of clinical microbiology, 6th ed.
Washington : American Society for Microbiology.
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Seminis. (2015). Seminis. Obtenido de

http://www.seminis.mx/recursos/guia-de-
enfermedades/tomates/black-root/

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