INFORME Nº3

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

CANDELARIA MERCEDES MADRID MIRANDA

DOCENTE

GRUPO D

MICROBIOLOGIA VETERINARIA

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE CIENCIA BASICAS
2017

OBJETIVOS
 Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el
crecimiento de microorganismos.
 preparar los medios de cultivos, liquido o solido siguiendo las
instrucciones dadas en la etiqueta del medio respectivo
INTRODUCCION
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones
adecuadas y en condiciones físicas optimas, permiten el crecimiento de
microrganismos. Los medios de cultivos son esenciales en el laboratorio de
microbiología por su control en la fabricación, preparación, conservación y uso
esto asegura la exactitud, reproducción y crecimiento del microorganismo, estos
necesitan distintas fuentes nutricionales básicas como una fuente de carbono,
fuente de nitrógeno, agua, vitaminas, energía, elementos metálicos y no
metálicos es de gran importancia para la supervivencia de los microorganismos
en distintos medios de cultivos. Las propiedades que requiere un medio de
cultivo para la proliferación de microorganismos son la humedad, pH, fertilidad y
transparencia. Se clasifican los medios de cultivo en; según su estado físico,
según su naturaleza y según su propósito, los cuales permiten que distintas
especies de microorganismo se desarrollen y muestren sus características
macroscópicas. En la preparación de dichos medios se puede utilizar preparados
en forma líquida o en forma sólida; usualmente para preparar un medio sólido,
se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el
agar, y/o la gelatina.

MARCO TEORICO
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de
Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparaciónde
medios de cultivo. Se licua completamente a la temperatura delagua hirviendo
y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimasexcepciones no tiene
efecto sobre el crecimiento de las bacterias y noes atacado por aquellas que
crecen en él.
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en:
 MEDIOS NATURALES O COMPLEJOS: constituidos por sustancias
complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente
complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos
no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas
presentes de cada uno de ellos.
 MEDIOS DEFINIDOS O SINTÉTICOS: son los medios que tienen una
composición química definida cualitativamente y cuantitativamente.
Generalmente se usan en trabajos de investigación.
De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:
  MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO:
Son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de
microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más
sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con
excepción de los que se quieren cultivar.
 MEDIOS SELECTIVOS:
Son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios
sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos
específicos.
 MEDIOS DIFERENCIALES:
Son medios que contienen indicadores de productos derivados de la
actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningún tipo
de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos.
Las necesidades nutricionales básicas para el crecimiento de los
microrganismos son
 FUENTES DE CARBONO:
El carbono es unos componentes esenciales para conformar la
estructura celular y permite realizar todas sus funciones. Según la fuente
de carbono se divide en dos grupos, los organismos autótrofos usan
principalmente dióxido de carbono como carbono inorgánico y los
organismos heterótrofos necesitan suministro de carbono orgánico como
la glucosa
 FUENTES DE NITROGENO
El nitrógeno en los compuestos orgánicos de las células se presenta en
estado reducido como grupo amino. La gran mayoría de los organismos
fotosintéticos asimilan el nitrógeno en estado inorgánico como nitratos,
que posteriormente son reducidos. Muchos organismos no fotosintéticos
como bacterias y hongos también pueden asimilar el nitrógeno como
nitrato, otros microorganismos son incapaces de llevar a cabo esta
reducción y utilizan como fuente de nitrógeno formas reducidas de este.
Las necesidades de nitrógeno se cubren frecuentemente con materiales
orgánicos que contienen nitrógeno en estado reducido.
 ELEMNTOS METALICOS (Ca, Zn, Na, k, Cu, Mn)
Son los llamados micronutrientes, oligoelementos; encontrados en sales
inorgánicas y tomados en bajas concentraciones
 ELEMENTOS NO METALICOS
El azufre puede encontrarse en proteínas, mientras que le fosforo está
formando sales

 VITAMINAS
Los microrganismos pueden tomarlas del medio, elaborarlas o
sintetizarlas.
 ENERGIA
 Existen dos tipos bioenergéticos de microrganismos, fotòtrofos y
quimiòtrofos. Los fotòtrofos emplean la energía radiante (luz solar) como
única fuente de energía, mientras que los quimiòtrofos obtiene la energía
por oxidación de compuestos químicos los cuales pueden ser moléculas
orgánicas o inorgánicas.

PROPIEDADES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

 HUMEDAD
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la
atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células
vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el
mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de
cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y
evitar así que se deseque el medio.
 pH
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el
crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se
desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que
requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la
presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar
sus procesos metabólicos normales.
 FERTILIDAD
Se refieren a los elementos o compuestos básicos que permiten el
crecimiento bacteriano
 TRANSPARENCIA
Permite la observación bacteriológica, evidenciar morfológica y
físicamente su crecimiento en medios de cultivos adecuados.
ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS
Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados
bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en
un lugar fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar
directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente
de calor o vapor.
Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases
de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se
debe tener la precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y
mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorción
de agua produce cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones del
polvo, etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber
sufrido cambios químicos o estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede
almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas
protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15ºC. Sin embargo,
almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8°C se prolonga la vida útil de los
mismos, (nunca por debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel).
Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para
evitar su deshidratación y cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar
por encima una envoltura de papel Kraft.

PROCEDIMIENTO
La práctica se inició con la explicación de la guía de laboratorio por parte de la
docente a cargo en la cual se habló del tema de preparación de medios de
cultivo; posteriormente se hicieron los respectivos cálculos para la preparación
de medios de cultivo de la siguiente manera:
EJEMPLO: para el caldo triptófano
16 g ------------------------ 1000 ml
X ------------------------ 30 ml
X: 0,48 g
En cual se hizo una regla de tres donde según las indicaciones de la etiqueta
del medio de cultivo se disolvían 16g en 1000 ml (1 litro) de agua destilada,
entonces se hizo el respectivo cálculo de cuantos gramos se necesitan para 30
ml de agua (los ml de agua para cada tubo de ensayo son de 5ml y cajas de
petri 25ml) en cual fue de 0,48 gramos del medio de cultivo sintético caldo
triptófano.
Seguidamente se pesó la cantidad del medio de cultivo necesaria según los
cálculos realizados; para el caso del medio de cultivo liquido ( caldo triptófano)
se disolvieron en los 30 ml de agua destilada en un vaso de precipitado el cual
se colocó a calentar en una estufa hasta su ebullición, luego se procedió a
servir en los tubos de ensayo taparosca con ayuda de una pipeta de 5 ml se
cerró el tubo de ensayo y se envolvieron en un bolsa ; para el medio de agar (
Brucella agar) se disolvieron los gramos necesarios en los mililitros según los
cálculos respectivos en un erlenmeyer, el cual se llevó a calentar en hasta su
ebullición, posteriormente se hizo un tapón con algodón y gasa para tapar la
boca de erlenmeyer. Después llevó a la autoclave los tubos de ensayo y
erlenmeyer para su esterilización. Finalmente se sirvió en cajas de petri y tubos
de ensayo y se dejó solidificar durante unos minutos.

RESULTADOS
FIG 1. AGAR EN MEDIO LIQUIDO ( BRUCELLA AGAR ) FIG 2 . AGAR EN MEDIO SOLIDO ( BRUCELLA AGAR)
EN TUBO DE ENSAYO EN CAJA DE PETRI

FIG 3. MEDIO LIQUIDO ( CALDO TRIPTOFANO)

EN TUBO DE ENSAYO

ANALISIS DE RESULTADOS
CONCLUSIONES:
Mediante el desarrollo de esta práctica definimos, estudiamos y aplicamoslos
procedimientos que se deben realizar para la elaboración de un mediode
cultivo, es claro que esto es referido para con la unidad que
estamosestudiando, microbiología veterinaria.
En esta práctica se aprendió la importancia de preparar medios de cultivo,de
que materias pueden ser hechos el distinto medio y tipos de cultivo quepueden
desarrollarse en el laboratorio, así como su clasificación,características
principales, los distintos tipos que pueden servir paraidentificar
diferentes, así como las condiciones que estos deben reunir.
CONSULTA:
MEDIO DE COMPOSI PREPARACION USO INTERPRETA
CULTIVO CION CION
CALDO *Digerido Suspender 46 g del Medio de cultivo Crecimiento
TETRATIO pancreático polvo en 1 litro de utilizado para el bueno par
de caseína agua destilada. enriquecimiento especies de
NATO 2,5 g Mezclar selectivo de salmonella y
*Digerido vigorosamente y Salmonella spp. crecimiento
péptico de llevar a ebullición. a partir de escaso para E.
Enfriar a 45°C o heces, orina, coli
 tejido animal menos. Agregar 20 ml alimentos y
2,5 g de solución iodurada. otros materiales
*Sales Mezclar y distribuir 10 de importancia
biliares 1,0 g ml por tubo, en tubos sanitaria.
*Carbonato estériles. No debe
de calcio calentarse luego de
10,0 g agregar la solución
*Tiosulfato iodada. El medio base
de sodio 30,0 puede mantenerse a
g 4°C, dura varios
*Agua meses, pero una vez
destilada agregada la solución
1.000 mL iodada debe usarse
en el mismo día.
BISMUTO *Extracto de Suspender 52,3 Es un medio Las colonias
SULFITO carne 5,0 g gramos del medio en altamente típicas de la
*Digerido un litro de agua selectivo, Salmonella typhi
pancreático destilada. Mezclar recomendado son marrones o
de caseína bien y calentar para negras, algunas
5,0 g agitando aislamiento de veces con brillo
*Digerido continuamente. Hervir Salmonella spp, metálico
péptico de durante un minuto o particularmente alrededor de las
tejido animal hasta que el medio se Salmonella colonias. Algunas
5,0 g disuelva por thyphi, en cepas producen
*Dextrosa completo. Evitar el heces colonias verdes
5,0 g sobre calentamiento; con poco o
*Fosfato de no autoclavar ningún
sodio 4,0 g Dejar que el medio se oscurecimiento.
*Sulfato enfríe a 45ºC (muy
ferroso 300,0 importante) y sin dejar
mg de agitar verter en
*Indicador de placas de Petri. El
sulfito de color del medio
bismuto 8,0 g preparado es blanco
*Agar 20,0 g opaco con tinte verde.
Verde El medio preparado
brillante 25,0 en placa debe
mg conservarse entre 8-
15°C
MEDIO *Fosfato Suspender 37,3 g del Base utilizada Los cultivos
LOWESTE monopotásic polvo en 600 ml de para la positivos
o 2.5 g agua destilada y preparación de generalmente, se
INJENSEN *Sulfato de agregar 12 ml de diferentes observan entre
magnesio0.2 glicerina. Calentar medios los 13 y 28 días
4g agitando destinados al de incubación,
*Citrato de continuamente y aislamiento, dependiendo del
magnesio hervir un minuto. cultivo y contenido de
0.6. g Esterilizar en diferenciación bacilos, en las
*Asparragina autoclave a 121°C de muestras
3.6. g durante 15 minutos. micobacterias, sembradas,
*Harina de Enfriar a 50°C fundamentalme mientras que el
papa 30.0 g aproximadamente. nte tres % de las
*Verde de Mezclar Mycobacterium micobacterias
malaquita 0.4 asépticamente un litro tuberculosis suele crecer a los
g de huevo íntegro, 40 días de
evitando la formación incubación .
de burbujas de aire y La aparición de
agregar al medio colonias de color
base. Mezclar el crema, rugosas o
huevo y la base hasta cremosas,
 uniformar. Distribuir amarillentas, es
en recipientes indicio de cultivo
estériles adecuados y positivo, el cual
tapar será confirmado
herméticamente. realizando la
Colocar los mismos coloración de
en posición inclinada Ziehl- Neelsen a
y coagular a 85-90°C un extendido del
durante 45 minutos. mismo, para
determinar la
presencia de
bacilos ácidos-
alcohol
resistentes (
BAAR)
MEDIO *Pluripeptona Medio Thayer Martin Medio selectivo Las colonias de
THAYERM 15.0 g modificado listo para que permite el gonococos y
*Almidón usar Fundir el crecimiento de meningococos
ARTIN soluble 1.0 g contenido de un Neisserias obtenidas en
*Fosfato frasco de 50 ml de patógenas. este medio
dipotásico Agar Base GC doble selectivo son
4.0 g concentración y usualmente
*Fosfato enfriarlo a 50°C. opacas,
monopotásic Reconstituir el grisáceas,
o 1.0 g Britalex y el VCNT convexas, de 1-4
* Cloruro de con 2,1 ml de mm de diámetro.
sodio 5.0g solvente cada uno. Luego de 48 h de
*Agar 5.0g Adicionar incubación
asépticamente la pueden
solución de transformarse en
hemoglobina, 1 ml de colonias
VCNT y 1 ml de mucoides.
BRITALEX a la base Coloración de
GC doble Gram: diplococos
concentración. Gram negativos.
Conservar el resto de
VCNT y Britalex
recién preparados en
congelador (estable
15 días a -20°C).
Mezclar para
homogeneizar.
Distribuir unos 10 ml
por placa y dejar
solidificar. Las placas
pueden conservarse
en heladera por 3
semanas, sin perder
su potencia
inhibidora.
BAIRD *Peptona de Suspender 60 g del Medio de alta Los estafilococos
PARKER caseína 10.0 medio deshidratado especificidad coagulasa
g en 940ml de agua diagnóstica, positivos
*Extracto de destilada. Dejar en selectivo y (Staphylococcus
carne 5.0 g reposo 5 a 10 diferencial para aureus) producen
*Extracto de minutos. Calentar el aislamiento y colonias
levadura 1.0 agitando recuento de brillantes,
g frecuentemente y estafilococos convexas, de
*Cloruro de hervir durante 1 coagulasa color gris oscuro
litio 5.0 g minuto. Distribuir y positiva en a negro, con o
 *Agar 17.0 g esterilizar en alimentos y sin una zona
*Glicina 12.0 autoclave a 121°C otros materiales opaca alrededor
*Piruvato de (15 libras) durante 15 de importancia de las colonias.
sodio 10.0 g minutos. Enfriar a sanitaria. Los
45°-50°C y agregar estafilococos con
50 ml de la emulsión resultado
de yema de huevo y negativo a la
10ml de la solución coagulasa
de telurito (Código producen
B03-601-61). crecimiento débil
Homogeneizar y o nulo, con
distribuir en cajas de colonias
Petri. de color gris a
negro,
habitualmente sin
zonas
transparentes ni
opacas.
CHOMOC *Peptonas Suspender 26,5 g en El Chromocult *E.coli: colonias
ULT 3,0 1 litro de agua. Agua es un medio de azul oscuro a
*Cloruro caliente en un baño cultivo selectivo violeta
sódico 5,0; de agua en ebullición para la *Coliformes
*Dihidrógeno o en una corriente de detección y totales: colonias
sódico vapor que fluye. recuento de de salmón a rojo
Fosfato 2,2 Revuelva el coliformes y de y colonias azul
*Hidrógeno Regularmente para E.coli. oscuro a violeta
fosfato ayudar a la disolución * Otros Gram-
disódico 2,7 (aproximadamente 35 negativos:
*Piruvato minutos). colonias
sódico 1,0 Puede producirse incoloras,
*Triptófano turbiedad, pero esto excepto
1,0 no afecta la actuación Algunos
*Agar - agar organismos que
10,0 poseen actividad
*Sorbitol 1,0 ß-D-
*Tergitol glucuronidasa.
70,15 Estas colonias
*Mezcla aparecen de
cromógena color azul claro a
0,4. turquesa. A fin de
que
Confirmar E.coli,
superponer las
colonias azul
oscuro a violeta
con
Una gota de
reactivo de Indole
de Kovacs
AGAR Infusión Disolver 52 g de polvo Es un medio Inocular en
CALDO corazón en un litro de agua sólido muy superficie 0,1 ml
vacuno destilada. Calentar a apropiado para de muestra o de
BHI ebullición hasta su el cultivo de caldo BHI.
*Peptona disolución total. bacterias y Incubar el tiempo
10.0 g Esterilizar en hongos, y a la
*Cloruro de autoclave durante 15 incluyendo los temperatura
sodio 5.0 g minutos a 121°C. de difícil óptimos para el
*Glucosa 2.0 desarrollo. microorganismo
g que se desea
aislar (a falta de
 *Fosfato otro criterio, 24-
disódico 2.5 72 horas a 35-37
*Agar 15.0 ºC
aproximadament
e). Dada la
riqueza de sus
componentes, la
recuperación
(tanto de
recuento total
como de
patógenos) es
superior a la de
otros medios
generales

BIBLIOGRAFIA
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