UNIVERSIDAD NACIONAL

DE SAN AGUSTÍN

FACULTAD DE INGENIERIA DE
PROCESOS
ESCUELA PROFESIONAL DE
INGENIERIA QUIMICA

“BIOPROCESOS”

DOCENTE:

DR. NIDIA POMPILLA

TEMA:

ARTICULO DE BIOTECNOLOGIA

ALUMNOS:

 LIZARES YNFANSON HEARLYN

 TACO FLORES DELIA MARISSA
 VALERIANO MAMANI IVAN

AREQUIPA-PERÚ

2019
 BIOTECNOLOGIA: EL ADN EN LA ACTUALIDAD

Actualmente la Biotecnología ha sido tema de estudio, hoy hablaremos acerca del

ADN RECOMBINANTE, CLONACION DEL ADN Y ADN RECOMBINANTE,
CLONACION VEGETAL Y EN ANIMALES, ENZIMAS DE RESTRICCION ECOR1
Y HINDLL Y SOBRE LA ELECTROFORESIS DEL GEL AGAROSA.
El ADN RECOMBINANTE es una molécula artificial que proviene de la unión
artificial de dos fragmentos de ADN por lo tanto la tecnología de ADN recombinante
es el conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo para su
posterior manipulación e inserción en otro diferente.
Para separar el ADN en 1975 Daniel Neidens y Hamilton descubrieron un tipo de
proteína, las enzimas endonucleosas o enzimas de restricción que actúan como
tijeras moleculares cortando la doble cadena de ADN a través del esqueleto de
fosfatos sin dañar las bases. El descubrimiento de estas enzimas condujo a dichos
microbiólogos al premio nobel en 1978 y dio origen a la Ingeniería Genética, las
enzimas de restricción son producidas por bacterias como método de defensa
contra virus y degradan el ADN extraño, las enzimas de restricción cortan dejando
extremos cohesivos o rombos, los extremos cohesivos son generados cuando la
enzima cortan las dos hebras asimétricamente dejando los extremos de cada hebra
de simple cadenas complementarios entre sí, por otro lado los extremos son
generados cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar.
Una vez que los biólogos encontraron como fabricar ADN recombinante usando
enzimas de restricción ligasas el desafío siguiente fue como producir grandes
cantidades de genes y como introducirlos en bacterias u otras células o especies,
el primer problema fue solucionado con el uso de plásmidos, pequeñas moléculas
de ADN circular presentadas en muchas bacterias, los plásmidos contiene uno o
más genes de resistencia a antibióticos y son capaces de autoreplicarse llega a
contener una secuencia de iniciación esto les permite replicarse de una manera
independiente del ADN genómico, podemos crear una molécula de ADN
recombinante usando un plásmido. Si tenemos un plásmido y un ADN de interés, el
ADN recombinante es el nombre general de la extracción de un trozo de ADN y
combinarla con otra cadena de ADN mediante la combinación de dos o más
diferentes de la cadena de ADN, en la mayoría de los casos el ADN recombinante
se forma cuando los fragmentos de ADN de dos o más organismos se empalman y
se unen en un laboratorio, en esta técnica el ADN se corta en sitios específicos con
una enzima de restricción que localiza una secuencia especifica de aminoácidos en
el ADN y lo corta en ese lugar dejando fragmentos de ADN con bases nitrogenadas
o extremos pegajosos impar.
El ADN es una secuencia se bases nitrogenadas como es Adenina, Timina, Guanina
y Citosina en lugar de una secuencia de aminoácidos, se empalma con la ayuda del
ADN ligasa.
El uso de bacterias para copiar el ADN de interés: dentro de las células bacterianas
no es solo una hebra de ADN que se encuentra en forma de anillo, a veces otros
anillos más pequeños de ADN se encuentran en las bacterias, estos anillos más
pequeños son llamados los plásmidos, los plásmidos no son esenciales para la
bacteria pero puede ayudar a que sobreviva a algunas situaciones que lo requieran.
La función de los plásmidos en la bacteria son a menudo para reproducir proteínas
que protejan a las bacterias de una sustancia nociva como los antibióticos, metales
pesados o espesos de nutrientes. Un ejemplo se está llevando a un gen que
produce insulina en los seres humanos en la inserción de AND en una bacteria, la
bacteria producirá la insulina que puede ser utilizada para los seres humanos para
tratar la diabetes, estamos en condiciones del uso del ADN recombinante para
producir la hormona del crecimiento humano, la eritropoyetina responsable para
producir glóbulos rojos, mejores cultivos resistentes a plagas, herbicidas, pesticidas.

Ahora hablaremos sobre la clonación de ADN que consiste en hacer copias

idénticas de un fragmento de ADN, generalmente es un fragmento de ADN que nos
interesa, puede ser un gen que se expresa a si mismo como una proteína que
pensamos que es útil de alguna forma.
Tenemos nuestro AND de doble cadena, y tenemos una parte de este ADN que
queremos clonar, lo primero que haremos es cortar, para eso vamos a usar enzimas
de restricción, que corta en el lugar adecuado, ya obtenido el gen cortado lo que
haremos es pegarlo en lo que llamamos un plásmido, como sabemos el plásmido
es un fragmento de material genético que se encuentra fuera de los cromosomas y
que se puede replicar junto con todo el mecanismo genético del organismo o incluso
se puede expresar a sí mismo como los genes del organismo que están en el
cromosoma y que se expresan por sí mismos, el plásmido que vamos a poner debe
tener los pares de bases complementarios que coincidan con lo que sobresale del
gen para que reaccione fácilmente entre ellos para esto agregamos las enzimas de
restricción, se agrega ADN ligasas para sellar las terminales o pegar , ya obtenido
el plásmidos pegado necesitamos un organismo que pueda hacer las copias,
generalmente el organismo que se usa es una bacteria como la Ecoli que se puede
colocar en una solución en donde añadimos los plásmidos, y para que la Ecoli recoja
el plásmido la técnica que más se usa es un golpe de calor, lo cual hace que la
bacteria recoja el plásmido y lo absorba, intentando cultivarlo en una placa ,
añadiéndole nutrientes, y observaremos colonias de bacterias pero como algunas
bacterias tomaran plásmidos y otras no, por eso hay algunas colonias que están
formadas por bacterias que si tiene el plásmido y otras que no lo tienen, para separar
a las bacterias que recogieron el plásmido de las que no lo recogieron tenemos que
poner un gen para la resistencia antibiótica en el plásmido y solamente las bacterias
que recogieron el plásmido tendrán la resistencia antibiótica entonces estaríamos
cultivando nutrientes más antibióticos por ende las colonias que recogieron los
plásmidos van a sobrevivir y las otras que no recogieron los plásmidos no
sobrevivirán.
Continuaremos con el tema de CLONACION VEGETAL Y ANIMAL.
La CLONACION VEGETAL, la clonación invitro de árboles es una técnica que
permite la clonación de ejemplares idénticos de una misma especie, un grupo de
investigadores del IMIDRA especializado en multiplicación vegetativa de especies
forestales, las especies que investigan son la encina, el alcornoque y el olmo, las
dos primeras son especies que son difíciles de multiplicar vegetativamente y se ha
conseguido un procedimiento de multiplicación como es la embriogénesis somática
y dentro de la especie del olmo veremos un sistema novedoso que es la inmersión
transitoria en medio líquido que a partir de una micro propagación se puede duplicar,
la propagación en medio liquido de olmo se da a partir de un tallo cultivado de cada
uno de los árboles se puede producir miles de individuos para ello se usa la
inmersión transitoria en envases paralelos, en un lado se mete el lado líquido y en
el otro los tallos, con un abomba cada cierto tiempo se sumergen los tallos con el
medio liquido pasados dos o tres minutos se reinvierte, esto viene a ser un riego de
lo que son los tallos, cuando ya se tiene muchos tallos se sacan del bote, los meten
en hormonas vegetales para que enraícen y se colocan en una cámara de brotacion.
Para la clonación de alcornoques y encinas se usan varias técnicas como el
estaquillado, cultivo invitro y dentro del cultivo invitro hay una técnica especifica que
es la embriogénesis somática y esta técnica se usa para la encina y el alcornoque,
inicialmente se toma una hoja de alcornoque se le pone en un medio de cultivo
complejo y eso produce un cambio en las células que empiezan a expresar un nuevo
programa genético y da lugar a la formación de nuevas semillas y embriones.
La CLONACION ANIMAL se dio en el Perú cuando CIENTIFICOS PERUANOS
CLONARON UNA VACA LECHERA “ALMA C1” El primer mamífero clonado en el
Perú se dio un 19 de Julio del 2016 en la Universidad Nacional Toribio Rodríguez
de Mendoza Chachapoyas en Amazonas.
Los creadores “padres “de Alma C1 son Dr. Jenin Cortez Polanco (Biólogo. Experto
en Biotecnología) y Dr. Luis Murga (Especialista en Transferencia de Embriones);
estos científicos tienen como prioridad la Conservación de Especies Peruanas en
Extinción (7 animales). Alma C1 fue alumbrada por la vaca Mayra una vaca criolla
que la alumbro de forma natural a pesar que estaba pensada una cesárea, la
esperanza de vida es de 8 años. Pese que la vaca Alma de la cual fue clonada solo
llego a vivir solo 5 meses. La vaca Alma C1 de la cual fue creada gracias a una
parte de su oreja .Fue una vaca de raza Jersey siendo esta raza una de las mejores
en índices de producción de leche y proteínas. En el 2008 los Científicos Coreanos
hicieron la primera clonación comercial costando $25.000 siendo la primera dueña
de una mascota clonada Bernann Mckinney.
También se sabe de ANIMALES MODIFICADOS GENETICAMENTE. Los animales
transgénicos son los que han sido modificados genéticamente cambiando una
secuencia en su ADN Y cambiado con el de otro animal como:
 - Salmon; modificado para que cresta el doble de grande y asi de mas
carne.
- Peces que brillan Intensamente; creado bajo la teoría de que era para
detectar la contaminación ambiental, brillan en la luz blanca y ultravioleta.
- Ratones, que puedan producir leche para humanos
- Cerdos, para trasplantar órganos a seres humanos
- Vaca de la Insulina, capaz de producir insulina humana en su leche.
- Primate modificado
- Ranas Translucidas; sus órganos son visibles a través de su piel siendo
la excusa que así se podrá ver fácilmente el desarrollo del cáncer y
envejeciendo de órganos internos.
- Vacas Belgian Blue; desarrollan entre un 15 y 20 % más de masa
muscular, dando una carne excelente.
- Ratas Translucidas , para una mejor visión de sus órganos y
enfermedades.
- Oveja
Ahora hablaremos acerca de las ENZIMAS DE RESCTRICCION, como la ECOR1
que es una herramienta enzimológica para la manipulación del ADN. Se da un
cortes por hidrolisis, se realizan dos cortes uno en cada cadena. Es una enzima de
restricción producida por el microorganismo Escherichia coli. Este posee una diana
de restricción en el ADN, Sus herramientas moleculares son: Polimerasa, ADN
Ligasa, Transcripcion Inversa.
Y otra enzima de restriccion es la HINDILL que es una enzima de restricción de tipo
II, producida por el microorganismo Haemophilus influenzae que posee una diana
de restricción en el ADN de cadena doble dependiente de una secuencia metilada,
palindrómica y no escalonada, sobre la cual su actividad catalítica hidrolasa genera
extremos romos su sitio de reconocimiento 5'GTPyPuAC - 3'CAPuPyTG y el
resultado del corte 5' GTPy PuAC - 3' CAPu PyTG.
En 1970, trabajando con bacterias Haemphilus influenzae, el investigador Hamilton
Smith, de la Universidad Johns Hopkins, aisló HindIII, la primera enzima de
restricción que pudo ser bien descrita y utilizada para la clonación del ADN. Smith
demostró que HindIII se podría utilizar para cortar o digerir ADN en fragmentos
menores. HindIII, es una enzima de restricción que reconoce la secuencia
5’AAGCTT-3 ‘(cadena superior) / 3’TTCGAA-5’ (cadena inferior) y corta entre las
dos A en ambas cadenas.
Finalmente hablaremos acercad de la ELECTROFORESIS DEL ADN. La
electroforesis es cuando moléculas cargadas son forzadas a ir a través de una
matriz debido a un flujo de corriente eléctrica.
Una molécula de DNA cortada con enzimas de restricción genera diferentes
fragmentos. Estos pueden ser separados en base a su tamaño utilizando un gel de
electroforesis.
El gel puede estar hecho de agarosa o poliacrilamida: La agarosa es un polisacáriso
de galactosa y derivados de galactosa que se entrecruzan por puentes de
hidrógeno. Se puede variar el tamaño de los poros ajustando la concentración de
agarosa. Los geles de poliacrilamida son generados al mezclarse polímeros de
acrilamida y bisacrilamida en una reacción catalizada por persulfato de amonio y
TEMED. El tamaño de los poros depende de la concentración de acrilamida y
bisacrilamida. La matriz de poliacrilamida posee poros mas pequeños que la de
agarosa, permitiendo la separación de fragmentos mas pequeños.
Los fragmentos de DNA migrarán a una razón inversamente proporcional al
logaritmo de su tamaño o peso molecular. A mayor tamaño menor será la migración
del fragmento y a menor tamaño mayor será la migración del fragmento.
El movimiento de los fragmentos de DNA va a producir un patrón de bandas, donde
cada banda corresponde a un fragmento de un tamaño particular. El tamaño de
cada fragmento puede ser determinado utilizando un marcador o una escalera de
DNA cuyos fragmentos tienen pesos moleculares conocidos. Este marcador sirve
de control y migrará paralelo a las bandas de DNA que deseamos analizar.
Una mezcla de diferentes moléculas puede ser separada en base a: Tamaño de la
molécula o masa, forma o conformación del DNA (ej. DNA súper enrollado migra
más que DNA lineal), tamaño de los poros del gel, magnitud de la carga neta de la
molécula.
Bajo condiciones fisiológicas los grupos fosfatos de los ácidos nucleicos son
ionizados y migrarán al electrodo positivo (ánodo) cuando se colocan en presencia
de un campo eléctrico. La carga neta del DNA es negativa (por la presencia de los
grupos fosfatos) lo que permite que migre del clo que permite que migre del cátodo
(electrodo negativo) al ánodo (electrodo positivo).