BUSCA DIFERÈNCIES I TROBA POSSIBLES SOLUCIONS

Quines són les dues línies cel·lulars de les quals has fet comanda?

HT29 FHC

BUSCA DIFERÈNCIES

Quines característiques presenta cada línia que us permetrà diferenciar-la de l’altra? Per tal
de respondre aquesta pregunta podeu pensar en:
- patrons d’expressió
- dotació cromosòmica
- marcadores específicos
- proliferació cel·lular
- morfologia cel·lular
- genoma
- etc.
Nom de la línia cel·lular 1​: HT29

1- Característiques: ​Derivado inicialmente en 1964 por Jorden Fogh de una hembra

caucásica de 44 años de edad, las células HT-29 forman una monocapa apretada al tiempo
que exhiben similitud con los enterocitos del intestino delgado . Las células HT-29 producen
en exceso el antígeno tumoral p53 , pero tienen una mutación en el gen p53 en la posición
273, lo que resulta en una histidina que reemplaza a una arginina . Las células proliferan
rápidamente en medios que contienen suramina , con la correspondiente alta expresión del
oncogén c-myc . Sin embargo, c-myc está desregulado, pero puede tener una relación con
los requisitos del factor de crecimiento de las células HT-29.
2- Patrones de expresión: Producen en exceso el antígeno tumoral p53, pero tienen una
mutación en el gen p53 en la posición 273, lo que resulta en una histidina que reemplaza a
una arginina. Las células proliferan rápidamente en medios que contienen suramina, con la
correspondiente alta expresión del oncogén ​c-myc​. Sin embargo, ​c-myc está desregulado,
pero puede tener una relación con los requisitos del factor de crecimiento de las células
HT-29.
3- Genes expresados: componente secretor de IgA; antígeno carcinoembrionario (CEA);
factor de crecimiento transformante proteína de unión a beta; mucin, myc +; ras +; myb +;
fos +; sis +; p53 +; abl -; ros -; src -, Tipo de sangre A; Rh +; Las células HLA A1, A3, B12,
B17, Cw5, HT-29 son negativas para CD4, pero existe una expresión en la superficie celular
de galactosa ceramida (un posible receptor alternativo para el VIH)
4- Expresión del receptor: Adrenérgico alfa2A ref. humano, receptor de uroquinasa
(u-PAR), vitamina D (expresión moderada), receptor de uroquinasa (u-PAR); Vitamina D
(expresión moderada), adrenérgico alfa2A humano Ref.
5- Dotación cromosómica: ​Número modal = 71; rango = 68 a 72.
El número de cromosomas de la línea madre es hipertriploide y el componente 2S aparece
en 2.4%. Se encuentran 17 cromosomas marcadores en la mayoría de las metafases,
generalmente en una sola copia por cromosoma. Las designaciones de marcadores son:
M1p - (= t (3p- ;?) con un brazo corto eliminado), t (7q ;?), t (10q ;?), i (13q), 19q + a; M6,? T
(8q; 9q-),? Xp, M9, 6q +, t (13;?) A, t (13;?) B, 19q + b, M14, M15, 15p + y Xq-. El
cromosoma 13 es nulisómico y los cromosomas 8 y 14 son generalmente monosómicos. No
se detectó cromosoma Y mediante análisis de banda QM
6- Marcadores: Se encuentran 17 cromosomas marcadores en la mayoría de las
metafases, generalmente en una sola copia por cromosoma. Las designaciones de
marcadores son: M1p - (= t (3p- ;?) con un brazo corto eliminado), t (7q ;?), t (10q ;?), i
(13q), 19q + a; M6,? T (8q; 9q-),? Xp, M9, 6q +, t (13;?) A, t (13;?) B, 19q + b, M14, M15,
15p + y Xq-.
7- Proliferación celular: Pueden proliferar en el cultivo celular sin factores de crecimiento
con un tiempo de duplicación de alrededor de 4 días, el tiempo de duplicación se puede
reducir a un día con la adición de suero fetal bovino.
Las células tienen un alto consumo de glucosa y, en un medio estándar que contiene 25 mM
de glucosa y 10% de suero, permanecen indiferenciadas.
8- Morfología celular: ​Forman una monocapa apretada al tiempo que exhiben similitudcon
los enterocitos del intestino delgado.
9- Derivación​: La línea HT-29 fue aislada de un tumor primario en 1964 por J. Fogh usando
el método de cultivo de explantes.
10- Expresión de antígeno:​ Tipo de sangre A; Rh +; HLA A1, A3, B12, B17, Cw5
11- Productos Celulares: Componente secretor de IgA; antígeno carcinoembrionario
(CEA); factor de crecimiento transformante proteína de unión a beta; mucin.
12- Medio de crecimiento completo: El medio de base para esta línea celular es el
Modificado de McCoy's 5A Modificado Medio de McCoy, No. de catálogo 30-2007. Para
hacer el medio de crecimiento completo, agregue los siguientes componentes al medio
base: suero fetal bovino a una concentración final del 10%.
13- Subcultivo: ​Retirar y desechar el medio de cultivo. Enjuague brevemente la capa
celular con 0,25% (p / v) de tripsina - solución de EDTA 0,53 mM para eliminar todas las
trazas de suero que contengan inhibidor de tripsina. Agregue de 2,0 a 3,0 ml de solución de
tripsina-EDTA al matraz y observe las células con un microscopio invertido hasta que la
capa de células se disperse (generalmente dentro de 5 a 15 minutos). Se recomiendan los
matraces Corning® T-75 (catálogo # 430641) para subcultivar este producto. Nota: Para
evitar aglomeraciones, no agite las células golpeando o agitando el matraz mientras espera
que las células se desprendan. Las células que son difíciles de separar se pueden colocar a
37 ° C para facilitar la dispersión. Agregue 6,0 a 8,0 ml de medio de crecimiento completo y
aspire las células pipeteando suavemente. Añadir alícuotas apropiadas de la suspensión
celular a los nuevos vasos de cultivo. Incubar los cultivos a 37 ° C.
14- Proporción de subcultivo: ​se recomienda una proporción de subcultivo de 1: 3 a 1: 8
15- Renovación del medio:​ 2 a 3 veces por semana
16- Crioconservación: Medio de congelación: medio de crecimiento completo, 95%;
DMSO, 5%. Temperatura de almacenamiento: temperatura de vapor de nitrógeno líquido.
17- Condiciones del cultivo: ​Atmósfera: aire, 95%; dióxido de carbono (CO2), 5%
Temperatura: 37 ° C
Nom de la línia cel·lular 2​: FHC

1- Características: La línea celular FHC (células fetales humanas) se ha establecido a

partir de la mucosa colónica normal. La caracterización detallada de esta línea celular y el
mecanismo de la inmortalidad adquirida espontáneamente no se han descrito
todavía.Forma tumores sólidos después del trasplante en ratones SCID.
2- Dotación cromosómica: ​FHC es una línea celular hipotriploide con un número de
cromosoma desde 66 hasta 69. Con respecto a los complejos reordenamientos presentes
en todas las difusiones metafásicas probadas, el cariotipo se complementa con un
análisis comparativo de hibridación genómica. Con la excepción de unos pocos
cromosomas (1, 2, 10 y 16), todos los demás cromosomas incluidos regiones de
ganancias o pérdidas en el número de copias (las celdas contienen más o menos de tres
copias). Aunque el análisis de bandas G mostró una línea celular hipotriploide, el ensayo
FISH reveló que la región 8q23 ~ 8q24.3 (codificación, por ejemplo, protooncogén MYC)
es presente en más de 20 copias en el isocromosoma 8. El segundo cromosoma no
mostró amplificación de MYC. oncogén. No hubo diferencia entre copia perfiles numéricos
para células FHC en los pasajes 13 y 40.
3- Marcadores:
Los siguientes marcadores son STR que marcan específicamente las secuencias de los
diferentes cromosomas de las células del cultivo de FHC.
Amelogenina: X, Y
CSF1PO: 11,12
D13S317: 12,13
D16S539: 9,11
D5S818: 12,13
D7S820: 8,12
THO1: 6,9.3
TPOX: 8,11
vWA: 16
4- Patrones de expresión:​ La familia de genes CEA representa un gran número de
diferentes genes, incluyendo CD66e (CEACAM5). Se ha descrito que algunos miembros
de CEA tienen características estructurales de la superfamilia de inmunoglobulinas y
funciones similares a la familia de cadherina de la adhesión celular. Expresan p53 en
Ser15.
5- Morfología celular:​ Epitelial
6- Tejido al que pertenece:​ Colon
7- Enfermedad:​ Son células sanas
8- Medio de crecimiento completo: El medio base para esta línea celular es DMEM:
Medio F12 (ATCC 30-2006). Para hacer el medio de crecimiento completo, agregue los
siguientes componentes al medio base: HEPES 10 mM adicionales (para una
concentración final de 25 mM) 10 ng / ml toxina del cólera 0.005 mg / ml de insulina.
0,005 mg / ml de transferrina 100 ng / ml de hidrocortisona 20 ng / ml de EGF humano
recombinante (Thermo Fisher PHG0311) Suero fetal bovino, concentración final del 10%
(ATCC 30-2020).
9- Subcultivo: Se dan volúmenes para un matraz de 75 cm2. Aumente o disminuya la
cantidad de medio de disociación necesario proporcionalmente para recipientes de cultivo
de otros tamaños. Retirar y desechar el medio de cultivo. Enjuague brevemente la capa
celular con 0,25% (p / v) de tripsina-0,53 mM de solución de EDTA para eliminar todas las
trazas de suero que contengan inhibidor de tripsina. Agregue de 2,0 a 3,0 ml de solución
de tripsina-EDTA al matraz y observe las células con un microscopio invertido hasta que
la capa de células se disperse (generalmente dentro de 5 a 15 minutos). Nota: Para evitar
aglomeraciones, no agite las células golpeando o agitando el matraz mientras espera que
las células se desprendan. Las células que son difíciles de separar se pueden colocar a
37 ° C para facilitar la dispersión. Agregue 6,0 a 8,0 ml de medio de crecimiento completo
y aspire las células pipeteando suavemente. Para eliminar la solución de tripsina-EDTA,
transfiera la suspensión celular al tubo de centrifugación y gíralo a aproximadamente 125
xg durante 5 a 10 minutos. Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender las células en
un medio de crecimiento fresco. Añadir alícuotas apropiadas de suspensión celular a
nuevos vasos de cultivo. Se recomienda un inóculo de 4 a 6 x 103 células viables / cm2.
Incubar los cultivos a 37 ° C. Relación de subcultivo: se recomienda una proporción de
subcultivo de 1: 2 a 1: 4 cada 10 a 15 días. Renovación del medio: cada 3 a 4 días.
10- Proporción de subcultivo: ​se recomienda una proporción de subcultivo de 1: 2 a 1:
4 cada 10 a 15 días.
11- Renovación del medio:​ 2 a 3 veces por semana
12- Crioconservación: Medio de congelación: medio de crecimiento completo
complementado con un 50% adicional de FBS y un 10% (v / v) de DMSO. Temperatura
de almacenamiento: nitrógeno líquido fase de vapor.
13- Condiciones del cultivo: Temperatura: 37 ° C. Atmósfera: Aire, 95%; dióxido de
carbono (CO2), 5%
 14- Condiciones de crecimiento:​ Atmósfera: aire, 95%; dióxido de carbono (CO2), 5%
15- Propiedades del cultivo:​ Adherencia

TROBA POSSIBLES SOLUCIONS

Un cop sabeu quines són les diferències entre cada línia cel·lular, ara cal que identifiqueu
quines tècniques es poden fer servir per discriminar cèl·lules en general. En aquesta taula
encara ​no cal que us centreu en les vostres soques, sinó que ha de ser una taula general
que reculli totes les tècniques que coneixeu que us poden ajudar a fer tal discriminació.

Nom de la tècnica Per a què serveix aquesta tècnica?

Obtención de cariotipo Serviria para ver las parejas de

cromosomas y diferenciar entre las dos
líneas.

Cultivo celular Para observar sus diferentes ritmos de

crecimiento y proliferación celular.

Western Blot Para la identificación de proteïnas

específicas.

ELISA Técnica en la cual un antígeno inmovilizado

se detecta mediante un anticuerpo
enlazado a una enzima capaz de generar
un producto detectable.

PCR + Secuenciación Amplificación de un fragmento de ADN y

determinación del orden de los nucleótidos.

Citometría de flujo Determina las propiedad es una tecnología

biofísica basada en la utilización de luz
láser, empleada en el recuento y
clasificación de células según sus
características morfológicas, presencia de
biomarcadores, y en la ingeniería de
proteinases

FISH Es una técnica citogenética de marcaje de

cromosomas mediante la cual estos son
hibridados con sondas que emiten
fluorescencia y permiten la visualización,
 distinción y estudio de los cromosomas así
como de las anomalías que puedan
presentar.

Microarray Permite realizar análisis genéticos sobre

miles de genes simultáneamente.

Passeu a l’activitat següent per escollir quina tècnica concretament aplicareu el vostre equip
de treball.